淀粉酶、编码它们的核酸及其制备和应用方法
【专利摘要】一方面,本发明涉及具有淀粉酶活性的多肽,编码这些多肽的多核苷酸,以及制备和使用这些多核苷酸和多肽的方法。一方面,本发明的多肽可以被用作淀粉酶,例如α淀粉酶,以便催化淀粉水解成为糖。一方面,本发明提供了缓释组合物,该组合物包括一种由胶乳聚合物涂层包衣的期望成分。
【专利说明】淀粉酶、编码它们的核酸及其制备和应用方法
[0001] 本申请为分案申请,原申请的申请日为2004年3月8日,申请号为 200480012052. 5 (针对的分案申请的申请号为201210020583. 5),发明名称为"淀粉酶、编 码它们的核酸及其制备和应用方法"。
[0002] 参考以光盘形式提夺的序列表
[0003] 本申请包括一张含有序列表的光盘(以一式四份提交)。此处将该序列表的完整 内容引入,作为参考。该序列表在光盘上的标识如下。
[0004]
【权利要求】
1.分离的、合成的或重组的核酸,其: (a)如 SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :13, SEQ ID NO :15, SEQ ID NO :17, SEQ ID NO :19, SEQ ID NO :2U SEQ ID NO :23, SEQ ID NO :25, SEQ ID NO : 27, SEQ ID NO:29,SEQ ID NO :3U SEQ ID NO:33,SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO :37, SEQ ID NO :39, SEQ ID NO :4U SEQ ID NO :43, SEQ ID NO :45, SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:49,SEQ ID NO :5U SEQ ID NO:53,SEQ ID NO :55,SEQ ID NO :57,SEQ ID NO :59, SEQ ID NO :6U SEQ ID NO :63, SEQ ID NO :65, SEQ ID NO :67, SEQ ID NO :69, SEQ ID NO:7USEQ ID NO:73,SEQ ID NO:75,SEQ ID NO:77,SEQ ID NO:79,SEQ ID NO: 8U SEQ ID NO :83, SEQ ID NO :85, SEQ ID NO :87, SEQ ID NO :89, SEQ ID NO :9U SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID N0:101、SEQ ID N0:103、SEQ ID NO :105,SEQ ID NO : 107, SEQ ID N0:109,SEQ ID NO :11USEQ ID N0:113,SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO :117、SEQ ID NO :119、SEQ ID NO :121、SEQ ID NO :123、SEQ ID NO :125、 SEQ ID N0:127、SEQ ID N0:129、SEQ ID N0:131、SEQ ID N0:133、SEQ ID N0:135、SEQ ID NO : 137、SEQ ID 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2. 表达序列盒、载体或克隆载体,其包括权利要求1中所述的核酸序列。
3. 转化细胞,其包括权利要求1中所述的序列。
4. 分离的、合成的或重组的多肽,其为a-淀粉酶: (a)如 SEQ ID NO:2、SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID N0:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO : 14、SEQ ID NO : 16、SEQ ID NO : 18、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :24、 SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID N0:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :58、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :70、 SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQ ID N0:80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :86、SEQ ID NO :88、SEQ ID NO :90、SEQ ID NO :92、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :96、SEQ ID NO :98、SEQ ID NO : 100、SEQ ID NO : 102、SEQ ID NO : 104、 SEQ ID NO :106,SEQ ID NO : 108,SEQ ID N0:110,SEQ ID NO : 112,SEQ ID N0:114,SEQ ID N0:116、SEQ ID N0:118、SEQ ID N0:120、SEQ ID N0:122、SEQ ID N0:124、SEQ ID N0:126、 SEQ ID