专利名称：由麦角甾醇衍生物制成的黑色素生成抑制剂和美白剂及含有麦角甾醇衍生物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及麦角甾醇衍生物制成的黑色素生成抑制剂和美白剂及含有麦角甾醇衍生物的组合物。尤其涉及化妆品、医药品、皮肤外用剂和食品。更具体涉及抑制黑素细胞的黑色素生成，美白紫外线照射后晒黑的皮肤，预防、改善和治疗因日晒引发的老人斑、雀斑、红斑等皮肤色素沉积的黑色素生成抑制剂和美白剂及组合物。尤其涉及化妆品、医药品、皮肤外用剂和食品。
背景技术：
中老年人随着年龄的增加，容易产生和增加因阳光照射引发的老人斑、雀斑、红斑等皮肤色素沉积，且不易消失，给中老年人带来烦恼。产生色素沉积的机理虽不清楚，但可能是阳光(特别是紫外线)照射引起表皮细胞中存在的黑素细胞内叫做黑素体的黑色素生成颗粒产生黑色素，并扩散到临近细胞，进而引起色素沉积。
为了使沉积色素的皮肤恢复到正常肤色，开发了很多产品，目前已商品化的有L-抗坏血酸.曲酸和对苯二酚等。
但L-抗坏血酸不稳定，曲酸效果不明显，对苯二酚虽有效，但会引起刺激性和过敏反应等，不适合配成药剂。因此，目前还没有发现能够真正预防和改善色素沉积的物质。
发明的揭示本发明是鉴于上述研究完成的发明，其目的是提供对紫外线照射后晒黑皮肤的美白，预防、改善和治疗因日晒而引起的老人斑、雀斑、红斑等皮肤色素沉积等方面有效的物质及含有该物质的组合物。
为解决上述问题，本发明者进行了专心研究，发现鹿角灵芝的提取物具有抑制黑色素生成的作用；又发现用分离精制方法纯化的具有特定结构的麦角甾醇衍生物具备很强的抑制黑色累生成作用和美白作用，从而完成了本发明。即，本发明为由下式(1) 表示的麦角甾醇衍生物制成的黑色素生成抑制剂和美白剂。
本发明为含有上述式(1)所示的麦角甾醇衍生物的黑色素生成抑制剂和美白剂。
本发明为含有上述式(1)所示的麦角甾醇衍生物的黑色素生成抑制用组合物和美白用组合物。
本发明为含有上述式(1)所示的麦角甾醇衍生物的化妆品，该化妆品可抑制黑色素生成和美白肌肤。
本发明为含有上述式(1)所示的麦角甾醇衍生物的医药品，该医药品可抑制黑色素生成和美白肌肤本发明为含有上述式(1)所示的麦角甾醇衍生物的皮肤外用剂，该皮肤外用剂可抑制黑色素生成和美白肌肤。
本发明为含有上述式(1)所示的麦角甾醇衍生物的黑色素生成抑制用食品和美白用食品。
实施发明的最佳方式以下，对本发明的实施方式进行说明。
本发明所用的下式(1) 表示的麦角甾醇衍生物是从真菌(奇果菌属)中提取的[Takaaki Ishizuka等，Chemi.Pharm.Bull.45(11)1756-1760(1997)中记载]，是已知物质。但，还不了解式(1)所示的麦角甾醇衍生物(以下简称式(1))具有抑制黑色素生成的效果和美白皮肤的效果。
式(1)的衍生物可从菌类分离出来，可采用包含式(1)的衍生物的任何菌，但最好采用鹿角灵芝等灵芝。此外，用化学方法合成也可以。从包含式(1)的菌体中分离出式(1)的衍生物时可用如下方法进行。即，将菌类的子实体或菌丝、胞子等部分细微粉碎后，将它们浸泡在提取溶剂中或在提取溶剂中加热回流。然后，进行过滤和离心分离除去不溶物，再浓缩提取溶液，通过公知的分离精制手段进行分离。
使用常用的提取溶剂进行上述提取，例如，使用甲醇、乙醇等醇类，丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，或单独用水或采用混合溶剂。通过常规方法进行提取，一般提取温度为0～100℃，较好为40～70℃；提取时间为1～168小时，较好为24～72小时。从提取溶液进行分离时，可采用反相色谱法、凝胶过滤柱色谱法和液相色谱法等方法。
以下是提取菌类和分离出式(1)的衍生物的具体例子。
精制例粉碎栽培的鹿角灵芝子实体，40℃用乙醇浸泡提取72小时。过滤除去不溶物后浓缩提取液，用反相色谱进行精制。再用质谱气相联用分析仪和NMR分析此精制物的结构，此化合物为前述式(1)所示的5α，8α-环二氧-(22E，24R)-麦角-6，22-二烯-3β-醇。
本发明所述的式(1)具有后述的抑制黑色素生成作用和美白作用。因此，含有式(1)的本发明的组合物可用于与抑制黑色素生成和美白有关的症状的预防、治疗的化妆品、医药品和食品范围内的各种化妆品、医药品和食品。
本发明的组合物有经口用(内服)和非经口用(外用)的两种形式。经口用时，把本发明的组合物配成医药品或食品等形式。非经口用时，配成化妆品、医药外用品，医药品、皮肤外用剂等形式。
配制含有式(1)的本发明的组合物时，最好使用式(1)的纯品。但可用含有式(1)的植物、菌体类提取物配制。
以下按用途详述含有式(1)的本发明的组合物。
本发明的用途之一的化妆品包括软膏剂、溶液、乳霜、乳液、化妆水、洗剂、凝胶、美容液、粉底霜、填塞物·面膜、口红、粘帖剂、淋浴液等各种皮肤外用剂在内的化妆品。
化妆品的剂型可采用溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、粉末分散系、油液系、凝胶系、软膏系、喷雾剂系、水-油双层系、水-油-粉末三层系等各种剂型。
本发明的化妆品中，式(1)的配比量占化妆品全量的0.001-20重量％，较好是0.01-16重量％，更好是0.1-12重量％，最好是1-10重量％。
本发明的用途之二的医药品可采用经口给药、非经口给药等任何给药方式，适合各种医药制剂形式。医药品制剂包括溶液剂、糖浆剂、注射剂、吸入剂、乳剂等液状剂和片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、吸入剂等固形剂，软膏等皮肤外用剂，栓剂等外用制剂。
医药品制剂中，式(1)的配比量占全量的0.001-30重量％，较好是0.01-20重量％，更好是0.1-10重量％。根据患者的年龄、体重和应用方式、症状及治疗方法决定给药量，一般情况下一天4-10ml左右，一天分1或2-3次给药，但无特殊限制。
本发明的用途之三的食品是指健康食品，包括饼干点心和清凉饮料等饮料、蔬菜或果品加工品、畜肉制品、调味品。其形式有粉末、固形制品、溶液等。根据其目的和制品形式，可适当调整食品中的式(1)的配比量。一般情况下，为口服液等溶液时，30ml中含有0.001-10mg，较好是0.01-5mg，更好是0.15-1mg，为片剂等固形制品时，300mg中含有0.001-10mg，较好是0.01-5mg，更好是0.1-1mg。
在不影响本发明效果的条件下，本发明的化妆品、医药品、食品等组合物中还可添加式(1)之外的常用于化妆品、医药品和食品的其他成分。
例如，化妆品中可添加油性成分、粉末、表面活性剂、保湿剂、增粘剂、低级醇、皮膜剂、紫外线吸收剂、多价螯合剂、有机胺、pH调节剂、药效成分、糖类、防腐剂、维生素类、其他美白剂、防氧化剂、香料和水等。
油性成分包括荷荷芭油、橄榄油、鳄梨油、蓖麻油、椰子油、牛油、硬化油等天然油脂及其衍生物，棕榈蜡、蜜蜡、羊毛脂等蜡类，液体石蜡、大颗粒蜡、三十碳烷等碳氢化合物，硬脂酸等高级脂肪酸类，十六烷醇、硬脂醇等高级醇，辛酸三甘油酯、十四烷酸异丙脂、苹果酸二异硬脂酸酯、二-2-庚基十一烷酸甘油酯、三-2-乙基已酸三羟甲基丙烷、癸二酸-二-2-乙基已酯等酯类，薄荷油、玫瑰油、玫瑰醇等精油类，二甲基聚硅氧烷、十甲基环戊硅氧烷等聚硅氧烷。根据化妆品的形状和剂型，适当选择化妆品中此类油性成分的含有量，一般占化妆品全量的0.1-95重量％。
粉末包括滑石粉、云母、高岭土、二氧化硅、氧化锌、云母钛、氧化钛、氧化铁、尼龙粉末等。
表面活性剂包括聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯等非离子表面活性剂，十六烷酸钠等阴离子表面活性剂，氯化硬脂酸三甲基铵等阳离子表面活性剂，磺基三甲铵乙内酯型两性表面活性剂。
保湿剂包括甘油、1，3-丁二醇、聚乙二醇等。
增粘剂包括羧基乙烯基聚合物、羧甲基纤维素、聚乙烯醇等水溶性高分子，膨润土等粘土矿物。
紫外线吸收剂包括对氨基安息香酸(以下简称PABA)、PABA甘油酯、PABA乙基二羟基丙酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、2-乙氧基乙基-对甲氧基肉桂酸酯、2，4-二羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4-甲基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4-甲基二苯甲酮磺酸盐、尿刊酸乙脂、2-苯基-5-甲基苯并噁嗪酮、4-甲氧基-4-叔丁基二苯甲酰甲烷、对甲氧基肉桂酸乙基己酯等。
多价螯合剂包括EDTA·4Na、柠檬酸等。低级醇包括乙醇等。有机胺类包括乙醇胺和三乙醇胺等。pH调节剂包括乳酸-乳酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠等缓冲液。
