专利名称：具有抗血管生成活性且没有抗凝作用的部分脱硫酸化糖胺聚糖的衍生物的制作方法
技术领域：
本发明在此涉及部分脱硫酸化(desulphated)的糖胺聚糖衍生物，特别是肝素类，其制备方法，其作为制备具有抗血管生成活性药物的活性成分的应用，特别是治疗肿瘤，如转移型肿瘤，以及含有它们的药物组合物。
在八十年代早期，随着干扰素(α/β)作为一种肿瘤血管生成抑制剂的发现，临床实验开始以这条治疗途径为基础。
当1998年3月3日纽约时报公开了波士顿Harvard Medical School和Children；s Hospital的J.Folkman实验室发现了两种分子制管张素和内抑制素(endostatin)的新闻时，媒体引起了相当大的轰动，这两种分子在抗癌中产生了令人鼓舞的结果。这两种分子在抑制血管生成的高水平的功效总体上推进了新化合物的研究。目前，存在约30种具有抗癌活性的分子，它们通过抗血管生成机理起作用，其业已进入到临床试验阶段(I-III期)并且几乎有相同数量的公司和机构参与其中。
仅仅在美国，据估计约9百万患者可以受益于抗血管生成疗法。现在，至少4,000名患者加入到采用这种疗法的临床试验中，没有任何特别不期望的作用的主诉。
在血管生成的一般性概念中我们应该区分血管发生、也就是说胚胎发育过程中血管的形成和血管生成，血管生成在严格意义下是指在产后生活中由预存在的血管开始的新血管(毛细管)的形成。血管生成对于实体瘤生长的重要性已有报导。在过去的三十年内据报导肿瘤生长以及转移瘤的形成，确实取决于能够使肿瘤块血管化的新血管的发育。
血管生成的抑制作用在肿瘤内坏死块的形成或肿瘤细胞内细胞凋亡的诱发中成为基础。
正常组织和肿瘤组织中的新血管形成存在本质区别。在前者中，血管内皮为静止组织，其组成细胞具有非常低的有丝分裂指数(测定的更新时间以百天计)，并且血管网有规律的相对均匀，并且适于适当氧合所有的组织，没有任何动静脉连接。在肿瘤组织内，一方面，对内皮细胞增殖的刺激作用导致后者有丝分裂指数升高(平均更新时间5天)，新血管形成在闭合区域内明显无规则，有时具有封闭末端，在一些点具有动静脉接触，并且最后基底膜存在裂隙，其在某些点导致组织缺氧。这些差异为鉴定选择性阻挡肿瘤新血管形成的药物提供了机会。
在肿瘤中，新血管形成不总是与肿瘤发展中的精确阶段一致；事实上，存在血管生成在肿瘤恶化之前业已开始的情况(例如，子宫颈的癌)，其他是其中两个阶段相吻合(例如，膀胱癌和乳腺癌)，而其他是其中血管生成在肿瘤后开始的情况(例如，黑素瘤和卵巢癌；参见，例如″Manual of Medical Oncology″，第4版(1991)G.Bonadonna等.)。
抗血管生成疗法比传统标准化疗具有多种优越性(CancerResearch 1998，58，1408-16)a)特异性其目标是一种过程，即肿瘤新血管形成；b)生物利用度其目标是内皮细胞，其可以容易地达到同时没有传统化疗直接作用于肿瘤细胞所存在的问题；c)化学抗性这可能是这种疗法的最重要的优越性；事实上，由于内皮细胞不同于肿瘤细胞，其在遗传上是稳定的，所以不太可能出血耐药现象；d)转移性蔓延新血管形成的阻断限制肿瘤细胞经血流传播到机体的其他部分；e)细胞凋亡对肿瘤内血管网络的阻挡可以减少氧和营养物供应到肿瘤细胞；细胞凋亡是这些情况中可取的；f)减轻全身性毒性毒性作用如脊髓抑制、胃肠作用和暂时性脱发，它们几乎始终存在于传统化疗中，但在抗血管生成疗法中观察不到。
已知多种分子要素参与肿瘤血管生成(Oncology 1997，54，177-84)。前-和抗-血管生成内源性因素涉及新血管形成中的生物调控机制。
在血管生成刺激物中我们应提及成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素、转化生长因子-α、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血小板衍生内皮细胞生长因子、转化生长因子-β、体外抑制剂但为体内刺激物、胎盘生长因子、白介素-8、肝细胞生长因子、血小板衍生生长因子、粒细胞集落刺激因子、增殖蛋白、前列腺素(PGE1、PGE2)、GM1-GT1b、P物质、bradykinins和一氧化氮。
相反地，所述的血管生成抑制剂包括bFGF的可溶受体，干扰素(α、β、γ)，制管张素，血小板反应蛋白1，促乳素(16kDa末端氨基片段)，血小板因子4(PF4)，组织金属蛋白酶(TIMP)抑制剂，胎盘增殖蛋白有关的肽，神经胶质瘤衍生血管生成抑制因子，抑制血管的甾类物质，软骨衍生抑制剂(CDI)，肝素酶，白介素-12，纤溶酶原激活物抑制剂，类视黄醇(retinoids)，内抑制素，angiopoietin-2，染料木黄酮，一氧化氮和GM3.
