专利名称：逆流除菌一次吸附和膜分离提取肌苷法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从肌苷发酵液以及其它含有肌苷和微生物菌体等物质的混合液中提取肌苷的方法，特别是一种逆流除菌一次吸附和膜分离提取肌苷法。
现有技术中的提取肌苷法，国内通常采用的工艺方法是肌苷发酵液酸性调节，带菌体在阳树脂柱上吸附，酸性水洗脱，活性炭二次吸附，有机溶剂洗脱，真空浓缩和结晶精制等。这类方法的缺点是吸附柱污染大，两次吸附周期长，肌苷损失率高，洗脱溶剂成本高，真空浓缩能耗大，肌苷洗脱收率处于65%至75%的低收率范围。英国专利GB2100731A提出采用肌苷发酵液碱性调节，过滤除菌体，阴树脂吸附，酸性水洗脱，再用活性炭进行二次吸附，丁醇溶液洗脱，真空浓缩和冷冻结晶等工艺方法提取肌苷。该方法的缺点是设备价格昂贵，过滤时间长，吸附剂不单一，丁醇成本高，真空浓缩能耗大，肌苷收率低。
本发明的目的是要提供一种逆流除菌一次吸附膜分离提取肌苷法。它能有效地缩短肌苷提取周期，提高肌苷收率，降低生产成本，节省能源消耗。
本发明的技术方案是在对肌苷发酵液进行除去菌体的处理过程中，向肌苷发酵液添加钙盐，或者铁盐，或者锌盐等可溶性无机盐，使这类无机盐在肌苷发酵液中的浓度达到0.05至0.5摩尔/升，然后调为碱性;或者采用氢氧化钙直接将肌苷发酵液调为碱性。同时，按照每100升肌苷发酵液加注0.5克到5克有机高分子絮凝剂聚丙烯酰胺的配比标准，将絮凝剂与调成碱性后的肌苷发酵液从菌体分离罐的下端进料管输入，处理后的肌苷发酵液从菌体分离罐的上端出料管输出，完成逆流除菌过程，沉淀菌体从罐体底部排出。
在菌体分离罐中完成絮凝沉淀和逆流分离除去菌体后的肌苷发酵液进入单柱或者多柱并联式树脂柱，以树脂柱内的阴离子交换树脂作单一吸附剂，对肌苷进行一次吸附处理。待树脂充分饱和后，对树脂柱内吸附了肌苷的树脂，采用PH值为0.5至6的酸性水进行循环调节，使吸附柱的PH值达到酸性范围。再用温度为30℃到50℃，PH值为0.5至6的温热酸性水进行单柱或者多柱串联式肌苷洗脱。然后将洗脱液调为碱性，用微孔滤膜和超滤膜对含有肌苷的溶液进行脱色、除杂质处理，再用反渗透膜进行浓缩处理，必要时再经真空浓缩，结晶和精制处理，获得纯净肌苷。
本发明因为采用在菌体分离罐中一次完成絮凝沉淀和逆流分离除去菌体的工艺方法，所以提高了肌苷分离效果;同时由于以阴离子交换树脂作单一吸附剂进行一次吸附，并且采用酸性水循环调节吸附柱的PH值至酸性范围，因而降低了设备费用和生产成本，缩短了生产周期;另外由于采用膜分离法对肌苷进行纯化分离和浓缩处理，达到了既分离杂质，又浓缩肌苷的目的。本发明还具有能耗低，肌苷收率高的优点。
本发明所述的提取肌苷的具体方法由以下的实施例给出。
取48升肌苷发酵液，添加钙盐，或者铁盐，或者锌盐等可溶性无机盐，使这类无机盐在肌苷发酵液中的浓度达到0.05至0.5摩尔/升，然后调为碱性，或者采用氢氧化钙直接将肌苷发酵液调为碱性。同时按照每100升肌苷发酵液加注0.5克至5克有机高分子絮凝剂聚丙烯酰胺的配比标准，将絮凝剂与调成碱性的肌苷发酵液从菌体分离罐的下端进料管输入，处理后的肌苷发酵液从菌体分离罐的上端出料管输出，完成逆流除菌过程，沉淀菌体从罐体底部排出。肌苷发酵液在菌体分离罐中完成絮凝沉淀和逆流分离除去菌体进程。