专利名称：腺苷脱氨酶诊断试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种疾病诊断试剂，特别涉及一种腺苷脱氨酶诊断试剂。
腺苷脱氨酶，简称ADA，是一种与机体细胞免疫系统有着重要联系的核酸代谢酶，对ADA的测定对于肝、胆疾病的诊断及黄疸的鉴别诊断非常重要。目前，测定ADA的方法主要采用手工法，即固定时间法，此法在测定过程中有氨的丢失，造成较大误差，而且其特异性不高，灵敏度也差，常常造成误诊。
本发明的目的就是要克服上述缺陷，研制一种特异性强、灵敏度高、误差小，能够作自动分析的腺苷脱氨酶诊断试剂。
本发明的技术方案是由下列成份按下列含量组成腺苷 0.3-1.2mmol/Lα-酮戊二酸 1.5-7.5mmol/L还原性辅酶Ⅰ 0.15-0.4mmol/L谷氨酸脱氢酶 4000-16000μ/L磷酸缓冲液 0.03-0.1mmol/L本发明的腺苷脱氨酶诊断试剂的优点在于没有氨的丢失，测试极其准确，而且特异性高、灵敏度高。
本发明的实施例1将下列成份按下述含量组成腺苷 0.6mmol/Lα-酮戊二酸 5.0mmol/L还原性辅酶Ⅰ 0.35mmol/L谷氨酸脱氢酶 8000μ/L磷酸缓冲液 0.05mmol/L根据原理，测试腺苷脱氨酶ADA，是通过酶的含量多少与催化活性成正比，其反应式为 其中 是腺苷;
H2O是水ADA是腺苷脱氨酶，在本反应中作催化剂 是次黄苷NH3是氨腺苷与水在ADA催化作用下(PH值呈7.4)生成次黄苷和氨，而生成的氨又与本试剂继续发生反应 式中NH3-是氨NADH-还原性辅酶ⅠGLDH-谷氨酸脱氢酶 NAD-辅酶Ⅰ
在第一个反应式中生成的氨迅速与NADH、α-酮戊二酸在GLDH催化作用下反应。
通过氨消耗NADH的速率，从而可以测定ADA的活性。
本发明的试剂是先称取0.6mmol/L腺苷、5.0mmol/L α-酮戊二酸、8000μ/LGLDH溶于500ml PH7.4的磷酸盐缓冲液中;再称取0.35mmol/L NADH溶于500ml PH7.4的磷酸缓冲液中。将上述两种试剂分别进行低温冷冻干燥。应用前，将上述两试剂等量混和即成工作试剂。
实施例2将下列成份按此含量组成腺苷 0.70mmol/Lα-酮戊二酸 4.5mmol/L还原性辅酶Ⅰ 0.50mmol/L谷氨酸脱氢酶 9000μ/L磷酸缓冲液 0.07mmol/L其它同实施例1。
权利要求
1.腺苷脱氨酶诊断试剂，其特征在于有下列成份组成，其成份含量为腺苷 0.3-1.2mmol/Lα-酮戊二酸 1.5-7.5mmol/L还原性辅酶I 0.15-0.4mmol/L谷氨酸脱氢酶 4000-16000mmol/L磷酸缓冲液0.03-0.1mmol/L
2.根据权利要求1所述腺苷脱氨酶诊断试剂，其特征在于其成份具体含量为腺苷 0.6mmol/Lα-酮戊二酸 5.0mmol/L还原性辅酶Ⅰ 0.35mmol/L谷氨酸脱氢酶 8000μ/L磷酸缓冲液 0.05mmol/L
3.根据权利要求1所述腺苷脱氨酶诊断试剂，其特征在于其成份具体含量为腺苷 0.70mmol/Lα-酮戊二酸 4.5mmol/L还原性辅酶Ⅰ 0.50mmol/L谷氨酸脱氢酶 9000μ/L磷酸缓冲液 0.07mmol/L
全文摘要
本发明涉及一种疾病诊断试剂，特别涉及一种腺苷脱氨酶诊断试剂。本发明利用酶的含量多少与催化活性成正比，产生氨并连续反应，进行动态观察，从而测定腺苷脱氨酶ADA的活性。解决了常用的固定时间法中氨的丢失而造成的误差大、灵敏度差、特异性不高的缺陷。使对于肝、胆疾病的诊断及黄疸的鉴别诊断的准确率大大提高。
文档编号C12Q1/25GK1099803SQ9311172
公开日1995年3月8日 申请日期1993年8月28日 优先权日1993年8月28日
发明者朱澜 申请人:朱澜