整联蛋白是一个家族的跨膜蛋白，其介导细胞与细胞和细胞与胞外基质之间的相互作用。所有整联蛋白能够识别普通肽序列Arg-Gly-Asp(″通用细胞识别位点″)，虽然各种整联蛋白优先识别这种三肽的不同构象。从药理学观点出发，在血管生成抑制剂的的开发中对整联蛋白的特异亚型的抑制也令人感兴趣。
蛋白激酶-C(PK-C)的控制也可以允许血管生成的调控。事实上，存在能够完全或部分阻断血管生成的典型PK-C抑制剂。
虽然许多组织和私人研究中心投入了庞大的研究和经费，但距最后解决世界范围的癌症问题相距甚远。尽管在过去的30年中改善了癌症患者的预后，而且存活率从30提高至50％，现在已经很好了解了涉及肿瘤恶化的遗传、细胞和生物化学机理，但制伏或至少限制此类病理学的可能性仍然是敏感的问题，并且许多方面仍未解决，例如复发的可能性、完全缓解和原发性肿瘤的转移性蔓延。
自近七十年起，当Folkman的观察开始由国际科学委员会证实时，业已从天然来源(植物、真菌、生物流质)和实验室合成中分离出数百种具有抗血管生成活性的分子。
许多药物业已处于III期临床，例如马立司特(Marimastat)(British Biotech.)，l’AG3340(Prinomast-Agouron)，和尼伐司特(Neovastat)(Aeterna)，其全部主要在肺水平(SNCL)上起作用，并且具有参与干扰金属蛋白酶的机理。处于III期临床的还有RhuMadVEGF(这是一种Genetech生产的抗VEGF抗体)和干扰素α(市售)，其是抗实体瘤的活性剂，这归功于其对前血管生成生长因子的干扰作用；或TNP-470(TAP Pharm.)，其直接作用于内皮细胞。最后，药物如CAI(NCI)和IM862(Cytran)是具有作为抗血管生成药物的活性抗血管生成剂，但没有特异性并且作用剂量还不清楚。
上述这些药物在数年内可能成为肿瘤学家的治疗医学武器，但其他目前已经进入到I/II期临床试验例的分子如Combretastatin(OxiGene)、甲氧基雌二醇和内制素(EntreMed)在临床前研究的基础上非常有希望。公司如Bristol Myers-Squibb(用BMS275291)、Novartis(以CGS27023A)和Parke-Davis(以Suramin)参与这个治疗战略。肝素肝素是不同长度和不同程度硫酸化的天然多糖的异源混合物，其具有抗凝活性并且由肝脏(首先从其中分离出来)、肌肉、肺、淋巴和脾脏中存在的结缔组织肥大细胞分泌。
除了规则序列以外，在肝素中鉴定出与抗凝血酶活性的活性位点相对应的序列。
肝素及其衍生物的抗肿瘤和抗转移活性归因于其抑制乙酰肝素酶(heparanase)、阻断生长因子和调控血管生成的能力。硫酸乙酰肝素(HS)硫酸乙酰肝素(HS)是遍在蛋白配体。这些蛋白与HS链结合是出于不同的作用，从简单的固定作用或避免蛋白水解的降解的保护作用到生物活性的特异性调控，例如血管生成。
肝素和硫酸乙酰肝素(HS)中的碳水化合物骨架在于D-葡糖胺(GlcN)和己糖醛酸(Glc.A或IdO.A)的交替。
在肝素中，GlcN残基多数被N-硫酸盐化，而在HS中它们同时被N-硫酸盐化和N-乙酰化，具有少量的未取代N-。
平均而言，HS比肝素少O-硫酸盐化。
肝素在血管生成疾病如肿瘤、特别是转移瘤的治疗中的应用本质上受到肝素抗凝活性的限制。
业已对肝素进行了化学修饰以降低其抗凝能力，同时保存其抗肿瘤性质。
抗凝血酶位点中一个单位的葡糖醛酸的打开可以使肝素对抗凝血酶的亲和性减弱由此，可以使用具有降低的抗凝作用但仍然保持其抗血管生成性质的肝素。乙酰肝素酶″乙酰肝素酶″是属于内糖苷酶家族，其水解硫酸乙酰肝素(HS)和肝素链的内糖苷键。
这些内糖苷酶参与肿瘤细胞的增殖、转移瘤和肿瘤的新血管形成。这提示了作为从胞外基质释放出结合肝素的生长因子，例如aFGF(也称作FGF-1)、bFGF(也称作FGF-2)和VEGF的结果，它们也可以参与肿瘤血管生成。
这些酶是抗血管生成活性的生物学目标，在科技文献中有大量的结构/活性相互关系的研究(参见，例如，Lapierre F.等，Glycobiology，第6卷，(3)，355-366，1996)。虽然许多方面仍待澄清，但研究业已报导了有关肝素及其衍生物对乙酰肝素酶的抑制作用，利用特殊的试验已经使那些可以指导获得新的选择性更高的衍生物的结构类型的考虑显现。
在Lapierre等的上述工作中，肝素衍生物据描述是通过2-O脱硫酸化或通过″二醇裂解″(用高碘酸盐氧化且随后用硼氢化钠还原)来获得。这些衍生物，在此定义分别为″2-O-脱硫酸化肝素″和″RO-肝素″，部分保持了肝素的抗血管生成活性，正如通过CAM试验在皮质类固醇的存在下进行评估的，如表III所述(出处同上360页)。
肝素和FGFFGFs调控多种生理过程，例如细胞的生长和分化，但也在病理过程例如肿瘤的血管生成中起作用。
FGFs是生长因子(一个超过10个多肽的家族)，其中酸(FGF-1)和碱性FGFs(FGF-2)是被研究最多的对象，其需要多糖辅因子、肝素或HS来结合FGF受体(FGFR)并激活它。
虽然肝素和HS激活FGFs的准确机理还不清除，然而已知肝素/FGF/FGFR形成″三分子″或″三元″复合物。
一种机理假定，肝素和HS诱导所谓的FGF的夹层给药，而且后者由此发生二聚作用，与FGFR形成稳定的复合物。
肝素衍生物的抗转移活性原发性肿瘤产生转移细胞的能力可能是抗癌症治疗所面临的主要问题。
具有阻断乙酰肝素酶的实质性能力的肝素衍生物似乎同样能够抑制原发性肿瘤和转移瘤中的血管生成。
此外，对乙酰肝素酶的抑制减弱肿瘤细胞从原发性肿瘤向其它器官的迁移能力。
下表给出肝素情况中结构/抗转移活性相关关系的实例
MW＝分子量该表中的数据提示，非常短的肝素片段仍然具有良好的抗转移活性，同时当葡糖胺的氨基与琥珀酸结合时这种活性减小。
支持血管生成抑制作用的肝素样分子的结构要素可以在被阻断靶向的基础上分为两类a)乙酰肝素酶的阻断，一种水解硫酸乙酰肝素的糖苷键释放出生长因子的酶。
为此目的肝素样化合物优选包含至少8个单糖单元含有N-乙酰基-氨基葡糖-葡糖醛酸的序列(或N-硫酸盐化葡糖胺(参见，例如，D.Sandback-Pikas等J.Biol.Chem.，273，18777-18780(1998)和引入的参考文献)。
