活化辅助t细胞的方法以及用于该方法的组合物的制作方法

活化辅助t细胞的方法以及用于该方法的组合物的制作方法
【专利摘要】本申请公开了活化辅助T细胞的方法以及用于该方法的组合物。具体地，本申请公开了：用于活化辅助T细胞的方法，其包括将WT1肽添加至抗原递呈细胞以活化该辅助T细胞的步骤，其中所述的WT1肽能够与选自HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中的任一个结合；在该方法中应用的组合物；通过活化辅助T细胞治疗和/或预防癌症的方法；在所述治疗和/或预防方法中使用的药物组合物；等等。
【专利说明】活化辅助T细胞的方法以及用于该方法的组合物 本申请为申请号为200880006096. 5的分案申请，要求2007年2月27日的优先权。

【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于活化辅助T细胞的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并由 此活化辅助T细胞，其中所述WTl肽具有结合HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个的能力，以及用于其的组合物，用于通过活化辅助T细胞治疗 和/预防癌症的药物组合物等等。

【背景技术】
[0002] WTl基因（维耳姆斯瘤1基因（Wilms'tumorlgene))被认为是导致维耳姆斯瘤（其 为儿童肾癌）的基因（非专利文献1和2)。WTl是具有锌指结构的转录因子。最初，WTl基 因被认为是肿瘤抑制基因。然而，随后的研究（非专利文献3、4、5和6)显示WTl基因在造 血肿瘤和实体癌中起着癌基因的作用。
[0003] 已显示可通过用WTl肽体外刺激外周血单核细胞而诱导WTl肽特异性T淋巴细胞 (CTL)，并且此类CTL损伤内源表达WTl的癌细胞，诸如造血肿瘤细胞和实体癌细胞。该CTL 识别复合物的形式的WTl肽，在所述复合物中，该WTl肽与MHC I类分子结合。因此，此类 WTl肽取决于MHC I类分子亚型而不同（专利文献1、非专利文献7、以及专利文献2、3和 4)。
[0004] 存在对癌抗原特异的辅助T细胞对有效诱导CTL是很重要的（非专利文献8)。通 过识别MHC II类分子和抗原递呈细胞上的抗原肽的复合物诱导和活化辅助T细胞。活化 的辅助T细胞产生诸如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6或干扰素的细胞因子以帮助B细胞的生长、 分化或成熟。活化的辅助T细胞还具有促进其它T细胞亚类（例如，Tc和TD细胞）的生 长、分化或成熟的功能。因此，活化的辅助T细胞具有通过促进B细胞或T细胞的生长或活 化从而活化免疫系统的功能。因此，在癌免疫治疗中通过MHC II类结合的抗原肽（辅助 肽）提高辅助T细胞的功能以增加癌疫苗的效果被认为是有用的（非专利文献9)。目前， 仅发现与HLA-DRB1*0401分子结合的肽（非专利文献10)、与HLA-DRB1*0405分子结合的肽 和与HLA-DRB1*1502分子结合的肽（专利文献5)是WTl的辅助肽。因此，需要发现各自与 HLA-DRB1*1501、HLA-DPB1*0901 或 HLA-DPB1*0501 分子结合的肽。
[0005] 此外，已显示在辅助肽中，存在能够与多个MHC II类分子结合并诱导辅助T细胞 的混杂辅助肽（非专利文献11和12)。然而，非常难以鉴定与三或更多类MHC II类分子结 合并发挥足够功能的混杂辅助肽。 专利文献 1:W02003/106682 专利文献 2:W02005/095598 专利文献 3:W02007/097358 专利文献4:国际专利申请号PCT/JP2007/074146 专利文献 5:W02005/045027 非专利文献 l:Daniel A.Haber 等，Cell. 1990Jun29 ;61 (7) :1257-69. 非专利文献 2:Call KM 等，Cell. 1990Feb9 ;60(3) :509-20. 非专利文献 3:Menke AL 等，Int Rev Cytol. 1998; 181:151-212.综述 非专利文献 4: Yamagami T 等，Blood. 1996AprI ;87 (7) : 2878-84. 非专利文献 5: Inoue K 等，Blood. 1998Aprl5 ;91 (8) : 2969-76. 非专利文献 6: Tsuboi A 等，Leuk Res. 1999May;23 (5) :499-505. 非专利文献 7: Oka Y 等，Immunogenetics. 2000Feb ;51 (2) : 99-107. 非专利文献 8: Gao FG 等，Cancer Res. 2002Novl5;62 (22) :6438-41. 非专利文献 9:Zeng G, J Immunother. 2001May ；24 (3) : 195-204 非专利文献 10:Knights AJ等，Cancer Tmmunol Immunother. 2002Jul ；51(5) :271-81. 非专利文献 11: Sotiriadou R 等，Br J Cancer. 2001Novl6;85 (10) :1527-34. 非专利文献 12:Hural JA 等，J Immunol·2002Jull;169(l):557-65·


【发明内容】
发明解决的问题
[0006] 本发明所要解决的问题是提供用WTl肽活化辅助T细胞的方法，其中所述的WTl 肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501分子结合的能力，和 用于其的组合物，以及用于通过活化辅助T细胞治疗和/预防癌症的药物组合物等等。 解决问题的手段
[0007] 考虑到上述情况进行深入研究，结果本发明人发现在与HLA_DRB1*0405分子和 HLA_DRB1*1502分子结合的WTl肤当中，具有氨基酸序列Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His 的WTl肽还与HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分 子和HLA-DPB1*0501分子结合。因此，本发明得以完成。
