脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针及试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针及试剂盒。所述试剂盒包括脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针，所述引物包括9对引物，所述探针包括15条探针；本发明的脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针及试剂盒利用荧光定量PCR技术，增加现有专利技术中所没有的常见突变位点的检测，实现一次性特异的检测16种由于SMN基因缺失、转换与点突变导致的SMA患者并实现对SMA患者的分型。
【专利说明】脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针及试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引 物和探针及试剂盒。
【背景技术】
[0002] 脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SM)是一种较常见的遗传性疾病， 儿童起病的SM呈常染色体隐性遗传。携带者发生率为1/35-1/80,最近报道中国人群SM 致病基因的携带者频率为1/42,群体发病率为1/5000-1/10000活产婴儿，居儿童致死性常 染色体遗传病的第二位，仅次于囊性纤维变性。脊髓性肌萎缩症国际协会根据SM患者的 发病年龄和临床表现分为4型：1型（严重型）、11型（中间型）JII型（轻型）和IV型（成 人型）。
[0003] 目前，临床上常用于辅助脊髓性肌萎缩症检测的方法主要有肌电图、肌肉活检组 织化学染色及血清肌酸磷酸激酶（CPK)检测。但SM的临床变异性大，肌电图在儿童患者 不易配合检查，肌肉活检为有创性检查，令家长难以接受，且需冰冻切片组化染色的条件， 更难以在临床上广泛开展，即使可以推行，肌电图和肌肉活检亦均缺乏特异性，因此本病 极易误诊。为了能够更准确地对患者进行确诊，以防止重症患者的出生，就需要对患者的 基因型进行检测。发展至今，在国内外用于SM基因诊断的主要方法有：①连锁分析；② 聚合酶链反应单链构象多态性（PCR-SSCP)技术；③错配聚合酶链反应一限制性片段长度 多态性（PCR-RFLP)分析；④变性高效液相分析技术（DHPLC);⑤多重连接探针依赖性扩 增技术（MLPA)⑥实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术；⑦高分辨率溶解曲线（Hight Resolution Melting Analysis，HRMA);⑧数字 PCR 技术（Digital PCR)。现有产品及专利 见表1。
[0004] 表 1
[0005]
【权利要求】
1. 脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针，其特征在于，所述引物包括9对 引物，所述探针包括15条探针； 所述9对引物为：
2. 根据权利要求1所述的脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物和探针，其特征在 于，所述15条探针的5'端和3'端分别设有荧光基团和荧光淬灭基团，具体如下：
3. 脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR反 应液，所述PCR反应液中包含权利要求1-2任一项所述的脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检 测的引物和探针。
4. 根据权利要求3所述的脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的试剂盒，其特征在于， 所述PCR反应液包括如下含量的各组分：
【文档编号】C12N15/11GK104480206SQ201410767333
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】刘晶晶, 李长远, 向筑 申请人:亚能生物技术（深圳）有限公司