专利名称：在视网膜疾病中用二核苷酸多磷酸促进液体的去除的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗眼病的方法。特别地，本发明涉及排除视网膜下和视网膜内空间中病态液体累积的方法。
背景技术：
视网膜色素上皮细胞(RPE)存在于脊椎动物眼睛后面并形成将视网膜和脉络膜血液供应分开的屏障。RPE的一个重要功能是保持并调节视网膜下空间的水合作用，视网膜下空间是视网膜和RPE之间的胞外体积。(Marmor，M.F.Marmor和T.J.Wolfensberger所编The Retinal，Pigment Epithelium一书第3-12页，牛津大学出版社，纽约，(1998))。这一功能是通过调节视网膜下空间和脉络膜血液供应之间液体、离子和代谢物的转运实现的。(Marmor，M.F.Marmor和T.J.Wolfensberger所编The Retinal，Pigment Epithelium一书第420-438页，牛津大学出版社，纽约，(1998)；Pederson，S.J.Ryan所编Retina一书第1955-1968页，Mosby，圣路易斯，(1994))。像所有的上皮细胞一样，RPE含有两层在功能和解剖学上都不同的膜朝向视网膜的顶膜和朝向脉络膜血液供给的基底外侧膜。在正常是视网膜中，液体在从视网膜下空间向脉络膜穿过RPE时被吸收。这种通常被称为“RPE泵”的RPE对液体的主动吸收通过将液体泵出视网膜空间从而对维持光感受器正确附着于RPE顶膜起到了重要的作用。(Marmor，S.J.Ryan，Mosby所编Retina一书第1931-1954页，圣路易斯，(1994)；Hughes等，M.F.Marmor和T.J.Wolfensberger所编The Retinal，Pigment Epithelium一书第xvii，745页，牛津大学出版社，纽约，(1998))。
视网膜剥离以视网膜下空间中液体的异常累积为特征，这将导致视网膜从底部的视网膜色素上皮细胞脱落。视网膜水肿是指液体异常累积于视网膜自身。视网膜在视网膜中心部分(黄斑)脱落或水肿会造成严重的视力丧失，且最终可导致无法治愈的失明。(Yanoff和Duker，Ophthalmology，Mosby，费城，(1999)；Wilkinson等，Michels’Retinal Detachment，第二版，Mosby，圣路易斯(1997))。许多研究病状可导致视网膜剥离或视网膜水肿。视网膜剥离最常见的类型是孔源性视网膜剥离，其原因是视网膜中产生了一个或多个允许液化的玻璃质进入视网膜下空间的裂纹(tear)或小洞，因此产生了视网膜剥离。
在治疗孔源性视网膜剥离(RRD)上还没有取得药理学进展。目前对RRD的治疗仅有外科手术(巩膜扣带术、充气性视网膜固定术或玻璃体切割术)(Wilkinson，Michels’Retinal Detachment，第二版，Mosby，圣路易斯(1997)。成功的RRD手术包括两个主要部分视网膜的再附着和视网膜破损修复。这三种治疗RRD的手术技术的主要差别在于所用使视网膜再附着的方法。
巩膜扣带术使用了眼外扣带(通常是硅酮海绵或固体硅酮)，它被缝在对着剥离的视网膜的巩膜上(Wilkinson，Michels’Retinal Detachment，第二版，Mosby，圣路易斯(1997)。视网膜通常在几天后再附着，但也可能需要数周。在手术时，外科医师可通过巩膜、脉络膜和RPE插入一个针头以排出视网膜下的液体。通常，扣带将一直缝合在巩膜上。在充气性视网膜固定术中，气泡被直接注入玻璃体，且头被定位，因此气泡可填塞并覆盖视网膜的破损。(Tornambe和Hilton，Ophthalmology 96(6)772-83(1989))。视网膜下的液体通常会在1-2天内排除，但它需要精确的头部定位以确保气泡可覆盖所述视网膜破损。(Tomambe等10人，Am.J.Ophthalmol.127(6)741-3(1999))。玻璃体切割术通常用于与玻璃体牵引或出血有关的复杂RRD，但有时也可用于单纯性RRD(Chang，M.Yanoff和J.S.Duker所编Ophthalmology一书中8.34.1-8.34.6，Mosby，费城，(1999))。其过程包括贯穿巩膜切三个小切口以将器械放进玻璃体房。取出玻璃体并用特殊的盐溶液代替。根据剥离的类型和起因，然后可以使用各种器械和技术以使视网膜再附着。就单纯性剥离而言，可穿过视网膜上的裂纹插入针头并通过视网膜下空间的前引流术使视网膜变平。
巩膜扣带术和玻璃体切割通常需要全身麻醉，并且需要住院。充气性视网膜固定术通常可在门诊完成，但需要病人配合以确保成功(Hilton和Tornambe，Retina11(3)285-94(1991)；Hilton和Brinton，Stephen J.Ryan所编Retina一书第2093-2112页，Mosby，费城，(1999)；Han等，Am.J.Ophthalmol.126(5)658-68(1998))。根据外科手术的技术和外科医师，每种实验的成功率是不同的，充气性视网膜固定术的成功率最低，巩膜扣带术的成功率最高。(Tornambe等，Am.J.Ophthalmol.127(6)741-3(1999)；Han等，Am.J.Ophthalmol.126(5)658-68(1998))。视网膜剥离手术成功与否是根据手术后任何时候(从几小时至数周)视网膜的再附着判定的。视觉后果和患者的生活质量等参数不能用来判断视网膜剥离手术成功与否。
通常与更严重的视网膜内水肿有关的病症是糖尿病黄斑水肿、渗出性年龄相关的黄斑变性(AMD)和临床上有意义的囊样黄斑水肿。(Jampol和Po，S.J.Ryan所编Retina一书第999-1008页，Mosby，圣路易斯，(1994))。其它与视网膜内或视网膜下空间液体累积异常有关的病理症状包括葡萄膜炎、中央和分支静脉阻塞、视网膜色素变性、中心性浆液性视网膜病、CMV视网膜炎和脉络膜黑色素瘤。与某些外科手术(如白内障手术)后的眼损伤有关的物理创伤也可导致视网膜剥离或水肿。(Ahmed和Ai，M.Yanoff和J.Duker所编Ophthalmology一书中8.34.1-8.34.6，Mosby，费城，(1999))。
黄斑中液体在视网膜内的累积会导致视敏度降低，且通常会对患有糖尿病型视网膜病变、AMD和其它局部缺血性视网膜病变(如分支和中央视网膜静脉阻塞)的患者造成视力丧失。(Jampol和Po，S.J.Ryan所编Retina一书第999-1008页，Mosby，圣路易斯，(1994)；Kent等，Br.J Ophthalmol.84(5)542-5(2000))。黄斑水肿通常与葡糖膜炎并发且通常可在视网膜色素变性患者中观察到。(Rothova等，Br.JOphthalmol.80(4)332-6(1996)；Fetkenhour等，Trans.Am.Acad.Ophthalmol.Otolaryngol.83(3)Pt 1OP515-21(1977))。黄斑水肿也是眼内手术后造成视力下降的主要原因(称为囊样黄斑水肿)。(Miyake，Surv，Ophthalmol.28增补本554-68(1984))。视网膜内液体的累积被认为是内部和/或外部血液-视网膜屏障崩溃的结果。(Kent等，Br.J Ophthalmol.84(5)542-5(2000))。内部视网膜屏障由视网膜脉管系统的内皮细胞构成，外部视网膜屏障包括视网膜色素上皮细胞。血液-视网膜屏障的崩溃会导致脉管系统的液体和累积在视网膜层或视网膜下空间中的液体病灶泄漏。目前对视网膜水肿的治疗包括全身和局部施用皮质类固醇、乙酰唑胺和非类固醇类的消炎药，还可以有手术方法，如玻璃体切割术、格栅(grid)激光光凝术和病灶激光光凝术。这些治疗方法对患者的效用有限。
尽管现今的RRD手术已经有相对较高的成功率(60-90％)，但是一旦手术失败，可再附着视网膜的药物组合物将对患者非常有利。此外，在无法进行手术治疗时，可再附着视网膜的药物组合物对于治疗是非常有效的，尤其是在孔源性视网膜剥离的治疗中。