b)血管生成生长因子(成纤维细胞型FGF-1和FGF-2；血管内皮型VEGF；血管渗透型VPF)的阻断。
为此目的肝素样化合物优选具有至少5个单糖单元长度、含有2个硫酸盐化艾杜糖醛酸和N，6-硫酸盐化葡糖胺的序列(参见，例如，M.Maccarana等J.Biol.Chem.，268，23989-23905(1993))。
在文献中小分子肽类(5-13个氨基酸)具有抗血管生成活性(theUniversity of Washington的US专利5,399,667)，其通过结合血小板反应蛋白受体或较长的肽(约50个氨基酸)起作用。
已知修饰的血小板因子(EP 0 589 719，Lilly)能够抑制内皮增殖，具有IC50＝7nM。
具有抗血管生成活性的低聚糖片段也已被充分描述业已发现，事实上，通过改变碳水化合物序列可以提高相互作用的选择性。
此外，肝素可以作为载体用于那些本身是抗血管生成的物质，例如一些甾类化合物，这是利用了肝素对血管内皮细胞的亲和性；参见，例如，University of Texas和Imperial Cancer Research Technology的WO 93/18793，其中要求保护具有酸不稳定连接体的肝素，例如与皮质醇结合的脂族酸肼。偶联分子的抗血管生成作用大于未偶联分子的，甚至当同时给药时也如此。
在Biochim.Biophys.Acta(1996)，1310，86-96中，描述了结合甾类物质的肝素(例如皮质醇)在C-20具有腙基，其具有比两种未偶联分子高的抗血管生成活性。
Daiichi Sc.的EP 0 246 654描述了在II期临床研究中具有抗血管生成活性的硫酸盐化多糖。
Pharmacia & Up.john-Harvard Coll.的EP 0 394 971描述了具有低硫酸盐化的六糖-肝素片段，其能够抑制内皮细胞的生长和(FGF-1)刺激的血管生成。
Alfa Wasserman在EP 0 618 234中描述了制备带有亲核性基团的具有肝素或乙酰肝素结构的半合成糖胺聚糖的方法。
Glycomed的WO 95/05182描述了多种具有抗凝、抗血管生成和抗炎活性的硫酸盐化低聚糖。
Glycomed在US 5,808,021中描述制备了基本上非解聚2-O，3-O脱硫酸化肝素的方法，其在艾杜糖醛酸的2-位(I，2-O)和在葡糖胺单元(A，3-O)的3位中脱硫酸化百分比是原始百分比的约99-约75％。这种方法提出在二价金属如钙或铜的阳离子的存在下进行脱硫酸化，随后将所得产物冷冻干燥。该脱硫酸化肝素具有抗血管生成活性。
本发明的目标是在乙酰肝素酶抑制作用和/或FGF生长因子抑制机理的基础上发现产生抗血管生成活性的最佳糖胺聚糖结构。本发明的另一目的是提供一种具有抗血管生成活性的药物，其基本上避免了肝素衍生物的典型副作用，例如抗凝活性。
发明概要现在发现，当使含具有不同程度的N-脱硫酸化并任选随后全部或部分N-乙酰化的葡糖胺残基的糖胺聚糖，例如肝素样糖胺聚糖、肝素或修饰的肝素经受控制的艾杜糖醛单元的2-O-脱硫酸化处理达到使脱硫酸化的程度不大于总糖醛单元(uronic unit)的60％时，可以保持血管生成生长因子结合性质。令人惊奇地，2-O-脱硫酸化不超过其总糖醛单元的60％的肝素可以有效抗血管生成。
在本发明所述的条件下进行的脱硫酸化也导致在2，3位具有环氧(oxyranic)环的艾杜糖醛单元的形成。该环氧环在本发明所述条件下开环生成L-艾杜糖醛或L-半乳糖醛单元。
本发明的一个目的是糖胺聚糖衍生物，特别是脱硫酸化肝素，选择性部分脱硫酸化并且脱硫酸化程度不超过总糖醛单元的60％；这些脱硫酸化裂隙缩短了由连续的二糖三硫酸盐单元构成的规则序列的长度。
在一个
具体实施例方式
中，本发明描述了式(I)化合物 其中U环可以具有下面的含义 X和X’可以相同或不同，是醛基或-CH2-D基团，其中D是羟基或氨基酸、肽或者碳水化合物或寡糖的残基。
R和R1，可以相同或不同，是SO3或乙酰基n和m，可以相同或不同，可以是1-40；n+m之和是6-40；m∶n的比例是在10∶2-1∶1内。优选m大于或等于n。优选n是和m+n的和的40-60％。符号 表示用m和n标记的单元是沿多糖链统计分布而不一定是逐一分布的。
作为本发明主题的化合物具有令人感兴趣的抗血管生成性质，因此可以作为活性成分用于制备治疗基于异常血管生成的病理、特别是治疗转移瘤的药物。
可取地，本发明的化合物降低了如果存在的抗凝性质，由此避免或减少肝素的典型副作用。另一优越性是事实上本发明的化合物可以用仪器分析技术来定性，例如NMR光谱学，由此能够进行控制，这从产业的观点看是绝对希望的。
在另一种修饰的肝素中，当制备血管生成抑制剂时分子量(MW)具有非常重要的作用。事实上公认，分子量(MW)减小到五聚糖单元相应的值时不会导致抗血管生成活性的损失。相反，业已确定超过某个长度后，肝素链更倾向于不抑制二聚作用并由此激活FGF。
发明详述脱硫酸化程度的含义是指非硫酸盐化的艾杜糖醛酸占最初存在于起始肝素中的总糖醛酸的百分比。一个优选的起始范围的脱硫酸化百分比是约40-约60％。在式(I)化合物中优选的化合物是部分2-O-脱硫酸化的分子量(MW)为11200的肝素，多分散性指数D为1.3，脱硫酸化程度为1.99(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比约50％(此后也称作ST1514)。所述的化合物包含在式(I)中，在其他相应的定义中，其中m∶n＝1∶1，并且用m和n标记的单元以规则的、交替的方式沿多糖链分布。
