一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法
【专利摘要】本发明涉及病理检测领域，特别涉及一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法。首先配置A液：由金胺O、乙醇、苯酚、水组成，B液：由37%盐酸和乙醇组成，C液：由高锰酸钾和水组成，然后再利用上述染色液进行检测。本发明的染色液染色简单、时间短，无沉渣，荧光镜下菌体呈现明亮橘黄色，背景黑暗，特征对比清晰，荧光染色后保存时间长，阳性率高、不易漏检等优点。本发明对抗酸杆菌的鉴别诊断和治疗具有重要意义。
【专利说明】一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法
[0001](一)
【技术领域】
本发明涉及病理检测领域，特别涉及一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法。
[0002](二)
【背景技术】
结核(Tuberculosis，简称TB)是常见并可致命的一种传染病，由分枝杆菌又称结核杆菌导致。结核通常感染并破坏肺以及淋巴系统，但其它器官如脑、中枢神经系统、循环系统、泌尿系统、骨骼、关节、甚至皮肤亦可受感染。据世界卫生组织统计资料显示，全球目前有近三分之一的人感染结核杆菌，结核病患者达2000万人，每年新增患者880万人，死亡200万人。因此，早期、快速、有效的病原学诊断对及时治疗结核病、减少病死率和后遗症极其重要。
[0003]目前,临床上检测结核病主要依靠抗酸染色法(Ziehl — Neelsen)来确诊。抗酸染色法作为经典的方法，结果较为准确且长期用于诊断结核病，但由于镜检时间较长，由于操作原因可能导致颜色对比不明显，阳性检出率较低，无法完全满足临床需求。
[0004](三)
【发明内容】
本发明为了弥补现有技术的缺陷，提供了一种方法简单、阳性检出率高的荧光抗酸染色液，同时提供了利用该染色液检测抗酸杆菌的方法。
[0005]本发明是通过如下技术方案实现的:
一种荧光抗酸染色液，其特征是，
包括A液:每100ml溶液中包含下列组分:
金胺 O 0.5-1.3g，95% 乙醇 50-130ml，苯酚 50_130ml，余量为水；
其配置方法为:将金胺O加入到95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70°C加热溶解的苯酚，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌Ih ；
B液:为由37%盐酸20-100ml、95%乙醇900_980ml组成的混合溶液，其配置方法为:先加入37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至100ml后搅拌均匀；
C液:每100ml溶液中，高锰酸钾2-10g，余量为水，其配置方法为:先将高锰酸钾溶入部分水，搅拌均勻后再用水定容至1000ml,并搅拌lh。
[0006]所述A液:每1000ml溶液中包含下列组分:金胺O 1.2g，95%乙醇100ml，苯酚100ml，余量为水。
[0007]所述B液的组成成分为:37%盐酸30ml、95%乙醇970ml。
[0008]每100ml溶液中，高锰酸钾7g，余量为水。
[0009]使用上述任一项所述的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法，其特征是，包括以下步骤:
1)将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室温染色15min或加热5min ；
2)冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液； 3)加B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗；
4)水洗，冲去脱色液，如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止；
5)加C液1-2滴，复染2-4min;水洗，干燥后在暗室镜检。
[0010]本发明的有益效果是:
本发明的染色液染色简单、时间短，无沉渣，荧光镜下菌体呈现明亮橘黄色，背景黑暗，特征对比清晰，荧光染色后保存时间长，阳性率高、不易漏检等优点。本发明对抗酸杆菌的鉴别诊断和治疗具有重要意义。
[0011](四)【具体实施方式】荧光抗酸染色液的配置:
A液的配制之
实施例一:
将0.5克金胺O加入到130ml 95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60_70°C加热溶解的苯酚50ml，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌Ih ；
实施例二:
将1.3克金胺O加入到50ml 95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60_70°C加热溶解的苯酚130ml，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌Ih ；
实施例三:
将1.2克金胺O加入到10ml 95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60_70°C加热溶解的苯酚100ml，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌Ih ；
B液的配置之实施例一:
先在容量瓶中加入20ml37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至100ml后搅拌均勻；
实施例二:
先在容量瓶中加入30ml37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至100ml后搅拌均勻；
实施例三:
先在容量瓶中加入100ml37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至100ml后搅拌均勻；
C液至配置之实施例一:
先将2克高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌lh。
[0012]实施例二:
先将10克高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌lh。
[0013]实施例三:
先将7克高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌lh。
[0014]利用上述配置的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法如下: 1)将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加上述配置好的任一种A液3-4滴,室温染色12-17min,最好是15min或加热4_7min,最好是5min ；
2)冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液；
3)加上述配置好的任一种B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗；
4)水洗，冲去脱色液，如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止；
5)加上述配置好的任一种C液1-2滴，复染2-4min;水洗，干燥后在暗室镜检。
[0015]除说明书所述技术特征外，其余技术特征均为本领域技术人员已知技术。
【权利要求】
1.一种荧光抗酸染色液，其特征是， 包括A液:每100ml溶液中包含下列组分: 金胺 O 0.5-1.3g，95% 乙醇 50-130ml，苯酚 50_130ml，余量为水； 其配置方法为:将金胺O加入到95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70°C加热溶解的苯酚，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌Ih ； B液:为由37%盐酸20-100ml、95%乙醇900_980ml组成的混合溶液，其配置方法为:先加入37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至100ml后搅拌均匀； C液:每100ml溶液中，高锰酸钾2-10g，余量为水，其配置方法为:先将高锰酸钾溶入部分水，搅拌均勻后再用水定容至1000ml,并搅拌lh。
2.根据权利要求1所述的荧光抗酸染色液，其特征是，所述A液:每100ml溶液中包含下列组分:金胺O 1.2g，95%乙醇100ml，苯酚100ml，余量为水。
3.根据权利要求1所述的荧光抗酸染色液，其特征是，所述B液的组成成分为:37%盐酸 30ml、95% 乙醇 970ml ο
4.根据权利要求1所述的荧光抗酸染色液，其特征是，每100ml溶液中，高锰酸钾7g，余量为水。
5.使用权利要求1至4任一项所述的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法，其特征是，包括以下步骤: 1)将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室温染色12-17min或加热4_7min ； 2)冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液； 3)加B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗； 4)水洗，冲去脱色液，如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止； 5)加C液1-2滴，复染2-4min;水洗，干燥后在暗室镜检。
6.根据权利要求5所述的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法，其特征是，包括以下步骤: 1)将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室温染色15min或加热5min ； 2)冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液； 3)加B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗； 4)水洗，冲去脱色液，如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止； 5)加C液1-2滴，复染2-4min;水洗，干燥后在暗室镜检。
【文档编号】C12Q1/04GK104388520SQ201410580766
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月27日 优先权日:2014年10月27日
【发明者】房滨, 宁春华, 聂晖, 崔兰兰, 韩莹莹, 刘俊廷, 曹立璇 申请人:济南百博生物技术股份有限公司