[0008] 本发明提供了 ： (1) 用于活化辅助T细胞的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并且由此活 化辅助T细胞，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。 (2) 根据（1)的方法，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分 子或HLA-DPB1*0501分子中的至少两个结合的能力。 (3) 根据⑴或⑵的方法，其中所述WTl肽还具有与HLA-DRB1*0405分子和/或 HLA-DRB1*1502分子结合的能力。 (4) 根据（1)-(3)任一项的方法，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901 分子、HLA-DPB1*0501 分子、HLA-DRB1*0405 分子和 HLA-DRB1*1502 分子结 合的能力。 (5) 根据（1)-(4)任一项的方法，其中所述的WTl肽是包含氨基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His (SEQ ID No: 2)的肤。 (6) 根据（1)-(5)任一项的方法，其中通过添加 WTl肽、添加包含编码WTl肽的多核苷 酸的表达载体或添加包括该表达载体的细胞实现将WTl肽添加到抗原递呈细胞。 (7) 用于通过添加 WTl肽至抗原递呈细胞从而活化辅助T细胞的组合物，其包含WTl 肽，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分 子中任一个结合的能力。 (8) 在受试者中治疗或预防癌症的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并且由 此活化辅助T细胞，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。 (9) 用于通过添加 WTl肽至抗原递呈细胞来活化辅助T细胞从而治疗或预防癌症的药 物组合物，其包含WTl肽，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分 子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。 (10) 特异性结合WTl肽的抗体，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。 (11) 在 HLA-DRB1*1501 阳性、HLA-DPB1*0901 阳性和 HLA-DPB1*0501 阳性受试者的任 一中测定WTl肽的存在或量的方法，其包括： (a) 使抗-WTl抗体与来自所述受试者的样品反应；以及 (b) 测定与所述样品中含有的WTl肽特异性结合的抗-WTl抗体的存在或量。 (12) 治疗或预防癌症的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并由此活化辅助T 细胞，以及将所述活化的辅助T细胞施与受试者，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分 子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501分子结合的能力。 (13) 用于治疗或预防癌症的药物组合物，包括用WTl肽活化的辅助T细胞，其中所述 WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结 合的能力。 (14) 在 HLA-DRB1*1501 阳性、HLA-DPB1*0901 阳性和 HLA-DPB1*0501 阳性受试者的任 一中测定WTl-特异性辅助T细胞的存在或量的方法，其包括： (a) 使 WTl 肽和 HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子或 HLA-DPB1*0501 分子的复 合物与来自所述受试者的样品反应；以及 (b) 测定样品中包含的识别复合物的辅助T细胞的存在或量。 (15) 在 HLA-DRB1*1501 阳性、HLA-DPB1*0901 阳性、HLA-DPB1*0501 阳性、 HLA-DRB1*0405阳性或HLA-DRB1*1502阳性受试者中测定WTl-特异性辅助T细胞的存在或 量的方法，其包括： (a) 用WTl肽刺激外周血单核细胞、侵袭性淋巴细胞（invasive lymphocyte)、肿瘤细 胞、腹水中的细胞、胸水中的细胞、脑脊髓液中的细胞、骨髓细胞或淋巴结细胞；以及 (b) 测定细胞因子的产生或辅助T细胞的反应， 其中细胞因子产生或辅助T细胞反应的存在或量的升高表明WTl特异性辅助T细胞的 存在或量。 本发明的效果
[0009] 本发明提供了用WTl肽活化辅助T细胞的方法，其中所述WTl肽与HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子，HLA-DPB1*0501 分子、HLA-DRB1*0405 分子和 HLA-DRB1*1502 分 子结合，和用于其的组合物，以及用于通过活化辅助T细胞治疗和/或预防癌症的药物组合 物等等。因此，能够在体内和体外活化具有任何此类MHC II类分子的受试者的辅助T细 胞，治疗和预防癌症等。由于约90%的日本人均被该五类MHC II类亚类所覆盖，可在非常 宽范围的受试者中活化辅助T细胞以治疗和/或预防癌症。 附图简述：
[0010] 图1是表示由TA28. 1细胞产生的IFN-Y的量的图。在图中，纵轴表示IFN-Y 的浓度（pg/ml)。该图从左边开始，分别相应于"在不存在WTl肽的情况下培养来自 HLA-DRB1*1501阳性受试者的外周血单核细胞的情况"、"在WTl肽的存在下培养TA28. 1细 胞的情况（黑色）"、"在不存在WTl肽的情况下培养来自HLA-DRB1*1501阴性受试者的外 周血单核细胞的情况"、"在WTl肽的存在下培养来自HLA-DRB1*1501阴性受试者的外周血 单核细胞的情况"。 图2是表示由TA28. 1细胞产生的IFN-γ、IL-4和IL-10量的图。在该图中，纵轴表示 浓度（pg/ml)。从左边开始，所述图对应于IFN- γ、IL-4和IL-10的值。 图3是表示由E15. 2细胞产生的IFN-γ、IL-4和IL-10量的图。在该图中，纵轴表示 浓度（pg/ml)。从左边开始，所述图对应于IFN- γ、IL-4和IL-10的值。 图4表示由HLA-DPB1*0501/*0501阳性单核细胞产生IFN-γ和IL-17。