专利名称：非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物的制作方法
1.发明领域本发明涉及连接到载体上的非粘蛋白型合成化合物，即非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物。本发明还涉及非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物用于制备单克隆抗体、人免疫缺陷病毒(HIV)剂、抗肿瘤剂和免疫刺激剂的用途。
背景技术：
2.现有技术粘蛋白型抗原，例如，如下图所示的Tn(GalNAcα1→O-Ser/Thr)，TF(Galβ1→3GalNAcα1→O-Ser/Thr)、STn(NeuAcα2→6GalNAcl→O-Ser/Thr)在肿瘤组织中高表达，但在正常组织中的表现(appearance)受到限制(G.F.Springer，J.Natl，Cancer Inst.，1975，54，335.，S.Hakomori，Advanced inCancer Research，1989，52，257)。 近来，在作为人免疫缺陷病毒(HIV)特异性糖蛋白的gp120上发现了Tn和STn表位(Hanse，J.E.，J.Viol.；1990，64，2833.，J.Viol.，1991，65，6416.；Arch.Viol.，1992，126，11.)。且据报导O连接的寡糖的单克隆抗体阻断HIV感染(Hanse，J.E，J.Viol.；1990，64，2833；KumarA，Virology，2000，274，149)。
预计施用粘蛋白型肿瘤抗原和/或连接到可药用载体上的粘蛋白型肿瘤抗原可作为癌和HIV的特异性免疫疗法。其中这些载体是可药用的蛋白质，如白蛋白(ALB)、钥孔血蓝素(KLH)、BCG，或是合成化合物，如棕榈酰衍生物、芳族化合物、脂族化合物、烷基、氨基烷基、肽和类肽，其可诱导免疫应答(S.J.Danishefsky，J.Am.Chem.Soc.1998，120，12474.；G.Ragupathi，Glycoconjugate J.，1998，15，217.；B.M.Sandmeier，J.Immunotherapy，1999，22(1)，54.；A.Singhal，CancerRes.，1991，51，1406.；T.Shimizu，1987，55，2287-2289)。
但是，上述粘蛋白型抗原—载体在糖和载体部分之间具有O-配糖键。因此，考虑到它们的代谢稳定性和免疫原性，这些O-配糖键易于被糖苷酶如N-乙酰基氨基半乳糖苷酶水解(EC 3.2.1.49)(Eq A)，或如下式所示(Eq B)被肽酶水解肽键，且预测其活性降低或减弱。 另一方面，Beau等已经合成了作为代谢稳定Tn抗原的C-糖苷(GalNAc α1—CH2-Ser)，其中碳原子代替了连接丝氨酸和N-乙酰基半乳糖胺的氧原子，如下式(A)所示。该Tn抗原对于糖苷酶，如N-乙酰基氨基半乳糖苷酶是稳定的(Beau等，J.C.S.Chem.Commun.，1998，955.)。但是，当这些C-糖苷连接到肽上时，这些化合物可被肽酶水解，其在活体内的稳定性是不令人满意的。 并且，Roy等已经合成了作为代谢稳定的糖类抗原仿制品的糖类肽(glycopeptoid)，其连接到对于肽酶水解代谢稳定的类肽上，如下式所示(Tetrahedron Lett.，1997，38，3487)。但是，其报导的化合物被认为是不稳定的，因为预测其也被糖苷酶如N-Z酰基氨基半乳糖苷酶水解。
Beau和Roy没有报导连接到载体蛋白质上的Tn抗原的药理学活性。 如上所述，由前述天然存在的粘蛋白型抗原和载体偶联制得的化合物其糖苷键被广泛存在于活体内的糖苷酶水解，且其肽键被肽酶水解。因此，预计会得到不充分的效果。
3.发明主题在这样的情况下，本发明旨在解决这些问题。本发明的目的是制备非粘蛋白型合成化合物-载体结合的化合物，其对于糖苷酶和肽酶两种酶都是水解稳定的。
以及制备非粘蛋白型合成化合物-载体结合的化合物，其具有特异反应性以诱导对癌和HIV的免疫应答，并具有优异的主动免疫活性。
以及制备非粘蛋白型合成化合物—载体结合的化合物，其能够得到对于癌和HIV选择性的单克隆抗体。
以及制备含有这种非粘蛋白型合成化合物—载体结合的化合物作为活性成分的抗肿瘤剂、抗HIV剂和免疫刺激剂。
并且，以有效成本制备N-乙酰基半乳糖胺的方法是本发明的另一目的，所述N-乙酰基半乳糖胺是非粘蛋白型合成化合物—载体结合的化合物的原料。4.解决问题的方法在这些背景下，我们努力地制备了具有C-糖苷和类肽，抗糖苷酶和肽酶的代谢稳定的化合物，并如下图所示，首次合成了非粘蛋白化合物。可以这么说，这些化合物是C-糖类肽(glycopeptoid)，且是新的化合物。 较之现有疫苗，这些C-糖类肽对于糖苷酶和肽酶更为代谢稳定。此外，它们能长期生效并能在室温下长期贮存。当这些新的C-糖类肽连接到可药用的载体蛋白质上时，这些化合物较之现有的疫苗在活体内对于糖苷酶和肽酶更为代谢稳定，并且也显示了优异的主动免疫活性。预计这些新的C-糖类肽对于癌和HIV具有有效的被动免疫原性。预期用这些化合物制备的单克隆抗体作为被动免疫应答对癌治疗具有活性。且这些化合物具有抗肿瘤、抗HIV活性和免疫刺激作用。
作为新化合物用作抗HIV剂和免疫刺激剂的调查结果，用如通式(1)所示的新化合物制备的抗体具有优异的抗肿瘤、抗HIV活性和免疫刺激作用。发明详述通式(1)化合物， 其中A代表OH或唾液酸和/或其衍生物，B代表OH或半乳糖和/或其衍生物；T代表H或胺保护基；M代表H或OH；X代表氧原子、-NH-或S(O)z(其中z为0、1或2)；Q为H或氧原子；V代表低级烷基或H；W为0～5的直链或支链亚烷基；Z为1～5的直链或支链亚烷基；i、m和t为0或1；非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其具有上述化合物作为抗原核心结构。
在T的说明中，胺保护基为烷基、乙酰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基和其它。W为0～5的直链或支链亚烷基。在本发明中，通式(1)被为非粘蛋白化合物。
化合物(1)具有免疫刺激，且能诱异免疫应答的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物可从化合物(1)制备或由与诸如棕榈酰衍生物的合成化合物连接的2-5簇化合物(1)制备。
通式(2)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m和t具有上述意义；E代表可药用的载体化合物，1为0或1；F如下所示 其中J为-CH2CH2X-或-N(L)-CH2CO-(其中X具有上述意义；L为H或低级烷基)；G为H或低级烷基；p为0～3；y为0或1；非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其具有上述化合物作为抗原的核心结构。 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m、t、E和1具有上述意义；r为1～4；非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其具有上述化合物作为抗原的核心结构。
通式(4)化合物 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、J、i、m、t、p和r具有上述意义；U代表H或低级烷基；w为0～50；y为1或50。
在E的说明中，可药用的蛋白质是，如白蛋白(ALB)、钥孔血蓝素(KLH)、BCG或合成化合物，如棕榈酰衍生物、芳族化合物、脂族化合物、烷基、氨基烷基、肽和类肽，其可诱导免疫应答。
非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物含有通式(1)作为核心结构。这些化合物能够应用于哺乳动物，如人类，且用作具有免疫刺激活性的抗肿瘤剂和/或抗-HIV剂。这些化合物还用于制备单克隆抗体。这些新化合物能够延长有效期，降低剂量，并减少副作用，此外，预计本发明化合物较之现有疫苗对于癌和HIV具有有效的免疫原性。预计由本发明制备的单克隆抗体具有优异的抗肿瘤和抗HIV活性。此外，当神经氨酸苷酶抑制剂，如Zanamivir或Oseltamivir与含有唾液酸的本发明化合物一起施用时，预计这些含有唾液酸的化合物在活体内更稳定。
粘蛋白型(O-Tn、O-STn、O-TF)或非粘蛋白型(C-Tn、C-STn、C-TF)抗原中的N-乙酰基吡喃半乳糖部分是从非常昂贵的原料N-乙酰基半乳糖胺合成的。另一方面，N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺在C-4羟基位的异构体较便宜且易于得到。因此希望采用较便宜的N-乙酰基葡糖胺作为原料。
根据本发明，N-乙酰基半乳糖胺衍生物可从N-乙酰基葡糖胺经C-4羟基的转化而合成。
也就是说，制备N-乙酰基半乳糖胺衍生物的方法，通式(6)可从通式(5)的N-乙酰基葡糖胺衍生物在C-4位上将OR2基团转化为OR1基团而制备。 |←-其中R1为H或羟基保护基，如乙酰基；R2为离去基团，如甲苯磺酸基、三氟甲磺酸基或甲磺酸基；G为烯丙基或保护的羟基。
此处我们描述了制备关键中间体半乳糖衍生物(1a-11)以及通式(1)化合物的方法。
1)合成中间体1a-11(i)路线1-a 如路线1-a所示，中间体1a-11由易于得到的N-乙酰基葡糖胺为原料，通过C-4羟基的转化来合成。
N-乙酰基葡糖胺被三苯甲基醚在C-6位选择性保护(B.Helferich等，Ann.，1920，450，219.)，然后在C-3，4位乙酰化，并用甲酸处理提供化合物1a-3(MBessodes，Tetrahedron Lett，1986，27，579.)。
通过在甲苯中将化合物1a-3与乙酸一起加热，使化合物1a-3的乙酰基迁移，得到4-羟基中间体1a-4(D.Chaplin等，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，1992，235.)。
仅以一个步骤将4-羟基衍生物的制备在C-3和6位选择性地保护为苯甲酰基酯或新戊酰基酯。
4-羟基被转化为三氟甲磺酸酯(triflate)1a-5，且该转化步骤采用乙酸铯进行以得到N-乙酰基-1，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖胺1a-6。
甲磺酰氯或对甲苯磺酰氯可用于代替三氟甲磺酰氯。然后将化合物1a-6脱乙酰化成N-乙酰基-D-半乳糖胺。
且在C-4位的差向异构作用按Cipolla等人的方法(Tetrahedron Asymmetry，2000，295-303)进行。按Horton的方法(Carbohydr.Res.，1996，309，319-330)将烯丙基引入到化合物1a-7中。
化合物1a-7与乙酰氯反应，然后用烯丙基三丁基锡和2，2’-偶氮二异丁腈(AIBN)进行烯丙基化，得到化合物1a-8。但是，烯丙基化的方法不限于该烯丙基化方法。