这里描述的本发明的化合物通过一种方法制备，该方法包括a)碱性处理在室温-约100℃、优选50-70℃、更优选在约65℃下进行，其导致艾杜糖醛酸的2位中硫酸根的受控百分比的消除并导致环氧基团的形成；并且，如果需要b)在约pH7下，在约50℃-约100℃的温度范围内、优选在70℃下打开该环氧化物环，生成半乳糖醛酸的残基；或，两者择一地c)在约0℃-约30℃的温度范围内、优选在25℃下打开该环氧化物环，生成艾杜糖醛酸的残基；和，如果需要d)用高碘酸钠氧化二醇，使糖苷环打开且每个被修饰的残基中形成两个醛基；e)将所述的醛基还原为一级醇，如果需要，D基团转化为非羟基的基团，如式(I)中规定的不同含义所设想的，f)任选地酸水解得到相应于规则序列的寡糖，或者两者择一地g)用选自下列的酶部分酶促水解裂合酶、肝素酶、乙酰肝素酶，或当量的步骤e)制得的产物，生成寡糖，优选四聚-或八聚-糖，具有由不饱和艾杜糖醛酸组成的非还原末端残基，由N-磺基葡糖胺组成的还原残基和含有至少一个打开的艾杜糖醛酸的残基；或者，两者择一地h)步骤a)所得的化合物，或步骤b)所得的产物通过部分酶水解处理；和，如果需要i)步骤a)、b)和e)之一得到的产物经过部分6-O-脱硫酸化；或者，两者择一地j)部分或完全6-脱硫酸化的起始肝素经过步骤a)、b)和e)。
按照本发明所述，优选的化合物是通过上述方法制备的部分2-O-脱硫酸化的肝素，其中步骤a)是在60℃下进行45分钟且步骤b)在70℃、pH7下进行，这种肝素的分子量(MW)为11200，多分散性指数D为1.3，脱硫酸化程度为1.99(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比是约50％(此后也称作ST1514)；分子量是通过HPLC-GPC(高效液相-凝胶渗透色谱)测定。
脱硫酸化程度是通过导电分析法测定，修饰的糖醛酸的百分比通过13C-NMR测定。
MW是分子量；和D是多分散性指数，表示为MW/Mn。
按照本发明所述，起始产物是不同来源的糖胺聚糖，优选天然肝素。也可以使用化学修饰的肝素，其具有的N，6二硫酸盐的百分含量是0-100％。从不同的6-O-硫酸盐化葡糖胺含量起始，可以调控一个打开艾杜糖醛酸与另一个之间的规则序列的长度。存在有打开的糖苷环的本发明糖胺聚糖一般被所属领域技术人员称作RO衍生物，这是指糖苷环通过氧化作用、随后还原的方式打开(还原-氧化-RO)。糖苷环的打开一般称作″二醇裂解(glycol split)″，如此称呼是因为在开环上两个伯羟基的形成。化合物在此也称作″RO″或″二醇裂解″衍生物。
本发明的进一步实施方式，由上述打开反应衍生的醛和伯羟基(″二醇裂解″)也使它们自身进行后续的官能化。所以，式(I)化合物也可以在由二醇裂解衍生的伯羟基上带有相同或不同的基团，如对X和X’定义的，例如，寡糖或肽基，单糖或氨基酸超过一个单元的长度，优选2或3单元。
其中X和X’是-CH2OH的式(I)化合物也可以通过适当结合肝素部分的方式用作其他类型的药物的载体，其能够在配制药物的制造和储藏的常规条件下产生稳定的价键。然而，其可以将被转运药物释放到机体内，优选释放到靶向器官的附近。可以被转运药物的实例是甾类和非甾类抗炎药物、皮质类固醇和其他具有抗转移作用的药物，在这种情况中将有利增强抗转移作用，其归因于本发明化合物的独立固有活性和与其结合抗转移药物的加和，并且有关的优越性还有更高的靶向选择性和较低的全身毒性。这些药物的实例是金属蛋白酶抑制剂。可以被有效转移的其他药物是那些在内皮水平作用的药物。其中X和X’不是羟基或醛的式(1)化合物也可以用作药物的载体，在这种情况中X和X’基团将在被转运分子、也就是说本发明的糖胺聚糖和用作载体的分子之间起″间隔基″的作用，在那些为了药动学和药效学的原因所期望的情况下。
在本发明的化合物衍生自肝素的情况中，通过所属领域技术人员已知的脱硫酸化技术从肝素本身来制备这些化合物。例如，脱硫酸化是在碱性试剂如氢氧化钠的存在下，在室温-100℃、优选50-70℃的温度内，例如60℃进行足够长的时间来达到预期的脱硫酸化。该脱硫酸化是通过作用于处理参数来加以控制，例如反应物的浓度、温度和反应时间。一种优选的实施例包括使底物(糖胺聚糖)的浓度恒定保持在80mg/ml，并且NaOH保持在1M，恒温为60℃并且将该脱硫酸化的反应时间控制在15-60分钟。该领域中的专业人员可以在试验实践的正常试验和误差的基础上并在其常规知识的基础上改变条件，例如通过提高反应温度和缩短反应时间。
使用碱性试剂的处理得到中间体产物，其特征在于在脱硫酸化单元上存在环氧化物环。以完全令人惊奇的方式，这些中间体业已被证实具有与式(I)化合物相似的抗血管生成性质。所以，本发明的另一目的是部分脱硫酸化肝素的衍生物，并且因此具有降低电荷的肝素，特别是脱硫酸化不超过60％的肝素，其特征在于在脱硫酸化位点上的环氧化物环。特征在于环氧化物环的所述化合物也是本发明的一个目的，也就是说含有它们的药物组合物和它们在制备具有抗血管生成活性的药物中的应用。
下列化合物是优选的部分2-O-脱硫酸化肝素，其分子量(MW)为12900D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为2.05(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基(uronic residue)(此后也称作ST1513)；部分2-O-脱硫酸化的肝素，其分子量(MW)为11000D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为2.05(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基；部分2-O-脱硫酸化的肝素，其分子量(MW)为9200D，多分散性指数D是1.5，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比的11％环氧基团，27.5％氧化的和还原的糖醛残基。