在该图中，横 轴表示IFN- γ，且纵轴表示IL-17。图4a表示没有用WTl肽刺激的细胞，以及图4b表示用 WTl肽刺激的细胞。 图5是表示TA28. 1细胞生长的图。在该图中，纵轴表示cpm(xl04)。该图从左边开始， 分别相应于"用没有加 WTl肽的外周血单核细胞共培养TA28. 1细胞的情况"、"用加了 WTl 肽的外周血单核细胞共培养TA28. 1细胞的情况（黑色）"、"在抗-MHC I类抗体存在下，用 加了 WTl肽的外周血单核细胞培养TA28. 1细胞的情况"、"在抗-HLA-DR抗体存在下，用加 了 WTl肽的外周血单核细胞共培养TA28. 1细胞的情况（阴影）"、"在抗-HLA-DQ抗体存在 下，用加了 WTl肽的外周血单核细胞共培养TA28. 1细胞的情况"、"在抗-HLA-DP抗体存在 下，用加了 WTl肽的外周血单核细胞共培养TA28. 1细胞的情况"。 图6是表示E15. 2细胞生长的图。在该图中，纵轴表示cpm(xl04)。该图从左边开始， 分别相应于"用没有加 WTl肽的来自HLA-DPB1*0901阳性受试者的外周血单核细胞共培养 E15. 2细胞的情况"、"用加了 WTl肽的来自HLA-DPB1*0901阳性受试者的外周血单核细胞共 培养E15. 2细胞的情况（黑色）"、"用没有加 WTl肽的来自HLA-DPB1*0901阴性受试者的 外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况"、"用加了 WTl肽的来自HLA-DPB1*0901阴性受 试者的外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况"。 图7是表示E15. 2细胞生长的图。在该图中，纵轴表示cpm。该图从左边开始，分别相 应于"用没有加 WTl肽的外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况"、"用加了 WTl肽的外 周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况（黑色）"、"在抗-MHC I类抗体存在下，用加了 WTl 肽的外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况"、"在抗-HLA-DR抗体存在下，用加了 WTl肽 的外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况"、"在抗-HLA-DQ抗体存在下，用加了 WTl肽的 外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况"、和"在抗-HLA-DP抗体存在下，用加了 WTl肽的 外周血单核细胞共培养E15. 2细胞的情况（阴影）"。 图8是表示HLA-DPB1*0501/*0501阳性单核细胞生长的图。在图中，纵轴表示cpm。该 图从左边开始，分别对应于"没有用WTl肽刺激的情况"和"用WTl肽刺激的情况"。 图9表示通过抗HLA-DP抗体抑制HLA-DPB1*0501/*0501阳性单核细胞的生长。图中， 纵轴表示cpm。该图从左边开始，分别对应于"没有用WTl肽刺激的情况"、"用来自HIV的 对照肽刺激的情况"、"用WTl肽刺激的情况"、"在抗HLA-DR抗体的存在下用WTl肽刺激的 情况"、"在抗HLA-DQ抗体的存在下用WTl肽刺激的情况"以及"在抗HLA-DP抗体的存在下 用WTl肽刺激的情况"。 图10是表示用不同浓度的WTl肽的情况下E15. 2细胞生长的图。图中，纵轴表示 cpm (xlO4)，并且横轴表示WTl肽的浓度。 实施本发明的最佳模式
[0011] 一方面，本发明涉及用于活化辅助T细胞的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细 胞，并由此活化辅助T细胞，其中所述WTl肽具有结合HLA-DRBl*1501分子、HLA-DPBl*0901 分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个的能力。在本发明中，WTl肽是指由SEQIDNo: 1所示 人WTl蛋白的部分氨基酸序列组成的肽；在所述氨基酸序列上具有一至若干个氨基酸替 换、修饰或缺失、并具有结合HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501 分子中任一个的能力的肽；或这样的肽，其中各种物质诸如氨基酸、肽或其类似物可能附着 于该肽的N端和/或C端。所述物质例如可以通过活体内的酶或通过诸如细胞内加工的过 程而被加工，并且最终所述WTl肽变成可结合HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个的形式。所述物质可以是调节本发明WTl肽溶解度、或增加其 稳定性（抵抗蛋白酶等）的物质。备选地，其可以是将本发明的WTl肽特异性地递送至例 如特定组织或器官，或增加抗原递呈细胞摄入效率的物质等。备选地，其可以为限制为与和 抗原递呈细胞来源的受试者相同类型的MHC I类分子的WTl肽。
[0012] 本发明的WTl肽具有结合HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个的能力。因此，所述WTl肽可以是具有与HLA-DRB1*1501分 子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中至少两个结合的能力的肽，或具有与 HLA-DRB1*1501分子和/或HLA-DPB1*0901分子和/或HLA-DPB1*0501分子、和除了上述分 子外的HLA II类分子结合的能力的肽，例如，具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405 分子和/或HLA-DRB1*1502分子结合的能力的肽；具有与HLA-DPB1*0901分子、 HLA-DRB1*0405分子和/或HLA-DRB1*1502分子结合的能力的肽；具有与HLA-DPB1*0501 分子、HLA-DRB1*0405分子和/或HLA-DRB1*1502分子结合的能力的肽；或具有与 HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子、HLA-DPB1*0501 分子、HLA-DRB1*0405 分子和 / 或HLA-DRB1*1502分子结合的能力的肽。由于具有氨基酸序列Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID No:2)的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子、HLA-DPB1*0501 分子、HLA-DRB1*0405 分子和 HLA-DRB1*1502 分 子结合的能力，具有此类氨基酸序列的WTl肽是优选的。一般而言，与MHC II类结合的肽 由10-25个氨基酸组成。因此，WTl肽优选具有由10-25个氨基酸组成的氨基酸序列。