已经进行了大量药理学和手术研究以治疗囊样黄斑水肿和糖尿病型黄斑水肿，但它们通常需借助于经验且经常是无效的。非特异性消炎治疗被用于所有类型的黄斑水肿，除了与局部缺血型视网膜炎有关的水肿，对它可采用激光治疗。(Kent等，Br.J Ophthalmol.84(5)542-5(2000)。皮质类固醇通常被用于治疗黄斑水肿，但它在随机的、安慰剂控制的研究中无效(Flach等，Am.J Ophthalmol.103(4)479-86(1987)；Flach等，Ophthalmology 97(10)1253-8(1990))。乙酰唑胺也可减轻某些类型的黄斑水肿，且它被认为是通过RPE泵的作用起作用的，但对乙酰唑胺的全身性耐受较弱。(Cox等，Arch.OphthazmoZ.106(g)1190-5(1988))。格栅(grid)或病灶激光光凝术通常被用来减少与糖尿病型视网膜炎有关的视网膜脉管系统渗漏，且它在有限的情况下是有效的。(Ip等，Ophthalmology，伦敦；PhiladelphiaMosby.8.4.1-8.4.2(1999)；The Diabetic Retinopathy Study Research Group，Ophthalmology 88(7)583-600(1981)；Early Treatment Diabetic RetinopathyStudy Research Group，Arch.Ophthalmol.103(12)1796-806(1985)；The BranchVein Occlusion Study Group，Am.J Ophthalmol.98(3)271-82(1984))。此外，玻璃体切割术被用于治疗糖尿病型视网膜炎以及玻璃体出血和/或玻璃体视网膜牵引术。(Wilkinson等，Michels’Retinal Detachment，第二版，Mosby，圣路易斯(1997))。对黄斑水肿安全有效的治疗还无法满足医疗需求。(Kent等，Br.JOphthalmol.84(5)542-5(2000))。
以前的工作显示，RPE的顶膜(朝向视网膜的膜)含有P2Y受体，该受体可被激活以促进液体沿视网膜下空间到脉络膜血液供给的方向穿过RPE，且这种作用机制被认为在视网膜剥离时有助于除去视网膜下的液体。(Peterson等，J.Neurosci.17(7)2324-37(1997))。然而，P2Y2受体的天然配体是ATP和UTP，这两者都会被普遍存在的胞外核苷酸酶迅速降解。因此，为使ATP和UTP在视网膜剥离的治疗中有效，这些化合物需要被直接输递到视网膜下空间。然而，普遍认为向视网膜下空间输递药物对患者有着不可接受的风险，因为这要将针头插在视网膜和RPE之间，而这可能导致并发症和失明。因此，为使ATP或UTP可用于治疗用途，必须将它们输递进玻璃体内腔，而这是侵入性小得多的过程。然而，为使ATP或UTP达到RPE顶膜，它必须扩散通过视网膜。还不知道在ATP或UTP到达RPE顶膜之前是否会被降解，因此不知道它们在促进视网膜再附着中是否有效。现有的例子显示，玻璃体内的UTP对于促进视网膜再附着是无效的，因此新型抗水解激动药对于促进视网膜再附着是有效的。
发明概述揭示了用于在需要此类治疗的患者中促进将视网膜或视网膜下空间内的外来液体的除去的药物组合物和使用它的方法。本发明所揭示的方法和组合物被用于促进将因任何原因产生的视网膜内或视网膜下的外来液体除去，这些原因包括但不限于对孔源性视网膜剥离的初步处理和附属处理、浆液性视网膜剥离、所有形式的囊样黄斑水肿(葡糖膜炎、手术后造成的、中央和分支静脉阻塞以及遗传性视网膜疾病，如视网膜色素变性)以及所有形式的视网膜和黄斑水肿(增生性和非增生性的、渗出性年龄相关的黄斑变性以及早熟性视网膜病)。
本发明揭示了通过施用结构式I的药物组合物以治疗视网膜疾病(如视网膜剥离或视网膜水肿)患者的方法，所述施用是通过玻璃体内注射、玻璃体内持续释放或输递、眼表面滴注、跨巩膜注射或灌输、或是全身注射或灌输进行的。
对本发明有用的药物组合物包含P2Y受体促效药，其中包括某些含有腺嘌呤、尿嘧啶和胞嘧啶的二核苷酸多磷酸，在视网膜色素上皮细胞的上皮细胞中它们是P2Y受体的选择性促效药。这些促效药对P2Y受体的激活与升高的胞内钙水平和液体通过RPE运输的提高有关。
本发明还提供了含有结构式I的化合物的新型组合物，其中结构式I的呋喃型糖部分选自3’-脱氧呋喃核糖基、2’，3’-双脱氧呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、3’-脱氧呋喃阿拉伯糖基、呋喃木糖基、2’-多于呋喃木糖基和呋喃来苏糖基。
附图简述
图1代表用非同位素原位杂交技术得到的白化兔视网膜/RPE/脉络膜组织的新鲜冷冻横截面中P2Y2受体mRNA的细胞定位。特别显示了在P2Y2受体mRNA序列上进行的反义和正义洋地黄毒苷(DIG)标记的核糖探针(riboprobe)的原位杂交结果。GCL神经节细胞层。IPL内分子层。INL内核层。ONL外核层。IS内段。OS外段。
图2比较了INS37217(UP4dC)和UTP在过表达P2Y2受体的1321NI细胞中对胞质溶胶钙转移的作用。
图3比较了INS37217(UP4dC)和UTP在过表达P2Y2受体的1321NI细胞中对肌醇磷酸产生的作用。
图4表示INS37217(UP4dC)在人类胎儿RPE中对液体吸收的作用。
图5表示INS37217(UP4dC)在牛RPE中对液体转运的数量和方向的作用。
图6表示来自新鲜分离的猪视网膜组织的INS37217(UP4dC)和UTP的代谢速度。
图7显示了在许多视网膜剥离的幼猪中，玻璃体内INS37217(UP4dC)对视网膜下气泡大小的作用，这是用间接检眼镜检查法评价的。
图8显示了玻璃体内INS37217(UP4dC)对视网膜下气泡再吸收的作用。视网膜下的气泡是通过在视网膜下空间注射含或不含INS37217(1mM)的MPBS溶液产生的。总结的结果(平均值±SEM)显示，与赋形剂对照相对，INS37217增加了视网膜下气泡的清除速度。
图9(A-C)显示了玻璃体内INS37217对视网膜下气泡再吸收的作用。将MPBS溶液注射进视网膜下以产生视网膜下的气泡，然后立即在玻璃体内注射含或不含INS37217(12mM，1.4mm和0.15mM)的MPBS溶液。总结的结果显示，与赋形剂对照相对，以12和1.4mM施用的INS37217增加了视网膜下气泡的清除速度，但0.15mM则没有这种效果。
图10显示INS37217(空心柱)和赋形剂对照(安慰剂，实心柱)对视网膜下气泡的记分有显著差异(p＜0.05)。
发明详述本发明提供了一种方法，此方法可增加液体通过视网膜色素上皮细胞(RPE)的吸收以便于将外来视网膜内或视网膜下的液体从眼睛后面的部分除去，从而治疗可导致视网膜剥离和视网膜水肿的疾病。本发明包括对受试者施用有效量的P2Y受体促效药以促进将与水肿性视网膜疾病有关的视网膜内和视网膜下空间内的病态液体累积除去。
所述P2Y受体促效药和或不和通常用于治疗或控制视网膜剥离和视网膜水肿的其它治疗剂和佐剂一起施用。有效剂量是激活位于视网膜色素上皮细胞朝向视网膜的膜(顶膜)上的P2Y受体并增强液体通过RPE吸收(从视网膜到脉络膜的方向)所必须的此类促效药的量。本发明提供了促进将外来液体从视网膜和视网膜下空间除去的方法，由此可有效预防、控制和治疗水肿性视网膜疾病，如视网膜剥离和视网膜水肿。
本发明的方法可有效控制和/或治疗所有与视网膜剥离和视网膜水肿有关的疾病，包括但不限于孔源性视网膜剥离、浆液性视网膜剥离、所有形式的囊样黄斑水肿(葡糖膜炎、手术后造成的、中央和分支静脉阻塞以及遗传性视网膜疾病，如视网膜色素变性)以及所有形式的视网膜和黄斑水肿(增生性和非增生性的、渗出性年龄相关的黄斑变性以及早熟性视网膜病)。
本发明提供了向受试者施用含有P2Y受体促效药的药物组合物以除去视网膜下和视网膜内空间内的病态液体累积的方法。所述P2Y受体促效药包括二核苷酸多磷酸和它们的类似物，它们可激活P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6和P2Y11，优选P2Y2受体。