在本发明的另一可能实施方式中，优选下列物质通过上述方法得到的部分2-O-脱硫酸化的肝素，其中步骤a)是在60℃下进行15分钟且步骤b)是在70℃、pH7下进行，并且分子量(MW)为12900D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为2.05(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基(此后称作ST1513)；通过上述方法制备的部分2-O-脱硫酸化的肝素，其中步骤a)是在60℃下进行30分钟和步骤b)在70℃、pH7下进行(此后称作ST1516)，并且分子量(MW)为11000D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为1.8(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基；通过上述方法制备的部分2-O-脱硫酸化的肝素，其中步骤a)是在60℃下进行60分钟和步骤b)在70℃、pH7下进行，并且分子量(MW)为9200D，多分散性指数D为1.5，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比11％环氧基团，27.5％氧化的和还原的(裂解)糖醛残基(此后称作ST1515)。
在环氧环的形成之后，利用已知技术打开后者。由在约55ppm处的13C-NMR信号面积与端基异构信号的总数(葡糖胺和糖醛残基的C1)之间的比例计算出所形成环氧化物的百分比，上述55ppm处的信号是含环氧化物的糖醛酸环的碳2和3的特征。如果开环是在加热下进行，得到半乳糖醛残基，而如果环氧化物环的打开是在冷的条件下进行，得到的是艾杜糖醛残基。含环氧化物环的化合物的优选实例是那些通过上述方法制备的且分别具有14％(此后称作ST1509)、24％(此后称作ST1525)和30％(此后称作ST1526)的环氧化的糖醛酸含量的化合物。
部分脱硫酸化肝素随后按照上述方法和Smith降解法(简称SD)经受″二醇裂解″(简称RO)。
或者，式(I)化合物也可以不经过环氧化物中间体来得到，也就是说通过直接二醇裂解和后续的Smith降解。
所述的方法制得其中X和X’皆为-CH2OH的式(I)化合物。
对于不是-CH2OH的X和X’，可以利用所属领域专业人员已知的转化带有其他定义如上的基团的羟基的方法。例如，通过用还原胺化反应处理由二醇裂解反应衍生的中间体醛可以完成与氨基酸或肽的偶联(Hoffmann J.等Carbohydrate Research，117，328-331(1983))，其可以在含水溶剂中进行并且适合肝素结构的保持。
如果需要，并且这构成本发明的另一目的，式(I)化合物可以进一步用酸试剂在适当的pH条件如pH4下降解，生成寡糖的混合物，其保持了抗血管生成性质。
以相同的途径，本发明的目的是通过上述方法的步骤g)、h)、i)和j)之一获得的化合物。
本发明的目的是含有至少一种式(I)化合物作为其活性成分的药物组合物，所述的式(I)化合物可以单用或者一种或多种式(I)化合物联合使用，或者所述的一种或多种式(I)化合物与上述脱硫酸化肝素如环氧化的中间体合用；后者也可以在药物组合物中单独作为活性成分。本发明的活性成分是与制药工艺中常用的适当载体和/或赋形剂的混合物，例如，那些描述在″Remington’s Pharmaceutical SciencesHandbook″最新版中的。本发明的组合物含有治疗有效量的活性成分。该领域的专业人员如主治医生或初级保健医生可以根据被治疗的疾病种类和患者的病症或者平行施用的其他活性成分推定出剂量。例如，可以指出0.1-100mg/kg的剂量。
药物组合物的实例是那些可以经口服或经非肠道、静脉内、肌肉内、皮下、经皮或以经鼻或口服喷雾的形式给药的药物组合物。适合所述目的的药物组合物是片剂、硬或软胶囊、散剂、溶液、混悬液、糖浆剂和用于即时液体制剂的固体剂型。非肠道给药的组合物是，例如所有肌肉内、静脉内和皮下注射的形式以及溶液、混悬剂和乳液。也应提及脂质体制剂。片剂还包括以下形式无论是否作为口服给药形式的活性成分控释剂型，用适当层包衣的片剂，微包封的散剂，与环糊精的复合物，长效形式，例如皮下形式，如长效注射剂和植入物。
本发明的化合物具有抗血管生成活性。这使它们适于制备有效治疗患有不同的血管生成的对象，一般是哺乳动物、并特别是人的药物。用是本发明目的药物治疗的疾病的实例是原发性肿瘤、转移瘤、糖尿病视网膜病、牛皮癣、晶状体后纤维组织形成、血管成形术和冠状搭桥术后再狭窄。
更加可取地，本发明的化合物基本上没有肝素的典型副作用。特别是，本发明的化合物基本上不具有抗凝活性。由于基本上不具有这种活性，从临床使用的观点看，专家指的是没有或只有可忽略的活性。
首先被发现具有血管生成作用的生长因子中的一种是bFGF(或FGF-2)，随后是aFGF(或FGF-1)(对该主题的综述参见Christofori，Oxford University，1996)。两种蛋白是一类以对肝素具有高水平亲和性为特征的生长因子的成员。其他有效的血管生成诱导体是VEGF、VEGF-B和VEGF-C。所有三种VEGF因子，象FGFs一样，遍布表达在机体中。这两种类型的因子，a/bFGF(FGF-1和FGF-2)和VEGF，结合特异性高亲和性受体，所述的受体带有具备酪氨酸激酶活性的跨膜结构域。VEGFs-VEGF-1(flt-1)、VEGF-2(kdr/flk-1)和VEGF-3(flt-4)-三种受体特异性地表达在内皮细胞上，而四种FGF受体表达在多种器官和组织中(该主题的综述参见Risau and Flame 1995 Annu.Rev.CellDevBiol.1173-91)。与肝素或硫酸乙酰肝素的片段结合的bFGF引起其二聚作用并通过激活信号的转导途径引起结合其自己的受体的可能性，上述信号可以活化致有丝分裂和分化中的内皮细胞。
所以，对结合肝素或硫酸乙酰肝素的片段的FGF的抑制作用在对抗由于生长因子的局部或全身水平升高所引起的病理性新血管生成中代表有效的治疗靶标。
为此设计出能够评估多种不同的肝素衍生物对bFGF与其自身受体结合的干扰作用的体外模型。
具体地说，使用中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)，在其表面具有硫酸乙酰肝素，但没有FGF受体1。还采用CHO细胞，称作CHO-745flg，其表达FGF受体1，但其与前者不同的是没有膜硫酸乙酰肝素。后者所述的细胞用用于绿荧光蛋白的cDNA坚固转染，并由此利用一组滤光器检测绿色发射可以在荧光显微镜下观察。简单地说，该技术是基于只要将FGF加入到两种细胞就使两种细胞可以相互作用(形成稳定的键)的可能性。事实上，在这种情况中，CHO-745flg细胞的硫酸乙酰肝素将结合FGF，其随后结合CHO-K1细胞，建立一个桥。由于CHO-745flg细胞发射出绿色荧光这种结合的出现是可以检测到的。