[0013] 可通过本领域通用的方法或其变形合成本发明的WTl肽。此类方法例如描述 于 Peptide Synthesis,Interscience, New York, 1966 ；The Proteins,卷 2,Academic Press Inc. , New York, 1976 ；Peptide-Gosei, Maruzen Co., Ltd.,1975 ；Peptide-Gosei No Kiso To Jikken, Maruzen Co. , Ltd. , 1985 ；和 Iyakuhin No Kaihatsu(Zoku),卷 14,Peptide-Gosei, Hirokawa-Book store, 1991。
[0014] 还可基于编码WTl肽的核苷酸序列信息应用基因工程技术制备本发明的WTl肽。 此类基因工程技术是本领域技术人员公知的。
[0015] 抗原递呈细胞是指诸如树状细胞的、能将WTl肽与MHC II类分子一起递呈给辅助 T细胞等的细胞。因此，抗原递呈细胞来源的受试者必须具有与所加入的WTl肽结合的MHC Π 类亚类相同的 MHC II 类亚类（例如，HLA-DRB1*1501、HLA-DPB1*0901、HLA-DPB1*0501、 HLA-DRB1*0405 或 HLA-DRB1*1502)。
[0016] 一般而言，辅助T细胞通过所述T细胞表面的TCR-⑶3复合物通过抗原递呈细胞 表面上MHC II类分子识别抗原肽，并且通过抗原递呈细胞表面的整联蛋白配体刺激T细胞 表面的整联蛋白而被活化。在本发明中，辅助T细胞的活化不仅包括辅助T细胞的活化，还 包括辅助T细胞的诱导与生长。如上所述,经活化的辅助T细胞具有通过增加 B细胞或T 细胞的诱导、生长或活化而活化免疫系统的功能。因此，本发明用于活化辅助T细胞的方法 可用作癌症等治疗中的辅助治疗。备选地，应用本发明的方法体外活化的辅助T细胞可以 用于治疗或预防癌症等，或可用作用于其的辅助治疗。可通过测量细胞因子诸如干扰素和 白介素等的产量和分泌量而确定辅助T细胞的活化。
[0017] 可直接通过添加 WTl肽、或间接通过添加包含编码WTl肽的多核苷酸的表达载体、 或添加包含该表达载体的细胞而实现将WTl肽添加至抗原递呈细胞。可通过本领域技术人 员的公知方法制备包含编码WTl肽的多核苷酸的表达载体和包含该表达载体的细胞。
[0018] 在另一方面，本发明涉及用于通过将WTl肽添加至抗原递呈细胞而活化辅 助T细胞的组合物，其包括WTl肽，其中所述的WTl肽具有结合HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个的能力。当将本发明的组合物施与 HLA-DRB1*1501、HLA-DPB1*0901或HLA-DPB1*0501阳性受试者时，该受试者的免疫系统通 过受试者的辅助T细胞的活化而被活化。在许多癌症和肿瘤中WTl基因都以高水平表达， 所述癌症和肿瘤包括造血肿瘤，诸如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤或恶性淋 巴瘤；以及实体癌，诸如胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、胚细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列 腺癌、子宫癌、宫颈癌或卵巢癌。因此，本发明的组合物可以用作治疗或预防癌症的辅助治 疗。备选地，应用本发明的组合物活化的辅助T细胞例如可用作癌症治疗中的佐药。
[0019] 如上所述，本发明的WTl肽可以是具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分 子和HLA-DPB1*0501分子中至少两个结合的能力的肽，或具有与HLA-DRB1*1501分子和/ 或HLA-DPB1*0901分子和/或HLA-DPB1*0501分子、和其他MHC II类分子结合的能力的肽。 因此，只要抗原递呈细胞来源的受试者对于本发明的WTl肽能与其结合的MHC II类亚类是 阳性的，即可以得到本发明组合物活化辅助T细胞的效果。
[0020] 除了 WTl肽外，本发明的组合物还可以包含例如载体、赋形齐IJ、添加剂等。因为本 发明组合物中包含的WT1肽活化对该WT1肽特异的辅助T细胞，因此该组合物可以包含MHC I类限制性WTl肽，或其可与该肽一起使用。
[0021] 可依据诸如辅助T细胞的期望活化、抗原递呈细胞的状态的条件合适地选择应用 本发明组合物的方法。此类方法的实例包括，但不限于真皮内施用、皮下施用、肌内施用、静 脉内施用、鼻内施用和口服施用，以及添加至抗原递呈细胞的培养基中。可依据诸如辅助T 细胞的期望活化、抗原递呈细胞的状态的条件合适地选择本发明组合物中包含的WTl肽的 量、以及本发明组合物的形式、使用次数等。
[0022] 在其它方面，本发明涉及通过将WTl肽添加至抗原递呈细胞活化辅助T细胞的组 合物，其包含包含编码所述WTl肽的多核苷酸的表达载体或包含该表达载体的细胞，其中 所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中 任一个结合的能力。包含编码所述WTl肽的多核苷酸的表达载体和包含该表达载体的细胞 描述如上。
[0023] 另一方面，本发明涉及包含编码WTl肽的多核苷酸的表达载体或包含该表达载体 的细胞在制备组合物中的应用。
[0024] 在其它方面，本发明涉及用于通过将WTl肽添加至抗原递呈细胞活化辅助T细胞 的试剂盒，其包含WTl肽，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分 子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。优选在用于活化辅助T细胞的方法中使用 该试剂盒。除了所述WTl肽之外，本发明的试剂盒还可以包含例如获得抗原递呈细胞的工 具、检测辅助T细胞活性的工具等。一般而言，所述试剂盒附有说明书手册。通过应用本发 明的试剂盒，可有效地诱导辅助T细胞。