化合物的描述对本发明有效的二核苷酸多磷酸是具有通式I的化合物活期药学上可接受的无毒盐结构式I
其中X是氧、亚甲基、二卤亚甲基(二氟亚甲基和二氯亚甲基是优选的)或亚氨；n＝0，1或2；m＝0，1或2；n+m＝0，1，2，3或4；Z＝OH或H；Z’＝OH或H；Y＝OH或H；Y’＝OH或H；和B和B’各自独立为如结构式Ia或Ib所定义的嘌呤残基或嘧啶残基，分别通过9-或1-位连接；结构式Ia 其中R1是氢、氯、氨基、单取代的氨基、二取代的氨基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代，其中硫上的取代基含有最多20个不饱和或饱和的碳原子；R2是羟基、链烯基、氧代、氨基、巯基、硫酮、烷基硫代、芳基硫代、烷芳基硫代、酰基硫代、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰氧基、单取代的烷基氨基、杂环基、单取代的环烷基氨基、单取代的芳烷基氨基、单取代的芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基、二烷基氨基、酰基氨基或二酰基氨基，Rx是O、H或缺少；R2和Rx可任选地一起形成1，N6-乙烯腺嘌呤衍生物的五元稠合咪唑环，乙烯部分的4-或5-位被如下定义的烷基、芳基或芳烷基部分任意取代；
R3是如下定义的氢、叠氮、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代；或是T(C1-6烷基)OCONH(C1-6烷基)W，其中T和W独立为氨基、巯基、羟基或羧基；或是它们药学上可接受的酯、酰胺或盐；或者缺少；因此，腺嘌呤的取代衍生物包括1-氧化物、1，N6-(4-或5-取代的乙烯)腺嘌呤；N6-取代的腺嘌呤；或N-取代的8-氨基腺嘌呤，其中6-或8-HNR’基的R’选自芳基烷基(C1-6)基，其芳基部分任选地如以下描述功能化；烷基；以及其中带有以下官能团的烷基；如([6-氨基己基]氨基甲酰基甲基)-，和ω-酰化的氨基(羟基、硫醇和羧基)烷基(C2-10)-，以及它们ω-酰化的氨基(羟基、硫醇和羧基)衍生物，这里的酰基选自(但不限于)乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基、取代的苯甲酰基等，或者羧基部分以其酯或酰胺衍生物的形式出现，例如，乙基或甲基酯或其甲基、乙基或苄胺衍生物。ω-氨基(羟基、硫醇)部分可被C1-4烷基烷基化。
J是碳或氮，条件是当J是氮时，R3不出现；其中，所述烷基是直链、支链或环状的；其中，所述芳基可任选地被低级烷基、芳基、氨基、单取代或二取代的氨基、NO2、N3、氰基、羧基、酰胺基、亚磺酰氨基、磺酸、磷酸盐或卤素基团取代；结构式Ib 其中R4是羟基、氧代、巯基、硫酮、氨基、氰基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二C1-4烷基氨基，其中所述烷基可任选地连接形成杂环；R5是氢、酰基、苯甲酰基、C1-6烷基、C1-5烷酰基、芳酰基或缺少；R6是羟基、氧代、巯基、硫酮、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、S-苯基、芳基硫代、芳基烷基硫代、三唑基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-5双取代的氨基、或二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任选地连接形成杂环或连接形成取代的环，如吗啉环、吡咯环等；或者R5和R6一起在嘧啶环的3和4位之间形成五元稠合的咪唑环，并形成3，N4-乙烯胞嘧啶衍生物，其中所述乙烯部分在4-或5-位被C1-4烷基、苯基或苯氧基任意取代；其中所述C1-4烷基、苯基或苯氧基至少一个氢被选自以下基团的部分任意取代，这些基团是卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、羧基、氰基、硝基、亚磺酰氨基、磺酸盐、磷酸盐、磺酸、氨基、C1-4烷基氨基和二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任选地连接形成杂环；R7选自氢、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基或苯基；取代的C2-8炔基、卤素、取代的C1-4烷基、CF3、C2-3链烯基、C2-3炔基、丙烯氨基、溴乙烯、乙基丙烯酸盐或丙烯酸和C2-8链烯基；或者R6和R7一起形成5或6元通过R6的N或O或S连接的饱和或不饱和的环，该环任意含有本身具有官能度的取代基；以及R8选自氢、氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-4烷基硫代、C7-12芳基烷基硫代、羧酰胺甲基、羧甲基、甲氧基、硫代甲基、苯氧基和硫代苯基；条件是当R8是氨基或取代的氨基时，R7是氢。
如上所述，所述核糖基部分是D-构型的，但也可以是L-构型，或者是D-和L-构型。D-构型是优选的。所述核苷残基包括糖的部分，呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、2’-脱氧呋喃核糖基、3’-脱氧呋喃核糖基、2’，3’-双脱氧呋喃核糖基、呋喃木糖基、2’-脱氧呋喃木糖基和呋喃来苏糖基；并且可以是α-或β-和D-或L-构型，但最好是β-D-构型。
在结构式I的一般结构(上述Ia和Ib)中，2至6位的虚线表示在这些位置上存在单键或双键；双键或单键的相对位置由R4、R5和R6的取代基是否能够酮-烯醇互变异构来确定。
在上述结构式I的一般结构中，酰基包括烷酰基和芳酰基。所述烷基含有1-8个碳原子，优选含有1-4个被如下所述的一个或多个合适的取代基任意取代的碳原子。芳基包括芳氧基基团的芳基部分，优选的是被如下所述的一个或多个合适的取代基任意取代的苯基。上面提到的链烯基或炔基含有2-8个碳原子，优选有2-6个碳原子，如乙烯基或乙炔基，可被如下所述的一个或多个合适的取代基任意取代。
上面提到的烷基、链烯基、炔基和芳基的合适取代基选自卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-12芳基、C6-12芳基烷氧基、羧基、氰基、硝基、亚磺酰氨基、磺酸盐、磷酸盐、磺酸基、氨基和取代的氨基，其中，所述氨基被C1-4烷基单取代或双取代，当双取代时，所述烷基可任意连接形成杂环。
通式I的二核苷酸多磷酸包括选自以下基团的二核苷酸四磷酸P1，P4-二(尿苷5’-)四磷酸(UP4U)；P1-(胞苷5’)-P4-(尿苷5’)四磷酸；P1，P4-二(腺苷5’-)四磷酸；P1-(腺苷5’)-P4-(尿苷5’)四磷酸；P1-(腺苷5’)-P4-(胞苷5’)四磷酸；P1，P4-二(乙烯腺苷)四磷酸；P1-(尿苷5’)-P4-(胸苷5’)四磷酸；P1-(腺苷5’)-P4-(肌苷5’)四磷酸；P1，P4-二(尿苷5’-)P2，P3-亚甲基四磷酸；P1，P4-二(尿苷5’-P2，P3-二氟亚甲基四磷酸)；P1，P4-二(尿苷5’-P2，P3-亚氨四磷酸)；P1，P4-二(4-硫代尿苷5’-四磷酸)；P1，P4-二(3，N4-乙烯胞苷5’-)四磷酸；P1，P4-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5’-)四磷酸，四铵盐；P1-(肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(尿苷5’-)P4-(黄苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧尿苷5’-)-P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1，P4-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)四磷酸2P4；P1，P4-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)四磷酸；2’(3’)-苯甲酰-P1，P4-二(尿苷5’-)四磷酸；P1，P4-二(2’，3’)-苯甲酰尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸(dCP4U)；P1-(8-氮杂腺苷-5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(2’-脱氧尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(阿拉伯糖胞苷5’-)四磷酸；P1-(腺苷5’-)P4-(4-硫代甲基尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5’-)四磷酸以及P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸。