细菌菌株，加工过的植物提取物，含有它们的组合物，其制备方法及其治疗和工业应用的制作方法

专利名称：细菌菌株，加工过的植物提取物，含有它们的组合物，其制备方法及其治疗和工业应用的制作方法
技术领域：
和背景本发明涉及(i)一种非致病性益生性微生物及其益生/治疗用途；(ii)含有由至少一种植物来源材料提取物制备的挥发性级份(VF)的水溶液的制剂，及其治疗用途；(iii)一种由所述植物来源材料生产所述制剂的方法；(iv)含有本发明的非致病性益生性微生物和/或其他益生性微生物和本发明的制剂的益生性组合物，及其益生/治疗用途；(v)一种用于工业应用的组合物，含有本发明的制剂和具有工业应用性的微生物；和(vi)应用上述后一种组合物的工业方法和装置。
在正常条件下，胃肠(GI)道微生物区系对个体的健康和状况起着重要作用。众所周知，微生物区系是微生物的复杂的和多样性的群体，该群体可能对个体具有有益和有害作用。在正常妊娠条件下，子宫中的胎儿是无菌的，不过，在出生期间，在通过阴道时胎儿会获得微生物，导致胃肠道微生物区系的形成。最终稳定在胃肠中的固有胃肠微生物区系是非常复杂的集合体，它具有超过1000种不同类型的微生物，包括大约400种不同类型的细菌[Fuller R.J.AppliedBacteriology 66365-378(1989)]。胃肠道微生物区系的组成是由宿主和微生物因素决定的，尽管有很多细菌能够在胃肠道中存活并生长，但是有很多种细菌不能存活和生长。另外，存活的生物必须避免蠕动作用，这种作用通常会通过食物将所述细菌冲洗掉。这一目的可以通过能够通过与胃肠壁结合而固定它自己的微生物而实现，和/或通过以超过主动清除速度的速度繁殖而实现。
一般，胃肠道微生物区系的存在是共生性的，因为所述微生物区系不仅有助于分解某些无法消化的食物，而且还能保护个体免受由病原体导致的感染。后一种现象业已用‘细菌拮抗性’，‘细菌干扰’，‘屏障效应’，‘建群抗性’，‘竞争排斥’等名词进行过表述。
胃肠道保护性微生物区系是非常稳定的。不过，它在少年、老年和受到危害的患者体内不那么有效。另外，它可能受到某些饮食和环境因素的影响，三种最重要的因素是过度洁净、抗生素治疗和紧张。
在胃肠道微生物区系的平衡受到负面影响的条件下，益生菌在恢复胃肠道微生物区系以及使得个体宿主恢复正常方面具有潜在价值。
益生菌是一类微生物，定义为能对动物和人类宿主产生有利影响的活的微生物。所述有益作用包括改善肠道微生物区系的微生物平衡或改善固有微生物区系的特性。益生菌的所述有益作用可以通过对特定类型生物的直接拮抗作用介导，通过对其代谢的影响或通过刺激免疫力导致所述生物数量减少。益生菌可以通过产生抗菌化合物，通过竞争营养或竞争附着位点抑制不需要的生物的存活数量。另外，益生菌能通过提高或降低酶活性改变微生物代谢，或通过提高抗体含量或提高巨噬细胞活性刺激免疫系统。
WO95/16461披露了一种厌氧细菌的益生性组合物，它能有效控制或抑制沙门氏菌在家畜体内的建群。该益生性组合物包含29种在生物学上基本上为纯的细菌，特别是大肠杆菌的群体或培养物。不过，在该PCT公开文献中所披露的益生性组合物对病原体的抑制作用需要大量细菌菌株的联合作用。
WO97/35596披露了施用通过混合含有路氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和婴儿双歧杆菌的粉末和一种液体获得的新制备的益生性混合物。据说该混合物能有效预防人类的感染性腹泻或由抗生素治疗所导致的腹泻。不过，冷冻干燥的活的细菌是复苏状态的。在施用之前必须使所述微生物湿润，以便恢复其存活力，这样做是不利的，因为正常情况下很多细菌在再水合过程中不能存活。另外，存活下来的生物不是马上就具有代谢活性，并且在胃的极端、酸性条件下不能存活。另外，在给腹泻受体施用时，它们从胃肠中排出的速度超过了恢复存活力的速度，导致少有或没有有效作用。
通过其制剂保存益生性生物的存活力和保留其活性是很多文献的主题。WO98/26787披露了通过提供β-葡聚糖，并选择性地与益生元和/或益生微生物联合，增强动物胃肠道中乳酸生产微生物，优选乳杆菌属的存留群体。
WO97/34591还披露了通过给个体提供选择性改性的或未改性的淀粉或其混合物在个体胃肠道的选定部位增强微生物的存留群体或抑制不需要的存留群体，所述改性或未改性淀粉起着一种或多种益生性微生物的载体作用，并且作为所述微生物的生长或维持培养基。所述益生元件以一种方式结合在所述载体上，以便在通过大肠或胃肠道的其他部位时保护所述微生物。
微生物被用于多种工业方法中。所述方法可以划分成连续方法和批量方法。在连续方法中，如连续有氧或厌氧发酵生产线，被用于生产多种发酵产品，例如，包括乙醇和甲醇，将可发酵的原材料连续输送到所述生产线上，并且以受控制的方式从所述生产线上连续收集发酵产品，以便在整个生产过程中所述微生物群体在所述生产线上得以维持。在批量方法中，例如，但不限于批量有氧或厌氧发酵，在漏油中对油的降解等，将可发酵的原材料与微生物群体混合，以便进行发酵。在某些场合下，在连续发酵和批量发酵方法中都需要用相关微生物的大量的和活的群体开始或恢复所述过程。例如，在生物降解油时，优选用假单胞菌或产碱菌微生物的尽可能大的群体开始所述过程，例如，以便减少完成所述油生物降解的时间。在使用富集了微生物的过滤器降解有机烟雾或挥发性物质时，其结果是一种连续过程，其中，将污染性化合物降解成无害的化合物。不过，存在于所述过滤器上的微生物的存活取决于有机烟雾或挥发性物质的连续供应。不过，在某些场合下，有机烟雾或挥发性物质的供应是不连续的，其结果是失去了所述微生物。在这种情况下，必须在短时间内恢复所述过滤器中有效量的存活微生物，以便能马上恢复功能性过滤器。
因此，普遍认为需要，并且高度优选一种制剂，在该制剂中，包括益生性微生物和可用于多种工业应用的微生物在内的微生物可以长时间保持存活力并且呈代谢活性形式。
在将本发明付诸实施时，业已意外地发现源于大肠杆菌的非致病性益生性微生物的单一菌种本身就能够恢复人和多种哺乳动物和禽类的正常胃肠道菌群。业已惊奇地发现，这种微生物，以及其他微生物可以在包括各种植物提取物的挥发性级份的水溶液的制剂中以存活和代谢活性形式长时间保存。业已发现包含悬浮在所述制剂中的益生生物的益生性组合物可以有效治疗和预防各种胃肠道疾病。另外还意外地发现所述制剂本身能够有效作为哺乳动物和禽类的体重增加增强剂和作为免疫刺激剂。
本发明概述根据本发明的一个方面，提供了ATCC保藏号为202226(DSM12799)的大肠杆菌菌株BU-230-98。
根据本发明的另一方面，提供了一种含有ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的存活大肠杆菌菌株BU-230-98的益生性组合物和用于维持所述大肠杆菌菌株的存活力的制剂。所述益生性组合物优选还包含至少一种香味剂，所述制剂优选包含植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，它是通过在减压条件下，在优选不超过38℃的水浴温度下对植物(例如，甜菜、莳萝、欧芹或葡萄)提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