[0025] 在另一方面，本发明涉及用于通过将WTl肽添加至抗原递呈细胞活化辅助T细胞 的试剂盒，其包含包含编码WTl肽的多核苷酸的表达载体或包含该表达载体的细胞，其中 所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中 任一个结合的能力。
[0026] 在其它方面，本发明涉及用于在受试者中治疗或预防癌症的方法，包括将WTl肽 添加至抗原递呈细胞，并由此活化辅助T细胞，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分 子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。本发明的方法是这 样的方法，其中通过活化辅助T细胞而活化受试者中的免疫系统，并且治疗或预防了该受 试者的癌症。可直接通过添加 WTl肽、或间接通过添加包含编码WTl肽的多核苷酸的表达 载体、或添加包含该表达载体的细胞而实现添加 WTl肽至抗原递呈细胞。
[0027] 如上所述，辅助T细胞识别任何一个MHC II类分子、尤其是HLA-DRB1*1501分 子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501与WTl肽的复合物。因此，所述受试者是具有 与WTl肽结合的MHC II类分子的受试者，例如HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳性、 或HLA-DPB1*0501阳性受试者。如上所述，本发明的WTl肽可以是具有与HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501分子中的至少两个结合的能力的肽，或具有与 HLA-DRB1*1501分子和/或HLA-DPB1*0901分子和/或HLA-DPB1*0501分子、和除了它们外 的MHC II类分子结合的能力的肽。因此，在这种情况下，能够在对于本发明的WTl肽能结 合的MHCII类亚类而言阳性的受试者中治疗或预防癌症。待治疗或预防的癌症可以是任意 一个，并且其实例包括造血肿瘤，诸如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤或恶性 淋巴瘤；以及实体癌，诸如胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、胚细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前 列腺癌、子宫癌、宫颈癌或卵巢癌。此外，本发明的方法可与用MHC I类分子限制性WTl肽 治疗或预防癌症的方法或用于其的药物组合物一起应用。
[0028] 另一方面，本发明涉及用于通过将WTl肽添加至抗原递呈细胞活化辅助T细胞 从而在受试者中治疗或预防癌症的药物组合物，其包含WTl肽，其中所述的WTl肽具有与 HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。所 述WTl基因在许多癌症和肿瘤中以高水平表达，所述癌症和肿瘤包括造血肿瘤，诸如白血 病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤或恶性淋巴瘤；以及实体癌，诸如胃癌、结肠癌、肺 癌、乳腺癌、胚细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌或卵巢癌。因此，本 发明的药物组合物可用于治疗或预防癌症。
[0029] 如上所述，本发明的WTl肽可以是具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分 子或HLA-DPB1*0501分子中的至少两个结合的能力的肽，或具有与HLA-DRB1*1501分子和 /或HLA-DPB1*0901分子和/或HLA-DPB1*0501分子、和除了它们外的MHC II类分子结合 的能力的肽。因此，只要该抗原递呈细胞来源自对于本发明的WTl肽能与其结合的MHC II 类亚类而言阳性的受试者，则本发明的药物组合物可用于治疗或预防癌症。
[0030] 当将本发明的药物组合物例如施用于HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳性 或HLA-DPB1*0501阳性受试者时，可通过该药物组合物中包含的WTl肽活化辅助T细胞从 而活化受试者的免疫系统，由此治疗或预防癌症。因此，本发明的药物组合物可与治疗或预 防癌症的方法或用于其的药物组合物一起使用。
[0031] 除了作为活性组分的WTl肽之外，本发明的药物组合物还可以包含例如载体、赋 形剂等。本发明药物组合物中包含的WTl肽与抗原递呈细胞表面的MHC II类分子结合，并 且活化辅助T细胞。因此，本发明的药物组合物还可以包含辅助T细胞的活化剂、生长因子、 诱导剂等，或可以包含MHC I类限制性WTl肽。
[0032] 可以依据诸如疾病类型、受试者的状况或靶部位等条件而适当地选择施用本发明 药物组合物的方法。此类方法的实例包括但不限于：真皮内施用、皮下施用、肌内施用、静脉 内施用、鼻内施用和口服施用。可以依据诸如疾病类型、受试者的状况或靶部位等条件而适 当地选择本发明药物组合物中所包含的肽的量、以及本发明药物组合物的剂型、施用的次 数等。肽的单剂量一般为〇· OOOlmg-lOOOmg，优选0· OOlmg-lOOOmg。
[0033] 在其它方面，本发明涉及用于通过将WTl肽添加至抗原递呈细胞活化辅助T细 胞从而在受试者中治疗或预防癌症的药物组合物，其包含包含编码所述WTl肽的多核苷 酸的表达载体或包含该表达载体的细胞，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。
[0034] 在其它方面，本发明涉及WTl肽、包含编码所述WTl肽的多核苷酸的表达载体或包 含该表达载体的细胞在制备药物组合物中的用途。
[0035] 另一方面，本发明涉及与WTl肽特异性结合的抗体，其中所述的WTl肽具有与 HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。可 通过本领域技术人员公知的手段或方法制备本发明的抗体。本发明的抗体可用于各种癌症 的诊断、其预后等。
