专利名称：碱式没食子酸铋在抑制氧化氮合成酶的形成中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及碱式没食子酸铋(bismuth subgallate)在抑制氧化氮合成酶的形成中的新应用。
已知的是，已经鉴别出三种独特的同工型NOS可诱导型(iNOS)以及称为神经元NOS(nNOS)和内皮NOS(eNOS)的两种组成型。NOS、特别是iNOS与以下病症有关血小板凝聚、体内平衡过程(homeostatic processes)、组织损伤、炎性病症、休克、免疫疾病、胃肠道能动性疾病以及中枢神经系统和周围神经系统的疾病、糖尿病(Epstein，The New England Journal of Medicine，1993，329(27)2002-2011；Hobbs等人，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.，1999，39191-220；Pfeilschfter等人，CellBiology International，1996，20(1)51-58)。据信，神经病与糖尿病性溃疡密切相关，并因此认为神经病是大多数低端糖尿病性溃疡的主要促成因素(N.Engl.J.Med.，第343卷(11)，2000年9月14日，第787-793页；以及J.Fam.Pract.，第49卷(11)增补本，2000年11月，第S40-S48页)。NOS还与氧化氮导致的病症有关，例如组织损伤、脑缺血、癫痫、免疫性以及炎症(Mulligan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1991，886338-6342)。
假如以上成立，预期能够降低NOS的量或者活性的化合物或者药物可用作治疗剂。例如，USP6,030,985公开了可用于治疗和预防其中抑制氧化氮合成酶而对其有益的病症的脒衍生物，所述病症例如是休克、精神分裂症、焦虑、以及疼痛。USP6,071,906提供了包含脒基衍生物的药物组合物，该脒剂衍生物可用作氧化氮合成酶的抑制剂。USP6,133,306描述了通过给药有效量的硝基吲唑来治疗神经变性疾病，该硝基吲唑是神经元氧化氮合成酶的抑制剂。USP6,235,747涉及某些具有氧化氮合成酶(NOS)抑制剂活性的6-苯基-吡啶-2-基胺衍生物，其还涉及包含该衍生物的药物组合物以及在治疗和预防中枢神经系统疾病中的应用。
碱式没食子酸铋是通过没食子酸、冰醋酸及硝酸铋之间的反应而制得的，其化学式为C7H5BiO6。已知碱式没食子酸铋可作为口服止泻剂治疗急性或慢性腹泻，因其可与肠道中由于异常发酵产生的大量硫化氢形成硫化铋，减少气体对大肠刺激所造成的腹泻及疼痛。碱式没食子酸铋由于属苯的衍生物，故亦可作为防腐剂。
在USP6,232,341中公开了用于治愈伤口的药物组合物，其包括碱式没食子酸铋和龙脑(borneol)。但是，现有技术都没有教导或者提示碱式没食子酸铋在抑制NOS合成酶方面的应用。
因此，本发明提供碱式没食子酸铋在抑制NOS形成中的新应用。
本发明的目的是提供在受治疗者中抑制氧化氮合成酶(NOS)形成的方法，其包括向需要治疗的受治疗者给药有效量的碱式没食子酸铋，其中所述碱式没食子酸铋是以有效抑制NOS形成的量给药的。根据本发明的优选实施方案，该方法包括向需要治疗的受治疗者给药有效量的碱式没食子酸铋与龙脑的组合，其中所述碱式没食子酸铋与龙脑的组合是以有效抑制NOS形成的量给药的。
本发明的再一个目的是提供用于抑制氧化氮合成酶形成的药物组合物，其包括足以抑制NOS形成的有效量碱式没食子酸铋以及药物学上可接受的载体。根据本发明的优选实施方案，本发明的药物组合物进一步包括龙脑，对抑制NOS的形成提供协同作用。
图2显示了龙脑在经活化的RAW 264.7细胞中抑制NO形成的作用。
图3显示了碱式没食子酸铋与龙脑的组合在经活化的RAW 264.7细胞中抑制NO形成的作用。
在此所用术语“龙脑”是指从龙脑香树(Dryobalanops aromatica)等植物中分离的产物，其化学式为C10H17OH。
在此所用术语“有效量”是指足以抑制氧化氮合成酶的形成并在患者中产生改善作用的量。药物组合物本发明发现了包含碱式没食子酸铋的药物组合物在抑制氧化氮合成酶形成中的新用途。
本发明提供用于抑制氧化氮合成酶形成的药物组合物，其包含足以抑制NOS形成的有效量的碱式没食子酸铋以及药物学上可接受的载体。