在催化量的酸存在下，用乙酸异丙烯酯将2-乙酰胺基团保护N，N-二乙酰基得到化合物1a-9(J.Oui.Horton等，Carbohydr.Res，1996，309，319-330)。化合物1a-9与氧化锇和NaIO4反应得到醛化合物1a-10。化合物1a-10用硼氢化钠进行还原得到化合物1a-11。
(ii)路线1-b
中间体1a-11也可以由N-乙酰基-D-葡糖胺为原料，如路线1-b所示制备。化合物1a-1在引入烯丙基后将C-4羟基转化(B.A.Roe等，J.Org.Chem，1996，61，6442-6445.)。用乙酰氯处理N-乙酰基-D-葡糖胺，然后用烯丙基三丁基锡进行C-烯丙基化得到化合物1b-2。化合物1b-2用NaOMe脱乙酰化得到化合物1b-3。然后化合物1b-3在C-6位被选择性保护为叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)醚，然后在碱性条件下用乙酸酐进行乙酰化以得到化合物1b-5。化合物1b-5用酸脱甲硅烷基，并在甲苯中在催化量乙酸存在下进行加热重排，得到化合物1b-7。
按路线1-a所述的类似方法，从4-羟基化合物1b-7合成得到化合物1a-11。
2)合成化合物2-5路线2 通过Mitsunobu反应(O.Mitsunobu，Synthesis，1，1981.)将化合物1a-11转化为2-1。然后将化合物2-1的叠氮基还原为伯胺；例如用Pd-C氢化。
化合物2-2用卤代酯，例如，溴代乙酸丁酯烷基化得到化合物2-3。用乙酸酐或乙酰氯将化合物2-3保护成乙酰胺。化合物2-5通过化合物2-4的脱保护得到。
3)合成化合物2-3路线3 将化合物1a-11中的羟基转化为诸如卤素的离去基团，然后在碱存在下与化合物3-2偶联，得到化合物2-3。但是，离去基团不限于卤素。 将化合物3-2中的乙酰氨基保护成合适的保护基，例如苄酰胺，然后通过烯烃的氧化裂解得到醛3-4。与化合物3-5进行还原胺化，然后脱保护得到化合物2-3。
4)合成化合物4-5路线4 化合物1a-11与二苯基二硫化物反应得到化合物4-1，然后用间氯过苯甲酸氧化得到化合物4-2。然后，在胺存在下加热得到烯烃化合物4-3。按路线1所述，氧化化合物4-3，然后还原得到化合物5-8。
5)合成化合物5-8路线5 通过Curibe等人的方法(Tetrahedron Lett，1981，22，3591-94)将烯丙基引入到化合物1a-11中。用OsO4将化合物5-2臭氧分解或氧化裂解得到化合物5-3。用胺，例如，苄胺将化合物5-3还原胺化得到化合物5-4。化合物5-4与卤代酯(例如溴代乙酸丁酯)偶联得到化合物5-5。然后化合物5-5的氨基通过氢化脱保护，然后乙酰化和脱丁基化得到化合物5-8。
6)合成唾液酸衍生物路线6i)路线6-a 保护氨基，然后通过脱乙酰化得到化合物6-2。通过Danishefsky的方法(J.Am.Chem.Soc.，1999，121，2662-2673.)，用唾液酸衍生物糖基化化合物6-2。且该反应中的离去基团不限于卤素。得到的化合物6-3可转化为簇形中间体化合物6-4。
(ii)路线6-b 通过化合物6-5的C-烯丙基化作用得到α-C-糖苷6-6。类似于所述路线1-5用化合物6-6合成化合物6-3。且该反应也可采用唾液酸转移酶和唾液酸衍生物进行(C.Pauison等，J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。
7)合成半乳糖衍生物路线7(i)路线7-a 化合物7-1通过化合物6-2的羟基保护而得到。将化合物7-1用乙酰溴半乳糖糖基化得到化合物7-3。且在该反应中离去基团不限于卤素。化合物7-3可转变为簇形中间体化合物7-4。
(ii)路线7-b α-C-糖苷7-6通过化合物7-5的烯丙基化得到。类似于所述路线1-5用化合物7-6合成化合物7-3。且该反应也可采用唾液酸转移酶和唾液酸衍生物进行(C.Pauison等J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。
8)合成簇形衍生物路线8 通过P.Roy的方法(Tetrahedron Lett.，1997，38，13478-13490.)，将化合物8-1a与化合物8-2偶联得到化合物8-3。化合物8-1b通过化合物8-3脱保护而合成，然后与化合物8-2偶联得到化合物8-3b。化合物8-1b，4通过化合物8-3a，b中酯的脱保护而得到。
9)偶联连接体与半抗原路线9 化合物9-4和9-5分别通过偶联连接体9-2或9-3与化合物9-1而制得(P.Roy等，Tetrahedron Lett.，1997，38，3478-3490)。且该偶联可用其它试剂，如N，N-双环碳化二亚胺，Danishefsky方法(J.Am.Chem.Soc.，1998，120，12474-12485)或用2-异丁基1-异丁氧基羰基-1，2-二氢喹啉进行。化合物9-7通过羟基的脱保护而得到。
10)偶联载体与半抗原路线10 将化合物9-4氧化成醛10-2，然后按Livingston方法在磷酸盐缓冲液(pH7.2)中用氰硼氢化钠与蛋白质进行还原胺化得到化合物10-9(Glycoconjugate Journal，1998，115，217-221)。化合物9-4也可按Slovin方法(Proc.Nat.Acad.Sci.USA，1999，96，5710.)与蛋白质偶联。将化合物9-4转化为顺丁烯二酰亚胺化合物10-4，然后与蛋白质中的硫羟基偶联，或将化合物9-4转化为硫代乙酸酯化合物9-5。化合物9-5通过Khono法(J.Clin.Lab.Anal.，1999，10，91.)与顺丁烯二酰亚胺化的蛋白质偶联得到化合物10-12。通过化合物10-1中的羧基与氨基偶联而得到化合物10-7。通过化合物10-8中的氨基与蛋白质中的羧基偶联而得到化合物10-13。并通过Danishefsky法(J.Am.Chem.Soc.，1999，121，2662-2673)将化合物10-1与棕榈酰衍生物偶联得到化合物10-6。
11)合成聚合物衍生物路线11-a 将连接体12-2与羧酸化合物12-1偶联得到化合物12-3。将化合物12-3还原为化合物12-4，然后与丙烯酰氯缩合得到化合物12-5。将化合物12-5通过K.Eklind等人(J.Carbohydrate Chem.，1996，15，1161)或J.Domb等人(J.MedChem.，2000，43，2591.)的方法转化为化合物12-6。聚合方法并不限于该方法。(ii)路线11-b 采用CMP-Neu-5Ac和唾液酸转移酶，从化合物12-6合成得到具有聚合物的唾液酸衍生物13-1(C.Pauison，J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。(iii)路线11-c 聚合后，采用半乳糖苷酶和半乳糖衍生物PNG-Gal用化合物12-6合成得到半乳糖衍生物14-1(C.Pauison，J.Am.Chem.Soc.，1990，112，9308-9309)。
对糖苷酶，如N-乙酰基氨基半乳糖苷酶的生物稳定性用烯丙基衍生物(11-1，11-2)通过Markvon ltzstein法测试(Org.Leyy.，1999，443-446)。 酶α-N-乙酰基氨基半乳糖苷酶0.32单位(1.69单位/ml含0.1％BSA的0.5M柠檬酸钠缓冲液)溶剂柠檬酸缓冲液(pD＝3)0.6ml温度35℃步骤将基质(2mg)溶解在柠檬酸缓冲液(0.6ml)中，并加入α-N-乙酰基氨基半乳糖苷酶(0.32单位)。每隔一定时间测定NMR谱。该测试结果—基质存留时间如表29所示。
表29 从上述结果显然可知，78％的O-苷连烯丙基醚(11-2)24h后水解。正如所预测的，化合物11-1，将醚键以C-C键代替，不受酶的影响，24h后没有观察到降解。
该结果显示，较之O-糖苷，C-糖苷的代谢和分解代谢更稳定。
本发明通式(1)所述的化合物可含有作为活性成分的一种或多于两种药用化合物。且通式(I)化合物可用于人类。通式(I)的单克隆抗体可用于人类。本发明所涉及的化合物可按任何符合其药物动学性质的路线实施给药。且化合物本身和/或可将其制成注射剂、粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、锭剂、干糖浆剂、脂质体(lipozome)制剂等。本发明化合物的合适剂量和给药时间必须由病人的病情、年龄、体重等决定。
列举化合物如下，但本发明不限于这些化合物 (其中T、E、F、Q、t、1和r具有上述意义，q代表0-5；u为0或1)。上式中的A(III)、A(II)、A(III)、B(I)、B(II)、B(III)、C(I)、C(II)和C(III)和表1-28如下所示
R-HN—KLH
表15
表16
表17
表18
表19
表20
表21
表22
表23
表24
表25
酯甲基氯化物)的工艺及单独使用上述商购絮凝剂B的工艺。结果示于表3。
表3
从表3中可以了解到实施例13样品水溶液具有作为聚合物絮凝剂的基本特性，在这方面优于比较例7样品水溶液和商购絮凝剂。发现另一事实，即同时使用实施例13样品水溶液和商购絮凝剂就得到令人满意的效果。
结果，发现一个事实，即以合适数量把离子基引入具有共轭二烯烃单元的聚苯乙烯及使树脂中的共轭二烯烃单元交联和/或聚合的聚电解质作为处理废水用絮凝剂具有显著优良特性。借助于固一液分离法进行磺化反应将结合
图1描述说明由固一液分离法磺化芳族聚合物的工艺流程。
由泵2连续从溶剂罐供给溶剂使芳族聚合物磺化，然后把芳族聚合物加入并溶解在溶剂中(见图1中(a)部)。可以代替这一步，加入已溶解在溶剂中的芳族聚合物。
此时，可以加热溶液或者可以省去加热步骤。为了改进加工性能，优选进行加热。
使芳族聚合物溶解在芳族聚合物中所需时间周期稍微受溶液温度和浓度，芳族聚合物的分子量和类型的影响。然而，时间周期一般为10分钟至2小时。
当使用含氯类溶剂时，芳族聚合物溶液浓度为1wt％至30wt％，优选5wt％至20wt％。当使用非含氯类溶剂时，该浓度为0.5wt％至20wt％，优选1wt％至15wt％。
如果需要，加入路易斯碱(见图1(b)部分)。
抗体滴度的测定将96孔微滴板涂布Tn抗原。通过酶标记免疫吸附测定法，分另用马-抗小鼠IgG抗体和抗-小鼠IgM抗体作为第二抗体来测定IgG和IgM抗体滴度。在96孔微滴板中培养人类克隆癌细胞系LS-174T细胞，并用甲醇固化。如上所述，用酶标记免疫吸附测定法测定IgG和IgM抗体滴度。通过该实验评价下述各种化合物对抗体滴度的影响。 接种疫苗后，小鼠血清中的IgG和IgM抗体滴度(抗Tn抗原)分别如表30和31所示。接种疫苗后，IgG和IgM抗体滴度(抗LS-174T细胞)如表32所示。表30
表31
表32
抗体依赖性细胞介导的细胞毒性应答(ADCC)用作靶细胞的LS-174T细胞和人体外周血单核细胞用作效应细胞。将靶细胞植入到96孔微滴板中(1×103细胞/孔/50μl)，并加入0.5μCi/孔的51CrCl2。收集细胞上清液并在P计数器中计数。以扣除自发释放之后的可释放数的百分数来评价细胞毒性。结果如表33所示。表33