药效成分包括泛酸醇乙醚和甘草酸盐等。维生素类包括维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物等。防氧化剂包括生育酚类、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯等。
糖类包括赤藓醇、蔗糖、透明质酸等。防腐剂包括对氨基乙基苯酸、对氨基丁基苯酸、安息香酸钠等。美白剂包括抗坏血酸及其衍生物、曲酸及其衍生物、甘草提取物、氢醌衍生物、谷胱甘酞等。
作为医药品，可添加赋形剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、吸收促进剂、pH调节剂、表面活性剂、稀释剂、载体等添加成分。这些添加成分包括淀粉、乳糖等糖类，硫酸镁，滑石粉，明胶，羟丙基纤维素等纤维素衍生物，大豆油、芝麻油等植物油，动物油或合成油，橡胶、生理盐水等水，乙醇、1，3-丁二醇、聚二烯醇等醇类。另外，可在上述配制化妆品的成分中进行选择。
作为食品，可添加甜味剂、酸味剂、保存剂、香料、着色剂、赋形剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、吸收促进剂、pH调节剂、表面活性剂、稀释剂、载体等添加成分。这些添加成分包括蘑菇提取液、人参提取液、生姜提取液、蜂蜜等各种食品提取液，液状食品，作为糖类的环状低聚糖、还原麦芽糖、海藻糖、乳糖、蔗糖脂肪酸酯等糖类。另外，可在上述配制化妆品和医药品的成分中进行选择。
可用本发明的必须成分和上述任何添加成分的1种或2种以上的成分混合配制本发明的上述组合物，并用常规方法调节任意形态和剂型。
实施例以下通过实施例具体说明本发明。组合物的配比量中没有特殊记载的，表示重量％。
实施例1 抑制黑色素生成效果采用来自小鼠的黑色素生成细胞-B16 10F7黑色瘤细胞(提供方秋田县综合食品研究所)，用培养液稀释上述精制例中精制的式(1)溶液，使此溶液作用于上述细胞后，观测评价黑色素的生成和抑制效果。PBS洗涤70％融合细胞后加胰蛋白酶剥离B-16细胞，再加与蛋白酶等量的含血清培养基(E-MEM+10％FBS)离心(800转/分钟，5分钟)，收集细胞并计细胞数，调节至约104细胞/毫升(E-MEM+10％FBS)。在细胞培养皿(粘附细胞用)中加20μL的灭菌PBS后，再加20μL的式(1)溶液，成倍稀释式(1)溶液(培养液中的最终浓度是100μg/mL-0.0012μg/mL)。作为对照组，同时稀释熊果苷(培养液中的最终浓度是140μg/mL-0.22μg/mL)和甲醇。
在装有稀释液的培养皿中加细胞悬浮液80μL。在37℃的CO2恒温箱内培养72小时后，用显微镜观察细胞的黑色素生成情况。生成黑色素时，除掉培养基，用300μL的1N的NaOH溶解黑色素，在470nm测定紫外线吸收，评价黑色素的生成量。甲醇溶剂的反应值定为100％时，变更式(1)和熊果苷的用量，测出最低浓度下抑制黑色素的浓度，其结果如表1所示。通过式(1)的显微镜照片也能观察出，式(1)比熊果苷更能抑制B-16细胞的黑色，具有很高的抑制黑色素生成效果和美白效果。
表1
如表1所示，式(1)对黑色瘤B-16的抑制黑色素生成效果比作为黑色素生成抑制剂的熊果苷还好。
实施例2-3，比较例1-2 美白效果的测定成分 配比量(重量％)(醇相)乙醇 25.0聚氧乙烯(25摩尔) 2.0硬化蓖麻油防氧化剂 适量防腐剂适量香料 适量试验化合物(表2有记载) 表2记载的量(水相)甘油 5.0六偏磷酸钠适量离子交换水剩余量制造方法调制水相和醇相后，相互混合配成溶液。
试验方法在夏季上午11点到下午1点的2小时之间，让试验者2天内晒太阳共计4小时。以被晒试验者的上腕内侧皮肤为对象，被太阳晒黑的第5天开始每天朝晚1次，共5周涂抹上述乳剂。
评价方法用以下判断标准评价使用后的试验结果。
判断标准显著色素沉积几乎没有有效色素沉积变得非常淡微效色素沉积变淡无效没变化判断◎试验者中16人以上是有效以上的结果。
○试验者中11-15人是有效以上的结果。
△试验者中6-10人是有效以上的结果。
×试验者中5人以下是有效以上的结果。评价结果如表2。
表2
如表2所示，含有式(1)的乳剂可防止黑色素的沉积，具有美白作用。另外，没加试验化合物的(比较例1)和添加了对苯二酚的(比较例2)的组合物没有效果。