[0036] 另一方面，本发明涉及用于确定HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳性或 HLA-DPB1*0501阳性受试者中WTl肽的存在或量的方法，其包括： (a) 使抗-WTl抗体与来自所述受试者的样品反应；以及 (b) 测定与所述样品中含有的WTl肽特异性结合的抗-WTl抗体的存在或量。例如，可 以通过将抗-WTl抗体与来自HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳性或HLA-DPB1*0501 阳性受试者的样品温育，或将该抗-WTl抗体施用于HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳 性或HLA-DPB1*0501阳性受试者，并确定例如其位置、部位或量从而诊断癌症或其预后等。 本发明的抗-WTl抗体是指可特异性识别本发明WTl肽的抗体。抗-WTl抗体可以是单克隆 抗体或多克隆抗体。抗-WTl抗体可以是经标记的。可应用已知的标记,诸如突光标记或放 射性标记用作标记。通过标记抗体，可以容易且快速地确定WTl肽的存在或量。
[0037] 另一方面，本发明涉及确定WTl肽的存在或量的试剂盒，其包含作为基本组分的 抗-WTl抗体。
[0038] 此外，在WTl肽的存在或量的确定中，当所述WTl肽具有与HLA-DRB1*0405分子和 /或HLA-DRB1*1502分子结合的能力，可在具有此类MHC II类亚类的受试者中确定WTl肽 的存在或量。
[0039] 另一方面，本发明涉及治疗或预防癌症的药物组合物，其包含用WTl肽活化 的辅助T细胞，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。通过活化的辅助T细胞诱导、生长或活化B细胞 或T细胞而治疗或预防癌症。因此，本发明这一方面的药物组合物可与治疗或预防癌症的 另一方法或用于其的药物组合物一起使用。用WTl肽活化辅助T细胞不仅包括用WTl肽直 接活化，还包括用包含编码WTl肽的多核苷酸的表达载体或包含该表达载体的细胞间接活 化。
[0040] 除了作为活性组分的经活化的辅助T细胞外，本发明的药物组合物还可以包含例 如载体、赋形剂等。可以依据诸如疾病类型、受试者的状况或靶部位等条件而适当地选择施 用本发明药物组合物的方法。此类方法的实例包括但不限于：真皮内施用、皮下施用、肌内 施用、静脉内施用、鼻内施用和口服施用。可以依据诸如疾病类型、受试者的状况或靶部位 等条件而适当地选择本发明药物组合物中所包含的辅助T细胞量、以及本发明药物组合物 的剂型、施用的次数等。
[0041] 另一方面，本发明涉及用于治疗或预防癌症的方法，包括将WTl肽添加至抗原递 呈细胞，并由此活化辅助T细胞，并将该活化的辅助T细胞施用于受试者，其中所述的WTl 肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合 的能力。
[0042] 另一方面，本发明涉及WTl肽在制备包含经活化的辅助T细胞的药物组合物中的 用途。
[0043] 在其它方面，本发明涉及在HLA-DRB 1*1501阳性、HLA-DPB 1*0901阳性和 HLA-DPB1*0501阳性受试者的任一中测定WTl-特异性辅助T细胞的存在或量的方法，其包 括： (a) 使 WTl 肽和 HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子或 HLA-DPB1*0501 分子的复 合物与来自所述受试者的样品反应；以及 (b) 测定样品中包含的识别复合物的辅助T细胞的存在或量。来自受试者的样品可 以是任何的样品，只要其可能含有淋巴细胞。此类样品的实例包括体液，诸如血液或淋 巴，以及组织。可应用本领域技术人员公知的方法，诸如生物素-抗生蛋白链菌素方法， 制备例如作为四聚体或五聚体的WTl肽和HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子或 HLA-DPB1*0501分子的复合物。可通过本领域技术人员公知的方法测量识别此类复合物的 辅助T细胞的存在或量。在本发明的这一方面，该复合物可以是经标记的。可应用已知的 标记，诸如突光标记或放射性标记用作标记。通过标记它，可容易或快速地确定辅助T细胞 的存在或量。本发明这一方面的方法可用于诊断癌症或其预后等。
[0044] 因此，本发明还提供了用于在HLA-DRB 1*1501阳性、HLA-DPB 1*0901阳性和 HLA-DPB1*0501阳性受试者的任一中确定辅助T细胞的存在或量的组合物，其包含WTl肽和 HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子或 HLA-DPB1*0501 分子的复合物。
[0045] 此外，本发明还提供了用于在HLA-DRB 1*1501阳性、HLA-DPB 1*0901阳性或 HLA-DPB1*0501阳性受试者中确定辅助T细胞的存在或量的试剂盒，其包含WTl肽和 HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子或 HLA-DPB1*0501 分子的复合物。
[0046] 此外，在辅助T细胞的存在或量的确定中，当该WTl肽具有与HLA-DRB1*0405分子 和/或HLA-DRB1*1502结合的能力时，能够在具有此类MHC II类亚类的受试者中确定辅助 T细胞的存在或量。在这种情况下，应用WTl肽与能和该WTl肽结合的MHC II类分子的复 合物。
[0047] 在其它方面，本发明涉及应用WTl肽和HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子 或HLA-DPB1*0501分子的复合物获得辅助T细胞的方法，其包括： (a) 使样品和该复合物反应；以及 (b) 获得样品中所含有的识别该复合物的辅助T细胞。该复合物如上所述。样品可以是 任何样品，只要其可能含有淋巴细胞。此类样品的实例包括来自受试者的样品，诸如血液， 以及细胞培养物。可应用本领域技术人员公知的方法，诸如FACS或MACS获得识别该复合 物的辅助T细胞。本发明允许培养所获得的辅助T细胞并将其用于治疗或预防各种癌症。
[0048] 因此，本发明还涉及可通过应用WTl肽和HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分 子或HLA-DPB1*0501分子的复合物获得辅助T细胞的方法获得的辅助T细胞。
[0049] 此外，本发明还涉及获得辅助T细胞的试剂盒，其包含WTl肽和HLA-DRB 1*1501分 子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501分子的复合物。
[0050] 此外，在辅助T细胞的获得中，当该WT1肽具有与HLA-DRB 1*0405分子和/或 HLA-DRB1*1502分子结合的能力时，可能获得识别此类MHC II类亚类和WTl肽的复合物的 辅助T细胞。在这种情况下，应用WTl肽和与其结合的MHC II类分子的复合物。
[0051] 另一方面，本发明涉及在HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳性、 HLA-DPB1*0501阳性、HLA-DRB1*0405阳性或HLA-DRB1*1502阳性受试者中测定WTl-特异 性辅助T细胞的存在或量的方法，其包括： (a) 用WTl肽刺激外周血单核细胞、侵袭性淋巴细胞、肿瘤细胞、腹水中的细胞、胸水中 的细胞、脑脊髓液中的细胞、骨髓细胞或淋巴结细胞；以及 (b) 测定细胞因子的产生或辅助T细胞的反应， 其中细胞因子产生或辅助T细胞反应的存在或量的升高表明WTl特异性辅助T细胞的 存在或量。在本发明该方法中应用的诸如外周血单核细胞、侵袭性淋巴细胞、肿瘤细胞、腹 水中的细胞、胸水中的细胞、脑脊髓液中的细胞、骨髓细胞或淋巴结细胞的细胞可以来源自 健康受试者或癌症患者。通过应用来自健康受试者的细胞，能够确定该受试者是否患有癌 症，该受试者是否具有其的易感性等。通过应用来自癌症患者的细胞，能够预测WTl免疫治 疗是否对该癌症患者具有效果，等等。用WTl肽刺激细胞可在体外或体内实施。由于其容 易性，优选在体外刺激。可通过已知的方法确定细胞因子产生或辅助T细胞反应的存在，或 细胞因子产生或辅助T细胞反应的量。
[0052] 以下实施例更详细地阐明了本发明，但是不能将其理解为对本发明范围的限制。 实施例
[0053] 1.制备抗原递呈细胞 从收集自健康供血者（HLA-DRB1*1501阳性、HLA-DPB1*0901阳性或HLA-DPB1*0501阳 性）的外周血中分离外周血单核细胞（PBMCs)。在1 % AB血清（Nabi, Miami, FL)、X-VIV015 培养基（Cambrex)中以IxlO7细胞/孔的密度将PBMCs接种于6孔塑料板中，并培养2小 时。培养后，移除悬浮细胞，并在 1000IU/ml IL-4(P印ro Tech)、1000IU/ml GM-CSF(P印ro Tech)，I % AB血清和X-VIV015培养基中培养剩下的贴壁细胞。在第2和第4天，更换培养 基，并加入IL-4和GM-CSF。第6天，将lOOIU/mlTNF- α加入到成熟的抗原递呈细胞。
[0054] 2. WTl肽特异性⑶4阳性T细胞的诱导 应用用于分离⑶4阳性T细胞的RosetteSep(StemCell)从来源自相同供体中的血液 分离⑶4阳性T细胞。将该⑶4阳性T细胞（3χ106细胞）添加至24孔板的每一个孔。用 加了 2〇μ/πι1 WTl肽（SEQ ID Ν〇:2)的自体抗原递呈细胞（3χ105细胞）刺激它们，并用 25Gy放射辐射。在刺激后次日，加入20IU/ml IL-2。类似地，每隔一周应用加了 2〇μ8/πι1 WTl肽的抗原递呈细胞刺激经刺激的CD4阳性T细胞。此外，在第二次刺激后，每隔一天将 培养基更换为含有IL-2的培养基。将通过总共3次刺激诱导的CD4阳性T细胞（分别将 HLA-DRB1*1501和HLA-DPB1*0901阳性T细胞限定为ΤΑ28. 1细胞和Ε15. 2细胞）用于以下 实验。
[0055] 3. IFN-Y 的测量 在20 μ g/ml WTl肽的存在下培养TA28. 1细胞和外周血单核细胞24小时，其中所述的 外周血单核细胞来自该TA28. 1细胞来源的受试者。培养后，应用EILISA试剂盒量化上清液 中的IFN-Y的量。作为对照，应用了来自HLA-DRB1*1501阴性受试者的外周血单核细胞。 结果如图1所示。其证实了 TA28. 1细胞识别对HLA-DRB1*1501分子特异的WTl肽，以增加 IFN-Y的产量（SM舌化）。
[0056] 此外，应用ELISA试剂盒，证实了 TA28. 1细胞和E15. 2细胞不产生IL-4和IL-10。 结果如图2和3所示。其证实了 TA28. 1细胞和E15. 2细胞是Thl细胞。
[0057] 应用HLA-DPB1*0501/*0501阳性单核细胞进行以下实验。将细胞悬浮于 X-VIV0(1% AB血清），并加入20yg/ml WTl肽、lOyg/ml布雷菲德菌素 A和0. 5yg/ ml⑶28/49d。在5% CO2下在37°C温育4小时。作为对照，应用没有添加 WTl肽温育 的细胞。在用缓冲液洗涤后，加入抗-⑶3-perCP抗体和抗-CD4-APC抗体，并将其在4°C 温育30分钟。用缓冲液洗涤后，应用BD Cytofix/Cytoperm固定细胞和透化处理（4°C， 20分钟）。用BDperm/wash缓冲液洗涤后，加入抗-INF- γ -FITC (BD，克隆：B27)和 抗-IL-17-PE(eBioscience，克隆：eBio64DEC17)，并在4°C温育30分钟。用缓冲液洗涤后， 用FACSAria分析细胞。结果如图4所示。其证实了 HLA-DPB1*0501阳性单核细胞生长，并 产生 IFN-γ 和 IL-17。
[0058] 4.生长测试 通过[3H]-胸苷掺入方法进行生长测试。在96孔板中共培养TA28. 1细胞（3xl04细 胞）和加了 WTl肽并辐射过的外周血单核细胞（HLA-DRB1*1501阳性；IxlO5细胞）。共培 养80小时后，加入37kBq/孔[ 3H]-胸苷（Amersham Biosciences)。再温育16小时，并应 用β-闪烁计数器测量。作为计数/分钟（cpm)表示测量结果。作为对照，应用没有加肽 的外周血单核细胞。此外，为了证实该活化信号对HLA-DRB1*1501分子是特异的，应用了 抗-MHC I类抗体、抗-HLA-DR抗体、抗-HLA-DQ抗体和抗-HLA-DP抗体。结果如图5所示， 其证实了 TA28. 1细胞被通过WTl肽和HLA-DRB1*1501的信号活化，并生长。其还证实该生 长对HLA-DRB1*1501是特异的，因为其被抗-HLA-DR抗体抑制。
[0059] 类似地，应用E15. 2细胞进行生长测试。作为附加对照，应用了来自 HLA-DPB1*0901阴性受试者的外周血单核细胞。结果如图6和7所示。其证实了 E15. 2细胞 被通过WTl肽和HLA-DPB1*0901的信号活化，并生长。其还证实了该生长对HLA-DPB1*0901 是特异的，因为其被抗-HLA-DP抗体抑制。
