专利名称：二色桌片参中新的抗肿瘤化合物Intercedenside B的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是一种从海洋动物二色桌片参中分离到的新的抗肿瘤化合物Intercedenside B。
Intercedenside B为白色无定形粉末，熔点218～220℃，分子式C55H84O28S2Na2；电喷雾离子质谱(ESI-MS)1325[M+Na]+，在ESI-MS负离子谱中出现1279[M-Na]+离子峰。红外光谱3502(OH)，2932(CH3，CH2)，1746(C＝O)，1650(共轭双键)，1465和1378(CH3，CH2)，1239(酯键)，1067(甙键)。1H和13C核磁共振数据见表1。
表1 Intercedenside B的1H和13C核磁共振数据甙元部分 糖部分碳原子序号碳化学位移 氢化学位移(J) 碳原子序号 碳化学位移氢化学位移(J)135.405 1.267(2H，br)Xy11 1 103.826 4.665(1H，d，7.2)226.340 1.796(1H，m)，1.896(1H，m)2 81.659 3.950(1H，1H，t，78)388.900 3.152(1H，dd，3.6，12)3 74.127 4.206(1H，t，9)438.872 4 75.839 4.891(1H，m)547.735 0.869(1H，dd，9.6，12.8) 5 63.224 3.7141H，m)，4.714(1H，m)623.054 1.863(2H，m) Qui 1 104.132 4.934(1H，d，7.8)7119.8945.572(1H，s) 2 74.252 3.895(1H，m)8145.027 3 74.948 3.804(1H，m)946.683 3.240(1H，d，13.8)4 85.043 3.468(1H，t，9)10 34.917 5 71.063 3.615(1H，m)11 22.0101.442(1H，m)，1.679(1H，m) 6 17.234 1.570(3H，s)12 30.8382.093(2H，m)，) Xy12 1 103.923 4.736(1H，d，7.8)13 58.694 2 72.762 3.826(1H，m)14 46.961 3 86.421 4.024(1H，m)15 43.105 1.569(1H，m)，2.545(1H，dd，8.4，12)4 68.306 3.879(1H，m)16 75.185 5.801(1H，ddd，7.2，8.4，8.4) 5 65.132 3.580(1H，m)，4.136(1H，m)17 53.868 2.692(1H，d，8.4) 3-MeGlc 1 104.257 5.088(1H，d，7.8)18 180.142 2 73.667 3.746(1H，m)19 23.403 1.058(3H，s)3 85.711 3.644(1H，m)20 85.419 4 69.365 3.910(1H，m)21 27.733 1.558(3H，s)5 74.711 4.009(1H，m)22 38.106 1.776(1H，m)，2.364(1H，m) 6 66.844 4.620(1H，dd，6，11.4)，4.875(1H，m)23 22.665 1.810(1H，m)，1.979(1H，m) OCH3 60.8 3.84(3H，s)24 123.333 4.947(1H，d，7.8)25 131.96626 25.073 1.574(3H，s)27 17.360 1.592(3H，s)30 16.761 0.961(3H，s)31 28.178 1.127(3H，s)32 31.771 1.142(3H，s)CH3COO170.785CH3COO20.674 1.947(3H，s)Xy1木糖，Qui喹纳糖，Glc葡萄糖，J值偶合常数本发明还提供了从二色桌片参提取分离Intercedenside B的方法，其步骤如下(1)提取将新鲜二色桌片参洗净、切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡提取7天，滤出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天。合并3次提取液，减压回收乙醇，得流浸膏。将流浸膏溶于水中，通过大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱。50％乙醇洗脱液减压回收乙醇，得总皂甙提取物。
(2)分离上述总皂甙提取物应用硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶剂洗脱，薄层层析检测，收集含Intercedenside B的流份，再经C18反相柱层析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)进行梯度洗脱，薄层层析检测，得Intercedenside B纯品。
本发明对Intercedenside B进行了体外抗肿瘤试验，表明其具有明显的抑制肿瘤的效果。试验所用的细胞株为国际通用的肿瘤细胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(肾癌)U-87-MG(神经母细胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(肠癌)试验方法为国际通用的SRB法根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪520nm波长下测定OD值。试验结果见表2表2.Intercedenside B对肿瘤细胞的抑制作用肿瘤细胞株 A-549MCF-7 IA-9 CAKI-1 U-87-MG PC-3 KB KB-VIN SK-MEL-2 HCT-8IC50(μg/ml)0.71 1.4 0.61 0.77 1.9 1.51.92.01.9 1.2IC50表示本发明化合物的半数有效抑制浓度上述实验结果表明，Intercedenside B对10种不同的肿瘤细胞株均显示明显的抑制作用。
本发明为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，为开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要意义。
权利要求
1.一种抑制肿瘤的化合物Intercedenside B，其特征在于化学结构式如下
2.权利要求1所述抑制肿瘤的化合物Intercedenside B的制备方法，其具体步骤如下(1)提取将新鲜二色桌片参洗净、切碎，用95％乙醇浸泡提取7天，滤出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天；合并3次提取液，减压回收乙醇，得流浸膏；将流浸膏溶于水中，通过大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱；收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得总皂甙提取物；(2)分离上述总皂甙提取物应用硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇∶水混合溶剂洗脱，薄层层析检测，收集含Intercedenside B的流份，再经C18反相柱层析，以甲醇∶水梯度洗脱，薄层层析检测，得Intercedenside B纯品。
3.权利要求1所述抑制肿瘤的化合物Intercedenside B用于制备抗肿瘤药物的用途。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，具体为一种从二色桌片参中分离的抗癌化合物Intercedenside B，分子式C
文档编号A61P35/00GK1405178SQ0214502
公开日2003年3月26日 申请日期2002年11月4日 优先权日2002年11月4日
发明者易杨华, 邹峥嵘, 刘宝姝 申请人:中国人民解放军第二军医大学