一种新的转基因枯草芽孢杆菌检测试剂盒及其检测方法
【专利摘要】本发明名为“一种新的转基因枯草芽孢杆菌检测试剂盒及其检测方法”，涉及转基因微生物检测【技术领域】，本发明通过巧妙地设计针对转基因枯草芽孢杆菌特异序列的带标记引物和探针，结合PCR扩增和核酸试纸条检测技术，实现了转基因枯草芽孢杆菌的高效快速检测。该方法特异性强，灵敏度局和稳定性好，对于提局转基因枯草芽孢杆菌的准确性、缩短检测时间具有非常显著的作用。本检测试剂盒使用方便快捷，节约成本和时间，原理和操作简单，可用于快速检测转基因枯草芽孢杆菌。
【专利说明】一种新的转基因枯草芽孢杆菌检测试剂盒及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及转基因微生物检测【技术领域】，提供了一种利用PCR扩增和核酸试纸条 技术相结合的快速检测转基因枯草芽孢杆菌的试剂盒，适用于转基因枯草芽孢杆菌的快速 检测。
【背景技术】
[0002] 枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，是细菌中的一个常见 种，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。有的菌株是a-淀粉 酶和中性蛋白酶的重要生产菌。
[0003] 目前在酶制剂产品中的转基因微生物检测的技术还是主要依靠传统分离培养的 形态学检测方法，检测灵敏度低，而且检测周期需要几天时间。近些年来，随着分子生物学 检测技术的快速发展，PCR技术成了微生物快速检测的常用手段，但是扩增产物需要凝胶电 泳，紫外凝胶成像，步骤多，耗时长，而且存在核酸染色剂环境污染的问题。
[0004] 本研究通过巧妙地设计针对转基因枯草芽孢杆菌的带标记的特异性引物和探针， 应用PCR扩增和核酸试纸条检测技术，实现了转基因枯草芽孢杆菌的高效快速准确检测。 该方法特异性强，灵敏度高和稳定性好，对于转基因枯草芽孢杆菌检测的准确性、检测效率 的提高具有重要的作用。
【发明内容】
[0005] 本发明需要解决的技术问题是提供用于检测转基因枯草芽孢杆菌的两套特异性 引物和探针。
[0006] 本发明需要解决的另一问题是提供包含上述引物的核酸试纸条检测试剂盒。
[0007] 本发明用于检测转基因枯草芽孢杆菌的两套PCR引物及探针序列为：
【权利要求】
1. 两套用于转基因枯草芽孢杆菌检测的特异性引物和探针，其特征在于，序列为：
2. -种用于检测转基因枯草芽孢杆菌的试剂盒其特征在于，包括如下成分： (1) 阳性对照转基因枯草芽孢杆菌DNA模板和阴性对照野生型枯草芽孢杆菌DNA模板 (2) 转基因枯草芽孢杆菌Spo、NprE特异序列上下游特异引物和探针
(3) IOXTaq PCR Buffer，ddH20，2. 5mM dNTP，5U/ii I Taq 酶 (4) 生物素（Biotin)、荧光素（Fite)抗原标记的薄膜层析试纸条。
3. -种转基因枯草芽孢杆菌的快速检测方法，包括如下步骤： (1) PCR反应体系：
PCR 反应条件：94 °C 预变性 I min，94 °C变性 30 s，60.8 °C °C退火 30 s，72 °C延 伸30 s，30个循环，72 °C延伸5 min (2) 探针杂交：扩增结束后，加入探针（IOii mol/L) 2 iil，94 °C变性30 s，60 °C退火 30 s (3) 取4 ii L扩增、杂交产物加到试纸条的样品垫上，然后滴加2-3滴缓冲液，5 min后 判读并记录结果 (4) 判定结果：用Spo、NprE两套特异引物探针进行扩增、杂交，PCR产物用试纸条检 测，两套引物、探针控制线正常，检测线都呈现阳性时，则说明该样品含有转基因枯草芽孢 杆菌，若有一套或两套引物、探针试纸条检测结果显示为阴性，则判定样品中没有转基因枯 草芽孢杆菌。
【文档编号】C12Q1/04GK104212907SQ201410484737
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月22日 优先权日:2014年9月22日
【发明者】张裕君, 贺艳, 赵卫东, 赵璟源, 郑文杰 申请人:天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心