一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种新颍的具有抑制肌肉生成抑制素（myostatin，MSTN)表达的化学 合成剂，其在鲤鱼幼鱼肌肉生长中起促进作用。
【背景技术】
[0002] 肌肉生成抑制素（myostatin，MSTN)作为一种新的生长因子在1997年被发现，被 命名为生长分化因子-8 (⑶F-8)。McPherron和Grobet等报道Myostatin编码序列发生突 变的牛肌肉质量增加显著，呈现所谓的"双肌现象"。敲除myostatin基因的转基因小鼠的 骨骼肌重量比正常的小鼠增加2-3倍。近年来人们试图找到myostatin的抑制物来降低 myostatin对肌肉成长抑制功能的发挥。Bogdanovich和Kim等分别在鸡和小鼠体内注射 myostatin蛋白抗体，实验结果发现鸡、小鼠的体重和肌肉量都增加。Lee等在2010年报 道将虹鳟鱼浸泡在含有体外表达MSTN抑制物的溶液中，鱼体重能够提高42%。Amali等在 2004年通过给斑马鱼注射morpholino抑制MSTN表达观察到鱼体皆增大现象。
[0003] 中国专利于2014. 04. 09授权公告了一种鱖鱼幼鱼肌肉生长促进剂，其授权公告号 为CN 103211099 B。所述鱖鱼幼鱼肌肉生长促进剂的成分是经过标记与化学修饰的化学合 成的双链小RNA分子，双链小RNA分子的正向序列为：5' -AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3'; 双链小RNA分子的反向序列为：5' -AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-Chol3'，反向序列 进行化学修饰，反向序列的3'端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5'端两个硫代修饰AsAs， 反向序列的3'端四个硫代修饰TsGsTsTs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。其突出优点 是人工合成了促进鱖鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明 显促进养殖鱖鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鱖鱼肉质不受影 响。
[0004] 鲤鱼，中文别名：鲤拐子、鲤子。鲤科（Cyprinidae)中粗强的褐色鱼，学名 Cyprinus carpio。原产亚洲，后引进欧洲、北美以及其他地区，杂食性。鳞大，上腭两侧各 有二须，单独或成小群地生活于平静且水草丛生的泥底的池塘、湖泊、河流中。鲤鱼体态丰 满，肉质肥厚，细嫩鲜美，营养丰富，深受广大消费者欢迎。目前我国鲤鱼养殖年产量超过40 万吨，其产值每年在200亿人民币以上，而且近几年其价格稳中有升，人工养殖获经济效益 较大，现已成为水产品市场中重要中高档产品。如何提高鲤鱼养殖产量满足市场需求稳定 鲤鱼价格已成为当务之急，也是保持我国鲤鱼养殖业沿着优质高效方向持续快速健康发展 的必要前提。开发MSTN抑制剂是促鱼肉生长新途径，因此本发明通过化学合成一对特异抑 制鲤鱼MSTN表达的核苷酸短链，从抑制肌肉生成抑制素方面来促进鲤鱼鱼肉生长，为保持 我国鲤鱼高效健康养殖持续发展奠定基础。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，以解决上述【背景技术】 中提出的问题。
[0006] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0007] -种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的 双链小RNA分子；所述双链小RNA分子的正向序列为：5 ^ -UACGUAUAACUAAGCGUGTCAACUA GAG-3，；双链小 RNA 分子的反向序列为：5，-CsUsCGUUACGAUAACGUCCGTAACUTsGsUsAs-Ch 〇13^，所述反向序列进行化学修饰，反向序列的3'端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5' 端两个硫代修饰CsUs，反向序列的:V端四个硫代修饰TsGsUsAs，反向序列的碱基全部甲 基化修饰。
[0008] 本发明的有益效果是：
[0009] (1)本发明是综合运用分子生物学、动物营养学和化学合成原理，对影响鲤鱼肌肉 生长深入研宄基础上，研宄开发的具有高效、稳定等特点的肌肉生长促进剂。
[0010] (2)本发明生产工艺成熟、产品质量稳定、价格合理、核心技术先进和经济效益显 著，是目前比较理想的鲤鱼肌肉生长促进剂，具有广阔的市场前景。
[0011] (3)本发明的突出优点是人工合成了促进鲤鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合 物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鲤鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌 肉生长促进剂后鲤鱼肉质更加鲜美。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合【具体实施方式】对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
[0013] 实施例1
[0014] 鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼生长性能的影响
[0015] 通过对鲤鱼肌肉局部注射的方式，测试鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂在促进鲤鱼 幼鱼肌肉生长中的作用，具体试验如下：
[0016] (1)试验材料：选用人工饲养的等长等重的健康河南黄河鲤幼鱼为试验对象，随 机分为阴性对照组、阳性对照组、试验组和对比组，每组20条。所述河南黄河鲤与陕西黄河 鲤、宁夏黄河鲤、山东黄河鲤、山西天桥黄河鲤并列阴性对照组为黄河干流的"五大名鲤"； 黄河鲤又同长江謝鱼、松江鲈鱼、太湖银鱼被共誉为我国四大名鱼。
[0017] (2)试验方法：1.阴性对照组的河南黄河鲤幼鱼不注射任何试剂；2.阳性对照组 的河南黄河鲤幼鱼注射PBS (磷酸盐缓冲液）；3.试验组的河南黄河鲤幼鱼注射鲤鱼专用肌 肉生长改善促进剂；4.对比组的河南黄河鲤幼鱼注射中国专利CN 103211099B公告的鱖鱼 幼鱼肌肉生长促进剂；其中，阳性对照组、试验组和对比组的注射剂量均为10 μ g/g体重， 且每天一次，连续注射三天，然后在相同条件下人工饲养一周。
[0018] (3)饲养一周后测定鱼体生长指标，具体结果请见表1。
[0019] 表1 :鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼生长性能的影响（平均值土标准差）
[0020]
【主权项】
1. 一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，其特征在于，其成分是经过标记与化学修饰的 化学合成的双链小RNA分子；所述双链小RNA分子的正向序列为W -UACGUAUAACUAAGCG UGTCAACUAGAG-3，；双链小RNA 分子的反向序列为：5，-CsUsCGUUACGAUAACGUCCGTAACUTsG sUsAs-Chol3'，所述反向序列进行化学修饰，反向序列的3'端胆固醇修饰-Chol，反向序 列的Y端两个硫代修饰CsUs，反向序列的:V端四个硫代修饰TsGsUsAs，反向序列的碱基 全部甲基化修饰。
【专利摘要】本发明公开了一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子；所述双链小RNA分子的正向序列为：5′-UACGUAUAACUAAGCGUGTCAACUAGAG-3′；双链小RNA分子的反向序列为：5′-CsUsCGUUACGAUAACGUCCGTAACUTsGsUsAs-Chol3′，所述反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰CsUs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsUsAs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。本发明的突出优点是人工合成了促进鲤鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鲤鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鲤鱼肉质更加鲜美。
【IPC分类】A23K1-16, A23K1-165, A23K1-18
【公开号】CN104605209
【申请号】CN201510088800
【发明人】刘备
【申请人】刘备
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月26日