N0:128、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:132、SEQ ID N0:134、SEQ ID N0:136、SEQ ID NO : 138、SEQ ID NO : 140、SEQ ID NO : 142、SEQ ID NO : 144、SEQ ID NO : 146、SEQ ID NO : 148、SEQ ID NO : 150、SEQ ID NO : 152、SEQ ID NO : 154、SEQ ID NO : 156、SEQ ID NO : 158、 SEQ ID NO : 160、SEQ ID NO : 162、SEQ ID NO : 164、SEQ ID NO : 166、SEQ ID NO : 168、SEQ ID NO :190,SEQ ID N0:192,SEQ ID NO : 194,SEQ ID NO : 204,SEQ ID NO : 206,SEQ ID NO: 208、SEQ ID N0:210、SEQ ID N0:212、SEQ ID N0:323、SEQ ID N0:325、SEQ ID N0:327、SEQ ID NO :329,SEQ ID NO : 33USEQ ID NO : 333,SEQ ID NO : 335,SEQ ID NO : 337,SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO :34U SEQ ID NO :343, SEQ ID NO :345, SEQ ID NO :347, SEQ ID NO :349, SEQ ID NO:351、SEQ ID NO:353、SEQ ID NO:355、SEQ ID NO:357、SEQ ID NO:359、SEQ ID NO:36U SEQ ID NO:363, SEQ ID NO:365, SEQ ID NO:367, SEQ ID NO:369, SEQ ID NO: 37U SEQ ID NO :373, SEQ ID NO :375, SEQ ID NO :377, SEQ ID NO :379, SEQ ID NO :38U SEQ ID NO :383,SEQ ID NO :385,SEQ ID NO :387,SEQ ID NO :389,SEQ ID NO :39USEQ ID NO :393, SEQ ID NO :395, SEQ ID NO :397, SEQ ID NO :399, SEQ ID NO :40U SEQ ID NO : 403、SEQ ID NO :405、SEQ ID NO :407、SEQ ID NO :409、SEQ ID NO :411、SEQ ID NO :413、 SEQ ID N0:415、SEQ ID N0:417、SEQ ID N0:419、SEQ ID N0:421、SEQ ID N0:423、SEQ ID NO:425, SEQ ID NO:427, SEQ ID NO:429, SEQ ID NO:43U SEQ ID NO:433, SEQ ID NO: 435, SEQ ID NO:437, SEQ ID NO :439, SEQ ID NO:44U SEQ ID NO:443, SEQ ID NO :445, SEQ ID NO :447,SEQ ID NO :449,SEQ ID NO :45USEQ ID NO :453,SEQ ID NO :455,SEQ ID NO :457, SEQ ID NO :459, SEQ ID NO :46U SEQ ID NO :46U SEQ ID NO :463, SEQ ID NO : 464、SEQ ID NO :466、SEQ ID NO :468、SEQ ID NO :469、SEQ ID NO :470、SEQ ID NO :471、 SEQ ID N0:472、SEQ ID N0:474、SEQ ID N0:476、SEQ ID N0:477、SEQ ID N0:479、SEQ ID NO :48U SEQ ID NO :482, SEQ ID NO :483, SEQ ID NO :485, SEQ ID NO :487, SEQ ID NO : 488, SEQ ID NO :489, SEQ ID NO :490, SEQ ID NO :49U SEQ ID NO :493, SEQ ID NO :495, SEQ ID NO :496,SEQ ID NO :497,SEQ ID NO :499,SEQ ID NO :50USEQ ID NO :502,SEQ ID NO :503, SEQ ID NO :504, SEQ ID NO :505, SEQ ID NO :506, SEQ ID NO :507, SEQ ID NO : 508、SEQ ID NO :510、SEQ ID NO :512、SEQ ID NO :513、SEQ ID NO :514、SEQ ID NO :516、 SEQ ID NO :518,SEQ ID NO :518,SEQ ID NO :520,SEQ ID NO :52USEQ ID NO :523,SEQ ID NO:525, SEQ ID NO:526, SEQ ID NO:528, SEQ ID NO:530, SEQ ID NO:53U SEQ ID NO: 533, SEQ ID NO :535, SEQ ID NO :536, SEQ ID NO :537, SEQ ID NO :538, SEQ ID NO :540, SEQ ID NO:542、SEQ ID NO:543、SEQ ID NO:545、SEQ ID NO:547、SEQ ID NO:548、SEQ ID NO :549, SEQ ID NO :550, SEQ ID NO :55U SEQ ID NO :553, SEQ ID NO :555, SEQ ID NO : 556, SEQ ID NO:557,SEQ ID NO:559, SEQ ID NO:56U SEQ ID NO:562, SEQ ID NO :563, SEQ ID NO :564,SEQ ID NO :566,SEQ ID NO :568,SEQ ID NO :570,SEQ ID NO :572,SEQ ID NO :574、SEQ ID NO :576、SEQ ID NO :578、SEQ ID NO :580、SEQ ID NO :582、SEQ ID NO : 584, SEQ ID NO :586, SEQ ID NO :588, SEQ ID NO :589, SEQ ID NO :590, SEQ ID NO :59U SEQ ID NO :592,SEQ ID NO :594,SEQ ID NO :604,SEQ ID NO :606,SEQ ID NO :608,SEQ ID N0:610、SEQ ID N0:612、SEQ ID N0:614、SEQ ID N0:616、SEQ ID N0:618、SEQ ID N0:620 或SEQ ID NO :622的氨基酸序列所述, (b)由权利要求1所述的核酸编码。
5. 蛋白制剂,所述蛋白制剂包含在权利要求4中所述的多肽,其中所述蛋白制剂包括 液体、固体或凝胶。
6. 固定化多肽,其如权利要求4中所述,其中所述多肽被固定在:细胞、金属、聚合物、 陶瓷、玻璃或石墨颗粒上。
7. 权利要求6所述的固定化多肽,其中所述聚合物为树脂。
8. 固定化多肽,其如权利要求4中所述,其中所述多肽被固定在:微电极、珠子、凝胶、 平板或毛细管上。
9. 固定化多肽,其如权利要求4中所述,其中所述多肽被固定在阵列上。
10. 用于人或动物的食物添加剂,其包括权利要求4中所述的多肽。
11. 用于人或动物的食物,其包括权利要求4中所述的多肽。
12. 水解淀粉的方法,包括如下步骤: (a)提供在权利要求4中所述的多肽; (b)提供包含淀粉的组合物;和 (C)用步骤(b)的组合物在其中多肽水解淀粉的条件下接触步骤(a)的多肽。
13. 液化淀粉的方法,包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供包含淀粉的组合物;和 (c) 用步骤(b)的组合物在其中多肽液化淀粉的条件下接触步骤(a)的多肽。
14. 去污剂组合物,所述去污剂组合物包含在权利要求4中所述的多肽。
15. 去污剂组合物,所述去污剂组合物包含在权利要求4中所述的多肽,其中所述多肽 配制为不含水的液体组合物。
16. 去污剂组合物,所述去污剂组合物包含在权利要求4中所述的多肽,其中所述多肽 配制为颗粒形式。
17. 去污剂组合物,所述去污剂组合物包含在权利要求4中所述的多肽,其中所述多肽 配制为凝胶形式。
18. 去污剂组合物,所述去污剂组合物包含在权利要求4中所述的多肽,其中所述多肽 配制为糊状形式。
19. 饲料添加剂,其包含在权利要求4中所述的多肽。
20. 饲料,其包含在权利要求4中所述的多肽。
21. 组合物,其包含淀粉,以及在权利要求4中所述的多肽。
22. 织物,其包含在权利要求4中所述的多肽。
23. 用于织物处理的方法,该方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供织物;和 (c) 在所述多肽可处理所述织物的条件下用步骤(b)的织物接触步骤(a)的多肽。
24. 用于织物脱浆的方法,该方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供织物;和 (c) 在所述多肽可脱浆织物的条件下用步骤(b)的织物接触步骤(a)的多肽。
25. 纸产品,所述纸产品包含在权利要求4中所述的多肽。
26. 纸浆,所述纸浆包含在权利要求4中所述的多肽。
27. 用于处理纸产品的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有纸产品的组合物;和 (c) 在多肽可以处理纸产品的条件下用步骤(b)的组合物接触步骤(a)的多肽。
28. 用于处理纸浆的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有纸浆的组合物;和 (c) 在多肽可以处理纸浆的条件下用步骤(b)的组合物接触步骤(a)的多肽。
29. 用于处理纤维的方法,所述方法包括如下步骤: (a)提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有纤维的组合物;和 (c) 在多肽可以处理纤维的条件下用步骤(b)的组合物接触步骤(a)的多肽。
30. 用于处理木素纤维素材料的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供木素纤维素材料;和 (c) 在多肽可以处理所述材料的条件下用步骤(b)的材料接触步骤(a)的多肽,从而改 进所述材料的性质。
31. 高麦芽糖、或高葡萄糖液体,所述液体包含在权利要求4中所述的多肽。
32. 高麦芽糖、或高葡萄糖糖浆,所述糖浆包含在权利要求4中所述的多肽。
33. 用于产生高麦芽糖或高葡萄糖糖浆的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有淀粉的组合物;和 (c) 在步骤(a)的多肽可以水解步骤(b)的组合物的条件下接触步骤(a)的多肽,从而 产生高麦芽糖或高葡萄糖糖浆, 其中所述淀粉来自稻、玉米、大麦、小麦、豆类、马铃薯或甘薯。
