专利名称：短双歧杆菌及用它制备的发酵豆乳的制作方法
技术领域：
本发明涉及能在贮存过程中很好存活的短双歧杆菌，及含有它的味道好的发酵豆乳。
背景技术：
很久以来，为获得更好味道的豆乳已开始使用微生物发酵豆乳，使其具有特有的豆的气味和草的味道。在上述发酵处理的过程中，已使用了多种微生物例如乳酸菌、酵母、纳豆芽孢杆菌、醋酸菌和曲霉属的微生物。已有报道在大多数情况下这种处理能获得具有良好味道的发酵产物。
已知豆乳可促进属于双歧杆菌属的微生物(在下文称为双歧杆菌)的增殖，这可能是由于豆乳中含有大豆寡糖(Yoichi KOBAYASHI等，“肠道菌群和食物因素”，p69，1984，由Gakkai Shuppan中心出版)。
同时，关于双歧杆菌的用途进行了大量研究。例如，已证实活菌制剂(短双歧杆菌)的给药在难治愈的小儿腹泻中表现出疗效，并且其可能的机制可归因于肠道菌群的改善。并且，已发现将制剂对成人给药时导致粪便中腐败产物及产生腐败产物的细菌的减少。此外，还阐明了双歧杆菌的免疫活化效应。因此，认为双歧杆菌通过改善肠内环境而有利于人体健康(由Tomotari MITSUOKA编辑，“双歧杆菌研究”，1994)。
因此，已开发出多种使用双歧杆菌的产品，同时已尽力开发发酵的豆乳产品，其中含有大量双歧杆菌并在产品的整个销售期间维持活菌计数(高存活率)。
然而，由于双歧杆菌经过糖代谢产生摩尔比为1∶1.5的乳酸和醋酸，双歧杆菌易于因自身产生的酸而死亡。因此，双歧杆菌生长到一定的活菌计数或更高并维持其活菌计数是困难的。
为解决上述问题，已提出使用高存活率的双歧杆菌(日本专利号2563197)。
然而，即使所使用的双歧杆菌与传统的双歧杆菌相比表现出更高的存活率，但所使用的细菌仍不能增殖到1×109细胞/ml或更高的水平，并且在贮存14天后维持至少1×108细胞/ml的活菌计数是困难的。
因此，本发明的目的是提供在贮存一定时期后仍能保持一定水平的活菌计数的双歧杆菌。本发明的另一个目的是提供含有双歧杆菌的发酵豆乳。
发明的公开考虑到前面所述的内容，本发明的发明人已进行了认真的研究，并已发现了满足上述对活菌计数要求的双歧杆菌同时也发现了可通过使用双歧杆菌生产味道好并具有高活菌计数的发酵豆乳。已经在这些发现的基础上完成了本发明。
因此，本发明提供刚在豆乳培养基中培养之后表现出1×109细胞/ml或更高的活菌计数并在于10℃贮存14天后维持1×108细胞/ml或更高的活菌计数的短双歧杆菌。本发明还提供含有双歧杆菌的发酵豆乳。
附图简述
图1是豆乳中所含细菌的存活率的图示。图2是发酵豆乳中YIT4065菌株的存活率的图示。
实施本发明的最佳方式本发明的短双歧杆菌在豆乳培养基中表现出显著高的存活率，并在生长至1×109细胞/ml的水平之后，甚至在10℃下贮存14天后仍能维持1×108细胞/ml或更高的活菌计数。
属于短双歧杆菌的微生物的例子包括名为YIT 4065并按照布达佩斯条约作为FERM BP-6223(原始保藏日1996/2/29)保藏在国立生命科学和人体技术研究所，工业科学和技术局(地址1-3，Higashi 1-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken 305-0046日本)的微生物。以下列方式产生该细菌。
将培养的短双歧杆菌YIT 4006细胞(按照布达佩斯条约作为FERM BP-752(原始保藏日1977/1/28)保藏在发酵研究所，工业科学和技术局，国际贸易和工业部(地址1-3，Higashi 1-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken 305-0046日本))(1.5×109细胞)悬浮于50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中，并将等量的5μg/ml NTG(N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍)溶液与悬浮液混合。获得的混合物在37℃保持30分钟。通过洗涤去除NTG之后，将获得的突变处理的细胞接种到14％全乳粉培养基(酵母提取物含量0.03％)中并于37℃进行培养直至pH达到4.5-4.7。在培养产物中加入8％的细滴溶液，并将混合物倒入试管中。每个试管用丁基橡胶塞封住并贮存于10℃。通过使用改良的Rogosa琼脂培养基在一段时间测定活菌计数。当活菌计数达到约1％时，将贮存的产物再次接种到14％的全乳粉培养基(酵母提取物含量0.03％)中并于37℃培养直至pH达到4.5-4.7。向培养产物中加入糖之后，再次贮存混合物。将此贮存-计数-接种-培养的过程重复4次，然后从这样获得的发酵产物中分离得到表现出改善的存活性的短双歧杆菌YIT 4065菌株。
除了上述的存活特性以外，短双歧杆菌YIT 4065还表现出下列真菌学特性。
通过在光学显微镜下进行的观察证明细菌是多形性的，即杆状的或有分枝的，并且是革兰氏阳性的。当细菌在改良的Rogosa琼脂培养基中进行厌氧培养时，形成白色而光滑的菌落，而当将它在乳培养基中进行相似的培养时，形成的乳酸和醋酸使乳凝结。过氧化氢酶的活性是阴性的。
