专利名称：用于促进哺乳动物生长的组合物以及利用该组合物促进哺乳动物生长的方法
技术领域：
本发明涉及一种用于促进哺乳动物生长的组合物，以及一种利用该组合物促进哺乳动物生长的方法。更具体地说，本发明涉及一种用于促进家畜生长的组合物，以及一种通过对哺乳动物施用该促进生长的组合物来增强哺乳动物的免疫力的方法，所述组合物包括一种含有磷酸化氨基酸的蛋白质。
一种含有磷酸化氨基酸的蛋白质即乳酪蛋白磷酸肽(下文缩写成CPP)是一种具有高含量磷酸丝氨酸的短肽，其通过乳酪蛋白与酶反应来得到。据鉴定以乳作为原料的发酵食品中也含有CPP，其作用是避免无机物的不溶性。因此，CPP在作为促进钙等吸收的物质方面引起了人们的很大兴趣。
并且，已知CPP在细胞培养系统中具有免疫学活性，但目前还不知道当添加到家畜饲料等中的CPP被摄食时，使抗体的产生增加以及使增肥效果提高。
而且，佐剂能够刺激免疫系统以增强对抗原的免疫反应，并主要作为助剂被添加到疫苗中。作为典型的佐剂，已知有铝化合物、多核苷酸、细菌的细胞成分等。然而，多数这些佐剂几乎不能用于人类。特别是，佐剂对抗原性物质普遍有效。因此，如果将这些佐剂用于人体疫苗，会出现以下问题具有增强含在抗原中的杂质的抗原性刺激作用或引发有害过敏反应的危险从而需要特别关注所用抗原的纯度等。因此，需要研制出安全性高的佐剂。
家畜传染病如肺炎、细菌性腹泻等不仅对家畜的生长非常不利，而且其它健康的家畜也有可能感染上这些传染病。特别是，传染病会感染幼畜，这是由于幼畜的自身免疫力弱，并且传染病往往能导致幼畜的死亡。
此外，传染病对生长延迟产生很大的影响。对于家畜来说，经济损失是巨大的。当家畜感染上肺炎或细菌性腹泻时，尽管会导致生产成本的增加，但还是通过抗生素给药进行治疗。因此，需要一种在安全性、疗效、可操作性、成本等方面不存在问题的增强家畜免疫力的方法。
基于这些情况，本发明的目的在于建立一种增强哺乳动物如家畜等的免疫力从而促进生长的技术。
权利要求1中所述的发明是一种用于促进哺乳动物生长的组合物，该组合物的特征在于包括一种含有磷酸化氨基酸的蛋白质。
权利要求2中所述的发明是权利要求1所述的组合物，其中所述的含有磷酸化氨基酸的蛋白质是乳酪蛋白磷酸肽。
权利要求3中所述的发明是一种促进哺乳动物生长的方法，该方法的特征在于给哺乳动物施用权利要求1或2中所述的组合物。
权利要求4中所述的发明是一种免疫球蛋白激活佐剂，该佐剂的特征在于包括一种含有磷酸化氨基酸的蛋白质。
权利要求5中所述的发明是权利要求4所述的佐剂，其中所述的含有磷酸化氨基酸的蛋白质是乳酪蛋白磷酸肽。
权利要求6中所述的发明是权利要求4所述的佐剂，其中所述的免疫球蛋白是抗乳球蛋白、产气荚膜梭状芽孢杆菌或大肠弯曲杆菌的。
图2是表示肠内含物(粪便)中的IgA总含量的图表。
图3是表示幼猪血清中的IgG含量的图表。
实施本发明的最好方式本发明的目的在于使得哺乳动物摄取含有磷酸化氨基酸的蛋白质如CPP等，由此增强免疫力，增强对传染病的抵抗力并消除抑制哺乳动物生长的因素从而促进生长。
本发明中所述的传染病的类型不受限制，并且包括所有由于作为病原体的微生物侵入哺乳动物的表面或内部后并定居其中进行繁殖而引起的疾病。
而且，由含有磷酸化氨基酸的蛋白质带来的本发明的效果，如下所述，主要体现在猪的身上。然而，本发明所涉及的哺乳动物并不只限于猪，而且还包括人和其它与猪具有相同免疫系统的家畜如牛、马、羊等。而且，宠物动物如狗、猫等也包括在本发明中。
本发明中使用的含有磷酸化氨基酸的蛋白质是指一种含有与磷酸结合的氨基酸，并且普遍存在于体内。这种蛋白质的具体实例包括卵黄高磷蛋白、酪蛋白、CPP等。
其中，上文描述的CPP可能是一种短肽(乳酪蛋白磷酸肽)，该短肽中具有高含量的通过乳酪蛋白与酶的反应得到的磷酸丝氨酸。例如，可以使用以下商品名的CPP“Meiji CPP-I”、“Meiji CPP-II”和“Meiji CPP-III”(全部由Meiji Seika Kaisha，Ltd.制造)。