纯化的载体蛋白质钥孔血蓝素(KLH，CHEMICONINTERNATIONAL INC.)按已经公开的方法纯化。将KLH(500mg)悬浮在50ml磷酸盐缓冲盐水(PBS(-))中并以1.200×g离心20min。得到的上清液以43.000×g离心15min。得到的沉淀物悬浮在(PBS(-))中并再以43.000×g离心15min，得到的沉淀用作载体蛋白质。
免疫接种每隔两周，将C-联Tn-KLH缀合物或C-联sTn-KLH缀合物(1～10μg)与BCG(50μg)一起皮下接种到雌性BALB/c小鼠中，共接种3次。在最后一次接种一周后，麻醉小鼠，并从腹静脉中收集血液。离心分离抗血清，用酶标记免疫吸附测定法测定抗gp120的IgG或IgM抗体滴度。该滴度定义为产生比正常血清吸收大的吸收的最大稀释度。结果如表34所示。
表34
我们的结果还显示了具有或甚至没有载体蛋白质的代谢和分解代谢稳定的“C-糖类肽”的有效免疫原性。另一方面，Danishefsky小组报导O-Tn、O-STn、O-TF抗原本身具有较小的有效免疫原性，但连接至载体蛋白质诸如KLH上(S.J.Danishefsky等，1998，120，1427-14285)。
我们首先阐述了采用“C-糖类肽”作为癌和HIV有希望的免疫治疗的概念和效果。
实施例下列实施例仅用于制备化合物的目的，并不限制本发明公开的内容。参考实施例12-乙酰基氨基-1，3，4-三-O-乙酰基-6-O-三苯基甲基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-2)的制备
将在吡啶(363ml)中的N-乙酰基葡糖胺(200g，0.9mol)和三苯甲基氯(250g，0.9mol)的悬浮液加热到85℃。悬浮液溶解后，加入乙酸酐(280ml，2.97mol)，并在室温下搅拌23h。将反应混合物慢慢倒入到冰水-乙酸中。搅拌混合物3h，并收集得到的沉淀，用水洗涤，得到400g(75％)目标化合物。MS(m/z)590，531，452，243，165.IR(cm-1)neat3364，1749，1656，1218.1H-NMR(CDCl3)δ3.02(1H，dd，J＝10.8，3.9Hz)，3.27(1H，dd，J＝10.3，2.0Hz)，3.87(1H，ddd，J＝9.3，2.0，2.0Hz)，4.54(1H，ddd，J＝11.2，9.3，3.9Hz)，5.17(1H，dd，J＝11.2，9.8Hz)，5.35(1H，dd，J＝9.8，9.8Hz)，5.53(1H，d，J＝8.8Hz)，6.29((1H，d，J＝3.4Hz)，7.31-7.17(9H，m)，7.41-7.43(6H，m).参考实施例22-乙酰基氨基-1，3，4-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-3)的制备 将上述参考实施例1得到的三苯甲基化合物(168g)溶解在乙醚(420ml)中，然后在室温下加入甲酸(420ml)，搅拌该混合物7h。反应完成后，将反应混合物倒入到冰冷的水中并用NaHCO3中和，然后除去乙醚，滤出得到的沉淀。滤液用氯仿萃取。干燥(Na2SO4)后，在减压下除去溶剂，得到46g(46％)目标醇。MS(m/z)347，304，228，114.IR(cm-1)neat3280、3076、1749、1665、1221.1H-NMR(CDCl3)δ1.91(3H，s)，2.04(3H，s)，2.16(3H，s)，3.55(1H，dd，J＝12.8，4.4Hz)，3.66(1H，dd，J＝12.8，2.2Hz)，3.78(1H，ddd，J＝10.1，4.3，2.2Hz)，4.43(1H，ddd，J＝10.9，9.0，3.6Hz)，5.14(1H，t，J＝9.7Hz)，5.25(1H，dd，J＝10.8，9.6Hz)，5.76(1H，d，J＝9.0Hz)，6.15(1H，d，J＝3.6Hz).参考实施例32-乙酰基氨基-1，3，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-4)的制备 向上述参考实施例2得到的伯醇化合物(81g，0.23mol)的甲苯(1600ml)溶液中加入乙酸(16ml)，在80℃搅拌该混合物15h。完成反应后，在减压下浓缩反应混合物。残余物用硅胶柱色谱(AcOEt)纯化。得到99g(58％)无色油状目标化合物。MS(m/z)347、304、262、228、114.IR(cm-1)neat3370、3010、1737、1659、1230.1H-NMR(CDCl3)δ1.93(3H，s)、2.13(3H，s)、2.17(3H，s)、3.70(1H，dd，J＝9.8，3.5Hz)、3.84(2H，d，J＝3.5Hz)、3.90(1H，dd，J＝9.8，9.2Hz)、4.30(1H，ddd，J＝11.1，9.0，3.7Hz)、5.12(1H，dd，J＝11.1，9.2Hz)、5.71(1H，d，J＝9.0Hz)、6.11(1H，d，J＝3.6Hz).参考实施例42-乙酰基氨基-1，3，6-三-O-乙酰基-4-三氟甲磺酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(化合物1a-5)的制备 将上述参考实施例3得到的醇化合物(5.0g，14.3ml)溶解在二氯甲烷(50ml)中，并加入吡啶(5ml)。将该溶液冷却到-40℃，然后向混合物中滴加triflicanhydride(3.1ml，18.7mmol)。搅拌2h后，将反应混合物倒入到冰冷的水中并用二氯甲烷萃取。有机层用10％HCl洗涤并干燥(Na2SO4)。在减压下除去溶剂，得到7.83g无色油状目标化合物。参考实施例53-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1a-6)的制备 在0℃，向2.0g(9.0mmol)的N-乙酰基半乳糖胺中慢慢加入乙酰氯(4.0ml)。在室温下搅拌混合物14h。反应后，将混合物倒入到冰冷的水中并用氯仿萃取。有机层用饱和的NaHCO3中和，并用水和盐水洗涤。干燥(Na2SO4)后，在减压下除去溶剂。得到3.3g无色油状N-乙酰基氨基-1-氯-三-O-乙酰基-2-脱氧-半乳糖胺。在氩气氛下，向得到的化合物(3.3g，9.0mmol)的甲苯溶液中加入烯丙基三丁基锡(8.5ml)和2，2’-偶氮二异丁腈(AIBN)(0.25g)。将该反应混合物加热到80℃并搅拌6h。反应完成后，将混合物冷却到室温，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt∶正己烷＝4∶1)纯化，得到0.85g(25.4％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)371，330，210，150，101，59.IR(cm-1)KBr3290，3071，1746，1658，1020.1H-NMR(C6D6)δ1.47(3H，s)，1.63(3H，s)，1.66(3H，s)，1.67(3H，s)，1.99(1H，m)，2.19(1H，m)，3.94(1H，m)，4.26(1H，d，d，J＝3，5Hz)，4.37(2H，m)，4.83(1H，m)，5.00(2H，m)，5.17(1H，d，J＝7Hz)，5.43(1H，t，J＝3Hz)，5.68(1H，m)，6.19(1H，S).参考实施例63-(2-二乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1a-9)的制备 向上述参考实施例5得到的化合物(1.5g，4.0mmol)在乙酸异丙烯酯(15ml)的溶液中加入对甲苯磺酸(20mg)。在55℃搅拌反应混合物42h。混合物冷却到室温后，加入三乙胺并搅拌15min。浓缩该混合物。残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt∶正己烷＝1∶1)纯化，得到1.0g(66％)无色油状目标二乙酸酯化合物。Mss(m/e)413，372，330，270，210，179，150，126，101，59.IR(cm-1)KBr3050，1749，1668，1233，7801H-NMR(CDCl3)δ1.95(3H，s)，2.03(3H，S)，2.16(3H，s)，2.17(1H，m)，2.39(3H，s)，2.75(1H，m)，4.05(2H，m)，4.15(2H，m)，4.61(1H，d，d，J＝4，8Hz)，5.11(2H，m)，5.50(1H，d，J＝3Hz)，5.75(1H，m)，5.95(1H，dd，J＝3，11Hz).参考实施例73-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙醛(化合物1a-10)的制备 在氩气气氛下，向上述参考实施例6得到的化合物(0.74g，1.78mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液中加入水(10ml)、NaIO4(1.9g，8.91mmol)和4％OsO4溶液。在室温下搅拌反应混合物4h。反应完成后，反应混合物用乙酸乙酯萃取并用水和盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂，得到0.77g(98％)无色油状目标醛化合物。IR(cm-1)KBr1746，1371，1230，1054，665.1H-NMR(CDCl3)δ1.95(3H，s)，2.04(3H，s)，2.16(3H，s)，2.37(6H，s)，2.85(1H，m)，3.17(1H，dd，J＝2，8Hz)，4.11(3H，m)，4.75(2H，m)，5.54(1H，m)，5.81(1H，d，d，J＝3.5，11Hz)，9.67(1H，s).参考实施例83-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙醇(化合物1a-11)的制备 在0℃，向上述参考实施例7得到的化合物(0.77g，1.85mmol)的甲醇(10ml)溶液中加入硼氢化钠(0.1g，2.78mmol)，且搅拌混合物10min。将反应混合物倒入到饱和的NH4Cl中并用二氯甲烷萃取。有机层用水和盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt∶MeOHe＝10∶1)纯化，得到0.25g(36％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)357(M+)，316，238，183，141，101，59.IR(cm-1)KBr1743，1680，1398，1236.1H-NMR(CDCl3)δ1.60(1H，m)，1.95(1H，m)，2.00(3H，s)，2.09(3H，m)，2.10(3H，s)，2.12(3H，s)，3.17(1H，dd，J＝3，8Hz)3.76(2H，m)，4.05-4.18(3H，m)，4.42(3H，m)，5.32(1H，t，J＝3Hz)，5.73(1H，d，J＝8Hz).