辣椒疫霉细胞分裂蛋白及其编码基因与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种辣椒疫霉细胞分裂蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的蛋白质为如下a)或b)：a)由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗盐相关的由序列1衍生的蛋白质。实验证明，本发明所提供的蛋白在辣椒疫霉自身生长发育过程中起作用，进一步获得的沉默转化子的生长发育较野生型有明显变化；通过游动孢子接种离体的辣椒叶片后发现沉默转化子接种的病斑面积明显小于野生型，利用苯胺蓝染色技术研究了侵染过程孢子的发育，也证明了沉默转化子的孢子萌发较晚，且芽管较短。以上结论均为辣椒疫霉的发育过程和分子致病机制的研究提供了一定的帮助。
【专利说明】辣椒疫霉细胞分裂蛋白及其编码基因与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于基因工程领域，涉及一种辣椒疫霉细胞分裂蛋白及其编码基因与应 用。
【背景技术】
[0002] 辣椒疫病是一种世界性分布的毁灭性的的±传病害，是由植物病原卵菌辣椒疫霉 引发的，该病原菌是一种兼性寄生菌。它的寄主除了辣椒等茄科植物外，还可W侵染黄瓜、 南瓜等葫芦科作物。辣椒疫病最先发现于美国新墨西哥州，此后陆续在其他国家发现，对世 界范围内的蔬菜生产造成了巨大的经济损失。随着辣椒疫霉在世界范围内地传播我国蔬菜 种植区辣椒疫病自80年代W来日趋严重，已经成为危害我国蔬菜产品质量和产量的重要 病害之一。因此辣椒疫病的防治对保障我国农业生产具有重要意义。如何控制辣椒疫病的 广泛传播和普遍发生，减少病害带来的各种损失成为植保工作者的首要任务。目前，在抗病 育种进展缓慢的情况下，主要依赖化学药剂进行防治，但该也导致了一定程度的负面影响， ±壤污染，农药残留等问题日益凸显。在此，寻找辣椒疫霉致病基因并通过合理有效的生物 学手段抑制阻碍其致病过程成为近些年卵菌工作者的工作重点。
[0003] 随着分子生物学和卵菌分子遗传学的向前发展，许多效率更高效果更好的基因功 能分析技术得到不断改进。因此，综合运用不同的分析手段，对于全面分析卵菌基因的遗传 学功能，无疑会促进卵菌分子遗传学的发展，加深人们对卵菌病害的认识。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种辣椒疫霉细胞分裂蛋白及其编码基因与应用。
[0005] 本发明所提供的蛋白质，名称为化CDP，来源于辣椒疫霉（Phyto地thoracapsici Leonian)，是如下（a)或化）：
[0006] (a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0007] 化）将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或 添加且与植物抗盐相关的由序列1衍生的蛋白质。
[000引其中，序列表中序列1由472个氨基酸残基组成。
[0009] 为了便于化CDP蛋白的纯化，可在由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋 白质的氨基末端或駿基末端连接上如下表所示的标签。
[0010] 表；柄签的序列
[0011]
【权利要求】
1. 蛋白质，是如下（a)或（b): (a) 由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b) 将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加 且与植物抗盐相关的由序列1衍生的蛋白质。
2. 编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。
3. 根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子是编码权利要求1所 述蛋白质的基因；所述基因是如下1)至3)中任一所述的DNA分子： 1) 序列表中序列2所不的DNA分子； 2) 在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子； 3) 与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上同源性且编码权利要求1所述蛋白质的 DNA分子。
4. 含有权利要求2或3所述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌。
5. 权利要求1所述的蛋白质，或权利要求2或3所述的核酸分子，或权利要求4所述的 重组载体或表达盒在促进辣椒疫霉生长发育和/或制备促进辣椒疫霉生长发育的产品中 的应用。
6. 核酸分子，为序列表中序列2的反向互补序列所不的DNA分子。
7. 含有权利要求6所述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌。
8. 权利要求6所述的核酸分子，或权利要求7所述的重组载体或表达盒在如下al)或 a2)中的应用： al)抑制辣椒疫霉生长发育或制备抑制辣椒疫霉生长发育的产品； a2)预防和/或治疗辣椒疫病或制备预防和/或治疗辣椒疫病的产品。
9. 一种抑制辣椒疫霉生长发育的方法，包括对目的辣椒疫霉中的权利要求1所述蛋白 质进行表达抑制的步骤。
10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于：对所述目的辣椒疫霉的权利要求1所述 蛋白质进行表达抑制是通过向所述辣椒疫霉中导入权利要求6所述核酸分子实现的。
【文档编号】C12N1/14GK104447966SQ201410720137
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月1日 优先权日:2014年12月1日
【发明者】朱春原, 张梦妍, 张修国 申请人:山东农业大学