以下是按各种配方和常用方法配制本发明的实施例。任何实施例都有明显的抑制黑色素生成效果和美白效果。
实施例4 乳霜成分 配比量(重量％)硬脂酸6.0甘油一硬脂酸酯2.0聚氧乙烯(20摩尔) 2.0山梨糖醇酐一硬脂酸酯1，3-丁二醇 10.0式(1) 5.0肉豆蔻酸异丙酯12.0三十碳烷 5.0液体石蜡 3.0维生素E 0.05亚硫酸氢钠适量防腐剂适量香料 适量离子交换水剩余量实施例5 乳液成分 配比量(重量％)硬脂醇2.0
三十碳烷5.0液体石蜡3.0三辛酸三羟甲基丙烷 2.0三辛酸甘油酯5.0甘油一油酸酯2.0聚氧乙烯(20摩尔)1.0山梨糖醇酐一油酸酯维生素C 0.1防腐剂 适量式(1) 8.0对氨基安息香酸 0.1香料适量亚硫酸氢钠 适量甘油5.0羧基乙烯基聚合物0.2三乙醇胺1.0精制水 剩余量实施例6 凝胶成分配比量(重量％)二丙二醇10.0PEG1500 5.0羧基乙烯基聚合物1.0乙醇2.0聚氧乙烯(50摩尔)油醇醚 2.0氢氧化钾0.15式(1) 1.02-羟基-4-甲氧基二苯甲酮磺酸钠 0.05防腐剂 适量EDTA·3Na 适量香料适量离子交换水 剩余量实施例7 美容液成分 配比量(重量％)甘油 5.0二丙二醇 10.0乙醇 10.0羧基乙烯基聚合物 0.2透明质酸钠 0.5氢氧化钾 0.1聚氧乙烯(20摩尔)山梨糖醇酐一油酸酯 0.5聚氧乙烯(20)辛基十二烷醇 1.0橄榄油 0.15胎盘提取物 0.1维生素E·乙酸酯0.1式(1) 3.0亚硫酸氢钠 适量防腐剂 适量EDTA·3Na 适量香料 适量精制水 剩余量实施例8 填塞物成分配比量(重量％)聚乙酸乙烯酯乳浊液 15.0聚乙烯醇10.0二丙二醇5.0山梨糖醇5.0乙酸生育酚 0.2橄榄油 1.0三十碳烷3.0聚氧乙烯(20摩尔)山梨糖醇酐一油酸酯 1.5氧化钛 5.0滑石粉 10.0乙醇7.0式(1) 3.0
防腐剂 适量香料 适量精制水 剩余量实施例9 化妆水成分 配比量(重量％)1，3-丁二醇 6.0甘油 5.0透明质酸钠 0.3聚氧乙烯(20摩尔)山梨糖醇酐一硬酯酸酯 1.5聚氧乙烯(20)辛基十二烷醇 0.5乙醇 15.0式(1)4.0防腐剂 适量香料 适量精制水 剩余量实施例10 软膏成分 配比量(重量％)聚氧乙烯(30摩尔)硬化蓖麻油2.0甘油一硬脂酸酯10.0三十碳烷 10.0凡士林40.0鲸蜡醇6.0式(1) 5.01，3-丁二醇 10.0离子交换水剩余量防腐剂适量香料 适量实施例11 粉底霜成分 配比量(重量％)滑石粉3.0氧化钛5.0氧化铁红 0.5
氧化铁黄 1.5氧化铁黑 0.1膨润土0.5聚氧乙烯(20摩尔)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0三乙醇胺 1.0甘油 5.0丙二醇5.0硬脂酸2.0一硬脂酸甘油酯10.0液体石蜡 10.0二甲基聚硅氧烷5.0聚氧烯烃改性的聚硅氧烷3.0式(1) 3.0精制水剩余量防腐剂适量香料 适量实施例12 健康口服液成分 配比量(30mL中)式(1) 0.085mg人参提取液50mg冬虫夏草提取液100mg生姜提取液300mg蜂蜜 150mg环状低聚糖300mg甜味剂适量酸味剂适量保存剂适量香料 适量实施例13 健康口服液成分 配比量(30mL中)
式(1) 0.5mg人参提取液 50mg冬虫夏草提取液 100mg生姜提取液 300mg蜂蜜 150mg环状低聚糖 300mg甜味剂 适量酸味剂 适量保存剂 适量香料 适量实施例14 健康食品片成分 配比量(300mg中)式(1) 0.025mg还原麦芽糖 87.8mg海藻糖 41.2mg乳糖 16.5mg蔗糖脂肪酸酯 6.2mg糊精 148.275mg实施例15 健康食品片成分 配比量(300mg中)式(1) 0.5mg还原麦芽糖 87.8mg海藻糖 41.2mg乳糖 16.5mg蔗糖脂肪酸酯 6.2mg糊精 147.8mg产业上利用的可能性如上所述，本发明能得到具有抑制黑色素生成和美白作用的物质。此外，能够获得具有抑制黑色素生成和美白作用，对紫外线照射后晒黑的皮肤美白，对晒黑引起的老人斑、雀斑、红斑等皮肤色素沉积的预防、改善、治疗有明显效果的化妆品、医药品、皮肤外用剂和食品。
权利要求书(按照条约第19条的修改)1.黑色素生成抑制剂，其特征在于，由下式(1) 表示的麦角甾醇衍生物制成。
2.美白剂，其特征在于，由式(1)所示的麦角甾醇衍生物制成。