UP4U和dCP4U是优选的化合物。
通式I的二核苷酸多磷酸包括选自以下基团的二核苷酸三磷酸P3-二(尿苷5’-)三磷酸；P1-(胞苷5’)-P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(腺苷5’-)三磷酸；P1-(腺苷5’)-P3-(尿苷5’)三磷酸；P1-(腺苷5’)-P3-(胞苷5’)三磷酸；P1，P3-二(乙烯腺苷)三磷酸；P1-(尿苷5’)-P3-(胸苷5’)三磷酸；P1-(腺苷5’)-P3-(肌苷5’)三磷酸；P1，P3-二(尿苷5’-)P2，P3-亚甲基三磷酸；P1，P3-二(尿苷5’-P2，P3-二氟亚甲基三磷酸)；P1，P3-二(尿苷5’-P2，P3-亚氨三磷酸)；P1，P3-二(4-硫代尿苷5’-三磷酸)；P1，P3-二(3，N4-乙烯胞苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5’-)三磷酸，四铵盐；P1-(肌苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(尿苷5’-)P3-(黄苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧尿苷5’-)-P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)三磷酸；2’(3’)-苯甲酰-P1，P3-二(尿苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(2’，3’)-苯甲酰尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(8-氮杂腺苷-5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P3-(2’-脱氧尿苷5’-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P3-(阿拉伯糖胞苷5’-)三磷酸；P1-(腺苷5’-)P3-(4-硫代甲基尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P3-(6-硫代己基嘌呤核苷5’-)三磷酸以及P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸。
此外，通式III的二核苷酸多磷酸包括选自P1-(尿苷5’-)P2-(4-硫代尿苷5’-)二磷酸；P1，P5-二(尿苷5)-五磷酸和P1，P6-二(尿苷5)-六磷酸的化合物。
优选的核苷促效药是抗水解的促效药。抗水解的促效药是带有经过修饰的磷酸酯主链的核苷，如亚甲基、亚氨基或其它可保护磷酸酯键被轻易水解的基团。二核苷酸也可因缺少末端磷酸基团而抵抗水解。某些二核苷酸特别抗水解。例如，与P1，P4-二(尿苷5’-)四磷酸相比，P1-(胞苷5’)-P4-(尿苷5’)四磷酸更加抗水解。此外，置于单核苷酸磷酸链末端的基团可赋予一定的抗水解稳定性，如简单的烷基磷酸酯(甲基、乙基、苄基等)或硫代基团(如UTPγS)。
本发明还提供了结构式I的化合物的新型组合物，其中结构式I的呋喃基糖部分选自3’-脱氧呋喃核糖基、2’，3’-双脱氧呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、3’-脱氧呋喃阿拉伯糖基、呋喃木糖基、2’-多于呋喃木糖基和呋喃来苏糖基。
以下特殊的化合物也是新的P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(2’-脱氧尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(阿拉伯糖胞苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5’-)四磷酸；P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(阿拉伯糖腺苷5’)P4-(尿苷-5’-)四磷酸；P1-(呋喃来苏糖基胸苷5’)P4-(尿苷-5’-)四磷酸和P1-(呋喃来苏糖基尿嘧啶-5’-)P4-(尿苷-5’-)四磷酸。
可以将一种被缩合剂活化的核苷酸的单-、二-或三磷酸与第二种相同或不同的单-、二-或三磷酸分子缩合，以形成所需的二核苷酸多磷酸，这样便可制得本发明的化合物，上述缩合剂包括但不限于羰基二咪唑或二环己基碳二亚胺。另一种制备方法是，将按上述方法活化的一种核苷酸磷酸依次和无核苷酸的单-、二-或三磷酸部分缩合以产生所需的二核苷酸多磷酸，其中所述无核苷酸的单-、二-或三磷酸部分有(但不限于)单磷酸或焦磷酸阴离子，这时，没有分离的中间产物是单核苷酸多磷酸。再一种制备方法是将按上述方法活化的单-、二-或三磷酸部分，或是酸性卤化物形式或其它朝着亲核置换的衍生反应物形式的单-、二-或三磷酸部分与核苷酸磷酸或核苷酸多磷酸依次缩合，以产生所需的二核苷酸多磷酸。可通过在嘌呤、嘧啶或碳水化合物环上进行取代或衍生修饰预先形成的二核苷酸多磷酸，这样也可形成所需的二核苷酸多磷酸。用作原料是核苷酸磷酸是商业上可获得的，或者可用精通此领域的技术人员熟知的方法由相应的核苷酸制得。同样，当核苷酸是商业上无法获得时，它们可通过修饰其它容易获得的核苷酸而制得，或者用精通此领域的技术人员熟知的方法由杂环和碳水化合物前体合成，这些方法有WO 96/40059，WO96/02443A1，WO-A-9815563和WO 98/55494；Theoclitou等，J.Chem.Sot.Perkin.Trans.I，2009-2019(1996)；Guranowski等，Nucleosides and Nucleotides 14，731-734(1995)；Visscher等，Nucleic Acids Research 20，5749-5752(1992)；Holler等，Biochemistry 22，4924-10 4933(1983)；Orr等，Biochem.Pharmacol.673-677(1988)；Plateau等，Biochemistry 24，914-922(1985)；Hagmeier等，J.Chromatography 237，174-177(1982)；Scheffzek等，Biochemistry 35，9716-9727(1996)；Stridh等，Antiviral Res.，97-105(1981)；Tarasova等，Chem.Abs.110，154770(1988)；Hata等，Chem.Lett.987-990(1976)；Huhn等，28，1959-1970(1993)；Tumanov等，Chem.Abs.109-6867d(1987)；Pintor等，MolecularPharmacology 51，277-284(1997)；以及美国专利第4,855,304；5,635,160；5,495,550和5,681,823号。