34. 用于改善含淀粉的生产流体的流动的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有淀粉的生广流体;和 (c) 在所述多肽可以水解生产流体中的淀粉的条件下,将步骤(a)的多肽与步骤(b)的 生产流体接触,从而通过降低其密度来改善其流动, 其中所述生产流体来自地下形成物。
35. 在酒精生产中使用淀粉酶的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有淀粉的组合物; (c) 在其中多肽可以水解在酒精生产中使用的组合物中的淀粉的条件下,将步骤(a) 的多肽与步骤(b)的组合物结合。
36. 在酿造中使用淀粉酶的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有淀粉的组合物; (c) 在其中多肽可以水解在酿造中使用的组合物中的淀粉的条件下,将步骤(a)的多 肽与步骤(b)的组合物结合。
37. 酒精饮料,所述酒精饮料包含在权利要求4中所述的多肽。
38. 啤酒,所述啤酒包含在权利要求4中所述的多肽。
39. 药物组合物,所述药物组合物包含在权利要求4中所述的多肽。
40. 口腔护理产品,所述口腔护理产品包含在权利要求4中所述的多肽。
41. 油井钻探流体,所述油井钻探流体包括在权利要求4中所述的多肽。
42. 用于改变组合物的粘度的方法,所述方法包括用在权利要求4中所述的多肽处理 所述组合物。
43. 用于帮助运走钻探泥浆的方法,所述方法包括用在权利要求4中所述的多肽处理 钻探泥浆。
44. 生物漂白溶液,所述生物漂白溶液包含在权利要求4中所述的多肽。
45. 对组合物进行生物漂白的方法,所述方法包括用在权利要求4中所述的多肽处理 所述组合物,其中所述组合物是纸产品。
46. 对组合物进行生物漂白的方法,所述方法包括用在权利要求4中所述的多肽处理 所述组合物,其中所述组合物是纸浆。
47. 用于生产基于乙醇的燃料的方法,所述方法包括如下步骤: (a) 提供在权利要求4中所述的多肽; (b) 提供含有淀粉的组合物;和 (c) 在所述多肽水解淀粉的条件下,用(b)的组合物接触(a)的多肽。
48. 分离的、合成的或重组的多肽,其为a-淀粉酶,其中所述多肽为与SEQ ID NO :2、 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:16、 SEQ ID N0:18、SEQ ID N0:20、SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :58、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :62、 SEQ ID N0:64、SEQ ID N0:66、SEQ ID N0:68、SEQ ID N0:70、SEQ ID N0:72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :80、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :86、SEQ ID NO :88、SEQ ID NO :90、SEQ ID NO :92、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :96、SEQ ID N0:98、SEQ ID N0:100、SEQ ID N0:102、SEQ ID N0:104、SEQ ID N0:106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO :110、SEQ ID NO :112、SEQ ID NO :114、SEQ ID NO :116、SEQ ID NO :118、 SEQ ID N0:120、SEQ ID N0:122、SEQ ID N0:124、SEQ ID N0:126、SEQ ID N0:128、SEQ ID NO : 130、SEQ ID NO : 132、SEQ ID NO : 134、SEQ ID NO : 136、SEQ ID NO : 138、SEQ ID NO : 140、SEQ ID NO : 142、SEQ ID NO : 144、SEQ ID NO : 146、SEQ ID NO : 148、SEQ ID NO : 150、 SEQ ID N0:152、SEQ ID N0:154、SEQ ID N0:156、SEQ ID N0:158、SEQ ID N0:160、SEQ ID NO : 162、SEQ ID NO : 164、SEQ ID NO : 166、SEQ ID NO : 168、SEQ ID NO : 190、SEQ ID NO : 192、SEQ ID NO :194、SEQ ID NO :204、SEQ ID NO :206、SEQ ID NO :208、SEQ ID NO :210、 SEQ ID NO :212,SEQ ID NO :323,SEQ ID NO :325,SEQ ID NO :327,SEQ ID NO :329,SEQ ID NO :33U SEQ ID NO :333, SEQ ID NO :335, SEQ ID NO :337, SEQ ID NO :339, SEQ ID NO : 341、SEQ ID NO :343、SEQ ID NO :345、SEQ ID NO :347、SEQ ID NO :349、SEQ ID NO :351、 SEQ ID NO:353、SEQ ID NO:355、SEQ ID NO:357、SEQ ID NO:359、SEQ ID NO:361、SEQ ID NO :363, SEQ ID NO :365, SEQ ID NO :367, SEQ ID NO :369, SEQ ID NO :37U SEQ ID NO : 373, SEQ ID NO:375, SEQ ID NO:377, SEQ ID NO :379,SEQ ID NO:38U SEQ ID NO :383, SEQ ID NO :385,SEQ ID NO :387,SEQ ID NO :389,SEQ ID NO :39USEQ ID NO :393,SEQ ID NO:395, SEQ ID NO:397, SEQ ID NO:399, SEQ ID NO:40U SEQ ID NO:403, SEQ ID NO: 405、SEQ ID NO :407、SEQ ID NO :409、SEQ ID NO :411、SEQ ID NO :413、SEQ ID NO :415、 SEQ ID NO :417,SEQ ID NO :419,SEQ ID NO :42USEQ ID NO :423,SEQ ID NO :425,SEQ ID NO:427, SEQ ID NO:429, SEQ ID NO:43U SEQ ID NO:433, SEQ ID NO:435, SEQ ID NO: 437, SEQ ID NO:439, SEQ ID NO :44U SEQ ID NO:443, SEQ ID NO:445, SEQ ID NO :447, SEQ ID N0:449、SEQ ID N0:451、SEQ ID N0:453、SEQ ID N0:455、SEQ ID N0:457、SEQ ID NO :459, SEQ ID NO :46U SEQ ID NO :46U SEQ ID NO :463, SEQ ID NO :464, SEQ ID NO : 466、SEQ ID NO :468、SEQ ID NO :469、SEQ ID NO :470、SEQ ID NO :471、SEQ ID NO :472、 SEQ ID NO :474,SEQ ID NO :476,SEQ ID NO :477,SEQ ID NO :479,SEQ ID NO :48USEQ ID NO :482, SEQ ID NO :483, SEQ ID NO :485, SEQ ID NO :487, SEQ ID NO :488, SEQ ID NO : 489, SEQ ID NO:490, SEQ ID NO:49U SEQ ID NO:493, SEQ ID NO:495, SEQ ID NO :496, SEQ ID NO :497,SEQ ID NO :499,SEQ ID NO :50USEQ ID NO :502,SEQ ID NO :503,SEQ ID NO :504, SEQ ID NO :505, SEQ ID NO :506, SEQ ID NO :507, SEQ ID NO :508, SEQ ID NO : 510, SEQ ID NO :512, SEQ ID NO :513, SEQ ID NO :514, SEQ ID NO :516, SEQ ID NO :518, SEQ ID NO :518,SEQ ID NO :520,SEQ ID NO :52USEQ ID NO :523,SEQ ID NO :525,SEQ ID NO :526, SEQ ID NO :528, SEQ ID NO :530, SEQ ID NO :53U SEQ ID NO :533, SEQ ID NO : 535, SEQ ID NO :536, SEQ ID NO :537, SEQ ID NO :538, SEQ ID NO :540, SEQ ID NO :542, SEQ ID NO:543、SEQ ID NO:545、SEQ ID NO:547、SEQ ID NO:548、SEQ ID NO:549、SEQ ID NO:550, SEQ ID NO:55U SEQ ID NO:553, SEQ ID NO:555, SEQ ID NO:556, SEQ ID NO: 557, SEQ ID NO:559, SEQ ID NO:56U SEQ ID NO:562,SEQ ID NO:563, SEQ ID NO :564, SEQ ID NO :566、SEQ ID NO :568、SEQ ID NO :570、SEQ ID NO :572、SEQ ID NO :574、SEQ ID NO :576,SEQ ID NO : 578,SEQ ID NO : 580,SEQ ID NO : 582,SEQ ID NO : 584,SEQ ID NO: 586, SEQ ID NO :588, SEQ ID NO :589, SEQ ID NO :590, SEQ ID NO :59U SEQ ID NO :592, SEQ ID NO :594,SEQ ID NO :604,SEQ ID NO :606,SEQ ID NO :608,SEQ ID NO :610,SEQ ID N0:612、SEQIDN0:614、SEQIDN0:616、SEQIDN0:618、SEQIDN0 :620 *SEQIDN0: 622所述的氨基酸序列具有95 %、96 %、97 %、98 %或99 %同一性的氨基酸序列所述的变体 多肽。
【文档编号】C12P7/06GK104388449SQ201410685675
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2004年3月8日 优先权日:2003年3月6日
【发明者】W·考伦, T·理查森, G·弗莱, K·格雷, J·S·克罗夫, M·斯卢皮斯卡, N·巴顿, E·欧唐纳古, C·米勒 申请人:维莱尼姆公司