参考实施例93-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1b-2)的制备 在0℃，向N-乙酰基葡糖胺100g(0.45mol)中加入乙酰氯(200ml)，并搅拌23h。反应后，用氯仿萃取混合物并将混合物倒入到冰冷的水中，并搅拌10min。有机层用饱和的NaHCO3中和并干燥(Na2SO4)。在减压下除去溶剂。向残余物中加入乙醚，并收集得到的沉淀，得到117g(71％)无色固体2-乙酰基氨基-1-氯-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-半乳糖。向得到的化合物(78g，0.21mol)的四氢呋喃(400ml)溶液中加入烯丙基三丁基锡(198ml，0.64mol)和2，2’-偶氮二异丁腈(AIBN)(3.4g 0.02mol)。在氩气氛下将该反应混合物加热到80℃并搅拌16h。在减压下浓缩反应混合物。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶正己烷＝4∶1)纯化，得到烯丙基化合物的混合物(1.62g)。向得到的混合物的丙酮(10ml)溶液中加入1％HCl(6m1)，并搅拌2h。在减压下浓缩混合物，残余物用氯仿(30ml)萃取。有机层用饱和的NaHCO3中和并干燥(Na2SO4)。在减压下除去溶剂，得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶正己烷＝4∶1)纯化，得到73g(92％)无色固体目标化合物。MS(m/z)371、330、312、210、126.1R(cm-1)neat3290、3071、1746、1658、1020.1H-NMR(CDCl3)δ1.47(3H，s)、1.63(3H，s)、1.66(3H，s)、1.67(3H，s)、1.99(1H，m)、2.19(1H，m)、3.94(1H，m)、4.26(1H，dd，J＝3，5Hz)、4.37(2H，m)、4.38(1H，m)、5.01(2H，m)、5.17(1H，d，J＝7Hz)、5.43(1H，t，J＝3Hz)、5.68(1H，m)、6.19(1H，s).参考实施例103-(2-乙酰基氨基-3，4-二-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-丙烯(化合物1b-4)的制备 在0℃，向上述参考实施例9得到的乙酸酯化合物(73g，0.2mol)的甲醇(400ml)溶液中加入甲醇钠(5g，0.95mmol)，并搅拌90min。反应完成后，反应混合物用IR-120树脂中和，过滤并浓缩，得到54.8g无色固体三醇化合物。向得到的三醇化合物(54.8g，224mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(224ml)溶液中加入咪唑(30.8g，448mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯(40.5g，268mmol)和二甲基氨基吡啶(2.7g，22.4mmol)，在35℃搅拌混合物70h。将反应混合物倒入到水中并用氯仿萃取。有机层用饱和的NaHCO3中和并干燥(Na2SO4)。在减压下除去溶剂，得到120g甲硅烷基化合物。向得到的甲硅烷基化合物中加入吡啶(108ml，1.34mol)、乙酸酐(84.7ml，0.89mol)和二甲基氨基吡啶(13.7g，0.11mol)。搅拌反应混合物1h。反应完成后，将混合物倒入到水中并用乙酸乙酯萃取。干燥(Na2SO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶正己烷＝2∶1)纯化，得到33.4g(35％)无色油状目标醇化合物。MS(m/z)428、386、326、117.1H-NMR(CDCl3)δ0.84(9H，s)、1.92(3H，s)、2.00(3H，s)、2.02(3H，s)、2.03(3H，s)、2.18-2.25(1H，m)、2.33-2.39(1H，m)、3.69(2H，s)、4.04-4.20(3H，m)、4.93-5.11(4H，m)、5.71-5.86(2H，m).参考实施例113-(2-乙酰基氨基-3，4-二-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-丙烯(化合物1b-6)的制备 在30℃，搅拌上述参考实施例10得到的甲硅烷基化合物(10g，23.1mmol)在四氢呋喃(10ml)、乙酸(30ml)和水(10ml)的混合物中的溶液62h。将反应混合物倒入到水中并用氯仿萃取，有机萃取液用饱和的NaHCO3中和并用Na2SO4干燥，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt)纯化。得到7.5g(100％)无色固体目标醇化合物。MS(m/z)330、288、268、228、126、101.IR(cm-1)KBr3352、2926、1734、1656、1233.1H-NMR(CDCl3)δ1.96(3H，s)、2.05(3H，s)、2.08(3H，s)、2.28-2.35(1H，m)、2.43-2.49(1H，m)、3.57-3.69(3H，m)、4.26-4.32(2H，m)、4.97(1H，dd，J＝8.3，8.3Hz)、5.10-5.19(3H，m)、5.78-5.86(2H，m).参考实施例123-(2-乙酰基氨基-3，6-二-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-丙烯(化合物1b-7)的制备 在80℃，搅拌上述参考实施例11得到的伯醇化合物(7.5g，23.1mmol)和乙酸(0.75ml)在甲苯(75ml)中的混合物18h。混合物在减压下浓缩，得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt)纯化，得到5.24g(70％)无色油状目标化合物。MS(m/z)330、228、209、168、126、101、83.IR(cm-1)KBr3352、1734、1656、1233.1H-NMR(CDCl3)δ1.95(3H，s)、2.13(3H，s)、2.14(3H，s)、2.30-2.36(1H，m)、2.40-2.49(1H，m)、3.55-3.59(1H，m)、3.66-3.70(1H，m)、4.18(1H，dd，J＝12.2，2.9Hz)、4.22-4.29(2H，m)、4.51(1H，dd，J＝12.2，4.9Hz)、4.99(1H，dd，J＝8.3，9.7Hz)、5.10-5.16(2H，m)、5.72-5.82(1H，m)、5.90(1H，d，J＝8.3Hz).实施例12-乙酰基氨基-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖(化合物1a-7)的制备 向乙酸铯(13.7g，71.5mmol)的二甲基亚砜(15ml)溶液中加入上述参考实施例4得到的trifrate化合物(7.83g)的二甲基亚砜(15ml)溶液。搅拌混合物3h后，将混合物在减压下浓缩。残余物倒入到水中并用二氯甲烷萃取，然后用Na2SO4干燥。减压下除去溶剂，得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt)纯化，得到3.4g(61％)无色油状目标化合物。MS(m/z)389、330、287、241、114.IR(cm-1)neat1746、1656、1218、1128.1H-NMR(CDCl3)δ1.88(3H，s)、1.96(3H，s)、1.97(3H，s)、2.10(3H，s)、3.99(1H，dd，J＝11.2，6.6Hz)、4.04(1H，dd，J＝11.2，6.8Hz)、4.20(1H，ddd，J＝6.8，6.6，0.9Hz)、4.63(1H，ddd，J＝11.6，9.0，3.6Hz)、5.14(1H，dd，J＝11.7，3.2Hz)、5.36(1H，dd，J＝3.1，0.7Hz)、5.82(1H，d，J＝9.0Hz)、6.15(1H，d，J＝3.6Hz).实施例23-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-丙烯(化合物1a-8)的制备 将上述参考实施例12得到的醇化合物(13.2g，40.1mmol)溶解在二氯甲烷(130ml)和吡啶(13ml)的混合物中。然后在40℃滴加triflic anhydride(8.1ml，48.1mmol)，并搅拌4h。将混合物倒入冰冷的水中并用二氯甲烷萃取，有机萃取液用10％HCl洗涤，Na2SO4干燥。在减压下除去溶剂，得到16.1g trifrate化合物(16.1g)。将得到的trifrate化合物(16.1g)的二甲基亚砜(60ml)溶液加入到乙酸铯(20.0g，104mmol)的二甲基亚砜(100ml)溶液中。搅拌混合物3h后，将混合物在减压下浓缩。残余物倒入到水中并用二氯甲烷萃取，然后用Na2SO4干燥。减压下除去溶剂，得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt)纯化。得到10.9g(84％)无色固体目标化合物。实施例32-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙基叠氮化物(化合物2-1a)的制备 向上述参考实施例8得到的醇化合物(2.33g，6.22mmol)的四氢呋喃(62ml)溶液中加入二苯基磷酰基叠氮化物(2.68ml，12.4mmol)和三苯基膦(3.25g，12.4mmol)。将溶液冷却到0℃，向该溶液中慢慢加入偶氮二羧酸二异丙酯(2.44ml，12.4mmol)，搅拌混合物1h。在减压下浓缩反应混合物，并用硅胶柱色谱(AcOEt∶苯＝1∶1)纯化得到的残余物，得到1.92g(77％)无色油状目标化合物。MS(m/e)401、357、313、277、166、101.IR(cm-1)neat3244、3046、2092、1737、1656.1H-NMR(CDCl3)δ1.66-1.72(1H，m)、1.83-1.89(1H，m)、2.00(3H，s)、2.07(3H，s)、2.08(3H，s)、2.12(3H，s)、3.35-3.39(2H，m)、4.02-4.12(2H，m)、4.31-4.35(2H，m)、4.45(1H，ddd，J＝8.3，8.3，4.9Hz)、5.14(1H，dd，.J＝8.8，3.4Hz)、5.33(1H，dd，J＝3.4，3.4Hz)、6.23(1H，d，J＝8.3Hz).实施例42-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙胺(化合物2-2a)的制备 将上述实施例3得到的叠氮化物(982mg，2.46mmol)溶解在甲醇(10ml)中，并向该溶液中加入乙酸(0.1ml)和10％Pd-C(98mg)。在H2气氛下搅拌反应混合物88h。过滤悬浮液并将滤液在减压下浓缩。