那些精通此领域的技术人员将认识到，所述原料是可以变化的，并且可以使用额外的步骤以制造本发明的化合物，这正如以下实施例所证明。某些情况下，对某些反应官能度的保护对于实现上述一些转化是有用的。通常，对这些保护基团的需求以及加上和除去这些基团所需的条件对于精通有机合成领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明的化合物还包括它们无毒的药学上可接受的盐，比如但不限于碱金属盐，如锂、钠或钾；碱土金属盐，如锰、镁或钙；或是铵盐或四烷基季铵盐，即NX4+(其中X是C1-4)。药学上可接受的盐是保留了本化合物所需的生物学活性且没有不需要的毒理学效应的盐。本发明还包括这里所描述的化合物酰化的前体药物。那些精通此领域的技术人员将了解各种可用于制备所述化合物无毒的药学上可接受的盐和酰化的前体药物的合成方法。
尽管本发明的化合物只要用于治疗人类受试者，但它们也可被兽医用于治疗其它哺乳动物受试者，如狗和猫。
本发明化合物的药效可通过对P2Y2和其它P2Y受体活性进行肌醇磷酸测定来说明。如Lazarowski等(1995)(Brit.J.Pharm.116，1619-27)描述的这种被广泛使用的测定方法依赖于对肌醇磷酸形成的测量，它被作为化合物活化通过G-蛋白与磷酸酶C连接的受体的活性的度量。
这些化合物的功效反映在它们促进除去视网膜下和视网膜内空间中的病态液体累积的能力上，这种累积与包括视网膜剥离和视网膜水肿在内的水肿性视网膜疾病有关。有效剂量取决于各个患者的特征、所用特定化合物的活性、用药模式和疾病或病症的特征，并且可有精通此领域的技术人员决定。
可除去视网膜内或视网膜下空间中外来液体的剂量水平在眼睛每眼10μg-10mg之间，优选每眼50μg-6mg，最优选为每眼0.1mg-4mg。
化合物的施用可用各种合适的方法对患者的眼睛施用这里所揭示的活性化合物，但优选的施用方法是以液滴、喷雾或凝胶的形式施用所述活性化合物的液体或凝胶悬液。或者，可通过脂质体对眼睛施用活性化合物。此外，可通过泵-导管系统将所述活性化合物灌输进泪液膜。本发明的另一实施方案涉及含在连续或选择性释放装置中的活性化合物，所述装置如用于(但不限于)OcusertTM系统(Alza公司，Palo Alto，加利福尼亚州)的膜。在另一个实施方案中，所述活性化合物被含在、携带在或附在放在眼睛上的隐性眼镜上。本发明的另一实施方案包括含在可用于眼表面的药签或海绵上的活性化合物。本发明的另一实施方案包括含在可用于眼表面的液体喷雾器内的活性化合物。本发明的另一实施方案包括将活性化合物直接注射到泪腺组织或眼表面。
优选以含水悬液的形式将这里所揭示的活性化合物使用到玻璃体内。玻璃体内用药包括；一次或多次玻璃体内注射；在手术时直接对玻璃体室单独施用或与眼内冲洗液或其它类似溶液或装置一起施用，这些装置通常是在玻璃体视网膜手术时使用的；通过脂质体或其它合适的药物载体施用；通过连续或选择性释放的植入玻璃体内的装置施用，这些装置包括但不限于OcusertTM(Alza公司，Palo Alto，加利福尼亚州)和Vitrasert(Bausch和Lomb公司，罗彻斯特，纽约州)。所述玻璃体内溶液含有活性化合物，并可任意含有生理上可接受的赋形剂，如精通眼科的技术人员按常规标准可选用的那些。所述赋形剂可选自已知的眼赋形剂，如(但不限于)盐溶液、含水的聚醚类(如聚乙二醇)、聚乙烯类(如聚乙烯醇和聚吡咯烷酮)、纤维素衍生物类(如甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素)、石油衍生物类(如矿物油和白凡士林)、动物脂肪(如羊毛脂)、丙烯酸的聚合物(如羧基聚亚甲基凝胶)、植物脂肪(如花生油)和多糖类(如葡聚糖)和糖胺聚糖类(如透明质酸钠盐)和盐类(如氯化钠和氯化钾)。优选的实施方案是含有活性化合物和pH中性且生理等渗的盐水的玻璃体内溶液。
含有活性化合物的局部溶液还可以含有生理上相容的赋形剂，精通眼科技术的人员可用常规的标准进行选择。赋形剂可选自已知的眼科赋形剂，包括(但不限于)盐水和含水的电解质溶液、含水的聚醚类(如聚乙二醇)、聚乙烯类(如聚乙烯醇和聚吡咯烷酮)、纤维素衍生物类(如甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素)、石油衍生物类(如矿物油和白凡士林)、动物脂肪(如羊毛脂)、丙烯酸的聚合物(如羧基聚亚甲基凝胶)、植物脂肪(如花生油)和多糖类(如葡聚糖)和糖胺聚糖类(如透明质酸钠盐)和盐类(如氯化钠和氯化钾)。
除了上述局部用药的方法，还有许多全身性施用本发明的活性化合物的方法，这样，化合物就可以通过全身吸收和循环到达眼部。这类方法之一涉及一种被受试者吸入的含有活性化合物的可吸入颗粒的气溶胶悬浮液。活性化合物将通过肺被吸收进血液，或经过鼻泪管与眼组织接触，随后再以药物有效量与眼内细胞接触。可吸入的颗粒可以是液体或固体，粒径应该足够小以被吸入时通过口腔和喉；通常，粒径在约1-10微米，但最好在1-5微米，这一范围内的颗粒被认为是可吸入的。
另一种向受试者的眼全身性施用活性化合物的方法包括以液态制剂的眼药水或洗眼液或滴鼻药水形式，或以受试者吸入的可吸入颗粒的鼻喷雾剂的形式施用液/液悬浮液。可以用精通此领域的技术人员已知的方法，将活性化合物与合适的赋形剂，如无菌无热原的水或无菌盐水混合，以制备用来制造鼻喷雾剂或滴鼻或滴眼液的活性化合物的液态药物组合物。
其它全身性施用活性化合物的方法包括口服施用，其中含有结构I的化合物的药物组合物是片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆剂或酏剂的形式。可以根据此领域中已知的用来制造药物组合物的任何方法来制造供口服的组合物，且这种组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的物质以提供好看且美味的药物制剂。与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的含有活性成分的片剂是适宜于制造片剂的。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣或可用已知的技术进行包衣以延迟它们在肠胃道中的崩解和吸收，从而在较长的时间内提供持续的活性。例如，可以使用单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之类的缓释材料。供口服的制剂可以硬明胶胶囊的形式提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂(如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或作为软明胶胶囊的形式，其中活性成分与水或油性介质(如，花生油、液态石蜡或橄榄油)混合。
其它向受试者的眼全身性使用活性成分的方法包括活性成分的栓剂形式，以通过全身性吸收和循环使治疗有效量的化合物到达眼部。
进一步的全身性施用活性化合物的方法包括直接内操作(intra-operative)滴注凝胶、乳膏或液体悬液形式的治疗有效量的活性化合物。
本发明的方法可有效提高用于治疗和控制与视网膜剥离和视网膜水肿有关的疾病的手术、药物疗法和佐剂的功效。手术方法包括巩膜扣带术、充气性视网膜固定术、黄斑易位(macular translocation)和玻璃体切割术。皮质类固醇和乙酰唑胺等药物治疗剂已被用于治疗黄斑水肿。
为达到实现目标响应的水平，一些治疗剂的用量可能较大，但这通常会带来较高频率的药物相关不良作用。因此，在使用本发明的化合物时，通常用于治疗视网膜剥离和视网膜水肿的药剂的用量应相对较小，这样，因长期使用此类治疗剂而导致的不良副作用的频率就较低。因此，本发明化合物的另一适应症是降低用于治疗视网膜剥离和视网膜水肿的药物的不良副作用，比如提高乙酰唑胺的总体效果。