本发明的药物组合物优选包含0.05-40重量％的碱式没食子酸铋。更优选的是，碱式没食子酸铋在本发明药物组合物中的量为1-20重量％。最优选的是，碱式没食子酸铋在本发明药物组合物中的量为2-10重量％。
根据本发明，药物组合物中还包含协同有效地抑制氧化氮合成酶的龙脑。优选地，药物组合物包含1-30重量％的碱式没食子酸铋和0.05-10重量％的龙脑。更优选的是，碱式没食子酸铋和龙脑在本发明药物组合物中的量分别是3-15重量％和0.1-5重量％。最优选的是，碱式没食子酸铋和龙脑在本发明药物组合物中的量分别是4-8重量％和0.5-1重量％。
除上述活性成分外，本发明的药物组合物还可包含其他有助于抑制氧化氮合成酶的常规药物，如以下文献中公开的化合物WO94/12165、WO94/14780、WO93/13055、EP0446699A1、USP5,132,453、USP6,030,985、USP6,071,906、USP6,133,306、和USP6,235,747。在根据本发明的药物组合物中加入这些常规药物对于本领域技术人员是容易的。
根据本发明，本发明药物组合物的合适剂量可由临床医师或者本领域技术人员通过常规方法来确定，并且可包括上述公开碱式没食子酸铋和龙脑的现有技术中所讨论的相应剂量。这些文献的内容在此并入作为参考。
在任何情况下，医师或者本领域技术人员能够确定对于个体患者最合适的实际剂量。该剂量可根据以下因素变化待治疗的病症、以及具体治疗患者的年龄、体重、性别和反应。
根据本发明，药物组合物可配制成局部、经口、非胃肠道或者其他给药形式的剂型。在本发明药物组合物中所用的合适的药物学上可接受的载体包括但不限于水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、糖(如乳糖、直链淀粉或者淀粉)、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。
在非胃肠道给药时，可注射的无菌溶液，优选油性或者水溶液，以及混悬液、乳剂或者植入剂包括栓剂是特别合适的。安瓿是方便的单元剂量。口服给药优选以胶囊、片剂和/或液体剂型来进行。
对于局部给药，本发明的药物组合物优选以糊剂、乳膏剂和凝胶糊等剂型给药。更优选的是，药物组合物可进一步包含抗炎药、收敛剂、润滑药或者镇痛剂。应用根据本发明的药物组合物可用于抑制氧化氮合成酶的形成。因此，本发明的药物组合物对于在包括人的哺乳动物中治疗与NO合成酶有关的病症是有效的，所述病症例如是血小板凝聚缺乏、体内平衡过程疾病、组织损伤、偏头痛、炎性疾病(如哮喘)、中风、急性和慢性疼痛、循环血容量减少性休克、外伤休克、再灌注损伤、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、脓毒性休克、多发性硬化、与AIDS有关的痴呆、神经变性疾病、神经元毒性、阿尔茨海默氏病、化学品依赖和成瘾病(如对药物、酒精和尼古丁的依赖性)、呕吐、癫痫、焦虑、精神病、头部创伤、成人呼吸压力综合症(ARDS)、吗啡诱导的成隐性以及戒断症状、炎性肠疾病、骨关节炎、类风湿关节炎、扩张性心肌病、急性脊索损伤、亨庭顿氏舞蹈病、帕金森氏病、青光眼、斑疹变性、糖尿病性神经病、糖尿病性溃疡、以及癌症。
更优选的是，本发明的药物组合物用于治疗与血小板凝聚、体内平衡过程以及组织损伤有关的病症。治疗血小板凝聚对于快速止血具有作用。
以下实施例将进一步说明本发明，但不应被理解为是对本发明范围的限制。本领域技术人员显而易见的改进和替代仍在本发明的范围和精神之内。实施例实施例1碱式没食子酸铋对氧化氮形成的作用测试中使用得自于Cell Culture Research Center，Food IndustryResearch and Development Institute，Hsinchu，Taiwan的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞(保藏编号CCRC 60001)。
RAW 264.7细胞温育在96孔组织培养板(Falcon)上。24小时后，在有以及没有100ng/ml LPS、100U/ml IFN-γ以及各种浓度(10μM、20μM、50μM、100μM、和200μM)的碱式没食子酸铋存在下，用Dulbecco′s Modified Eagle Medium(DMEM，2014，GibcoBRL)活化细胞(Hwang等人，1994，J.Biol.Chem.269，711-715)。24小时后，由各孔取1μl上清液，通过Griess反应的Saville改良法(Green等人，Analytical Biochem，1982，126131-138)分析是否存在亚硝酸盐。结果用三次测量值的平均值加标准偏差值(平均值±SE)表示。