本发明的益生性组合物可用于预防或治疗胃肠感染或失调，保持或恢复正常的胃肠道微生物区系，预防或治疗腹泻，预防或治疗由肠道病原体，如革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌导致的胃肠感染，预防或治疗胃肠沙门氏菌感染，预防或治疗由例如，艰难梭菌，沙门氏菌属，特别是志贺氏沙门氏菌，弯曲杆菌属，大肠杆菌，变形菌属，假单胞菌属或梭菌属导致的感染性腹泻，由抗生素治疗、放疗或化疗所导致的慢性腹泻或腹泻，和/或用于使胃肠道的生理学活性正常化。
根据本发明的另一方面，提供了含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂，所述挥发性级份是通过在减压条件下在不超过38℃的水浴温度下通过对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。所述植物提取物优选可以从选自植物叶片、茎、根和果实的植物器官中获得。所述植物可以是蔬菜，如大豆、苜蓿、大蒜、甜菜和甘蓝或草本植物，如欧芹、薄荷和莳萝。所述制剂还包含蜂箱产品，例如，但不限于蜂胶。所述制剂可以用作兽医饲料或食品添加剂，用于增强受体动物的体重增加。正如在本文中进一步披露的，还可将其用于保存存活细菌。
因此，根据本发明的另一方面，提供了一种制备植物的挥发性级份的方法，包括以下步骤(a)研磨植物来源的材料，得到一种植物生物物质；(b)将所述植物生物物质与水混合，并且在环境温度下搅拌；(c)在减压条件下，并且在不超过38℃的水浴温度下对步骤(b)中所获得的混合物进行蒸汽蒸馏；和(d)收集通过所述蒸汽蒸馏所获得的挥发性级份。所述减压优选为5-10毫巴。可以将该制剂用作食品添加剂，饲料添加剂，并且具有意想不到的治疗作用，以及有利的细菌保存特性。还披露了含有植物的挥发性级份的治疗制剂，该制剂可以通过将植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)与生理学或兽医可接受的添加剂、载体或稀释剂混合而制备。所述挥发性级份优选是在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下通过对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备。
因此，根据本发明的另一方面，提供了一种益生性组合物，该组合物包含(a)有效量的至少一种存活的益生性微生物，该微生物在胃肠道中具有有益的生物学或治疗活性；和(b)植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，该挥发性级份优选是按本文所披露的方法制备的。所述益生性微生物可以是大肠杆菌，优选是ATCC保藏号为202226(DSM12799)的菌株BU-230-98，该微生物除了可用于治疗或预防消化不良症状，用于增强患有免疫障碍的患者的免疫应答，例如，由免疫应答抑制治疗导致的疾病之外或者作为替代方案，还可将其用于治疗或预防上述任何失调/病理/疾病/综合症。
根据本发明的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包含(a)至少一种微生物，如埃希氏菌，产碱菌，节杆菌，双歧杆菌，乳杆菌，乳球菌，亚硝化单胞菌和假单胞菌；和(b)植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保存至少2个月，优选至少3-6个月，更优选至少6-12个月或更长时间。
根据本发明的另一方面，提供了一种生长ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的大肠杆菌菌株BU-230-98的方法，该方法包括以下步骤将ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的大肠杆菌菌株BU-230-98的起始培养物接种到生长培养基中，并且将所述大肠杆菌菌株生长到在650nm下的光学密度为15-30。
根据本发明的另一方面，提供了一种生产益生性组合物的方法，该方法包括以下步骤将ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的存活大肠杆菌菌株BU-230-98悬浮在一种制剂中，以便保持所述大肠杆菌菌株的存活力。所述制剂优选包含植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，所述挥发性级份优选是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏制备的，例如，所述植物提取物是从选自诸如大豆、欧芹、薄荷、莳萝、苜蓿、大蒜、甜菜或甘蓝的蔬菜或草本植物的叶片、茎、根和果实的植物器官获得的。
根据另一方面，本发明提供了一种制备益生性组合物的方法，该方法包括以下步骤将有效量的、在胃肠道中具有有益的生物学或治疗活性的至少一种存活的益生性微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中。
根据本发明的另一方面，提供了一种制备含有存活微生物的组合物的方法，该方法包括以下步骤将至少一种微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便能在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。例如，所述微生物可以是埃希氏菌，产碱菌，节杆菌，双歧杆菌，乳杆菌，乳球菌，亚硝化单胞菌或假单胞菌。
根据本发明的另一方面，提供了一种微生物分配器，该分配器包含一个储存器和一个与该储存器连接的计量器，该储存器装有存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中的至少一种微生物，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种对生物进行生物控制的方法，该方法包括以下步骤将至少一种能够对所述生物进行生物控制的存活微生物喷洒在流行区域，所述至少一种存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种清除油污染的方法，该方法包括以下步骤将至少一种能降解油的微生物喷洒在受污染的区域，所述至少一种存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种恢复生物过滤器中的有机烟雾降解微生物群体的方法，该方法包括以下步骤将至少一种能降解有机烟雾的存活微生物分配在所述过滤器上，所述至少一种存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种制备用于发酵过程的发酵剂的方法，该方法包括以下步骤生长足够数量的发酵剂微生物，并且将所述发酵剂微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