通过以下实施例进一步阐述了本发明，这些实施例不能理解为将本发明限制在它们所描述的特定步骤的范围内。
实施例实施例1.P2Y2-受体mRNA在视网膜和RPE中的定位用非同位素原位杂交技术研究了白化兔视网膜/RPE/脉络膜组织的新鲜冷冻横截面中P2Y2受体mRNA的细胞定位。图1代表在P2Y2受体mRNA序列上进行的反义和正义洋地黄毒苷(DIG)标记的核糖探针(riboprobe)的原位杂交结果。用碱性磷酸酶共轭的抗DIG抗体通过免疫组织化学显示反义和正义核糖探针的杂交，并对碱性磷酸酶进行生色团反应以检测DIG特异信号，产生了紫色/黑色的染色。还用核坚牢红对该组织进行复染。作为对照的正义探针(右)没有显示特异的标记。反义探针标记显示P2Y2受体mRNA序列定位在神经节细胞分散的核和内核层中，并穿过光感受器的内段层。在脉络膜血管的上皮细胞中还检测到了贯穿RPE的强标记。
实施例2.合成的P2Y2促效药UP4dC(INS37217)对克隆的人P2Y2受体的作用二核苷酸[P1-(尿苷5’-)-P4-(2’-脱氧胞苷5’-)四磷酸四钠盐](UP4dC)，也称为INS37217，被测试了其在克隆的人P2Y受体亚型上的活性(潜能、效力和选择性)，这种亚型在1321N1星形细胞瘤细胞中被稳定表达。用两种体外细胞活性指标评定活性，这两种指标是1)胞内钙储备的活化，以及2)[3H]-肌醇磷酸([3H]-IP)的累积。UP4dC在两种反对细胞表达P2Y1、P2Y2、P2Y4或P2Y6受体的测定中都具有活性。
UTP和UP4dC在表达人P2Y2(图2)受体的1321N1星形细胞瘤细胞中诱导了胞质溶胶钙的活化，其EC50值分别为0.22μM和0.8μM。在P2Y2受体上，钙对100PM UP4dC的响应与对UTP的最大响应相等。总之，与UTP相比，UP4dC在P2Y2受体上是钙活化的全效促效药。
UTP和UP4dC促进表达人10 P2Y(图3)受体的1321N1细胞中[3H]-IP的累积，其EC50值分别为1.1和2.2μM。肌醇磷酸对100PM UP4dC的响应大致等于UTP的最大响应。总之，在实验系统中与UTP相比，UP4dC在P2Y2受体上是肌醇磷酸释放的全效促效药。
实施例3.在新鲜分离的RPE单层中UP4dC(INS37217)促进液体的吸收用经过改进的电容探针技术研究了液体通过新鲜分离的、完整的牛和人RPE单层的转移(Frambach等，Biophys.J.47(4)547-52(1985)；J Gen.Physiol.83(6)875-99(1984))。
RPE被垂直安置在改进的Ussing室中，这样顶膜和基底外侧膜就各自暴露于储存在浴池(bathing reservoirs)中的林格溶液。不锈钢电容探针被缓慢放进顶部和基底外侧的浴池中以感知探针和液体半月板之间空隙的电容。液体转移速度Jv(μL cm-2hr-1)是通过监测因液体移动而导致的顶部和基底外侧浴液处空隙电容的变化而测定的。
图4显示了人胚胎RPE中促效药对J的代表性作用。正的Jv值表示液体被吸收(顶部向基底外侧)而负的Jv值表示液体分泌(基底外侧向顶部)。在图4显示的实验中，对照液体通过新鲜分离的人胚胎RPE单层的移动以约5μL cm-2hr-1的速度被吸收。在沐浴顶膜的林格溶液中加入50μM促效药使液体吸收在回到刺激前水平前暂时升高到约40μL cm-2hr-1。在1小时的处理阶段中，UP4dC(INS37217)增加的总液体吸收大约有三倍。
尽管RPE通常是液体吸收上皮，但在新鲜分离的RPE标本中也观察到了液体分泌。假设体内液体分泌在某些情况(如在黑暗和明亮之间转换时)或在病态状况(如浆液性视网膜剥离)下是RPE生理机能的正常组成部分。图5显示了在新鲜分离的牛RPE单层中，其中Jv分泌是在对照条件下观察的，所述促效药可逆转液体转运被吸收的方向。在返回对照林格溶液后促效剂的作用是可逆的。促效药在体内的这种作用将为浆液性视网膜剥离的治疗提供治疗的可能，所述浆液性视网膜剥离如中心性浆液性视网膜病，其中，假设异常的RPE介导的液体分泌可引起脉络膜的液体转运进入视网膜下空间。
实施例4.新鲜分离的视网膜组织中UP4dC(INS37217)和UTP代谢稳定性的比较UP4dC(INS37217)和UTP在新鲜分离的猪视网膜组织中的代谢速度是用连接有UV检测器的高效液相色谱(HPLC)法检测的。大小相同的新鲜分离的视网膜组织是从安乐死的幼猪(2-3个月)中分离的，并将视网膜组织分别放在37℃的培养室中。平衡30分钟后，将各个组织和100μM UP4dC或UTP一起掺到生理缓冲液中，并温育0.5、1、2和4小时。然后对来自各个室的等量的缓冲液进行W-偶联的HPLC检测，以得到各个时间点上母体UP4dC和UTP化合物的色谱图，从而可记录各个母体化合物的代谢速度。图6显示，在这些实验条件下UP4dC的代谢半衰期是UTP的四倍。
实施例5.在大气泡型视网膜剥离(large bullous retinal detachment)的猪模型中UP4dC增加了视网膜下液体的再吸收目的设计该研究的目的是评价在正常手术条件下UP4dC对视网膜下液体再吸收的临床作用，所述手术是在大气泡型视网膜剥离的猪中进行的。
方法将300μl平衡盐盐水加(BBS+)注射进12只猪一只眼睛的视网膜下空间，这样可产生中心性玻璃体切割术和延伸1-2个象限的大视网膜剥离。将含或不含UP4dC(5.6mM)的BBS+注射进玻中璃体腔，并通过间接检眼镜检查、超声和OCT-成像观察3-7天。
结果在用UP4dC处理的所有眼睛中，在36小时内观察到了大视网膜剥离中视网膜下液体的完全再吸收，并在所有的对照研究中在5-7天后观察到了这一结果。这些结果显示在图7中。
结论在小和大视网膜剥离的试验动物模型中，在玻璃体内使用UP4dC增加了视网膜下液体的再吸收。因此将UP4dC作为外科辅助物以促进人类视网膜剥离或限制性黄斑易位中视网膜下液体的再吸收是有效的。
实施例6.兔模型中视网膜下和玻璃体内UP4dC的作用方法诱导视网膜下气泡的外科手术过程通过肌肉内注射每千克体重0.3ml盐酸氯胺酮(100mg/ml)和0.5ml盐酸甲苯噻嗪(100mg/ml)将重约1.5kg(2-3个月大)的新西兰白兔麻醉。按需要加入盐酸氯胺酮。对于需要观察眼底的实验，用氢溴酸东莨菪碱0.25％、cyclogy 1％和盐酸苯肾上腺素2.5％滴眼液扩张瞳孔。
在每只眼睛中产生局部视网膜剥离。放进金属丝的眼睑窥镜并在时钟3和9的位置上进行节段性角膜缘球结膜环状切开术(segmental conjunctivalperitomy)(大约需要2小时)。用19号MVR刀片在边缘后0.5mm贯穿玻璃体将巩膜切出两条切口。将自留平凹隐性眼镜放在角膜表面。将用来照明的枝形吊灯光源(Grieshaber & Co.，AG Schaffhausen，Switzerland)小心通过一个巩膜切开位置放进玻璃体腔以避免接触隐性眼镜。
用有斜面的36号视网膜针头(Grieshaber & Co.，AG Schaffhausen，Switzerland)造成视网膜剥离，所述针头通过一伸缩管连接到1ml的注射器，该注射器由经过校准的机械注射泵(351型，Sage Instruments，Cambridge，Mass)驱动。用手术显微镜直接观察，所述视网膜针头被插进通过第二巩膜切口并缓慢前进至鼻或太阳穴的髓磷脂翼瓣(myelin wing)。这些位置是选出来供注射用的，这时因为与附近薄且无血管的视网膜相比，髓磷脂翼瓣可提供额外的结构支持。将眼内压保持在较低水平以使易碎的视网膜从RPE上缓慢地水分离。将36号针的尖端小心插到髓磷脂翼瓣下。用机械注射泵在视网膜下空间注射进约50μl磷酸缓冲盐水，这样可产生局部的圆形视网膜剥离。从眼睛中除去这些装置，巩膜切割位置将维持打开状态以保持眼内压恒定。尽管这些试验性的视网膜剥离只有非常小的视网膜穿孔，但它们在功能上与非视网膜剥离类似并可被用来研究视网膜下液体的再吸收机制。