然后进入单柱或者多柱并联式树脂柱，以树脂柱内的阴离子交换树脂作单一吸附剂进行一交吸附处理。待树脂充分饱和后，对树脂柱内吸附了肌苷的树脂，采用PH为0.5至6的酸性水循环调节，使吸附柱的PH值达到酸性范围。再用温度为30℃至50℃，PH值为0.5至6的温热酸性水进行单柱或者多柱串联式肌苷洗脱。然后将洗脱液调为碱性，用微孔滤膜和超滤膜对含有肌苷的溶液进行脱色、除杂质处理，以纯化分离肌苷。最后用反渗透膜进行浓缩处理，必要时再进一步真空浓缩，结晶和精制处理后获得纯净肌苷。
权利要求
1.一种逆流除菌一次吸附和膜分离提取肌苷法，它采用肌苷发酵液碱性调节，除去菌体和肌苷吸附、洗脱、分离浓缩、结晶和精制等工艺方法，从肌苷发酵液以及其它含有肌苷和微生物菌体等物质的混合液中提取肌苷，其特征在于采用菌体分离罐进行絮凝沉淀、逆流分离除去菌体，以阴离子交换树脂作单一吸附剂进行肌苷一次吸附，采用酸性水循环调节吸附柱的PH值至酸性范围，以温热的酸性水进行肌苷洗脱，并且采用膜分离法对肌苷进行纯化分离和浓缩处理。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是采用向肌苷发酵液中添加可溶性无机盐和无机碱的方法，或者直接添加氢氧化钙的方法，将它调为碱性，同时按照每100升肌苷发酵液添加0.5至5克有机高分子絮凝剂聚丙烯酰胺的配比标准，加注絮凝剂。
3.根据权利要求1、2所述的方法，其特征是向肌苷发酵液中添加的可溶性无机盐是钙盐，或者铁盐，或者锌盐，使其在肌苷发酵液中的浓度达到0.05至0.5摩尔/升。
4.根据权利要求1，2，3所述的方法，其特征是肌苷发酵液在菌体分离罐中完成絮凝沉淀和逆流分离除去菌体的过程，待处理肌苷发酵液从菌体分离罐的下端进料管输入，处理后的肌苷发酵液从菌体分离罐的上端出料管输出，完成逆流除菌过程，沉淀菌体从罐体底部排出。
5.根据权利要求1，2，3，4所述的方法，其特征是经菌体分离罐处理后的碱性肌苷发酵液进入单柱或者多柱并联式树脂柱，以树脂柱内的阴离子交换树脂作单一吸附剂对肌苷进行吸附处理。
6.根据权利要求1，5所述的方法，其特征是对树脂柱内吸附了肌苷的树脂，采用PH值为0.5至6的酸性水进行循环调节，使吸附柱的PH值达到酸性范围。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征是采用温度为30℃至50℃，PH值为0.5至6的温热酸性水进行单柱或者多柱串联式肌苷洗脱。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征是采用微孔滤膜、超滤膜和反渗透膜对含有肌苷的溶液进行纯化分离和浓缩处理。
全文摘要
一种逆流除菌一次吸附和膜分离提取肌苷法，其特征在于采用在菌体分离罐中进行絮凝沉淀和逆流分离除去菌体的工艺方法，以阴离子交换树脂作单一吸附剂进行肌苷一次吸附，并且采用酸性水循环调节吸附柱，以温热酸性水进行肌苷洗脱，以膜分离法对肌苷进行纯化分离和浓缩处理。本发明适用于从肌苷发酵液以及其它含有肌苷和微生物菌体等物质的混合液中提取肌苷，并且具有肌苷提取周期短，肌苷收率高，生产成本低和节省能源消耗的优点。
文档编号C12P19/40GK1056897SQ9010388
公开日1991年12月11日 申请日期1990年5月26日 优先权日1990年5月26日
发明者张万鹏 申请人:宜昌市第四制药厂