附图的简述在本文中，仅以举例方式结合附图对本发明进行说明。下面具体详细参见附图，应当指出的是，图中所示出的细节是举例性质的，并且仅仅是用于对本发明的优选实施方案进行说明性讨论的，提供这样的附图，是为了提供对本发明的原理和概念性特征进行最有用的和最便于理解的说明。就此而言，对本发明结构细节的显示不超出功能性理解本发明的需要，对所述附图的说明，使本领域技术人员可以了解能够以若干种形式实施本发明。
在附图中

图1是本发明分配器的示意图。
发明详述本发明是(i)一种非致病性益生性微生物及其益生/治疗用途；(ii)含有由至少一种植物来源材料提取物制备的挥发性级份(VF)的水溶液的制剂，及其治疗用途；(iii)一种由所述植物来源材料生产所述制剂的方法；(iv)含有本发明的非致病性益生性微生物和/或其他益生性微生物和本发明的制剂的益生性组合物，及其益生/治疗用途；(v)一种用于工业用途的组合物，含有本发明的制剂和具有工业应用性的微生物；和(vi)应用上述后一种组合物的工业方法和装置。
参考附图和附图的说明可以更好地理解本发明的原理和操作。
在详细解释本发明的至少一种实施方案之前，必须理解的是，本发明的应用不并局限于在下面的说明书或实施例的说明中所提供的细节。本发明可以具有其他实施方案，或者以各种方式实施或执行。另外，应当理解的是，本文所使用的措辞和术语是用于说明目的的，而不应当被认为是限定性的。
在一方面，本发明涉及一种益生性微生物，它是源于大肠杆菌的非致病性细菌，例如，在胃肠道中具有有益的生理学和/或治疗活性，并且在ATCC的保藏号为№202226，在DSMZ的保藏号为No.12799。
“益生性”在本文中被用作形容词，用于表示具有抑制至少一种病原体生长的特性的分离的细菌。在本文中所使用的抑制试验是在固体培养基上进行的体外试验，其中，将候选分离细菌的培养上清液涂在所述固体培养基的表面上，观察其抑制病原体生长的特性。通常，将用候选益生性菌株的培养上清液浸泡过的纸片放置在接种了所述病原体的琼脂平板表面上。益生性细菌上清液导致了一圈透明的琼脂或减弱了的生长密度，表明抑制了所述纸片附近的病原体。有其他抑制试验可以使用或可以设计，包括体外或体内直接生长竞争试验，它能产生一组类似于本文所披露的益生性细菌。通常上述任何一种试验所鉴定的细菌菌株都属于益生性细菌的类型，正如在本文中所使用的该术语。
本发明的益生性细菌可以用作食品或饲料添加剂，以便提供添加了ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的存活大肠杆菌菌株BU-230-98的食品或饲料。本发明的食品还可以包括至少一种乳来源物质，并且可以选自干酪和酸奶。
本发明还涉及含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂，所述挥发性级份是通过在减压条件下在通常不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸馏而制备的。
用于获得所述挥发性级份的植物材料可以从任何合适的植物部分获得，如果实、叶片、茎或根。很多植物都适合用作所述挥发性级分的来源，例如苹果、柑橘、大豆、甜菜、甘蓝、大蒜和苜蓿，以及草本植物，如欧芹、薄荷和莳萝。本发明的制剂还可以选择性地含有合适数量的农产品，如蜂蜜、蜂胶或其他蜂箱产品的挥发性级份，所述级份可以用与本文所披露的用于从植物提取物中获得挥发性级份相同的方法制备。
正如在下面的实施例中将要更详细地说明的，可以将所述制剂本身用作食品/饲料添加剂。本发明人业已发现，该制剂具有增强体重增加的活性，并且它构成了本发明的一个方面。根据本发明该方面的一种具体实施方案，所述动物体重增加增强制剂或饲料添加剂包含蒸馏水和苜蓿、大豆、甜菜和莳萝的挥发性级份，所述挥发性级份的体积比优选为2∶8∶1∶4。另外，本发明的制剂或饲料添加剂包含蒸馏水和每100份水中所含有的各1份的胡萝卜、甜菜、莳萝和葡萄的挥发性级份。作为另一种替代性方案，本发明的制剂或食品添加剂包含蒸馏水和每100份水中所含有的各1份甜菜、莳萝和欧芹的挥发性级份。
在另一方面，本发明涉及一种组合物，该组合物含有本发明的上述制剂和至少一种存活微生物，所述微生物可以是在诸如人和/或动物的胃肠道中具有治疗或有益生物学活性的益生性生物，以便提供一种益生性组合物，或者是具有工业应用价值的生物，以便提供具有工业应用性的组合物。
本发明的益生性和工业组合物的特殊优点源于以下事实，即它们是液体制剂。在生物学活性条件下，所述制剂还可用作活细菌的支持性培养基，冷冻干燥的制剂则不同，其中，所述细菌是处在厌氧条件下。结果，举例来说，本发明的益生性组合物在口服之后马上就起作用，这种作用始于胃肠道的上部，大部分肠道病原体的主要作用都是在这里发生的，导致不良的胃肠综合症的出现。本发明的益生性组合物还可用作体重增加制剂或食品/饲料添加剂。类似地，可以将本发明的工业组合物用于有效恢复具有工业应用性的微生物群体。
因此，应当指出的是，对于益生性用途来说，除了属于菌株BC-230-98(ATCC保藏号202226，同样以12799的编号在DSM保藏)的其他益性细菌可以与本发明的植物材料来源的制剂一起使用。所述益生性细菌具有非常广谱的拮抗活性。它们也与大部分肠道病原体属于相同的系统发育类型，并且拥有相同的存活系统。因此，肠道病原体的抑制和排出可以包括多种不同的机制，例如拮抗物质的分泌，对养分的竞争利用和对粘附受体的竞争。因此，符合上述标准的任何非致病性细菌都可用于本发明的益生性组合物中。
根据本发明的另一方面，可将本发明的益生性组合物可用于预防或治疗胃肠感染。术语‘胃肠感染’被用于表示由肠道病原体导致的任何感染，包括但不限于革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌。为了改善胃肠道的总体平衡和健康，本发明的制剂和益生性组合物还可用于预防由酵母、病毒和原生动物引起的胃肠感染。
对本文来说，术语‘治疗有效量’或‘有效量’是由本领域公知的因素确定的用量。所述用量必须足以有效恢复胃肠道微生物区系，从而导致胃肠道功能的正常化。
在一种具体实施方案中，用于预防胃肠感染发生的益生性组合物包含本发明的制剂，该制剂是用蒸馏水和体积比为例如5∶1∶5∶15∶1的本文所定义的苜蓿、大豆、甜菜、莳萝和薄荷的挥发性级份，以及治疗有效量的益生性细菌，如ATCC保藏号为202226的大肠杆菌(与DSM 12799相同)或任何其他益生性细菌制备的。
胃肠感染的一个具体例子是由沙门氏菌属导致的感染，并且本发明特别有利于预防或治疗由沙门氏菌属导致的胃肠感染。
另外，本发明的食品添加剂或制剂可以单独或与有效量的诸如ATCC保藏号为202226的大肠杆菌(与DSM 12799相同)联合用于治疗或预防感染性腹泻、慢性腹泻或由抗生素或化疗导致的腹泻。
根据本发明的另一种具体实施方案，所述用于治疗腹泻的益生性组合物可以含有蒸馏水和体积比为例如5∶1∶5∶15∶1的苜蓿、大豆、甜菜、莳萝和薄荷的挥发性级份，以及治疗有效量的ATCC保藏号202226(DSMZ 12799)。
