专利名称：一种双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种西药制剂，具体涉及一种用于预防和治疗各种特异、非特异性妇科炎症和妇科肿瘤的双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂以及制备方法。
本发明是通过下面的技术方案来解决上述技术问题的。其特征在于它是从年轻健康妇女阴道穹隆处分离并鉴定出双歧杆菌、乳酸杆菌各一株，经体外诱变培养、耐氧驯化，然后再加入分散剂冷冻干燥后制成。其制备方法是以PYG厌氧菌增菌培养基使上述菌种增菌达到浓度109～1011/ml以上，取上述浓度菌液10～30％，加10～30％脱脂牛乳、5～15％蔗糖分散剂，10～40％明胶、40～70％甘油赋形剂，充分混合后，于-80℃低温冰箱30～60分钟冻结，22～26小时内-30℃～70℃冷冻干燥，再将两种菌粉1∶1混合，使每颗药丸含双歧杆菌、乳酸杆菌活菌各0.4～0.6亿。
本发明所得菌株生物性状稳定、无耐药质粒存在、耐氧性增强，适合工业生产。其所用菌株均来源于人体正常菌群，且局部用药，不会产生全身副作用；药物生产中菌液快速冷冻干燥，分散剂较少引起细菌死亡，两利细菌可协同生长，协同抗炎、抗感染，抑菌谱较前扩大，同时添加的双歧杆菌具有抗肿瘤及免疫调节作用，使本药物的适应征更广，属新型阴道微生态制剂。
本发明双歧杆菌、乳酸杆菌菌株的分离方法是取23～27岁健康已婚未育、无阴道炎妇女阴道穹隆分泌物0.2ml，分别以双歧杆菌、乳酸杆菌选择性液体培养基倍比稀释，取稀释度10-5～10-7分泌物稀释液以铂耳环划线分别接种于双歧杆菌、乳酸杆菌选择性培养基平皿，厌氧培养24～72小时，挑单克隆于各自选择性培养基进一步选择培养，再用法国梅里埃公司生产的AP120A厌氧鉴定试剂条进行鉴定，结合普通光镜形态、气相色谱仪分析，得到长双歧杆菌、发酵乳酸杆菌各一株，质粒分析发现均无质粒的存在；然后采用菌种体外5代或5代以上进行传代培养，氧浓度5～15％培养环境下进行耐氧驯化。本发明所得菌株生物性状稳定、无耐药质粒存在、耐氧性增强，适合工业生产。其细菌分离所用的选择性培养基中双歧杆菌选择性培养基PH值为6.8～7.2，乳酸杆菌选择性培养基，PH值为5.8～6.2。
本发明制备方法以PYG(胰胨酵母复合培养基)厌氧菌增菌培养基使上述菌种增菌达到浓度109～1011/ml以上，取上述浓度菌液10～30％，加10～30％脱脂牛乳、5～15％蔗糖分散剂，10～40％明胶、40～70％甘油赋形剂，充分混合后，于-80℃低温冰箱30～60分钟冻结，24小时内-30℃～-70℃冷冻干燥，两种菌粉1∶1混合即可，制剂为胶囊形式；每颗药丸含双歧杆菌、乳酸杆菌活菌各0.5亿。
本发明使用方法使用前将药丸1颗以配备的平衡液(生理盐水)10ml充分混合溶解，阴道内滴入，早晚各一次。
权利要求
1.一种双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂，其特征在于它是从年轻健康妇女阴道穹隆处分离并鉴定出双歧杆菌、乳酸杆菌各一株，经体外诱变培养、耐氧驯化，然后再加入分散剂冷冻干燥后制成。
2.根据权利要求1所述的双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂，其特征在于其分离方法是取23～27岁健康已婚未育、无阴道炎妇女阴道穹隆分泌物0.1～0.3ml，分别以双歧杆菌选择性培养基和乳酸杆菌选择性培养基之液体培养基倍比稀释，取稀释度10-5～10-7分泌物稀释液以铂耳环划线分别接种于双歧杆菌选择性培养基和乳酸杆菌选择性培养基平皿，厌氧培养24～72小时，挑单克隆于各自选择性培养基进一步选择培养。
3.根据权利要求1所述的双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂，其特征在于其菌种体外诱变是由菌种体外5代或5代以上反复传代培养而成。
4.根据权利要求1所述的双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂，其特征在于其耐氧驯化是在氧浓度5～15％环境下进行细菌培养。
5.根据权利要求2所述的双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂，其特征在于双歧杆菌选择性培养基之PH为6.8～7.2，乳酸杆菌选择性培养基PH为5.8～6.2。
6.一种双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂制备方法，其特征在于它是以PYG厌氧菌增菌培养基使上述菌种增菌达到浓度109～1011/ml以上，取上述浓度菌液10～30％，加10～30％脱脂牛乳、5～15％蔗糖分散剂，10～40％明胶、40～70％甘油赋形剂，充分混合后，于-80℃低温冰箱30～60分钟冻结，22～26小时内-30℃～70℃冷冻干燥，再将两种菌粉1∶1混合，使每颗药丸含双歧杆菌、乳酸杆菌活菌各0.4～0.6亿。
全文摘要
一种双歧杆菌、乳酸杆菌混合活菌滴剂,其特征在于它是从年轻健康妇女阴道穹隆处分离并鉴定出双歧杆菌、乳酸杆菌各一株,经体外诱变培养、耐氧驯化,然后再加入分散剂冷冻干燥后制成。其制备方法是:以PYG厌氧菌增菌培养基使上述菌种增菌达到浓度10
文档编号A61K35/74GK1347702SQ01128659
公开日2002年5月8日 申请日期2001年9月30日 优先权日2001年9月30日
发明者卢放根 申请人:卢放根