如
图1所示，未用LPS和IFN-γ活化的细胞不产生NO。相反地，用LPS和IFN-γ活化的细胞产生最高65μM的NO。另外，在有碱式没食子酸铋存在时温育的细胞表明亚硝酸盐浓度降低，反映NO的产生下降。NO的产生与碱式没食子酸铋浓度的增加成反比。实施例2龙脑对NO形成的作用按照与实施例1相同的实验方法测试龙脑对NO合成酶的抑制作用。用各种浓度(0μM、40μM、80μM、160μM、320μM和640μM)的龙脑替代实施例1中的碱式没食子酸铋。结果用三次测量值的平均值加标准偏差值(平均值±SE)表示。如图2所示，NO的形成被龙脑显著抑制。实施例3碱式没食子酸铋与龙脑组合对NO形成的协同作用按照与实施例1相同的实验方法测试碱式没食子酸铋与龙脑的组合对NO合成酶的抑制作用。以下浓度的碱式没食子酸铋0μM、12.5μM、25μM、50μM和100μM，分别与以下浓度的龙脑组合0μM、10μM、20μM、和40μM，得到替代实施例1中的碱式没食子酸铋的组合。结果用三次测量值的平均值加标准偏差值(平均值±SE)表示。如图3所示，用碱式没食子酸铋与龙脑组合治疗，显著地降低了NO的形成。该组合对NO形成的作用显著高于单独使用碱式没食子酸铋时的作用。换言之，碱式没食子酸铋与龙脑的组合对于抑制NO合成酶具有协同作用。
权利要求
1.碱式没食子酸铋在制备用于抑制氧化氮合成酶(NOS)的药物中的应用。
2.根据权利要求1的应用，其中所述药物是用于治疗涉及氧化氮形成的疾病。
3.根据权利要求1的应用，其中还与其他NOS抑制剂组合使用。
4.根据权利要求1的应用，其中所述药物是通过局部、口服或者非胃肠道途径给药。
5.根据权利要求1的应用，其中所述碱式没食子酸铋的量为0.05-40重量％。
6.根据权利要求5的应用，其中所述碱式没食子酸铋的量为1-20重量％。
7.根据权利要求6的应用，其中所述碱式没食子酸铋的量为2-10重量％。
8.根据权利要求1的应用，其中所述药物进一步包括协同有效量的龙脑。
9.根据权利要求8的应用，其中碱式没食子酸铋与龙脑的量分别是1-30重量％和0.05-10重量％。
10.根据权利要求9的应用，其中碱式没食子酸铋与龙脑的量分别是3-15重量％和0.1-5重量％。
11.根据权利要求10的应用，其中碱式没食子酸铋与龙脑的量分别是4-8重量％和0.5-1重量％。
12.根据权利要求7的应用，其中还与其他NOS抑制剂组合使用。
13.根据权利要求7的应用，其中所述药物是通过局部、口服或者非胃肠道途径给药。
14.根据权利要求1-13之一的应用，其中所述药物是用于治疗以下疾病血小板凝聚缺乏、体内平衡过程疾病、组织损伤、偏头痛、炎性疾病、中风、急性和慢性疼痛、循环血容量减少性休克、外伤休克、再灌注损伤、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、脓毒性休克、多发性硬化、与AIDS有关的痴呆、神经变性疾病、神经元毒性、阿尔茨海默氏病、化学品依赖和成瘾病、呕吐、癫痫、焦虑、精神病、头部创伤、成人呼吸压力综合症(ARDS)、吗啡诱导的成隐性以及戒断症状、炎性肠疾病、骨关节炎、类风湿关节炎、扩张性心肌病、急性脊索损伤、亨庭顿氏舞蹈病、帕金森氏病、青光眼、斑疹变性、糖尿病性神经病、糖尿病性溃疡、以及癌症。
15.根据权利要求14的应用，其中，所述疾病是血小板凝聚缺乏症。
16.根据权利要求14的应用，其中所述疾病是体内平衡过程疾病。
17.根据权利要求16的应用，其中治疗体内平衡过程疾病对于快速止血有作用。
18.根据权利要求14的应用，其中所述疾病是组织损伤。
19.根据权利要求14的应用，其中所述疾病是炎性疾病。
20.根据权利要求19的应用，其中所述炎性疾病是哮喘。
21.根据权利要求14的应用，其中所述疾病选自于以下组中糖尿病性神经病和糖尿病性溃疡。
全文摘要
本发明涉及碱式没食子酸铋在制备用于抑制氧化氮合成酶的药物以及用于治疗涉及氧化氮形成的疾病中的新应用。本发明还涉及碱式没食子酸铋与龙脑的组合在制备用于抑制氧化氮合成酶的药物以及用于治疗涉及氧化氮形成的疾病中的新应用。
文档编号A61P1/04GK1401317SQ0210606
公开日2003年3月12日 申请日期2002年4月11日 优先权日2001年8月27日
发明者蔡英杰, 吴思惠, 许承先 申请人:友合生化科技股份有限公司