[0060] 此外，还应用HLA-DPB1*0501/*0501阳性单核细胞进行生长测试。作为对照，还应 用了来自HLA-DPB1*0501阴性受试者的外周血单核细胞。结果如图8和9所示。其证实了 HLA-DPB1*0501/*0501阳性单核细胞被通过WTl肽和HLA-DPB1*0501的信号活化，并生长。 其还证实了该生长对HLA-DPB1*0501是特异的，因为其被抗-HLA-DP抗体抑制。
[0061] 此外，还用各种浓度的WTl肽进行了 E15. 2细胞的生长测试。应用的WTl肽的浓 度为0.08、0.4、2、10、50、100或15(^8/1111。结果如图10所示。其证实了11'1肽以浓度依 赖的方式使E15. 2细胞生长。 工业实用性
[0062] 本发明提供了用WTl肽活化辅助T细胞的方法，其中所述WTl肽具有结合 HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501分子的能力，并提供了用于其 的组合物，以及提供了用于通过活化辅助T细胞治疗和/或预防癌症的药物组合物等。因 此，本发明可用于医药等领域，例如，应用于开发和制备用于预防或治疗高水平表达WTl基 因的各种造血肿瘤和实体癌的药物组合物领域。
【权利要求】
1. 用于活化辅助T细胞的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并且由此活化辅助 T细胞，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501 分子中任一个结合的能力。
2. 根据权利要求1的方法，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中的至少两个结合的能力。
3. 根据权利要求1或2的方法，其中所述WTl肽还具有与HLA-DRB1*0405分子和/或 HLA-DRB1*1502分子结合的能力。
4. 根据权利要求1-3任一项的方法，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901 分子、HLA-DPB1*0501 分子、HLA-DRB1*0405 分子和 HLA-DRB1*1502 分子结 合的能力。
5. 根据权利要求1-4任一项的方法，其中所述的WTl肽是包含氨基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His (SEQ ID No: 2)的肤。
6. 根据权利要求1-5任一项的方法，其中通过添加WTl肽、添加包含编码WTl肽的多核 苷酸的表达载体或添加包括该表达载体的细胞实现将WTl肽添加到抗原递呈细胞。
7. 用于通过添加WTl肽至抗原递呈细胞从而活化辅助T细胞的组合物，其包含WTl肽， 其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子 中任一个结合的能力。
8. 在受试者中治疗或预防癌症的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并且由 此活化辅助T细胞，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和 HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。
9. 用于通过添加WTl肽至抗原递呈细胞来活化辅助T细胞从而治疗或预防癌症的药物 组合物，其包含WTl肽，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子 和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。
10. 特异性结合WTl肽的抗体，其中所述的WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、 HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结合的能力。
11. 在 HLA-DRB1*1501 阳性、HLA-DPB1*0901 阳性和 HLA-DPB1*0501 阳性受试者的任一 中测定WTl肽的存在或量的方法，其包括： (a) 使抗-WTl抗体与来自所述受试者的样品反应；以及 (b) 测定与所述样品中含有的WTl肽特异性结合的抗-WTl抗体的存在或量。
12. 治疗或预防癌症的方法，包括将WTl肽添加至抗原递呈细胞，并由此活化辅助T细 胞，以及将所述活化的辅助T细胞施用于受试者，其中所述WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分 子、HLA-DPB1*0901分子或HLA-DPB1*0501分子结合的能力。
13. 用于治疗或预防癌症的药物组合物，包括用WTl肽活化的辅助T细胞，其中所述 WTl肽具有与HLA-DRB1*1501分子、HLA-DPB1*0901分子和HLA-DPB1*0501分子中任一个结 合的能力。
14. 在 HLA-DRB1*1501 阳性、HLA-DPB1*0901 阳性和 HLA-DPB1*0501 阳性受试者的任一 中测定WTl-特异性辅助T细胞的存在或量的方法，其包括： (a)使 WTl 肽和 HLA-DRB1*1501 分子、HLA-DPB1*0901 分子或 HLA-DPB1*0501 分子的复 合物与来自所述受试者的样品反应；以及 (b)测定样品中包含的识别该复合物的辅助T细胞的存在或量。 15?在 HLA-DRB1*1501 阳性、HLA-DPB1*0901 阳性、HLA-DPB1*0501 阳性、HLA-DRB1*0405 阳性或HLA-DRB1*1502阳性受试者中测定WTl-特异性辅助T细胞的存在或量的方法，其包 括： (a) 用WTl肽刺激外周血单核细胞、侵袭性淋巴细胞、肿瘤细胞、腹水中的细胞、胸水中 的细胞、脑脊髓液中的细胞、骨髓细胞或淋巴结细胞；以及 (b) 测定细胞因子的产生或辅助T细胞的反应， 其中细胞因子产生或辅助T细胞反应的存在或量的升高表明WTl特异性辅助T细胞的 存在或量。
【文档编号】C12N5/0783GK104312974SQ201410573477
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2008年2月27日 优先权日:2007年2月27日
【发明者】杉山治夫 申请人:株式会社癌免疫研究所