3.黑色素生成抑制剂，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
4.美白剂，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
5.黑色素生成抑制用组合物，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
6.美白用组合物，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
7.化妆品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
8.如权利要求7所述的化妆品，其特征还在于，用于抑制黑色素的生成。
9.如权利要求7所述的化妆品，其特征还在于，用于美白。
10.医药品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
11.如权利要求10所述的医药品，其特征还在于，用于抑制黑色素的生成。
12.如权利要求10所述的医药品，其特征还在于，用于美白。
13.皮肤外用剂，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
14.如权利要求13所述的皮肤外用剂，其特征还在于，用于抑制黑色素的生成。
15.如权利要求13所述的皮肤外用剂，其特征还在于，用于美白。
16.黑色素生成抑制用食品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
17.美白用食品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
权利要求
1.黑色素生成抑制剂，其特征在于，由下式(1) 表示的麦角甾醇衍生物制成。
2.美白剂，其特征在于，由式(1)所示的麦角甾醇衍生物制成。
3.黑色素生成抑制剂，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
4.美白剂，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
5.黑色素生成抑制用组合物，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
6.美白用组合物，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
7.化妆品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
8.如权利要求7所述的化妆品，其特征还在于，用于抑制黑色素的生成。
9.如权利要求7所述的化妆品，其特征还在于，用于美白。
10.医药品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
11.如权利要求10所述的医药品，其特征还在于，用于抑制黑色素的生成。
12.如权利要求10所述的医药品，其特征还在于，用于美白。
13.皮肤外用剂，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
14.如权利要求13所述的皮肤外用剂，其特征还在于，用于抑制黑色素的生成。
15.如权利要求13所述的皮肤外用剂，其特征还在于，用于美白。
16.黑色素生成抑制用食品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
17.美白用食品，其特征在于，含有式(1)所示的麦角甾醇衍生物。
全文摘要
本发明提供了对紫外线照射后晒黑皮肤的美白，对晒黑引起的老人斑、雀斑、红斑等皮肤色素沉积的预防、改善、治疗有明显效果的物质，以及含有该物质的组合物。提供了由上式(1):表示的麦角甾醇衍生物制成的黑色素生成抑制剂和美白剂。含有式(1)表示的麦角甾醇衍生物的黑色素生成抑制剂和美白剂。含有式(1)表示的麦角甾醇衍生物的黑色素生成抑制用组合物和美白用组合物。含有式(1)表示的麦角甾醇衍生物的化妆品、医药品和皮肤外用剂。含有式(1)表示的麦角甾醇衍生物的黑色素生成抑制用食品和美白食品。
文档编号A61K8/00GK1468086SQ01817014
公开日2004年1月14日 申请日期2001年10月10日 优先权日2000年10月11日
发明者坂本贤二, 畠惠司 申请人:坂本生物科技有限公司, 秋田县