此外，评估化合物对细胞增殖的抑制活性。事实上，FGF的一种主要作用是在不存在血清下刺激细胞在表达FGF受体1(FGFR-1)的细胞中的生长。
所以，使用两种细胞系，两种均表达FGFR-1(L6WT1和牛主动脉细胞)，在FGF的存在下、加入或不加入预期具有抑制活性的肝素衍生物来评估其生长。
FGF2介导的细胞间粘着的抑制CHO-K1细胞以90,000细胞/cm2的密度接种在24孔平板中。24小时后细胞在含3％戊二醛的PBS中在4℃下固定2小时，并用0.1M甘氨酸/PBS洗涤。在被固定的单层CHO 745/flg细胞上，用FGFR-1以50,000个细胞/cm2的密度在含10mM EDTA、30ng/ml FGF-2和升高剂量的试验化合物的DMEM中转染。37℃下孵育2小时后，在倒置显微镜下对粘着细胞计数。结果表示为粘着细胞的数目与在不存在试验化合物下测得的数目相比的百分比。化合物一式三份在1ng/ml-100μg/ml内的6个浓度下试验并且计算出各个化合物的ID50(表1)。
表1CHO-K1 e CHO-745flg细胞的细胞间粘着的抑制(ID50)
用FGFR-1转染的L6细胞中DNA合成的抑制作用将L6-WT1细胞(用FGFR-1转染的大鼠成肌细胞)以25,000个细胞/cm2的密度接种在48孔平板DMEM+10％FCS中。24小时后细胞用无血清培养基洗涤并用DMEM+0.5％FCS温育48小时。随后细胞用FGF-2在15和30ng/ml的浓度下、在存在或不存在试验化合物下(全部为100μg/ml)温育16小时。在温育结束时，加入3H-胸苷(0.25μCi/孔)不改变培养基。6小时后，测量可沉淀的TCA。各试验点是3次测定的平均。结果如表2所示。
表2用FGFR-1转染的L6细胞的DNA合成的抑制
对牛主动脉内皮细胞(BAEC)中DNA合成的作用将BAEC细胞以2,500细胞/cm2的密度接种在48孔平板内EGMBullet套盒完全培养基中。24小时后，细胞在无血清下在无牛脑提取物和hEGF的EGM培养基中培养。24小时后，细胞用30ng/ml的bFGF在增高浓度的试验化合物的存在下处理。16小时后，向培养基中加入1μCi/ml的3H-胸苷。6小时后，测定可沉淀TCA活性。各试验点是8次测定的平均值。结果如表3-6所示。
表3对牛主动脉内皮细胞(BAEC)中DNA合成的作用-ST1514
表4对牛主动脉内皮细胞(BAEC)中DNA合成的作用-ST1528
表5对牛主动脉内皮细胞(BAEC)中DNA合成的作用-ST1525
表6对牛主动脉内皮细胞(BAEC)中DNA合成的作用-ST1507
BAEC中细胞增殖的试验将第7代BAEC细胞以2,500细胞/cm2的密度接种在96孔平板内不含牛脑提取物和hEGF的EBM培养基中。向该培养基中加入30ng/ml的FGF-2和各个试验化合物，所述化合物是在10ng/ml-100μg/ml之间的5个浓度下。3天后将细胞固定且用结晶紫染色，通过ELISA微量平板读数器测定光密度。各个试验点一式四份进行并且计算ID50。结果如表7所示。
表7BAEC中细胞增殖的试验胎BAEC GM 7373中细胞增殖的试验
GM7373细胞以70,000个细胞/cm2的密度接种在96孔平板MEM+10％FCS培养基中。24小时后，细胞用无血清培养基洗涤并用10ng/ml的FGF-2在含0.4％FCS的培养基中处理。8小时后，向培养基中加入10ng/ml-100μg/ml内的5个浓度的试验化合物。16小时后，细胞经过胰蛋白酶消化作用并在Burker室内计数。计算出各化合物的ID50，结果是一式三份的2次试验的平均值。结果如表8所示。
表8胎BAEC GM 7373的细胞增殖的试验
血管生成的抑制对于血管生成的研究，所用的模型是鸡胚胎绒毛膜尿囊膜(CAM)模型(Ribatti等.Int.J.Dev.Biol.，40，1189(1996))。
300个胚胎的母鸡蛋在37℃恒定温度条件下温育。在温育的第3天，从鸡蛋的尖端抽吸2-3ml的蛋清蛋白使CAM与壳分离。用剪刀在蛋壳上开一个窗口。由此暴露出接受CAM的血管。该窗口用透明玻璃片密封并将鸡蛋放回保温箱。在温育的第8天，在灭菌条件下，按照下面的方案利用最新开发的技术处理CAM(Ribatti等J.Vasc.Res.34，455(1997))，其包括使用大小为1mm2的尺寸的无菌明胶海绵。使各种分子重新悬浮在3μl的PBS中，浓度为50或100μg/胚胎。作为阳性对照，使用FGF-2(1μg/海绵)，其对于CAM的强的血管生成活性(Ribatti等，Dev.Biol.170，39，(1995))已被证实。海绵首先静置在CAM的表面上，随后取3μl的试验物质的溶液吸移到海绵的表面上。每天用带有照相设备的Zeiss SR立体显微镜检查CAM。在温育的第12天停止试验，当进行分子的血管生成活性的全面评估时，表示为与开始和结束的试验的数目有关的百分抑制(表9)。此外，对于化合物ST1514，在100μg/胚胎的浓度下评估，血管生成抑制活性的肉眼定量评估也按照Brooks等(Science，264，569，(1994))提出的技术来测定，对包围在海绵周围的血管的数目进行计数。将血管的数量与用PBS(试验化合物的载体)处理的对照海绵的血管数目并与FGF-2(阳性对照)进行比较。结果如表10所示。
表9对CAM模型的血管抑制(Angiostatic)活性
应该注意天然肝素没有活性。
表10血管抑制活性肉眼定量评估(Brooks)
应该注意天然肝素没有活性。Balb/c小鼠中肝素毒性的评估
20只体重为20g 6周龄雌性Balb/c小鼠(Harlan)随机分组，用肝素钠处理作为参比，用本发明的化合物ST1514处理。处理的时间表是q2dx5型，即间隔2天总共给药5次，皮下给予200μl/小鼠的50mg/kg/10ml和25mg/kg/10ml溶液。