注射溶液用于所有视网膜下和视网膜内注射的经过改进的磷酸缓冲盐水(MPBS)含有13.6mM Na2HPO4、6.2mM NaH2PO4、130.5mM NaCl和5mM KCl，其同渗容摩约为300mOsm，pH为7.2。在MPBS溶液中加入UP4dC(MW 862)以使靶药物的浓度为12mM、1.4mM、1.0mM或0.15mM。使实验溶液和对照溶液保持相等的同渗容摩。对于浓度为1mMUP4dC或更低的溶液，需在MPBS溶液中加入适量NaCl以补偿UP4dC对同渗容摩的贡献(1mM UP4dC的贡献约为4-5mOsm)。对于浓度大于1mM UP4dC的溶液，可通过减少MPBS溶液中相等的NaCl的同渗容摩以代替加入的UP4dC，这样可维持溶液的等渗性。每种剂量的所有实验溶液和对照溶液都照此配制，最终的同渗容摩分别为±2mOsm。提供了无菌溶液并让不知情的观察者来评价。
研究设计将每个动物的一只眼睛作为实验眼，而另一只眼睛作为对照。UP4dC是通过视网膜下或玻璃体内输递的，以评价其在试验性视网膜剥离中对视网膜下液体再吸收的作用。在第一系列的实验中，含或不含UP4dC(1mM)的MPBS被注射到视网膜下空间中。在第二系列的实验中，产生了含有MPBS溶液的视网膜下气泡，然后用100μl的Hamilton注射器在靠近所述视网膜下气泡的地方将50μl含或不含UP4dC(12mM、1.4mM和0.15mM)的MPBS溶液施用到玻璃体腔。外科医师是不知道所施用溶液的具体浓度的。
实验前的观察用甲基纤维素层保护角膜上皮以保持角膜透明。在选定的情况下用眼底照相机(TRC-W，TOPCON，日本)得到眼底的照片。观察者通过间接检眼镜检查确定气泡最初的大小，并且每30分钟测定一次气泡大小，这样进行3小时。以邻近的视神经盘为参考标记，将每个视网膜下气泡的垂直和水平直径记录为盘直径(discdiameter)。(视神经盘的评价参考直径约为1mm，如先前在显微镜下在10只来自白化兔的摘除细胞核的眼睛中测定的结果类似)。每个评定时间点的气泡的大小的计算方法是，首先将垂直和水平尺寸相乘，然后将结果除以各个气泡最初的大小以得到无量纲的数值。然后将各个评定时间点上无量纲(归一化)的气泡尺寸作为时间的函数绘图并分析。
结果视网膜下和玻璃体内UP4dC的作用在第一组实验中，将含有1mM UP4dC的等渗的MPBS溶液直接注射进视网膜下空间。对面的眼睛仅接受了视网膜下注射的等渗的MPBS溶液。图8显示，含有UP4dC的视网膜下气泡的消散明显快于仅含MPBS溶液的气泡。在用UP4dC处理的气泡中，在120-150分钟观察到了视网膜的再附着，而对照的视网膜下气泡在3小时的观察期内都没有消散。通过重复使用ANOVA测量方法，30、60和90分钟的视网膜下再吸收有显著差异(p＜0.05)。
在第二组实验中，首先用MPBS溶液诱导视网膜下气泡，然后立即在非常接近所述气泡的地方在玻璃体内注射50μl含或不含UP4dC(12、1.4和0.15mM)的MPBS溶液。图9A和B显示，与赋形剂相比，两个较高剂量的UP4dC明显增强了视网膜下气泡的再吸收和视网膜再附着的速度。在用UP4dC处理和单独用赋形剂处理30、60和90分钟的眼睛的再吸收速度之间存在着统计学上显著的差异(p＜0.05)。用UP4dC处理的眼睛在约90分钟即显示了接近完全的视网膜再附着，而对照气泡在180分钟时还没有完全再附着。
图9C显示了用0.15mM玻璃体内UP4dC处理或单独用赋形剂处理的眼睛中视网膜下气泡的再吸收。与单独用赋形剂处理相比，在用0.15mM UP4dC处理的眼睛中，任何时间点上视网膜下液体的再吸收之间都没有统计学上显著的差异。
实施例7.大鼠模型中UP4dC对视网膜再附着的作用方法体内准备大鼠研究设计在Long-Evans雌性大鼠中通过将2-3μl经过改进的磷酸缓冲盐水(MPBS)的林格溶液注射进视网膜下空间以造成视网膜剥离；对每只大鼠只使用一只眼睛。使用CCD照相机以1分钟为间隔获得视网膜下气泡的图象，这样持续数小时。下面将更详细地描述图象的获得。在各个实验的对照部分(视网膜剥离产生后0-30分钟)，表观气泡大小达到稳定，其大小在麻醉阶段(数小时)保持不变。配制含或不含UP4dC(5mM)的MPBS溶液并在隐蔽和随机的条件下将其注射进大鼠眼睛的玻璃体内(3μl)。针剂药水瓶和它们的成分是无法区别的。玻璃体注射后，如实验者用图10所示的7级范围(0±3)做出的判断，表观气泡大小在以后的60分钟内既不增加也不减小，或者说是恒定的。该等级是通过观察在玻璃体内注射药物或安慰剂后30-90分钟内表观气泡大小的变化制定的。等级为-3说明视网膜气泡明显被展平。等级为+3说明气泡的尺寸几乎增大了两倍。0等级说明表观气泡大小未随时间变化。所有实验完成后，告知各个针剂药水瓶的成分并与试验者的结论进行比较，试验者的结论是根据对图象的观察得出的，所示图象是在施用药物或安慰剂后30-90分钟内和以后一天内获得的。
结论图10显示了玻璃体内UP4dC对12只大鼠(每只动物用1只眼睛)视网膜再附着的作用。实验是以不知情的方式进行的，以精密并客观地评价UP4dC对液体再吸收(来自实验制造的视网膜下的气泡)的作用。在这些实验中，气泡产生后，以不知情的方式(针剂药水瓶和它们的成分是无法区别的)将药物或安慰剂溶液注射进大鼠眼睛的玻璃体内。对所有12只眼睛都记分后，告知关键因素并与基于1和24小时观察的总结果进行比较。结果总结在图10中，它显示UP4dC(空心柱)和赋形剂对照(安慰剂，实心柱)对视网膜下气泡的记分存在显著差异(p＜0.05)。处理1小时后，用UP4dC处理的眼睛都显示了气泡大小的减小，而对照眼睛却都显示出气泡大小的增加。第二条，来自用UP4dC处理的眼睛的视网膜下气泡几乎完全消失，而来自赋形剂处理的研究的视网膜下气泡则基本上没有改变。6只用UP4dC处理的眼睛中有4只，其视网膜在24小时的时间点上似乎完全展平。
实施例8.初步处理患有黄斑病变性视网膜剥离(macula-off rhegmatogenousretinal detachment)的受试者中心视力突然丧失的患者被诊断为黄斑病变性视网膜剥离，它在上视网膜(superior retina)中只有一个尺寸小于1时钟小时的缺口。用典型的Betadine消毒患者的结膜(盲管)，并洗涤并遮盖脸、睫毛和眼睑。通过结膜下注射利多卡因进行局部麻醉。
然后将来自0.25cc或0.50cc结核菌素注射器的29或30号针通过巩膜插入眼睛的睫状环区域，以便仅对患者缓慢施用50μL玻璃体内注射的无菌药物组合物。所示药物组合物含有阻止代谢的P2Y2受体促效药，所述促效药在盐水中被制备成等渗(280-300mOsm)，并具有生理pH(7.0-7.5)。
从两侧修复患者的眼睛，并使患者在水平的位置上休息4小时，就是在这一位置上对眼睛进行视网膜再附着实验的。如果视网膜在4小时的时间点没有完全再附着，则再从两侧修复患者的眼睛直至第二条(给药20-24小时后)，此时在检查视网膜的再附着情况。在视网膜再附着后，用常规的方法适当处理视网膜裂孔，比如冷冻疗法或激光凝固。
现在已经用完整、清楚、简洁且准确的术语描述了本发明以及制造和使用它的方式和方法，这就使得精通此领域的任何技术人员都可以制造和使用它。应该理解的是，上面描述了本发明优选的实施方案，并可以在不背离如权利要求所列出的本发明范围的情况下对其作出改进。为特别指出并明确要求本发明的主题，用以下的权利要求结束本说明书。
权利要求
1.一种在需要治疗的受试者中治疗水肿性视网膜疾病的方法，其特征在于，所述方法包括对所述受试者施用含有P2Y受体拮抗剂的药物组合物，P2Y受体拮抗剂的量可有效促进与水肿性视网膜疾病有关的视网膜内和视网膜下空间中病态液体累积的去除。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述视网膜疾病是视网膜剥离或视网膜水肿。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述水肿性视网膜疾病选自糖尿病黄斑水肿、年龄相关的黄斑变性、中心性浆液性视网膜病和黄斑水肿。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述黄斑水肿起因于葡萄膜炎、中央和分支静脉阻塞、视网膜色素变性、中心性浆液性视网膜病、CMV视网膜炎或脉络膜黑色素瘤。