得到的残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH∶H2O＝8∶2∶0.2)纯化，得到662mg(72％)无色油状目标化合物。MS(m/e)374、317、256、166、115.IR(cm-1)neat3280、2932、1740、1656.1H-NMR(CD3OD)δ1.75-1.79(1H，m)、1.97-2.01(1H，m)、1.99(3H，s)、2.03(3H，s)、2.05(3H，s)、2.09(3H，s)、3.02-3.04(2H，m)、4.07(1H，dd，J＝11.7，4.4Hz)、4.18-4.19(1H，m)、4.31-4.45(3H，m)、5.12(1H，dd，J＝9.3，3.4Hz)、5.42(1H，dd，J＝3.4，3.4Hz).实施例52-({2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}氨基)乙酸叔丁酯(化合物2-3a)的制备 向上述实施例4得到的胺化合物(590mg，1.58mmol)的二氯甲烷(15.8ml)溶液中加入三乙胺(0.33ml，2.73mmol)和溴代乙酸叔丁酯(0.35ml，2.37mmol)。在60℃搅拌混合物2h后，混合物在减压下浓缩。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶MeOH＝10∶1)纯化，得到225mg(27％)无色油状目标酰胺化合物。MS(m/e)489、414、387、224、164、88.IR(cm-1)neat3328、1740、1656、1233.1H-NMR(CD3OD)δ1.54(9H，s)、1.61-1.65(1H，m)、1.96-1.98(1H，m)、1.96(3H，s)、2.02(3H，s)、2.03(3H，s)、2.10(3H，s)、2.62-2.77(2H，m)、3.28-3.37(2H，m)、4.10(1H，dd，J＝10.7，4.9Hz)、4.16(1H，ddd，J＝8.3，8.3，2.4Hz)、4.22(1H，ddd，J＝8.3，8.3，3.4Hz)、4.24-4.32(1H，m)、4.40(1H，dd，J＝9.8，4.9Hz)、5.12(1H，dd，J＝9.8，2.9Hz)、5.40(1H，dd，J＝2.9，2.9Hz).实施例62-(N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙酰氨基)乙酸叔丁酯(化合物2-4a)的制备 将上述实施例5得到的胺化合物(100mg，0.205mmol)溶解在吡啶(1ml)中，并向该溶液中加入乙酸酐(0.039ml，0.41mmol)和二甲基氨基吡啶(12mg，0.103mmol)。搅拌溶液1h后，将混合物倒入到水中并用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和CuSO4和盐水洗涤，Na2SO4干燥。在减压下除去溶剂，然后得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶MeOH＝20∶1)纯化，得到100mg(92％)无色油状目标化合物。MS(m/e)530、487、429、387、222、57.IR(cm-1)neat2968、1740、1650、1230.1H-NMR(CD3OD)δ1.45(9H，s)、1.73-1.77(1H，m)、1.92-1.97(1H，m)、1.97(3H，s)、2.00(3H，s)、2.03(3H，s)、2.10(3H，s)、2.16(3H，s)、3.40-3.60(2H，m)、3.89-4.30(6H，m)、4.40-4.44(1H，m)、5.07-5.14(1H，m)、5.38-5.40(1H，m).实施例72-(N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙酰氨基)乙酸(化合物2-5a)的制备 搅拌上述实施例6得到的酯化合物(90mg，0.17mmol)和三氟乙酸(0.2ml)在二氯甲烷(1ml)中的混合物3h。在减压下浓缩混合物，得到的残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)纯化，得到70mg(87％)无色油状目标化合物。MS(m/e)474、429、314、222、69.IR(cm-1)neat1740、1370、1230.1H-NMR(CD3OD)δ1.76-1.82(1H，m)、1.92-1.97(1H，m)、1.99(3H，s)、2.03(3H，s)、2.11(3H，s)、2.14(3H，s)、2.17(3H，s)、3.70-3.52(2H，m)、4.00-4.30(6H，m)、4.43-4.46(1H，m)、5.08-5.14(1H，m)、5.38-5.40(1H，m)4.43-4.46(1H，m)、5.08-5.14(1H，m)、5.38-5.40(1H，m).实施例83-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-苯基硫基乙烷(化合物4-1)的制备 将上述实施例7得到的化合物(0.25g，0.67mmol)溶解在吡啶(3ml)中，并向该溶液中加入三丁基膦(0.42ml)和二苯基二硫化物(0.32g)。在氩气氛下、60℃，搅拌混合物3h。用乙酸乙酯萃取反应混合物，并用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt∶正己烷＝10∶1)纯化，得到0.18g(56％)无色油状目标苯硫基化合物。Mass(m/e)467(M+).1H-NMR(CDCl3)δ1.63(1H，m)，1.94(3H，s)，1.96(1H，m)，2.03(3H，s)，2.06(3H，s)，2.56(3H，s)，2.91(1H，m)，3.24(1H，m)，3.98(1H，m)，4.51(2H，m)，4.32(1H，m)，4.42(2H，m)，5.07(1H，dd，J＝4，9Hz)，5.29(1H，t，J＝3Hz)，5.55(1H，d J＝7Hz)，7.21-7.38(5H，m).实施例93-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-苯基亚磺酰基(Sulufenyl)乙烷(化合物4-2)的制备 在-78℃，向上述实施例8得到的化合物(0.14g，0.29mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中慢慢加入3-氯过苯甲酸的二氯甲烷(1.0ml)溶液。搅拌30min后，向反应混合物中加入乙醚(10ml)和10％NaOH(1ml)，搅拌混合物15min。分离有机层并用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到0.15g(99％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)483(M+).1H-NMR(CDCl3)δ1.89(1H，m)，1.91(3H，s)，1.95(3H，s)，2.05(3H，s)，2.09(1H，m)，1.96(1H，m)，2.58(1H，m)，2.80(1H，t，J＝8Hz)，3.01(1H，m)，3.80(1H，m)，3.95-4.10(2H，m)，4.20(1H，m)，4.35(1H，m)，4.56(2H，m)，5.10(1H，dd，J＝4，9Hz)，5.27(1H，t，J＝3Hz)，6.50(1H，d，J＝8Hz)，7.4-7.60(5H，m).实施例103-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙烯(vinylene)(化合物4-3)的制备 将上述实施例9得到的化合物(0.14g，0.29mmol)和二异丙基乙胺(0.09ml)混合物甲苯(2ml)混合物回流18h。反应混合物冷却到室温后，用乙酸乙酯萃取混合物，并用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt)纯化，得到0.07g(70％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)357(M+)，298，255，165，101(BP)，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.96(3H，s)，2.05(3H，s)，2.06 3H，s)，2.16(3H，s)，4.14(3H，m)，4.62(1H，m)，4.76(1H，m)，5.03(1H，dd，J＝4，10Hz)，5.35(1H，d，J＝2Hz)，5.45(3H，m)，5.95(1H，m).实施例113-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-甲醛(化合物4-4)的制备 向上述实施例10得到的化合物(0.07g，0.20mmol)在四氢呋喃(2ml)和水的混合物中加入NaIO4(0.16g，0.78mmol)和4％OsO4溶液(0.01ml)。搅拌混合物4h后，用乙酸乙酯萃取反应混合物，并用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到0.705g(69.6％)无色油状目标醛化合物。Mass(m/e)360(M+1)，330，300，199，139，97(BP)，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.98(3H，s)，2.06(3H，s)，2.02(3H，S)，2.17(3H，s)，3.92(1H，t，J＝7Hz)，4.20(2H，m)，4.59(1H，d，J＝Hz)，4.80(1H，m)，5.09(1H，dd，J＝3，9Hz)，5.38(1H，d，J＝3Hz)，6.22(1H，d，J＝9Hz)，9.83(1H，S).实施例123-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-甲醇(化合物4-5)的制备 在0℃下搅拌上述实施例11得到的化合物(0.77g，1.85mmol)和硼氢化钠(0.1g，2.78mmol)的甲醇(10ml)混合物10min。将反应混合物倒入到饱和的NH4Cl中，用二氯甲烷萃取混合物，有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt)纯化，得到0.25g(36％)无色油状目标醇化合物。Mass(m/e)362(M+1)，330，300，199，139，97(BP)，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.98(3H，s)，2.06(3H，s)，2.02(3H，s)，2.17(3H，s)，3.92(1H，t，J＝7Hz)，4.20(2H，m)，4.59(1H，d，J＝3Hz)，4.80(1H，m)，5.09(1H，dd，J＝3，9Hz)，5.38(1H，d，J＝3Hz)，6.22(1H，d，J＝9Hz)，9.83(1H，s).