所述感染性腹泻可以由多种因素引起，例如，由选自艰难梭菌，沙门氏菌属，特别是志贺氏沙门氏菌，弯曲杆菌属，大肠杆菌，变形菌属，假单胞菌属，梭菌属，肠葡萄球菌属。以上只是多种感染剂中的少数几种。
另外，可以将本发明的益生性组合物用于有效恢复需要这种治疗的对象体内的胃肠道微生物区系，这种治疗会导致胃肠道功能的正常化。例如，所述组合物可以包含蒸馏水和苜蓿、大豆、甜菜、莳萝、薄荷、欧芹和甘蓝的挥发性级份，挥发性级份的比例优选为例如1∶5∶5∶2∶2∶1，以及治疗有效量的ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的益生性细菌。
含有至少一种在诸如胃肠道的部位具有治疗作用的益生性细菌的本发明益生性组合物的其他用途包括缓解患有不耐受乳糖的患者的乳糖不耐受性，治疗小肠结肠炎，治疗便秘，用于降低血液中的胆甾醇含量，用于治疗消化不良症状，和/或用于刺激患有免疫系统障碍的对象的免疫系统，所述障碍可能是由免疫抑制治疗所导致的免疫障碍。
在另一方面，本发明涉及一种用于制备植物提取物的挥发性级份的方法，该方法包括以下步骤(a)研磨植物来源材料，以便获得植物生物物质；(b)优选以3份水和1份植物生物物质的重量比混合在步骤(a)中获得的植物生物物质和水，并且在环境温度下搅拌该混合物至少2小时；(c)在减压条件下，并且在优选在不超过38℃的水浴温度下蒸馏在步骤(b)中获得的混合物；和(d)收集通过蒸汽蒸馏所获得的挥发性级份，可以用合适的缓冲液进一步稀释所述级份。
本发明的挥发性级份可以与水混合，以便得到本发明的食品/饲料添加剂或制剂。还可以通过混合用本发明方法获得的一种以上的植物挥发性级份，制备本发明的食品/饲料添加剂或制剂。该混合物可以进一步与水混合。
所述挥发性级份可以用任何合适的水果、蔬菜，植物的叶、茎或根制备。例如，所述植物可以是苹果、柑橘果实、大豆、甜菜、大蒜、甘蓝或苜蓿，或草本植物，如欧芹、薄荷或莳萝。应当指出的是，如果合适的话，所述制剂还可以含有来自农产品，如蜂蜜或蜂胶或其他蜂箱产品的挥发性级份。所述挥发性级份可以用制备植物提取物挥发性级份的相同的方法制备。
根据本发明的所述方法，所述蒸馏步骤优选是在5-10毫巴的减压条件下进行的。
正如上文所指出的，本发明的食品/饲料添加剂或制剂还可以与至少一种益生性或工业制剂组合，以便提供本发明的益生性或工业组合物。因此，本发明的制备方法还可以包括将至少一种存活的益生性或工业微生物悬浮在在上述步骤(d)中获得的挥发性级份或悬浮在按上述方法获得的挥发性级份的混合物中的步骤。
根据本发明的一种具体方法，所述悬浮的益生性微生物可以是本发明的新型细菌，该细菌源于由ATCC保藏的保藏号为202226的大肠杆菌(在DSM的保藏号为12799)。
最后，本发明涉及将植物提取物的挥发性级份(VF)用于制备食品/饲料添加剂的用途，其中，所述VF是通过在不超过38℃的水浴温度下蒸馏所述植物提取物或诸如蜂蜜或蜂胶的农产品而制备的。
本发明的另一方面包括一种制备含有存活微生物的组合物的方法。该方法是通过将至少一种微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中实现的。所述制剂是经过选择的，以便能在室温下将所述微生物的存活力保持至少2个月。所选择的微生物可以是益生性的或者具有工业用途。可以在本发明的制剂中维持的生物包括埃希氏菌，产碱菌，节杆菌，双歧杆菌，乳杆菌，乳球菌，亚硝化单胞菌和假单胞菌。
如图1所示，本发明的另一方面提供了一种微生物分配器10。分配器10包含一个储存器12和一个与它连接的计量器14。储存器12容纳有在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中的至少一种微生物。所述制剂是经过选择的，以便在室温下将所述微生物的存活力保持至少2个月。容器12可以是制冷的，例如制冷到大约2-20℃，优选制冷到大约4℃。分配器10可以是机载分配器，以便可以分配害虫控制生物制剂。所述分配器可以是手持式的。在任何情况下，都可以将所述分配器设计成自动分配预定体积的溶液，例如定期分配。为此，分配器10可以包含一个可编程的或预设的控制机构16，阀18等。
因此，根据另一方面，本发明提供了一种生物的生物控制方法，该方法是通过将至少一种能够对所述生物进行生物控制的存活微生物喷洒在流行区域而实现的。所述存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种清除油污染的方法，该方法是通过将诸如假单胞菌的至少一种能降解油的存活微生物喷洒在受污染的区域。所述存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种恢复生物过滤器中的有机烟雾降解微生物群体的方法，包括将诸如假单胞菌、亚硝化单胞菌或节杆菌的能降解有机油的至少一种存活微生物分配到所述过滤器上。所述存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
根据本发明的另一方面，提供了一种制备发酵过程的发酵剂的方法，包括生长足够数量的发酵剂微生物，如乳球菌、埃希氏菌、双歧杆菌、乳杆菌、乳球菌或假单胞菌，并且将所述发酵剂微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
通过审阅以下实施例，本领域普通技术人员可以了解本发明的其他目的、优点和新的特征，所述实施例不是用于限定目的的。另外，上述本发明的各种实施方案和方面的每一个，以及下面的权利要求部分都可以从以下实施例中找到实验依据。
实施例参见以下的实施例，这些实施例与上述说明书一起以非限定方式对本发明进行了说明。
实施例1制备植物提取物或来自农产品的提取物的“挥发性级份”用自来水将从市场上购买的新鲜蔬菜充分洗净，切碎，并且在商用搅拌器中磨成细粉。以3份水和1份蔬菜生物物质的重量比将蒸馏水添加到所述蔬菜生物物质中，并且在环境温度下搅拌至少2小时。
将所述混合物转移到旋转蒸发器的蒸发烧瓶中，并且在以下条件下在减压(5-10毫巴)下蒸发水浴温度不超过38℃，冷凝器入口温度为2-5℃。每2.5千克植物生物物质收集大约1升冷凝物(挥发性级份)。正如在下文将要进一步说明的，该材料可以在冷藏条件下保存至少12个月而不损失其特性。
可以用诸如蜂蜜或蜂胶的农产品代替所述植物材料，用相同的方法进行处理。
通常，每一种“挥发性级份”是用一种类型的蔬菜制备的，并且以不同的稀释比例用于制备用于各种目的的不同的混合物。