物质溶解如下肝素钠通过将160mg的粉末溶解在4ml的无Ca++-和Mg++-的PBS1xpH7.4中制备溶液；将其再分为243μl的等份并且储藏在-20℃下。在处理时，该溶液用无Ca++-和Mg++-的PBS(Dulbecco，改进配方)1x，pH7.4处理使该物质的终浓度为50mg/kg/10ml和25mg/kg/10ml。
ST 1514通过将160mg的粉末溶解在4ml的无Ca++-和Mg++-的PBS1xpH7.4中制备溶液；将其再分为243μl的等份并且储藏在-20℃下。在处理时，该溶液用无Ca++-和Mg++-的PBS(Dulbecco，改进配方)1x，pH7.4处理，使该物质的终浓度为50mg/kg/10ml和25mg/kg/10ml。
在试验物质末次给药后48小时时采集血样用于全血计数和血液学分析。
血样将小鼠置于密封箱中，其中吹入足够使动物昏迷的CO2。从各动物的眼眶后血管丛(retro-orbital plexus)采集血液(约1ml血液/小鼠)，以0.4ml血液/小鼠的量分配将其在含20μl Vister肝素(5000U/ml)的Eppendorf试管中进行全血计数和血液学分析；并且将相同量的血液分配在含50μl的3.8％柠檬酸钠的Eppendorf试管中以便进行凝血酶原时间测定。在采集血样后，通过颈脱位处死各动物。
样品的数目每只小鼠采集2个血样，用其进行两次全血计数并且制备两个载玻片和血浆样本保存在-20℃下。
全血计数按照操作手册所述的标准方法使用器具(CellAnalyzer 580 A，DELCON)。用稀释器(dilutor)取血样(25nul)并用等渗溶液(PLTA盐水，DELCON)调至10ml的体积(稀释1∶400)。稀释器从这种溶液(称作溶液A)自动取出100μl的样本并使之达到10ml(1∶100稀释)，由此得到溶液B。向溶液A加入3滴Emosol(DELCON)用于溶解血红细胞。这种溶液用于WBC读数。另一方面，用溶液B进行RBC和血小板(PLT)读数。各样本一式两份读数。
所得数据利用ANOVA分析。
用剂量为50mg/kg/10ml和25mg/kg/10ml的肝素钠处理的动物组在接种处存在明显的血肿；这种现象在接受ST1514处理的组中没有出现。研究动物中的尸体解剖揭示了用50mg/kg/10ml和25mg/kg/10ml剂量的肝素钠处理组的肝脏存在异常特征，而在用ST1514处理的组中检测不到这种现象。
与血液学分析有关的数据表明，用剂量为50mg/kg和25mg/kg的肝素钠处理的两个组与对照组相比血红细胞均减少，而在用ST1514处理的组中检测不到这种差异。
用剂量为25mg/kg肝素钠处理的组与对照组比较出现显著的血小板不足。在白细胞的数目上研究处理组与对照组比较无一出现明显差异。
下列实施例进一步举例说明本发明。
实施例1将1g的肝素溶解在12.5ml的NaOH 1N中。在60℃下加热并搅拌该溶液45分钟。通过快速冷却和中和来阻断反应。随后该溶液在70℃、pH7下加热直至环氧化物环完全打开(该反应趋势可以通过NMR控制)。将脱硫酸化样本(在此称作G2999H)溶解在20ml的水中并且冷却至4℃。加入20ml的0.2M NaIO4溶液之后，将该溶液在黑暗中搅拌20小时，通过加入乙二醇中止该反应，通过正切超滤消除盐。将400mg的NaBH4分为若干部分加入到脱盐溶液(30-40ml)。室温下搅拌该溶液3小时，用稀HCl中和并通过正切超滤脱盐。得到710mg的产物，在此称作ST1514。
分子量(MW)11200D，多分散性指数D1.3，脱硫酸化程度1.9(表示为SO3-∶COO-摩尔比)；修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比约为50％。该化合物通过NMR光谱学定性(
图1)。
实施例2-4按照与实施例1相同的方法，除了将碱性溶液分别加热15、30和60分钟之外，得到具有下面特性的化合物-ST1513分子量(MW)12900D，多分散性指数D1.5，脱硫酸化程度2.05(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的(裂解)糖醛残基；-ST1516分子量(MW)12900D，多分散性指数D1.5，脱硫酸化程度1.8(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的(裂解)糖醛残基；-ST1515分子量(MW)9200D，多分散性指D1.5，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为11％环氧基团，27.5％氧化的和还原的(裂解)糖醛残基。
权利要求
1.糖胺聚糖衍生物，特别是脱硫酸化肝素，具有不超过总糖醛酸60％的脱硫酸化程度。
2.权利要求1的衍生物，其是肝素样糖胺聚糖。
3.权利要求1的衍生物，其是修饰的肝素，含有不同程度N-脱硫酸化和任选地后续全部或部分N-乙酰化的葡糖胺残基。
4.权利要求1的衍生物，其具有下式(I) 其中U环可以具有下面的含义 X和X’可以相同或不同，是醛基或-CH2-D基，其中D是羟基或氨基酸、肽或者碳水化合物或寡糖的残基。R和R1，可以相同或不同，是SO3或乙酰残基；n和m，可以相同或不同，可以是1-40；n+m之和是6-40；m∶n的比例是在10∶2-1∶1内。符号 表示用m和n标记的单元是沿多糖链统计分布而不一定是逐一分布的。
5.权利要求4的衍生物，其是部分2-O-脱硫酸化肝素，其分子量(MW)为11200，多分散性指数D为1.3，脱硫酸化程度为1.99(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，被修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比是约50％。
6.权利要求4的衍生物，其是部分2-O-脱硫酸化肝素，其分子量(MW)为12900D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为2.05(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基。
