专利名称：用于检测上皮癌的若丹明诊断剂和诊断方法
技术领域：
本发明涉及新颖的诊断剂，用于检测癌性与癌前期上皮组织。
按照另一方面，本发明涉及新颖的方法，其用于检测和/或描绘癌性和/或癌前期上皮组织。
本发明在另一方面涉及这样的诊断程序及其所用试剂，它们尤其可用于体内筛选可能的口腔癌患者，作为牙医师或内科医师的例行检查或程序的一部分，例如定期的牙科或内科检查、牙齿清洗等。
本发明在另外一方面涉及这样的程序及其所用组合物，它们使用比现有技术程序所用染剂更易获得和/或合成更便宜与更简单和/或更纯的染剂。
本发明在另外一方面涉及采用这样一种染剂的体内程序和组合物，尽管现有技术有相反的教导，不过该染剂是足够无毒的，以便通过清洗整个口腔和/或漱口而能够被采用。
用于检测恶化前上皮损伤、例如口腔损伤和口腔癌的体内诊断程序采用这样的染剂组合物，它们被因发育异常、增生、肿瘤发生和其他活性表面损伤而异常的组织所选择性地保留，这些程序是本领域已知的。例如，采用荧光素或荧光素衍生物的程序公开在Chenz《中国口腔学杂志》(2744-47(1992))和Filurin(《口腔学》(俄罗斯)7244-47(1993))中。这些程序涉及涂以染剂，然后在紫外灯下用肉眼检查，以检测选择性发荧光的癌性/癌前期组织。
另一种现有技术程序涉及体内用甲苯胺蓝O清洗，然后是正常的肉眼检查，以检测所有选择性染色的组织。这样的程序例如公开在Tucci等的美国专利5,372,801和Mashberg的美国专利4,321,251中。甲苯胺蓝作为体外组织病理学染剂已经使用了数十年。通过这种用途它已经成为已知的异染性染剂，把富含在DNA与RNA中的核染成紫色至粉红色。当染剂与核酸或其他酸性细胞大分子结合时，甲苯胺蓝O固有的深蓝色变为紫色或粉红色。当然，这种类型的染色取决于染剂进入内部亚细胞结构，例如核。仅用甲醛或其他破裂细胞膜但不破坏细胞一般结构的试剂“固定”组织样本即可易于实现这种进入。
与涉及体外用途的机理相反，甲苯胺蓝O体内染色口腔组织是由于它能够穿透细胞壁和依附于线粒体，线粒体保留染剂的时间比细胞外基质组分更长。
Mashberg的程序涉及用甲苯胺蓝O溶液漱口清洗整个口腔，然后用水和乙酸清洗以除去未被癌性或癌前期组织保留的染剂。然后在10-14天后，直接对怀疑部位涂以甲苯胺蓝O组合物，通过Mashberg程序进行初步诊断。Tucci的’801专利公开了按照Mashberg教导的通用程序所使用的改进甲苯胺蓝O组合物。
Papazian《胃肠病学临床与生物学》916-22(1985)提出了一种体内程序，涉及吕戈尔溶液(Lugol’s solution)(碘)和甲苯胺蓝O的用途，用于同时检测食管癌和上气道消化道癌。
最近，Pomerantz的美国专利5,882,627公开了一类结构明确的噁嗪与噻嗪染剂，它们一般可用于Mashberg诊断方案。
Bemal等《癌症研究》43,716-720(1983)公开了若丹明染剂体外选择性地抑制癌细胞生长并杀死癌细胞。Gaboury等的美国专利5,773,460公开了若丹明优先地被很多肿瘤细胞所保留，提出了某些若丹明酯可用于某些肿瘤细胞系的体外光动力抑制，但是也指出全身毒性可能限制它在化学疗法中的有用性。
若丹明即2-(6-氨基-3-亚氨基-3H-呫吨-9-基)苯甲酸甲酯及其离子盐、例如盐酸盐，是吡啶鎓类亲脂性阳离子染剂。一般按照Mashberg的’251专利所公开的方案，通过局部涂于上皮，然后通过正常的肉眼检查，它有效地选择性鉴别和/或描绘癌性与癌前期上皮组织。