实施例2ATCC保藏号为202226的益生性生物大肠杆菌的分离和生长益生性生物大肠杆菌(于1999年5月3日，以202226的保藏号保藏于ATCC，于1999年5月4日，以12799的保藏号保藏于DSM)是从大肠杆菌M-17中分离的，包括从在37℃下长期(2个月)保存在含有实施例1所述植物来源材料的挥发性级份的制剂中的存活物开始分离物的系列转移，并且筛选能够与病原体竞争的分离物，正如在下面更详细说明的。将益生性生物大肠杆菌(于1999年5月3日，以202226的保藏号保藏于ATCC，于1999年5月4日，以12799的保藏号保藏于DSM)在以下培养基中生长(NH4)2SO4-5g/L，KH2PO4-13g/L，Na2HPO4-13g/L，MgCl2-3g/L，CaCl2-0.3g/L，酵母提取物-10g/L，大豆蛋白胨-10g/L和葡萄糖-5g/L。随着所述培养物的生长连续添加额外的养分(酵母提取物-1g/L，大豆蛋白胨-2.5g/L和葡萄糖-90g/L)，使发酵培养液中的葡萄糖浓度保持在2g/L的水平上。通过连续添加4N NH4OH将发酵培养液的pH保持为中性。培养是在30℃下，在标准发酵罐中以0.5vvm的通气速度进行16小时，此时生长达到汇合。该方法能得到1010-1011细胞/毫升。通过离心收获大肠杆菌细胞，悬浮在盐水中，并再次沉淀。所述微生物生物物质可以放在盐水中在冰箱里保持48小时而不丧失存活力。
实施例3制备能够快速增加哺乳动物和禽类体重的食品/饲料添加剂制剂该混合物含有按上述实施例1所述方法制备的以下挥发性级份苜蓿50ml/L，大豆-200ml/L，甜菜-25ml/L和莳萝-100ml/L。用蒸馏水进行平衡。
实施例4制备用于使人类胃肠道功能正常化的食品添加剂该混合物含有按上述实施例1所述方法制备的以下挥发性级份苜蓿-50ml/L，大豆-10ml/L，甜菜-50ml/L，莳萝-50ml/L，薄荷-20ml/L，欧芹-20ml/L和甘蓝-10m1/L。用蒸馏水进行平衡。以107细胞/毫升的细胞浓度将大肠杆菌(ATCC 202226)细胞(实施例2)悬浮在该混合物。为了改善口感可以选择性地添加NaCl(例如4-10g/L)。
实施例5制备用于预防哺乳动物和禽类胃肠道感染的饲料添加制剂该混合物含有按上述实施例1所述方法制备的以下挥发性级份苜蓿-50ml/L，大豆-10ml/L，甜菜-50ml/L，莳萝-150ml/L和薄荷-10ml/L。用蒸馏水进行平衡。以107细胞/毫升的细胞浓度将大肠杆菌(ATCC 202226)细胞(实施例2)悬浮在该混合物。为了改善口感可以选择性地添加NaCl(例如4-10g/L)。
实施例6大肠杆菌(ATCC 202226)对鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028)的拮抗活性用鼠伤寒沙门氏菌接种装有改性的Brilliant Green琼脂(沙门氏菌属的选择性生长培养基)的培养皿。在琼脂上形成9毫米直径的孔。将一定体积的所述食品添加剂(实施例4)沉积在每一个孔中，并且在35℃下孵育所述平板24小时。重复相同的过程，不过不用所述食品添加剂，而是将通过微生物滤膜(孔径0.45微米)过滤获得的液体沉积在所述孔中。
在含有所述食品添加剂的每一个孔周围观察到了缺乏鼠伤寒沙门氏菌菌落的抑制区(10-17毫米)。在含有不含所述益生性生物的滤液的孔周围没有出现抑制区。
实施例7大肠杆菌ATCC202226及其亲代大肠杆菌M-17对志贺氏菌的拮抗活性将弗氏志贺氏菌、索氏志贺氏菌、大肠杆菌(ATCC 202226)和M-17分别在营养琼脂上在37℃下生长18-20小时。所有培养物都收获到盐水中，并且稀释到10Klett单位的光密度。将志贺氏菌稀释培养物的等份试样本身1毫升或与大肠杆菌(ATCC 202226)的稀释培养物组合(1毫升)接种到装有营养液(5毫升)的通风杯状试管中。在37℃下孵育所述试管24小时。通过将所述培养物铺板到营养琼脂上，确定所述病原体和大肠杆菌(ATCC 202226)的集落形成单位(CFU)数量。在下面的表1中示出了两种志贺氏菌物种在纯的培养物和在具有益生性大肠杆菌的混合培养物中的CFU数量。
表1
实施例8将食品添加剂(实施例4)和大肠杆菌素(大肠杆菌M-17的干燥制剂)用于住院的肠胃炎患者将住院之后发生肠胃炎的一组60位患者随机分成三个小组，使每一组在性别、年龄和肠胃炎症状严重程度方面具有类似的分布。所有患者都接受正常的支持性治疗，包括再水合、维生素等。症状的严重程度不需要用抗生素治疗。第一组的20位患者每日3次在饭前30分钟接受10毫升的食品添加剂(实施例5)共治疗7天时间。第二组同样数量的患者按照生产商推荐的方案(每天2次饭前30分钟施用)大肠杆菌素(Colibacteriilum siccum)，而第三组根本不接受添加剂。
记录所有组的肠胃炎症状正常化的开始(以天数计)，并且在下面的表2中示出。
表2
大肠杆菌素(Colibacterinum siccum)是由BIOMED公司(莫斯科，俄罗斯)生产的活的大肠杆菌M-17的冷冻干燥制剂，并且被推荐用于治疗腹泻[Vidal HandbookPharmaceutical preparations inRussia(N.B.Nikolaeva，B.P.Alperovich and V.N.Sovinov，Eds.)AstrapharmService，1997，Moscow，p.275]。
实施例9将食品添加剂(实施例4)用于患有急性胃肠道感染的患者本研究包括患有各种病因的重度胃肠道感染的患者沙门氏菌病、埃希氏菌病、志贺氏菌病、葡萄球菌感染和未知病因的食物中毒。在所有患者中，住院以疾病的急性发作和急性肠胃炎的出现为指征。用所述食品添加剂对总共186位患者进行治疗，而一组类似的102位患者接受标准治疗。
记录所有组的肠胃炎症状正常化的开始(以天数计)，并且在下面的表3中示出。
表3
在一项独立的研究中，用所述食品添加剂对一组30位患有肠伤寒的患者进行治疗，80％患者的疾病症状在3天内消失。仅有3例所述添加剂治疗由于更严重的慢性肠炎的发展而终止。
实施例10将食品添加剂(实施例4)用于由抗生素导致的胃肠道失调患者将患有重度GI失调的患者分成2组。第一组包括48位患有胃溃疡疾病的患者，这些患者在针对幽门螺杆菌进行抗生素治疗之后出现了胃肠道失调。第二组包括22位患者，这些患者在针对肺炎进行抗生素治疗之后出现了胃肠道失调。
每天3次在饭前施用所述食品添加剂(5毫升)，共使用7天。在这2组内，所有患者的腹泻症状都在2-3天内消失。在施用所述添加剂之后，在84.5％的患者中观察到了胃肠微生物区系的完全正常化。这是通过乳杆菌属和双歧杆菌属的显著增加，大肠杆菌总数的减少，以及溶血大肠杆菌和诸如葡萄球菌属、普通变形菌甚至是念珠菌的其他病原体的完全消失而证明的。在其余的15.5％的患者中，观察到了显著改善。
实施例11将食品添加剂(实施例5)用于患有放射治疗后期肠胃炎的患者给患有子宫、结肠和胃癌的24位患者施用所述食品添加剂(10毫升，每天3次，饭前30分钟施用，共施用14天)，所述患者在接受放射治疗或放疗和化疗的联合治疗之后出现了肠胃炎。
在使用所述食品添加剂之前，所有患者都有经常性的和痛苦的排便欲望、液体样粪(每天4-12次)、在粪便中出现黏膜(9例)和血液(3例)的主诉。
在摄入所述添加剂2或3天之后，所有患者都注意到了痛苦的减轻和排便次数的减少，大便具有正常的外观。在腹泻症状消失之后4-5天，血液和黏膜的出现停止。血液分析表明，血液指标有显著改善。
在类似规模的对照组中，持续存在所述症状。
实施例12将食品添加剂(实施例4)用于AIDS患者患有AIDS的患者经常会出现慢性腹泻。让一组这样的患者施用10毫升食品添加剂(实施例5)，每天3次，饭前30分钟施用，共施用20天，对照组不接受添加剂。治疗结果示于下面的表4中。