7.权利要求4的衍生物，其是部分2-O-脱硫酸化的肝素，其分子量(MW)为11000D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为1.93(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基。
8.权利要求4的衍生物，其是部分2-O-脱硫酸化的肝素，其分子量(MW)为9200D，多分散性指数D是1.5，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为11％环氧基团，27.5％氧化的和还原的糖醛残基。
9.制备权利要求1-8的衍生物的方法，包括下列步骤a)碱性处理在室温-约100℃、优选50-70℃、更优选在约65℃下进行，其导致艾杜糖醛酸的2位中硫酸根受控百分比的消除并导致环氧基团的形成；并且，如果需要b)在约pH7下，在约50℃-约100℃的温度范围内，优选在70℃下打开该环氧化物环，生成半乳糖醛酸的残基；或，两者择一地c)在约0℃-约30℃的温度范围内，优选在25℃下打开该环氧化物环，生成艾杜糖醛酸的残基；并且，如果需要d)用高碘酸钠氧化二醇，使糖苷环打开且每个被修饰的残基中形成两个醛基；e)所述的醛基还原为一级醇，并且如果需要，D基团转化为非羟基的基团，如权利要求4中不同含义所设想的，f)任选地酸水解得到相应规则序列的低聚物，或者g)用选自下列的酶部分酶促水解裂合酶、肝素酶、乙酰肝素酶，或当量的步骤e)制得的产物，生成寡糖，优选四聚-或八聚-糖，具有由不饱和艾杜糖醛酸组成的非还原末端残基，由N-磺基葡糖胺组成的还原残基和含有至少一个打开的艾杜糖醛酸的残基；或者，两者择一地h)步骤a)所得的化合物，或步骤b)所得的产物通过部分酶水解处理；和并且，如果需要i)步骤a)、b)和e)之一得到的产物经过部分6-O-脱硫酸化；或者，两者择一地j)部分或完全6-脱硫酸化的起始肝素经过步骤a)、b)和e)。
10.按照权利要求9所述的方法得到的部分2-O-脱硫酸化肝素，其中步骤a)是在60℃下进行45分钟并且b)是在70℃、pH7下进行，并且分子量(MW)为11200，多分散性指数D为1.3，脱硫酸化程度为1.99(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比是约50％。
11.按照权利要求9所述的方法得到的部分2-O-脱硫酸化肝素，其中步骤a)是在60℃下进行15分钟并且b)是在70℃、pH7下进行，并且分子量(MW)为12900D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为2.05(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基。
12.按照权利要求9所述的方法得到的部分2-O-脱硫酸化肝素，其中步骤a)是在60℃下进行30分钟并且b)是在70℃、pH7下进行，并且分子量(MW)为11000D，多分散性指数D为1.5，脱硫酸化程度为1.80(表示为SO3-∶COO-摩尔比)，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为5％环氧基团，29％氧化的和还原的糖醛残基。
13.按照权利要求9所述的方法得到的部分2-O-脱硫酸化肝素，其中步骤a)是在60℃下进行60分钟并且b)是在70℃、pH7下进行，并且分子量(MW)为9200D，多分散性指数D为1.5，修饰的糖醛酸占总糖醛酸的百分比为11％环氧基团，27.5％氧化的和还原的糖醛残基。
14.由权利要求4-8的化合物的酸降解得到的具有抗血管生成活性的寡糖的混合物。
15.由权利要求9所示方法的步骤f)获得的具有抗血管生成活性的寡糖的混合物。
16.由权利要求9所示方法的步骤g)获得的具有抗血管生成活性的寡糖的混合物。
17.由权利要求9所示方法的步骤h)获得的具有抗血管生成活性的寡糖的混合物。
18.由权利要求9所示方法的步骤i)获得的具有抗血管生成活性的寡糖的混合物。
19.含有至少一种权利要求1-8和/或10-18所述的化合物作为活性成分并与药学可接受载体和赋形剂混合的药物组合物。
20.权利要求1-8和10-18所述的化合物作为药物的用途。
21.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备具有抗血管生成活性的药物中的用途。
22.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗因异常血管生成引起的病理状态的药物中的用途。
23.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗肿瘤、任选地与转移瘤有关的药物中的用途。
24.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗肿瘤转移的药物中的用途。
25.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗糖尿病性视网膜病的药物中的用途。
26.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗晶状体后纤维组织形成的药物中的用途。
27.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗牛皮癣的药物中的用途。
28.权利要求1-8和10-18或权利要求20所述的化合物在制备用于治疗血管成形术后和冠状搭桥术后的再狭窄的药物中的用途。
全文摘要
本发明描述了部分脱硫酸化的糖胺聚糖，特别是肝素，并且更特别的是式(I)的化合物，其中U、R和R
文档编号A61K31/7024GK1396930SQ01804094
公开日2003年2月12日 申请日期2001年1月24日 优先权日2000年1月25日
发明者B·卡苏, G·托利, A·M·纳吉, G·简尼尼, C·皮萨诺, S·潘克 申请人:希格马托制药工业公司