实施例133-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙基乙烯氧基甲酸酯(化合物5-1a)的混合物 将上述实施例8得到的化合物(0.09g，2.27mmol)溶解在四氢呋喃(5ml)中，在吡啶(1ml)存在下，将氯甲酸烯丙酯(0.026ml，2.5mmol)加入到该溶液中。搅拌溶液30min后，用乙酸乙酯萃取反应混合物，有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt∶正己烷＝4∶1)纯化，得到0.08g(70％)无色油状目标化合物。IR(cm-1)KBr1743，1392，1245，1020.1H-NMR(CDCl3)δ1.58(1H，m)，1.99，(3H，s)，2.07(3H，s)，2.08(3H，s)，2.12(3H，s)，4.12(2H，m)，4.19-4.35(4H，m)，4.38(1H，m)，4.48(1H，m)，4.62(2H，d，J＝6Hz)，5.13(1H，dd，J＝3，8Hz)，5.27-5.39(3H，m)，5.64(1H，d，J＝8Hz).实施例143-(2-乙酰基氨基-3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-乙氧基丙-2-烯(化合物5-2a)的制备 将上述实施例13得到的化合物(0.07g，0.15mmol)溶解在苯(2ml)中，在氩气氛下将Pd(OAc)2(0.7mg)和三苯基膦(4mg)加入到该溶液中。在70℃搅拌混合物2h后，浓缩混合物。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt∶正己烷＝4∶1)纯化，得到0.045g(72.3％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)415(M+)，358，314，277，181，152，101，59.1H-NMR(CDCl3)δ1.82(1H，m)，1.91(1H，m)，1.97(3H，s)，2.05(3H，s)，2.06(3H，s)，2.12(3H，s)，3.50(2H，m)，3.97(2H，d，J＝3Hz)，4.06(2H，m)，4.22(1H，m)，4.28(1H，m)，4.50(1H，m)，5.12(1H，dd，J＝3，5Hz)，5.15(1H，dd，J＝2，7Hz)，5.30(1H，m)，5.76(1H，d，J＝8Hz)，5.90(1H，m).实施例152-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-[2-(苄基氨基)乙氧基]乙烷(化合物5-3a)的制备 将上述实施例14得到的化合物(0.69g，1.65mmol)在甲醇(5ml)和二氯甲烷(5ml)中的溶液在-78℃臭氧化。反应完成后，向混合物中加入二甲硫醚，且在室温下搅拌溶液。浓缩混合物并得到0.69g(99％)醛。向得到的醛的二氯甲烷(5ml)溶液中加入苄胺(0.22ml)。搅拌15min后，向混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.5g)，搅拌混合物12h。反应混合物用氯仿萃取，且有机层用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，得到0.51g(64.4％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)449(M-NHAc)，383，192，120，91.IR(cm-1)KBr3290，2950，1740，1660，1378，1230，1000.1H-NMR(CDCl3)δ1.87(1H，m)，1.95(3H，s)，1.97(1H，m)，2.05(6H，m)，2.19(3H，s)，2.81(2H，t，J＝5.0Hz)，3.51(2H，m)，3.57(2H，t，J＝5.0Hz)，3.84(1H，s)，4.03(1H，m)，4.08(1H，m)，4.38(1H，m)，4.50(1H，m)，5.13(1H，dd，J＝8.3，2.1Hz)，5.31(1H，t，J＝3Hz)，5.85(1H，d，J＝8.0Hz)，7.32(5H，m).实施例162-[(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)苄基氨基]乙酸叔丁基酯(化合物5-4a)的制备 将上述实施例15得到的化合物(0.51g，1.03mmol)和溴代乙酸叔丁酯(0.3ml)在二氯甲烷(5ml)中的混合物在60℃搅拌16h。反应完成后，向混合物中加入三乙胺并搅拌15min。用乙酸乙酯萃取混合物，并用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(ABW-200，CHCl3∶MeOH＝10∶1)纯化，得到0.23g(36.9％)无色油状目标化合物。1H-NMR(CDCl3)δ1.45(9H，s)，1.75(1H，m)，1.84(1H，m)，1.97(3H，s)，2.05(3H，s)，2.06(3H，s)，2.12(3H，s)，2.86(2H，t，J＝6.0Hz)，3.29(2H，s)，3.40-3.60(4H，m)，3.83(2H，s)，4.02(1H，m)，4.11(1H，m)，4.20(1H，m)，4.32(1H，m)，4.50(1H，m)，5.11(1H，dd，J＝6.0，2.0Hz)，5.31(1H，t，J＝3Hz)，5.70(1H，d，J＝6.0Hz)，7.33(5H，m).实施例172-[(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)氨基]乙酸叔丁酯(化合物5-5a)的制备 将上述实施例16得到的化合物(0.21g，0.34mmol)溶解在甲醇(10ml)中，向溶液中加入乙酸(0.5ml)和10％Pd-C(20mg)。在H2气氛下搅拌反应混合物3h，然后经硅藻土过滤悬浮液，浓缩滤液，得到0.18g(99％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)431，373，314，91，78.1H-NMR(CDCl3)δ1.45(9H，s)，1.91(1H，m)，1.95(1H，m)，2.01(3H，s)，2.05(6H，s)，2.05(3H，s)，2.50(1H，s)，2.87(2H，t，J＝6.0Hz)，3.40-3.70(4H，m)，4.10(2H，m)，4.20-4.41(3H，m)，4.50(2H，m)，5.20(1H，dd，J＝6.0，2.0Hz)，5.33(1H，t，J＝3Hz)，6.05(1H，d，J＝6.0Hz).实施例182-[(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰基氨基]乙酸叔丁酯(化合物5-6a)的制备 在二异丙基乙胺(0.1ml)存在下，向上述实施例17得到的化合物(0.18g，0.34mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中慢慢加入乙酰氯(0.36ml)。搅拌溶液2h后，在减压下浓缩混合物，得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt)纯化，得到0.13g(66.5％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)517(M-Bu)，501，431，358，314，199，144，99，72.1H-NMR(CDCl3)δ1.47 9H，s)，1.83(1H，m)，1.93(1H，m)，1.86(3H，s)，1.91-2.20(15H，m)，3.40-3.60(10H，m)，3.96-4.40(9H，m)，4.50(1H，m)，5.18(1H，dd，J＝6.0，3.0)，5.30(1H，t，J＝3.0Hz)，5.75(1H，m).实施例192-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰基氨基]乙酸(化合物5-7a)的制备 向上述实施例18得到的化合物(0.15g，0.26mmol)中加入三氟乙酸(0.4ml)的二氯甲烷(2ml)溶液，并搅拌3h。浓缩反应混合物，得到0.13g(66.8％)无色油状目标化合物。Mass(m/e)517(M-Bu)，501，431，358，314，199，144，99，72.1H-NMR(CDCl3)δ0.89(1H，m)，0.97(1H，m)，2.00(3H，s)，2.03(3H，s)，2.04(3H，s)，2.15(3H，s)，2.19(3H，s)，3.40-3.65(6H，m)，3.95-4.18(3H，m)，4.30(2H，m)，4.46(1H，m)，5.10(1H，d，J＝4.0Hz)，5.18(1H，m).实施例20O-(甲基5-乙酰基氨基-4，7，8，9-四-O-乙酰基-3，5-二脱氧-β-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulopyranoside)-(2→6)-2-(2-乙酰基氨基-3，4-二-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(丙-2-烯基氧基)乙烷(化合物6-2a)的制备 向上述实施例14得到的醇化合物(173mg，0.66mmol)和MS4A(380g)的四氢呋喃(10ml)混合物中加入二叔丁基吡啶(0.29ml)和AgOTf(337mg)，搅拌混合物30min。冷却到-78℃后，向混合物中滴加sialyl氯(670mg，0.66mmol)的四氢呋喃(8ml)溶液，搅拌混合物28h。经硅藻土过滤悬浮液并在减压下除去滤液。得到的残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH＝10∶1)纯化，得到81mg(18％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)785(M+).IR(cm-1)3340、2944、1744、1656.1H-NMR(CDCl3)δ1.88(3H，s)、1.99(3H，s)、2.03(3H，s)、2.04(3H，s)、2.13(3H，s)、2.14(3H，s)、2.58(1H，dd，J＝17.4，4.4Hz)、2.97(1H，d，J＝3.9Hz)、3.99-4.10(4H，m)、4.14-4.27(2H，m)、4.34(1H，dd，J＝12.2，2.5Hz)、4.40-4.43(1H，m)、4.84-4.91(1H，m)、5.21-5.39(4H，m)、5.87-5.96(1H，m)、6.74(1H，d，J＝5.9Hz).