适合涂于上皮组织的染剂用若丹明组合物是这样制备的，将该染剂与适合的药学上可接受的溶剂混合。优选地，用适合的药学上可接受的缓冲系统调节若丹明溶液的pH，以便最终的溶液是基本上等渗的，pH范围大约为2.5至7，优选为4.0-5.0。这可以用乙酸-乙酸钠缓冲体系来实现。其他适合的缓冲体系包括柠檬酸-柠檬酸钠，或混合的酸盐体系，例如柠檬酸-磷酸钠等。
用于提供本发明的液体若丹明染剂组合物的溶剂是一种水性溶剂。按照目前本发明优选的实施方式，溶剂包括药学上可接受的、也就是无毒、无反应性醇，例如乙醇。这样的溶剂不会可感知地干扰染色机制，本身也不会有助于染剂从显色形式还原为隐色形式。
如果作为口腔“洗液”使用，可以加入对染剂组合物其他组分稳定的矫味剂，以提高组合物的可口性。
优选地调节若丹明染剂在液体组合物中的量至浓度大约占最终组合物重量的1％，不过也可以采用更高的浓度，更低的浓度也至少是部分有效的。现在，我优先采用含有约0.5至约3.5重量％若丹明组分的染剂组合物。
本发明还涵盖用于本发明方法的组合物，其中通过以类似于Tucci的’801专利所公开的方式包含药学上可接受的氧化剂，存在于组合物中的染剂的任何隐色形式被氧化为显色形式。
实施例提供下列实施例的目的是向本领域技术人员阐述发明的实施，但不限制其范围，发明范围仅由权利要求书限定。
实施例1诊断组合物的制备按下列比例(重量％)混合所示各组分，制备诊断组合物
纯净水U.S.P. 83.85冰乙酸U.S.P. 4.61乙酸钠三水合物U.S.P. 2.45SD18乙醇 7.4830％过氧化氢，U.S.P. 0.41IFF覆盆子IC563457 0.20若丹明 1.00实施例2清洗溶液的制备按所示比例(重量％)混合下列组分，制备清洗溶液纯净水U.S.P. 98.70冰乙酸U.S.P. 1.00苯甲酸钠U.S.P. 0.10IFF覆盆子IC563457 0.20实施例3临床有效性利用Mashberg的’251专利所公开的诊断方案，比较实施例1和2组合物与按照Tucci的’801专利所制备的甲苯胺蓝O诊断对照组合物(diagnostic control composition)的临床有效性。
首先采用TBO对照组合物筛选口腔病变患者。鉴别潜在的癌性或癌前期病变后，用水和实施例2乙酸洗液反复清洗怀疑部位，除去所有TBO痕迹。
然后使用表现口腔病变的患者作为实施例1若丹明诊断组合物的受试验者。将2-3cc若丹明组合物涂于病变黏膜表面，然后用清洗混合物和水清洗，以除去过量若丹明组合物。
实施例1若丹明诊断组合物染色部位组织的组织学检查确认，若丹明组合物至少在鉴别和描绘癌性与癌前期上皮组织上同甲苯胺蓝O一样有效。
实施例4重复实施例3的程序，但是用试验与对照组合物漱口，通过清洗涂于口腔黏膜，而不是直接涂于怀疑部位局部。得到相同结果。
我的发明已经公开到使本领域技术人员能够理解和实施的程度，并且已经公开了目前优选的实施方式。
权利要求
1.用于鉴别和描绘癌性上皮组织的诊断方法，包含(a)将若丹明涂于上皮，以选择性标记癌性组织；和(b)肉眼检查所述上皮，通过比较被怀疑部位的颜色与相邻组织的颜色，鉴别和描绘被怀疑为癌性的组织部位。
2.恶化前上皮损伤和癌的体内检测方法，包括下列连续步骤用被癌性与癌前期组织选择性保留的染剂组合物清洗上皮，其中该染剂组合物基本上由甲苯胺蓝O组成，和用清洗组合物清洗上皮，以除去未被保留的染剂组合物，该方法的改进在于其中该染剂组合物包含若丹明。
3.用于体内检测癌性与癌前期组织的生物染剂组合物，包含(a)若丹明，(b)药学上可接受的水性溶剂，和(c)用于隐色若丹明的药学上可接受的氧化剂。
全文摘要
用于检测和/或描绘癌性与癌前期上皮组织的若丹明染剂组合物和方法。
文档编号A61KGK1371290SQ00812220
公开日2002年9月25日 申请日期2000年6月30日 优先权日2000年6月30日
发明者道格拉斯·D·伯克特 申请人:日拉公司