对哺乳动物施用蛋白质如CPP等的方法通常为以下方法将饲料等与一种蛋白质混合并通过口摄取。还可以使用将一种蛋白质添加到饮料如水等中并摄取的方法。
对与一种蛋白质如CPP等混合的饲料等没有特别的限制，可以使用商品化的产品。可以根据哺乳动物的类型、它们生长的程度等来选择合适的产品。
掺入饲料等中的含有磷酸化氨基酸的蛋白质的量将根据哺乳动物的类型等来确定。例如，以商品名“Meiji CPP-I”(由MeijiSeika Kaisha，Ltd.制造)作为CPP时，基于饲料等的合适量是0.1-1％(重量)，优选地是0.5％(重量)。
此外，对家畜等施用CPP的时间等没有特别限制。为了得到满意的效果，在一定的时间段内连续地对家畜等施用含CPP饲料是可取的。例如，对于幼猪，通过口服施用3个多星期，优选地5个星期就能显示出效果。
施用含有磷酸化氨基酸的蛋白质可以增加IgA的量，并对局部免疫有效。而且，当将细菌等作为抗原使用时，可以使在抗原-抗体反应中起主要作用的IgG增加。综上所述，当给人施用这种蛋白质时，通过将它添加到食物或食物成分中并不断摄食能够预防传染病。同样，通过在宠物的食物中掺入适量的该物质，也能防止狗、猫等中的传染病。
下面通过参照阐明本发明效果的实施例来更加具体地说明本发明。然而，本发明的范围不受这些实施例的限制。
表1 幼猪生长饲料
以下实验是以16头(全部是3周龄)长白猪(Landrace)和大白猪(Large White)和杜洛猪(Duroc)的F1杂交幼猪(LWD)为一组进行的。
前面表中列出的饲料被随意地摄取5星期。而且，作为对照，以同样的方式摄取一种其中添加了0.5％(重量)的用来调节蛋白质含量的卵清蛋白且不含CPP的饲料。并且，在β-乳球蛋白处理组中，β-乳球蛋白以乳液的形式与弗氏不完全佐剂一起以2个星期的间隔肌内注射三次。
饲养后，各类免疫球蛋白的总含量和抗β-乳球蛋白的特异性抗体的含量通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行测定。即，
图1显示了通过ELISA测定肠内容物(粪便)中抗β-乳球蛋白的免疫球蛋白(IgG、IgM和IgA)的含量，图2显示了肠内容物中IgA的总含量。
结果，通过施用CPP，几乎没有观察到肠内容物中抗β-乳球蛋白的特异性IgG和IgM的含量变化，而IgA的总含量有了显著的增加。而且，肠内容物中的IgA的总含量同样也有所增加。
顺便提一下，已知IgA在局部免疫中起着重要的作用。IgA通过局部粘膜淋巴组织来产生，然后作为分泌型IgA分泌到粘膜表面，并在粘膜表面作为抗原的特异性免疫抗体发挥作用。据说分泌型IgA对细菌或病毒的凝集能力很高并且对粘液的亲和性也很强，而且进一步对消化酶具有抗性因而能有效抑制微生物粘附、侵入、在肠等的粘膜表面上形成菌落等(buta byorigaku-seiri.shikkan.shiyo-<第3版>，由K.K.Kindai Shuppan出版，第78-91页)。结果表明通过施用CPP使免疫力得到增强。
另外，在对幼猪开始进行实验时(在断乳时)和实验完成时分别称量每一头幼猪的体重，由增加的体重评估促进生长的效果。结果见表2。
表2 对幼猪金开始实验前和结束实验后进行称重的结果
从表2可以清楚地看出，完成实验时没有添加CPP的组的幼猪的平均体重是12.68kg和13.04kg，并且体重分别增加了5.22kg和5.58kg。同时，完成实验时添加CPP的组的幼猪的平均体重是15.86kg和14.94kg，并且体重分别增加了8.38kg和7.32kg。因此，可以确定无论是否进行了β-乳球蛋白的处理，通过施用CPP都促进了生长。
首先，使用总共12头至少30日龄的SPF幼猪(平均体重9.7kg)作为进行试验的猪。使用实施例1中的相同饲料作为幼猪的饲料。使用一种添加了作为CPP粉的0.5％(重量)的“Meiji CPP-I”(CPP含量15％，由Meiji Seika Kaisha，Ltd.制造)的饲料作为CPP施用组的饲料，同时使用一种以同样方式添加了用来调节蛋白质含量的白蛋白(由Sigma制造，下文有时缩写成ALB)的饲料作为对照组的饲料。顺便提一句，从开始试验前7天到试验结束的6个星期内，CPP或ALB被连续添加到饲料中，随意摄取该饲料。