实施例21O-(甲基5-乙酰基氨基-3，5-二脱氧-β-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulopyranoside)-(2→6)-2-(2-乙酰基氨基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(丙-2-烯基氧基)乙烷(化合物6-3a)的制备 搅拌上述实施例20得到的化合物(21mg，0.027mmol)和2％K2CO3(3ml)的甲醇(9ml)混合物20h。用1％HCl中和反应混合物，然后在减压下浓缩。得到的残余物用硅胶柱色谱(PR-18，H2O∶AcOH＝100∶1)纯化，得到13mg(81％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)579(M-H)+IR(cm-1)neat3268、1638、1566.1H-NMR(CD3OD)δ1.60-1.80(2H，m)、2.01-2.05(1H，m)、2.01(3H，s)、2.05(3H，s)、2.85-2.88(1H，m)、3.50-3.60(3H，m)、3.65-3.76(5H，m)、3.81-3.95(5H，m)、4.02(2H，d，J＝5.4Hz)、4.21-4.33(2H，m)、5.18-5.21(1H，m)、5.29-5.34(1H，m)、5.91-6.00(1H，m).实施例22O-(甲基5-乙酰基氨基-3，5-二脱氧-β-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulopyranoside)-(2→6)-2-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰氨基]-N-(2-{2-[2-(2-丙烯基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)乙酰胺(化合物6-3b)的制备 使用按下述实施例32得到的化合物，根据实施例20-21所述的方法得到目标化合物。MS(ESI，m/e)877(M+Na)+IR(cm-1)KBr3400，2950，1650，1400，1125.1H-NMR(CD3OD)δ1.62(2H，m)、2.01(3H，s)、2.04(3H，s)、2.20(3H，s)、2.81(1H，dd，J＝2.8Hz)、3.40-3.98(30H，m)、4.18(4H，m)、4.21(4H，m)、5.20(1H，d，J＝12Hz)、5.19(1H，d，J＝12Hz)、6.98(1H，m).实施例23制备下列化合物 向上述实施例14得到的化合物(0.12g，0.41mmol)的乙腈(10ml)溶液中加入苯甲醛二甲基缩醛(0.12ml)和对甲苯磺酸盐(3.8mg)，在60℃、氩气氛下搅拌混合物6h。冷却到室温后，用乙酸乙酯萃取混合物，有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt)纯化，得到0.10g(644％)无色油状目标缩醛化合物。MS(ESI，m/e)377(M)+1H-NMR(CDCl3)δ1.96(2H，m)、1.99(3H，s)、3.43-3.60(3H，m)、3.75(1H，d，J＝3Hz)、4.01(3H，m)、4.11(2H，m)、4.42(2H，m)、5.20(2H，，dd，J＝3.8Hz)、5.60(1H，s)、5.90(1H，m)、6.20(1H，d，J＝3Hz)、7.30-7.56(5H，m)实施例24制备下列化合物 向上述实施例23得到的化合物(100mg，0.41mmol)和MS4A(380g)的二氯甲烷(10ml)混合物中加入二叔丁基吡啶(0.12ml)和AgOTf(0.14g)，搅拌混合物30min。冷却到-78℃后，向混合物中滴加半乳糖衍生物(0.22g，0.41mmol)的二氯甲烷溶液。反应完成后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(BW-200，AcOEt)纯化，得到0.10g(644％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)707(M)+1H-NMR(CDCl3)δ1.96(2H，m)、1.99(3H，s)、3.43-3.60(3H，m)、3.75(1H，d，J＝3Hz)、4.01(3H，m)、4.11(2H，m)、4.42(2H，m)、5.20(2H，，dd，J＝3，8Hz)、5.60(1H，s)、5.90(1H，m)、6.20(1H，d，J＝3Hz)、7.30-7.56(5H，m)实施例25制备下列化合物 将上述实施例24得到的化合物(0.11g 0.16mmol)的80％乙酸溶液加热到70℃，并搅拌2h。在减压下除去溶剂，得到的二醇化合物溶解在甲醇(5ml)中。将甲醇钠(2mg)加入到该溶液中，在室温下搅拌混合物2h。反应混合物用Amberlite IR-120中和并过滤，滤液在减压下浓缩，得到0.1g(64.4％)目标化合物。MS(ESI，m/e)451(M)+1H-NMR(CDCl3)δ1.75(1H，m)、2.00(1H，m)、2.13(3H，s)、3.16(1H，m)、3.55(2H，m)、3.60(1H，m)、3.69-3.82(3H，m)、3.98(2H，m)、4.01-4.10(5H，m)、4.30(1H，m)、4.80(3H，m)、5.11(1H，m)、5.18(2H，m)、5.23(1H，m)、5.40(1H，m)、5.90(1H，m)实施例262-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}-2-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰基氨基]乙酸叔丁酯(化合物8-3a)的制备 将上述实施例7和5得到的羧酸(67mg，0.14mmol)和胺(69mg，0.14mmol)的混合物溶解在乙腈(1.4ml)中，向混合物中加入二异丙基乙胺(0.027ml)和O-(苯并三唑-1-基)N，N，N’，N’-四甲基水合氢四氟硼酸盐(TBTU)(50mg)。反应混合物搅拌24h后，将混合物倒入到盐水中并用氯仿萃取，有机层用Na2SO4干燥，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶MeOH＝10∶1)纯化，得到72mg(54％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)944(M+).1H-NMR(CD3OD)δ1.46(9H，s)、1.77-1.83(1H，m)、1.92-1.97(1H，m)、1.90(3H，s)、1.91(3H，s)、1.94(3H，s)、1.95(3H，s)、2.00(3H，s)、2.01(3H，s)、2.04(3H，s)、2.05(3H，s)、2.11(3H，s)、3.41-3.68(4H，m)、3.90-4.59(14H，m)、5.09-5.16(2H，m)、5.40-5.42(2H，m).实施例272-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基)-2-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰基氨基]乙酸(化合物8-1b)的制备 搅拌上述实施例26得到的酯化合物(62mg，65.7μmol)和三氟乙酸(0.2ml)的二氯甲烷(1ml)溶液4h。在减压下浓缩反应混合物。得到的残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)纯化，得到50mg(86％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)888(M+).1H-NMR(CD3OD)δ1.77-1.82(2H，m)、1.94(3H，s)、1.95(3H，s)、1.97(3H，s)、1.99(3H，s)、2.00(3H，s)、2.02(3H，s)、2.04(3H，s)、2.07(3H，s)、2.11(3H，s)、3.34-3.77(4H，m)、4.06-4.87((14H，m)、5.10-5.15(2H，m)、5.33-5.41(2H，m).实施例28N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基]-2-(N-{2-乙酰基氨基3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙酰基氨基)-N-({N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}-N-[(N-氨基甲酰基)甲基]氨基甲酰基}甲基)乙酸叔丁酯(化合物8-3b)的制备 向上述实施例27和17得到的羧酸(48mg，54.1μmol)和胺(26.3mg，54.1μmol)的乙腈(1ml)溶液中加入二异丙基乙胺(10μl，59.5μmol)和O-(苯并三唑-1-基)N，N，N’，N’-四甲基水合氢四氟硼酸盐(TBTU)(19mg，59.5μmol)。搅拌38h后，将混合物倒入到盐水中并用氯仿萃取，有机层用Na2SO4干燥，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶MeOH＝5∶1)纯化，得到40mg(54％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)1382(M+Na)+.1H-NMR(CD3OD)δ1.46(9H，s)、1.73-1.83(3H，m)、1.94-2.18(42H，m)、3.41-3.78(8H，m)、4.03-4.55(21H，m)、5.10-5.15(3H，m)、5.40-5.42(3H，m).实施例29N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基]-2-(N-{2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}乙酰基氨基)-N-({N-{2-[2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙基}N-[(N-氨基甲酰基)甲基]氨基甲酰基}甲基)乙酸(化合物8-1c)的制备 搅拌上述实施例28得到的酯化合物(40mg，29.5μmol)和三氟乙酸(0.2ml)的二氯甲烷(1ml)溶液16h。在减压下浓缩反应混合物。得到的残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)纯化，得到18mg(47％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)1302(M+).1H-NMR(CD3OD)δ1.65-1.75(3H，m)、2.00-2.14(42H，m)、3.31-3.60(6H，m)、4.05-4.50(21H，m)、5.05-5.10(3H，m)、5.30-5.39(3H，m).