细菌对核糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、乳糖、蜜二糖、绵子糖、松三糖和水杨苷表现出阳性的发酵活性，而对阿拉伯糖、木糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和菊粉表现出阴性的发酵活性。
本发明的发酵豆乳可通过使用上述短双歧杆菌发酵豆乳来生产。
本发明中作为原料的豆乳优选地从未经处理的含油和脂肪的大豆、脱脂大豆、大豆薄片等中产生。脱脂大豆可作为原料。
豆乳可通过下列方法生产将原料浸入水中；加入选择性地含有重量百分比为0.5-1.0(在下文简称为％)的碳酸纳的热水碾碎；去除okara(豆腐渣)；并加热消毒。然而，豆乳的生产并不限于此方法，并且用于本发明的豆乳可用任何方法生产。
在豆乳中，可以添加细菌生长所需的营养物质，如掺入食物中的糖，例如蔗糖、葡萄糖、果糖或转化糖；肉膏；蛋白胨；酵母提取物；和肽以便用细菌进行后处理。此外，为实现靶细菌中的最佳pH，也可将掺入食物中的酸如柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸和醋酸加入豆乳中。
对发酵方法没有特别的限制，并且发酵可在典型的条件下进行。例如，当将短双歧杆菌YIT 4065接种到上述豆乳中时，可在37℃下进行培养约20-22小时直至pH达到约4.5-4.7。发酵可在按照培养条件适当选择的条件如静置培养、旋转培养、振荡培养和好气培养下进行发酵。
尽管本发明的发酵豆乳可以通过将短双歧杆菌加入豆乳中生产，但也可进一步加入其它双歧杆菌或其它微生物。这样的微生物的例子包括细菌如乳杆菌、乳球菌、链球菌、明串珠菌、芽孢杆菌、醋杆菌和葡糖杆菌；酵母如酵母、假丝酵母、红酵母、毕赤酵母、裂殖酵母、色串孢和接合酵母；及丝状真菌如曲霉、散囊菌、红曲霉、分枝菌、脉孢菌、青霉和根霉。
由此获得的本发明的发酵豆乳可原样作为食物或可制成口服药物，并可进一步含有任何通常使用的添加剂。这些添加剂的例子包括糖化物、蛋白、脂肪和油、维生素、植物提取物、动物提取物；细菌提取物；香料和颜料。并且，本发明的发酵豆乳可加工成任何形式，如液体、糊状物、蛋糕或固体。除了豆乳饮料以外，发酵豆乳还可加工成多种食品如豆乳酸乳酪、豆乳布丁和豆腐。
实施例下面以实施例的方式更详细地描述本发明。
实施例1豆乳(Shikoku Kakoki的产品，固体含量12.0％，粗脂肪2.48％，粗蛋白4.71％)在100℃下用蒸汽消毒90分钟。
通过使用在厌氧条件下生产的豆乳进行数次传代，从而产生如图1所示的两个短双歧杆菌接种体和两个长双歧杆菌接种体。每个接种体以0.5-2％的量接种到上述的消毒豆乳中，并培养至pH达到4.6。
当将葡萄糖以5％的量加入发酵产物中后，将混合物在厌氧条件下贮存于10℃。计数存活的细胞，结果如图1所示。
两个短双歧杆菌样品在发酵产物制备之后不久表现出1×109细胞/ml的活菌计数。但是，短双歧杆菌ATCC 15700在贮存14天后未能维持1×108细胞/ml的活菌计数。
同时，两个长双歧杆菌样品也未能保持活菌计数。
本发明的短双歧杆菌YIT 4065(FERM BP-6223)在贮存之后保持了1×108细胞/ml或更高的活菌计数，并提供了具有高活菌计数和高存活率的发酵豆乳。
实施例2将豆乳(Shikoku Kakoki的产品，固体含量12.0％，粗脂肪2.78％，粗蛋白5.03％)(7L)置于10-L的发酵罐中并在100℃下用蒸汽消毒90分钟。
通过使用在厌氧条件下生产的豆乳进行数次传代，从而产生短双歧杆菌接种体。每个接种体以0.5％的量进行接种，并培养至pH达到5.3。
当将含有天冬苯丙二肽酯(0.13％)和柠檬酸(1.1％)的糖浆溶液以5％的量加入发酵产物中后，将混合物在厌氧条件下贮存于10℃。计数存活的细胞并检测味道，结果如图2所示。
本发明的短双歧杆菌YIT 4065在10℃贮存14天之后保持了1×108细胞/ml或更高的活菌计数，并且通过使用相同的双歧杆菌生产的发酵豆乳具有很好的味道。
工业实用性本发明的短双歧杆菌起初表现出1×109细胞/ml或更高的活菌计数并在10℃下贮存14天后能维持1×108细胞/ml或更高的活菌计数，因此是能通过改善肠内环境促进人体健康的非常好的双歧杆菌。
本发明的使用短双歧杆菌的发酵豆乳含有高浓度的双歧杆菌，它可具有多种可能的用途，并在贮存过程中有利地维持活菌计数而没有剧烈的活菌计数的大幅度下降。
权利要求
1.刚在豆乳培养基中培养之后表现出1×109细胞/ml或更高的活菌计数并在于10℃贮存14天后维持1×108细胞/ml或更高的活菌计数的短双歧杆菌。
2.根据权利要求1所述的短双歧杆菌，它命名为YIT 4065并作为FERM BP-6223保藏在国立生命科学和人体技术研究所，工业科学和技术局。
3.含有如权利要求1或2所述的短双歧杆菌的发酵豆乳。
全文摘要
刚在豆乳培养基中培养之后表现出1×10
文档编号A23C11/10GK1269827SQ98808850
公开日2000年10月11日 申请日期1998年8月11日 优先权日1997年9月4日
发明者岛川康久, 森下隆, 石川文保 申请人:株式会社益力多本社 被以下专利引用 (1),