表4
接受所述食品添加剂的患者表现出肠微生物区系的正常化大肠杆菌总数减少，溶血大肠杆菌消失，乳杆菌属和双歧杆菌属的数量增加，念珠菌减少。
实施例13将食品/饲料添加剂(实施例3)用于加速健康猪崽的体重增加。
每天给每只小猪崽施用3毫升所述食品/饲料添加剂，直到断奶。接受所述饲料添加剂的组，在断奶时每只小猪的体重平均比对照组增加了1.0千克。
实施例14将所述饲料添加剂(实施例5)用于健康小猪崽数百头健康的小猪崽在出生的第1和第3天以及断奶时每只小猪崽施用3毫升所述饲料添加剂。与接受标准预防性抗生素治疗的对照组相比死亡率减少了50％。接受饲料添加剂的组在断奶时每只小猪的体重平均比对照组增加了0.39千克。当在同窝崽中比较所述饲料添加剂和抗生素治疗时，发现获得所述饲料添加剂的小猪崽的体重增加比对照组高2.4千克。
实施例15将饲料添加剂(实施例4)应用于表现出腹泻的小猪崽给表现出腹泻的数百头小猪崽每天每头小猪施用5毫升的饲料添加剂。相同规模的对照组用抗生素处理advocin，庆大霉素，阿莫西林。接受所述饲料添加剂的组的腹泻症状在1-2天内消失。没有出现死亡，并且小猪崽发育正常。抗生素能使大部分小猪崽停止腹泻，但是这些小猪崽仍然发育缓慢。
给接受抗生素治疗腹泻1周的、一般被认为会死去的大约70头发育迟缓小猪崽施用饲料添加剂3天。这些小猪崽中除2头外全部存活。
实施例16将饲料添加剂(实施例4)用于健康牛犊通过乳液给刚出生的健康牛犊施用5毫升饲料添加剂，施用7天时间。超过95％的小牛犊直到14日龄都没有出现腹泻，同时诊断了少量病例的轮状病毒阳性。通常，一般，在该农场中腹泻的发病率为20-30％。
实施例17将饲料添加剂(实施例6)用于出现腹泻的牛犊通过乳液每天给每头出现腹泻的牛犊施用10毫升饲料添加剂。90-95％的牛犊的腹泻症状在1-2天内消失。其余5-10％的腹泻是由病毒引起的。用抗生素治疗这些牛犊得到了较差的结果。
实施例18将饲料添加剂(实施例6)用于健康的绵羊羔和山羊羔通过乳液给刚出生的绵羊羔和山羊羔施用3毫升的饲料添加剂，共施用7天时间。在某些情况下，会出现轻度至中度腹泻症状。这些症状通常会自动消失，或能够用较大剂量的饲料添加剂(5毫升)成功治疗。对于绵羊羔和山羊羔来说，在所述农场中腹泻的发病率通常为50％。
实施例19将饲料添加剂(实施例5)用于表现出腹泻的绵羊羔和山羊羔在患有致病性大肠杆菌感染的兽群中试验所述饲料添加剂。在试验的前一年，120只绵羊羔和山羊羔中大约有90只死于腹泻。用抗生素治疗不起作用，因为这种病是突然发生的，并且很快死亡。在3-5天时间内，通过乳液给每头表现出腹泻的绵羊羔和山羊羔每天施用5毫升的饲料添加剂。对照组的动物按照正常的推荐用抗生素治疗。接受饲料添加剂的绵羊羔和山羊羔的大约90％的腹泻症状在1-2天内消失。这些羊羔的进一步发育表现正常。接受抗体(庆大霉素)的对照组表现出较差的结果。对照组的腹泻持续存在，需要用抗生素反复治疗。对照组动物的发育严重迟缓。
实施例20将饲料添加剂(实施例5)用于家禽在繁育期(42-49天)将饲料添加剂添加到饮用水中，使每只鸡每天摄入0.01毫升的饲料添加剂。在用童子鸡进行的受控制的试验中，发现了体重增加为3.2％，同时还伴随着饲料转化提高4％。
用1天-6周龄的火鸡同样获得了良好的结果。每只禽每天接受0.01毫升的添加剂。观察到了超过10％的体重增加，同时降低了死亡率。仍然表现出腹泻的家禽每天用0.1毫升的食品添加剂治疗，而不用任何抗生素治疗，并且与仅用抗生素治疗的对照禽类相比，表现出更好的恢复情况。
实施例21将饲料添加剂(实施例5)用于犬和猫将饲料添加剂用于小狗，导致在24-48小时内使腹泻症状终止。
实施例22将饲料添加剂(实施例5)用于小鼠；免疫刺激的证据将2周龄的C571B1小鼠分成4组，每组10只动物。从下午4点到次日上午8点不让小鼠喝水，然后提供15毫升的水(第1和3组)或饲料添加剂(第2和4组)。重复该处理2周。在该处理结束时，来自第3和4组的小鼠在乙醚麻醉条件下进行剖腹手术。在腹壁上形成1.5厘米的切口。通过干燥纱布进行肠刺激。所有小鼠都在剖腹手术之后24小时宰杀；切除脾脏。分离脾细胞，并且在存在植物凝集素(PHA)的条件下，在RPMI培养基上培养48-72小时。在用饲料添加剂处理的组中，由剖腹手术导致的脾细胞增殖活性的减弱得到恢复。
由PHA诱导的脾细胞增殖1.对照组/水3060±2902.对照组/水/剖腹手术 2120±3003.测试组/BioCocktail 2740±3704.测试组/BioCocktail/剖腹手术 3040±520实施例23将食品添加剂(实施例4)用于人；免疫刺激的证据对多位患者实施子宫、宫颈、胃和肠恶性肿瘤手术。妇科患者(20位患者)接受随后的放射治疗。腹部患者(30位患者)接受化疗。大约1/2的患者在治疗期间每天2次施用食品添加剂。在接受食品添加剂的所有患者中，出现了显著的免疫刺激，其表现为妇科肿瘤 腹部肿瘤对照 食品添加剂 对照 食品添加剂T-淋巴细胞0.03±0.01 0.10±0.03 1.0±0.1 1.6±0.2(CD3+，HLA-，DR+)淋巴母细胞转化a.自发 530±110 880±80700±120 1070±100b.PHA-诱导 1600±360 5720±2100 4400±134013370±3720吞噬细胞数量(％) 60.7±2.9 76.5±2.2 57.7±1.5 74.2±1.9实施例24所述制剂的细菌保存作用将大肠杆菌细胞分散在按上述实施例1方法制备的制剂中，并且在室温下保存6个月。在所述6个月开始和结束时，将来自所述分散液的样品，以合适的连续稀释比例接种在营养液琼脂平板上。测定这两种样品的集落形成单位数量。在这两种情况下所测定的浓度为1×107，证实了该制剂在保存微生物方面的作用。用恶臭假单胞菌同时进行的上述实验，得到了相同的结果。
尽管业已结合本发明的具体实施方案对本发明进行了说明，很明显，很多种改变、改进和变化对本领域技术人员来说是显而易见的。因此，所有这样的改变、改进和变化都被认为属于所附权利要求书的构思和广泛的范围。在本说明书中所提到的所有文献、专利和专利申请，都被以相同的程度以全文形式收作本说明书的参考文献，就如同每一份文献、专利、专利申请被专门和特别指明收作本文参考一样。另外，在本申请中所引用或提到的任何参考文献，都不应当被认为是承认所述文献可以用作本发明的现有技术。
权利要求
1.ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的大肠杆菌菌株BU-230-98。
2.一种含有ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的存活大肠杆菌菌株BU-230-98的益生性组合物和用于维持所述大肠杆菌菌株的存活力的制剂。
3.如权利要求2所述的益生性组合物，还包含至少一种香味剂。
4.如权利要求2所述的益生性组合物，其中所述制剂包含植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)。