实施例30制备下列化合物 使用上述实施例20得到的化合物，按实施例26-28所述的方法得到目标化合物。1H-NMR(CD3OD)δ1.80-2.25(69H，m)，3.01-3.68(50H，m)，3.90-4.58(6H，m).实施例312-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(2-{N-[(N-{2-[2-(2-丙烯基氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酰基)甲基]乙酰氨基}乙氧基)乙烷(化合物8-4)的制备 向上述实施例19得到的羧酸(23mg，44.4μmol)和胺(17mg，88.8μmol)的乙腈(1ml)溶液中加入二异丙基乙胺(9μl，48.8μmol)、O-(苯并三唑-1-基)N，N，N’，N’-四甲基水合氢四氟硼酸盐(TBTU)(16mg，48.8μmol)。搅拌混合物4h后，将混合物倒入到盐水中并用氯仿萃取，有机层用10％HCl和饱和NaHCO3洗涤。干燥(Na2SO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶MeOH＝8∶1)纯化，得到20mg(65％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)688(M+).IR(cm-1)neat3286、2860、1743、1650.1H-NMR(CDCl3)δ1.80-1.86(1H，m)、2.00(3H，s)、2.06(3H，s)、2.12(3H，s)、2.13(3H，s)、2.18(3H，s)、3.42-3.67(18H，m)、4.40-4.11(6H，m)、4.20-4.30(1H，m)、4.34-4.41(1H，m)、4.42-4.47(1H，m)、5.10-5.14(1H，m)、5.17-5.20(1H，m)、5.25-5.30(1H，m)、5.31-5.32(1H，m)、5.86-5.98(1H，m).实施例322-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)乙氧基}乙基)乙酰基氨基]-N-}2-[2-(2-丙烯基氧基)乙氧基]乙基}乙酰胺(化合物8-6)的制备 在0℃下搅拌上述实施例31得到的乙酸酯化合物(19.5mg，29.0μmol)和甲醇钠(3mg，58.0μmol)的甲醇(1ml)混合物1.5h。用IR-120中和反应混合物，过滤，在减压下除去滤液，得到15.7mg(99％)无色油状目标三醇化合物。MS(ESI，m/e)562(M+).IR(cm-1)neat3272、2932、1636.1H-NMR(CD3OD)δ1.68-1.78(1H，m)、1.92-2.00(1H，m)、1.92(3H，s)、2.21(3H，s)、3.64-3.78(24H，m)、3.83-3.88(1H，m)、4.05-4.10(2H，m)、4.21-4.29(2H，m)、5.19-5.22(1H，m)、5.30-5.53(1H，m)、5.91-6.01(1H，m).实施例33制备下列化合物 向上述实施例7得到的羧酸(20mg，57.5μmol)和胺(136mg，115μmol)的二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入二异丙基乙胺(42μl，230μmol)、HATU(87mg，230μmol)和HOAt(16mg，115μmol)。搅拌混合物24h后，将混合物倒入到盐水中并用氯仿萃取，有机层用10％HCl和饱和NaHCO3洗涤。干燥(Na2SO4)后，在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH∶AcOH＝18∶2∶1)纯化，得到5mg(6％)无色油状目标化合物。MS(ESI，m/e)11501H-NMR(CDCl3，ppm)δ1.70-2.12(45H，m)、3.41-3.79(15H，m)、4.09-4.58(26H，m)、5.08-5.36(1H，m)、5.40-5.48(3H，m)、5.90-6.05(1H，m)实施例34制备下列化合物 在-78℃，将上述实施例32得到的化合物的甲醇和二氯甲烷溶液臭氧化。反应混合物用二甲硫醚处理并浓缩得到醛，向该醛和KLH的磷酸盐缓冲液的混合物中加入氰硼氢化钠，并搅拌30h。用PBS(-)渗析纯化后，得到目标糖蛋白抗原。实施例35制备下列化合物 将上述实施例34得到的醛与4-(4-N-顺丁烯二酰亚氨基甲基)环己基1-羰基肼反应得到顺丁烯二酰亚胺衍生物。向该化合物和KLH的磷酸盐缓冲液混合物中加入氰硼氢化钠。用PBS(-)渗析纯化后，得到目标糖蛋白抗原。实施例362-(2-乙酰基氨基-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基)-1-(2-{N-[(N-{2-[2-(3-乙酰基硫基丙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酰基)甲基]乙酰基氨基}乙氧基)乙烷的制备 向上述实施例3 1得到的烯烃(22mg，0.032mmol)的二噁烷(2ml)溶液中加入硫代乙酸(0.02ml)，在80℃加热混合物6h。在减压下除去溶剂。得到的残余物用硅胶柱色谱(AcOEt∶MeOH＝9∶1)纯化，得到0.02g(82％)目标化合物。实施例372-[N-(2-{2-[2-乙酰基氨基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基]乙氧基}乙基)乙酰基氨基]-N-}-2-[2-(2-亚氧硫基丙氧基)乙氧基]乙基}乙酰胺的制备 向上述实施例36得到的化合物(20mg，0.029mmol)的甲醇(1ml)溶液中加入甲醇钠(2mg，0.058mmol)，并搅拌12h。反应混合物用IR-120中和，用硅藻土过滤，在减压下除去溶剂。得到8mg(51％)目标化合物。实施例38制备下列化合物
搅拌下将上述实施例37得到的化合物加入到顺丁烯二酰亚胺化的KLH中，并在4℃放置2h。反应混合物用磷酸盐缓冲的盐水(pH7.4)渗析48h，并用蒸馏水渗析48h，然后byophilization，得到目标化合物。
权利要求
1.通式(1)化合物， 其中A代表OH或唾液酸和/或其衍生物，B代表OH或半乳糖和/或其衍生物；T代表H或胺保护基；M代表H或OH；X代表氧原子、-NH-或S(O)z(其中z为0、1或2)；Q为H或氧原子；V代表低级烷基或H；W为0～5的直链或支链亚烷基；Z为1～5的直链或支链亚烷基；i、m和t为0或1；非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其具有上述化合物作为核心抗原结构。
2.通式(2)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m和t具有上述意义；E代表可药用的载体化合物，1为0或1；F如下所示 其中J为-CH2CH2X-或-N(L)-CH2CO-(其中X具有上述意义；L为H或低级烷基)；G为H或低级烷基；p为0～3；y为0或1；非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其具有上述化合物作为抗原的核心结构。
3.通式(3)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m、t、E和1具有上述意义；r为1～4；非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其具有上述化合物作为抗原的核心结构。
4.通式(4)化合物， 其中A、B、T、X、Q、V、W、Z、i、m、t、p和r具有上述意义；U代表H或低级烷基；w为0～50；y为1或50。
5.通式(1)～(4)的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其中A为唾液酸和/或其衍生物，B为OH。
6.通式(1)～(4)的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其中A为OH，B为半乳糖和/或其衍生物。
7.通式(1)～(4)的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物，其中A和B均为OH。
8.一种制备吡喃半乳糖的方法，该方法是将上述吡喃葡萄糖衍生物中的OR2转化为OR1，以得到通式(6)化合物， 其中OR1为H或羟基保护基，如乙酰基；R2为离去基团，如甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基或甲磺酸酯基；G为烯丙基或保护的羟基，
9.采用权利要求1～7的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物的免疫疗法。
10.单克隆抗体，它用权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物制备。
11.抗肿瘤剂，其中含有权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物作为活性组分。
12用于肿瘤的免疫刺激剂，其中含有权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物作为活性组分。
13.抗人免疫缺陷病毒(HIV)剂，其中含有权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物作为活性组分。
14.用于HIV的免疫刺激剂，其中含有权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物作为活性组分。
15.采用含有权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物作为活性组分的肿瘤治疗方法。
16.采用含有权利要求1～7所示的非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物作为活性组分的HIV治疗方法。
全文摘要
本发明目的在于制备对酶稳定的非粘蛋白型合成化合物-载体结合化合物,其具有诱导癌和HIV免疫应答的特异反应性的能力。本发明公开了通式(1)化合物,其中A代表OH或唾液酸和/或其衍生物,B代表OH或半乳糖和/或其衍生物;T代表H或胺保护基;M代表H或OH;X代表氧原子、－NH－或S(O)z(其中z为0、1或2);Q为H或氧原子;V代表低级烷基或H;W为0～5的直链或支链亚烷基;Z为1～5的直链或支链亚烷基;i、m和t为0或1;非粘蛋白型合成化合物或其载体结合的化合物,其具有上述化合物作为核心抗原结构。
文档编号A61P31/18GK1341595SQ0113283
公开日2002年3月27日 申请日期2001年8月11日 优先权日2000年8月11日
发明者富山泰, 上山直人, 柳谷昌宏, 大仓靖史 申请人:寿制药株式会社