并且，以产气荚膜梭状芽孢杆菌标准无活性菌株(下文有时缩写成CL细胞)和大肠弯曲杆菌标准无活性菌株(下文有时缩写成Cam细胞)作为抗原性物质。这些标准无活性菌株是通过以常规方式使来源于日本农业、林业和渔业部，国家动物健康研究所的标准菌株失活而获得的。有关施用这些抗原的方法，为了确定抗原性物质的安全性通过两种途径进行施用，即口服和皮下注射。表3列出了试验组。
表3 试验组
根据以上试验组，对于CPP/CL+Cam组，也就是CL细胞和Cam细胞施用组，以一个星期的间隔按照先口服后注射的顺序口服总量为8.5mg的细胞(6mg的CL细胞+2.5mg的Cam细胞)并且皮下注射总量为6mg的细胞(4mg的CL细胞+2mg的Cam细胞)。因此，所述抗原交替施用两次，施用抗原的次数总共是四次。并且，对于CPP/CL组和ALB/CL组，也就是CL细胞施用组，以同样的方式口服总量为6mg的细胞，和以同样的方式皮下注射总量为4mg的细胞。对于口服，使用了掺有悬浮在一定量蒸馏水中的细胞的饲料。对于皮下注射，使用了弗氏不完全佐剂。补充一句，在35天的饲养期内，随意摄取饲料和水，并定期进行体重的称量和采血样。
饲养后，抗CL细胞和Cam细胞的特异性抗体的量通过实施例1中的ELISA方法进行测定。通过ELISA方法测定的血清中的IgG(用血清稀释1000倍)如图3所示。
结果表明施用了含CPP饲料的CPP/CL+Cam组和CPP/CL组的血清中的IgG含量比施用了含ALB饲料的ALB/CL组和ALB组的血清中的IgG含量高。而且，随着使施用抗原的周期延长，IgG的含量得到了增加。
此外，在开始进行幼猪实验时和幼猪实验完成时分别称量每一组中的每头幼猪的体重。结果，在施用了CPP的CPP/CL+Cam组和CPP/CL组中，体重在饲养期间增加正常。
IgG是普通动物体内最必需的免疫球蛋白，其占初乳或血清中所含有的免疫球蛋白的80％或更多，在抗原-抗体反应中起主要作用。因此，通过施用作为抗原的细菌如CL细胞、Cam细胞等可增加血清中的IgG含量，这证明了通过施用CPP，免疫力得到增强。工业实用性本发明提供了一种促进哺乳动物生长的组合物和佐剂，该组合物包括含有磷酸化氨基酸如CPP等的蛋白质。通过对哺乳动物施用这种组合物，能够增强哺乳动物的免疫力，并由此促进生长。
权利要求
1.一种用于促进哺乳动物生长的组合物，其特征在于该组合物包括一种含有磷酸化氨基酸的蛋白质。
2.如权利要求1所述的组合物，其中含有磷酸化氨基酸的蛋白质是一种乳酪蛋白磷酸肽。
3.一种促进哺乳动物生长的方法，其特征在于对哺乳动物施用如权利要求1或2所述的组合物。
4.一种免疫球蛋白激活佐剂，其特征在于该佐剂包括一种含有磷酸化氨基酸的蛋白质。
5.如权利要求4所述的佐剂，其中含有磷酸化氨基酸的蛋白质是一种乳酪蛋白磷酸肽。
6.如权利要求4所述的佐剂，其中所述免疫球蛋白是一种抗β-乳球蛋白、产气荚膜梭状芽孢杆菌或大肠弯曲杆菌的免疫球蛋白。
全文摘要
本发明目的在于提供一种在安全性、可操作性等方面不存在问题的能够增强哺乳动物免疫力并促进哺乳动物生长的方法。在本发明中,哺乳动物对含有磷酸化氨基酸的蛋白质如CPP等的摄取能够增强免疫力,增强对传染病的抵抗力,消除抑制哺乳动物生长的因素并促进生长。而且,通过施用含有磷酸化氨基酸的蛋白质可增加IgA和IgG的量。因此,通过将这种蛋白质添加到适当的食物或食物成分中以使人不断地摄取所述蛋白质能够预防传染病。同样,通过将适量该物质掺在宠物食物中能够预防狗、猫等的传染病。
文档编号A61K38/17GK1370054SQ00811917
公开日2002年9月18日 申请日期2000年8月23日 优先权日1999年8月24日
发明者大谷元, 北村博, 泽田一彦, 押田敏雄, 楠原征治 申请人:明治制果株式会社