5.如权利要求4所述的益生性组合物，其中所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
6.如权利要求4所述的益生性组合物，其中所述植物提取物是从选自植物叶片、茎、根和果实的植物器官中获得的。
7.如权利要求4所述的益生性组合物，其中所述植物提取物是从选自蔬菜和草本植物的植物获得的。
8.如权利要求7所述的益生性组合物，其中所述蔬菜选自大豆、苜蓿、大蒜、甜菜和甘蓝。
9.如权利要求7所述的益生性组合物，其中所述草本植物选自欧芹、薄荷和莳萝。
10.如权利要求4所述的益生性组合物，还含有蜂箱产品。
11.如权利要求10所述的益生性组合物，其中所述蜂箱产品是蜂胶。
12.如权利要求2所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗胃肠感染或失调。
13.如权利要求2所述的益生性组合物，被鉴定用于保持或恢复正常的胃肠道微生物区系。
14.如权利要求2所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗腹泻。
15.如权利要求14所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗由肠道病原体导致的胃肠感染。
16.如权利要求15所述的益生性组合物，其中所述病原体是革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。
17.如权利要求2所述的益生性组合物，包含蒸馏水和甜菜、莳萝和欧芹的挥发性级份。
18.如权利要求2所述的益生性组合物，包含蒸馏水和甜菜、莳萝和葡萄的挥发性级份。
19.如权利要求2所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗胃肠沙门氏菌感染。
20.如权利要求2所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗感染性腹泻、由抗生素治疗、放疗或化疗所导致的慢性腹泻或腹泻。
21.如权利要求2所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗感染性腹泻，包含蒸馏水和甜菜、莳萝和欧芹的挥发性级份。
22.如权利要求21所述的益生性组合物，其中所述感染性腹泻是由艰难梭菌，沙门氏菌属，特别是志贺氏沙门氏菌，弯曲杆菌属，大肠杆菌，变形菌属，假单胞菌属或梭菌属导致的。
23.如权利要求2所述的组合物，被鉴定用于使胃肠道的生理学活性正常化。
24.含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂，所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
25.如权利要求24所述的制剂，其中所述植物提取物是从选自植物叶片、茎、根和果实的植物器官中获得的。
26.如权利要求24所述的制剂，其中所述植物提取物是从选自蔬菜和草本植物的植物获得的。
27.如权利要求26所述的制剂，其中所述蔬菜选自大豆、苜蓿、大蒜、甜菜和甘蓝。
28.如权利要求26所述的制剂，其中所述草本植物选自欧芹、薄荷和莳萝。
29.如权利要求24所述的制剂，还含有蜂箱产品。
30.如权利要求29所述的制剂，其中所述蜂箱产品是蜂胶。
31.一种用于增强动物的体重增加的兽医食品添加剂，含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
32.如权利要求31的兽医饲料添加剂，包含蒸馏水和甜菜、莳萝和欧芹的挥发性级份。
33.一种用于增强受体体重增加的食品添加剂，含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
34.如权利要求33的食品添加剂，包含蒸馏水和甜菜、莳萝和欧芹的挥发性级份。
35.一种益生性组合物，包含(a)有效量的至少一种存活的益生性微生物，该微生物在胃肠道中具有有益的生物学或治疗活性；和(b)植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)。
36.如权利要求35的益生性组合物，还包含至少一种香味剂。
37.如权利要求35的益生性组合物，其中所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
38.如权利要求35的益生性组合物，其中所述益生性微生物是大肠杆菌。
39.如权利要求37的益生性组合物，其中所述益生性微生物是ATCC保藏号为202226的大肠杆菌菌株BU-230-98。
40.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗胃肠感染或失调。
41.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于保持或恢复正常的胃肠道微生物区系。
42.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗腹泻。
43.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗由肠道病原体导致的胃肠感染。
44.如权利要求43所述的益生性组合物，其中所述病原体是革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。
45.如权利要求43所述的益生性组合物，用于治疗消化不良症状。
46.如权利要求43所述的益生性组合物，用于增强患有免疫障碍患者的免疫应答。
47.如权利要求46所述的益生性组合物，其中所述免疫障碍是由免疫应答抑制治疗导致的。
48.如权利要求35所述的益生性组合物，包含蒸馏水和甜菜和莳萝的挥发性级份。
49.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗胃肠沙门氏菌感染。
50.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗感染性腹泻、由抗生素治疗、放疗或化疗所导致的慢性腹泻或腹泻。
51.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于预防或治疗感染性腹泻，包含蒸馏水和甜菜和莳萝的挥发性级份。
52.如权利要求51所述的益生性组合物，其中所述感染性腹泻是由艰难梭菌，沙门氏菌属，特别是志贺氏沙门氏菌，弯曲杆菌属，大肠杆菌，变形菌属，假单胞菌属或梭菌属导致的。
53.如权利要求35所述的益生性组合物，被鉴定用于使胃肠道的生物学活性恢复正常。
54.如权利要求53所述的益生性组合物，包含蒸馏水，并且其中所述挥发性级份来自苜蓿、大豆、甜菜、莳萝、薄荷、欧芹和甘蓝，所述益生性微生物是ATCC保藏号为202226的大肠杆菌菌株Bu-230-98。
55.一种组合物，包含(a)至少一种微生物；和(b)植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
