一种Poly (A)聚合酶活性测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种非放射性的Poly(A)聚合酶活性测定方法，所述方法包括：首先根据单链模板合成引物，然后进行PAP酶催化的加尾反应，反应完成后与单链模板退火，随后在足量没有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶存在下进行聚合反应生成双链DNA，最后测定聚合反应完成后反应体系中双链DNA的相对量，并利用该检测结果推导出Poly(A)聚合酶活性程度，其中所用单链模板上引物3’方向上的碱基不是t。本发明的方法不采用放射性元素，没有放射性污染，操作步骤简单快速，灵敏度高。
【专利说明】一种PoIy(A)聚合酶活性测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生化【技术领域】，具体来说涉及一种Poly(A)聚合酶活性测定方法。
【背景技术】
[0002] Poly(A)聚合酶（Poly(A)polymerase，PAP)是一种特殊的RNA聚合酶。该酶可不 依赖模板特异性的催化三磷酸腺甘（ATP)，逐个聚合至单链RNA片段的3'-0H端上，其反应 方程式为：
【权利要求】
1. 一种Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述方法包括：首先根据单链模 板合成引物，然后进行PAP酶催化的加尾反应，反应完成后与单链模板退火，随后在足量没 有3'-5'外切酶活性的DNA聚合酶存在下进行聚合反应生成双链DNA，最后测定聚合反应完 成后反应体系中双链DNA的相对量，并通过该检测结果推导出Poly (A)聚合酶活性程度， 其中所用单链模板上引物3'方向上第一位的碱基不是t。
2. 如权利要求1所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，反应体系中双链 DNA的相对量是利用仅与双链DNA或仅与单链DNA结合的荧光染料，利用荧光法检测得到 的，并且双链DNA的相对量是以荧光强度表示的。
3. 如权利要求2所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所采用的荧光染 料是双链DNA特异性荧光染料。
4. 如权利要求3所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述荧光染料是 picogreen 染料。
5. 如权利要求1所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所采用的单链模 板是单链环状DNA模板。
6. 如权利要求5所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所采用的单链模 板是Ml3噬菌体单链DNA。
7. 如权利要求6所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所用的引物是 -aagccatccgcaaaaatgacctct-3,〇
8. 如权利要求1所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所采用的DNA聚 合酶是Klenow DNA聚合酶exo-突变体。
【文档编号】C12Q1/48GK104357543SQ201410502196
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】徐晓昱 申请人:南京诺唯赞生物科技有限公司