56.如权利要求55所述的益生性组合物，其中所述至少一种微生物选自埃希氏菌，产碱菌，节杆菌，双歧杆菌，乳杆菌，乳球菌，亚硝化单胞菌或假单胞菌。
57.一种制备植物的挥发性级份的方法，包括以下步骤(a)研磨植物来源的材料，得到一种植物生物物质；(b)将所述植物生物物质与水混合，并且在环境温度下搅拌；(c)在减压条件下，并且在不超过38℃的水浴温度下对步骤(b)中所获得的混合物进行蒸汽蒸馏；和(d)收集通过所述蒸汽蒸馏所获得的挥发性级份。
58.如权利要求57的方法，其中所述植物提取物获自植物叶片、茎、根或果实。
59.如权利要求58的方法，其中所述植物是蔬菜或草本植物。
60.如权利要求59的方法，其中所述蔬菜或草本植物选自大豆、苜蓿、大蒜、甜菜、莳萝、薄荷、欧芹和甘蓝。
61.如权利要求57的方法，其中所述减压为5-10毫巴。
62.一种制备治疗制剂的方法，包括将植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)与生理学上或兽医学上可以接受的添加剂、载体或稀释剂混合的步骤。
63.如权利要求62的方法，其中所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备。
64.一种生长ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的大肠杆菌菌株BU-230-98的方法，该方法包括以下步骤将ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的大肠杆菌菌株BU-230-98的起始培养物接种到生长培养基中，并且使所述大肠杆菌菌株生长到在650nm下的光学密度为15-30。
65.一种生产益生性组合物的方法，该方法包括以下步骤将ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的存活大肠杆菌菌株BU-230-98悬浮在一种制剂中，以便保持所述大肠杆菌菌株的存活力。
66.如权利要求65的方法，其中所述制剂包含植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)。
67.如权利要求66的方法，其中所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
68.如权利要求66的方法，其中所述植物提取物获自选自植物叶片、茎、根和果实的植物器官。
69.如权利要求66的方法，其中所述植物提取物是从选自蔬菜和草本植物的植物获得的。
70.如权利要求69的方法，其中所述蔬菜或草本植物选自大豆、苜蓿、大蒜、甜菜、莳萝、薄荷、欧芹和甘蓝。
71.如权利要求66的方法，还包括添加蜂箱产品。
72.如权利要求71的方法，其中所述蜂箱产品是蜂胶。
73.如权利要求65的方法，其中所述至少一种挥发性级份来自苜蓿、大豆、甜菜、莳萝和薄荷。
74.一种制备益生性组合物的方法，该方法包括以下步骤将有效量的、在胃肠道中具有有益的生物学或治疗活性的至少一种存活益生性微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中。
75.如权利要求74的方法，其中所述挥发性级份是通过在减压条件下，在不超过38℃的水浴温度下通过对所述植物提取物进行蒸汽蒸馏而制备的。
76.如权利要求74的方法，其中所述益生性微生物是大肠杆菌。
77.如权利要求75的方法，其中所述益生性微生物是ATCC保藏号为202226的大肠杆菌菌株BU-230-98。
78.如权利要求74的方法，其中所述至少一种挥发性级份包含苜蓿、大豆、甜菜、莳萝、薄荷、欧芹和甘蓝的挥发性级份。
79.一种制备含有存活微生物的组合物的方法，该方法包括以下步骤将至少一种微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便能在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
80.如权利要求79的方法，其中所述至少一种微生物选自埃希氏菌，产碱菌，节杆菌，双歧杆菌，乳杆菌，乳球菌，亚硝化单胞菌或假单胞菌。
81.一种微生物分配器，该分配器包含一个储存器和一个与该储存器连接的计量器，该储存器装有存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中的至少一种微生物，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
82.如权利要求81的分配器，其中所述分配器是机载的。
83.如权利要求81的分配器，其中所述分配器是手持式的。
84.如权利要求81的分配器，其中所述分配器被设计成能自动分配预定的体积。
85.如权利要求81的分配器，其中所述分配器被设计成能定期自动分配预定的体积。
86.一种对生物进行生物控制的方法，该方法包括以下步骤将至少一种能够对所述生物进行生物控制的存活微生物喷洒在流行区域，所述至少一种存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
87.一种清除油污染的方法，该方法包括以下步骤将至少一种能降解油的微生物喷洒在受污染的区域，所述至少一种存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
88.一种恢复生物过滤器中的有机烟雾降解微生物群体的方法，该方法包括以下步骤将至少一种能降解有机烟雾的存活微生物分配在所述过滤器上，所述至少一种存活微生物存在于含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
89.一种添加了ATCC保藏号为202226(DSM 12799)的存活大肠杆菌菌株BU-230-98的食品。
90.如权利要求89的食品，含有至少一种乳来源物质。
91.如权利要求90的食品，选自干酪和酸奶。
92.一种制备用于发酵过程的发酵剂的方法，该方法包括以下步骤生长足够数量的发酵剂微生物，并且将所述发酵剂微生物悬浮在含有植物提取物的至少一种挥发性级份(VF)的制剂中，所述至少一种挥发性级份是经过选择的，以便在室温下将所述至少一种微生物的存活力保持至少2个月。
全文摘要
本发明披露了(i)一种非致病性益生性微生物及其益生/治疗用途；(ii)含有由至少一种植物来源材料提取物制备的挥发性级份(VF)的水溶液的制剂，及其治疗用途；(iii)一种由所述植物来源材料生产所述制剂的方法；(iv)含有本发明的非致病性益生性微生物和/或其他益生性微生物和本发明的制剂的益生性组合物，及其益生/治疗用途；(v)一种用于工业应用的组合物，含有本发明的制剂和具有工业应用性的微生物；和(vi)应用上述后一种组合物的工业方法和装置。
文档编号A61P31/04GK1494374SQ01821485
公开日2004年5月5日 申请日期2001年11月27日 优先权日2000年11月30日
发明者M.奥尔谢尼特斯基, G.布克曼, 曼 申请人:生物平衡公司