5.如权利要求1所述的方法，其中，施用了所述P2Y受体拮抗剂被以使玻璃体内浓度范围为1微摩尔至500微摩尔。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述P2Y受体拮抗剂是具有结构式I的二核苷酸多磷酸化合物结构式I 其中X是氧、亚甲基、二卤亚甲基或亚氨；n＝0，1或2；m＝0，1或2；n+m＝0，1，2，3或4；Z＝OH或H；Z’＝OH或H；Y＝OH或H；Y’＝OH或H；和B和B’各自独立为如结构式Ia或Ib所定义的嘌呤残基或嘧啶残基，分别通过9-或1-位连接；结构式Ia 其中R1是氢、氯、氨基、单取代的氨基、二取代的氨基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代，其中硫上的取代基含有最多20个不饱和或饱和的碳原子；R2是羟基、链烯基、氧代、氨基、巯基、硫酮、烷基硫代、芳基硫代、烷芳基硫代、酰基硫代、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰氧基、单取代的烷基氨基、杂环基、单取代的环烷基氨基、单取代的芳烷基氨基、单取代的芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基、二烷基氨基、酰基氨基或二酰基氨基，Rx是O、H或缺少；R2和Rx可任选地一起形成1，N6-乙烯腺嘌呤衍生物的五元稠合咪唑环，乙烯部分的4-或5-位被如下定义的烷基、芳基或芳烷基部分任意取代；R3是如下定义的氢、叠氮、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代；或是T(C1-6烷基)OCONH(C1-6烷基)W，其中T和W独立为氨基、巯基、羟基或羧基；或是它们药学上可接受的酯、酰胺或盐；或者缺少；J是碳或氮，条件是当J是氮时，R3不出现；其中，所述烷基是直链、支链或环状的；其中，所述芳基可任选地被低级烷基、芳基、氨基、单-或二烷基氨基、NO2、N3、氰基、羧基、酰胺基、亚磺酰氨基、磺酸、磷酸盐或卤素基团取代；结构式Ib 其中R4是羟基、氧代、巯基、硫酮、氨基、氰基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二C1-4烷基氨基，其中所述烷基可任选地连接形成杂环；R5是氢、酰基、苯甲酰基、C1-6烷基、C1-5烷酰基、芳酰基或缺少；R6是羟基、氧代、巯基、硫酮、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、S-苯基、芳基硫代、芳基烷基硫代、三唑基氨基、C1-6烷基氨基、C1-5双取代的氨基、或二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任选地连接形成杂环或连接形成取代的环，如吗啉环、吡咯环等；或者R5和R6一起在嘧啶环的3和4位之间形成3，N4-乙烯胞嘧啶衍生物的五元稠合咪唑环，其中所述乙烯部分在4-或5-位被C1-4烷基、苯基或苯氧基任意取代；其中所述C1-4烷基、苯基或苯氧基至少一个氢被选自以下基团的部分任意取代，这些基团是卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、羧基、氰基、硝基、亚磺酰氨基、磺酸盐、磷酸盐、磺酸、氨基、C1-4烷基氨基和二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任选地连接形成杂环；R7选自氢、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基或苯基；取代的C2-8炔基、卤素、取代的C1-4烷基、CF3、C2-3链烯基、C2-3炔基、丙烯氨基、溴乙烯、乙基丙烯酸盐或丙烯酸和C2-8链烯基；或者R6和R7一起形成5或6元通过R6的N或O或S连接的饱和或不饱和的环，该环任意含有本身具有官能度的取代基；以及R8选自氢、氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-4烷基硫代、C7-12芳基烷基硫代、羧酰胺甲基、羧甲基、甲氧基、硫代甲基、苯氧基和硫代苯基。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述通式I的二核苷酸多磷酸是选自P3-二(尿苷5’-)三磷酸；P1-(胞苷5’)-P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(腺苷5’-)三磷酸；P1-(腺苷5’)-P3-(尿苷5’)三磷酸；P1-(腺苷5’)-P3-(胞苷5’)三磷酸；P1，P3-二(乙烯腺苷)三磷酸；P1-(尿苷5’)-P3-(胸苷5’)三磷酸；P1-(腺苷5’)-P3-(肌苷5’)三磷酸；P1，P3-二(尿苷5’-)P2，P3-亚甲基三磷酸；P1，P3-二(尿苷5’-P2，P3-二氟亚甲基三磷酸)；P1，P3-二(尿苷5’-P2，P3-亚氨三磷酸)；P1，P3-二(4-硫代尿苷5’-三磷酸)；P1，P3-二(3，N4-乙烯胞苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5’-)三磷酸，四铵盐；P1-(肌苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(尿苷5’-)P3-(黄苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧尿苷5’-)-P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)三磷酸；P1，P3-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)三磷酸；2’(3’)-苯甲酰-P1，P3-二(尿营5’-)三磷酸；P1，P3-二(2’，3’)-苯甲酰尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(8-氮杂腺苷-5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P3-(2’-脱氧尿苷5’-)三磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P3-(阿拉伯糖胞苷5’-)三磷酸；P1-(腺苷5’-)P3-(4-硫代甲基尿苷5’-)三磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P3-(6-硫代己基嘌呤核苷5’-)三磷酸和P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5’-)P3-(尿苷5’-)三磷酸的二核苷酸三磷酸。
8.如权利要求6所述的方法，其中，所述通式I的二核苷酸多磷酸是选自P1-(尿苷5’-)P2-(4-硫代尿苷5’-)二磷酸；P1，P5-二(尿苷5)-五磷酸和P1，P6-二(尿苷5)-六磷酸的化合物。
9.如权利要求6所述的方法，其中，所述通式I的二核苷酸多磷酸是选自P1，P4-二(尿苷5’-)四磷酸；P1-(胞苷5’)-P4-(尿苷5’)四磷酸；P1，P4-二(腺苷5’-)四磷酸；P1-(腺苷5’)-P4-(尿苷5’)四磷酸；P1-(腺苷5’)-P4-(胞苷5’)四磷酸；P1，P4-二(乙烯腺苷)四磷酸；P1-(尿苷5’)-P4-(胸苷5’)四磷酸；P1-(腺苷5’)-P4-(肌苷5’)四磷酸；P1，P4-二(尿苷5’-)P2，P3-亚甲基四磷酸；P1，P4-二(尿苷5’-P2，P3-二氟亚甲基四磷酸)；P1，P4-二(尿苷5’-P2，P3-亚氨四磷酸)；P1，P4-二(4-硫代尿苷5’-四磷酸)；P1，P4-二(3，N4-乙烯胞苷5’-)四磷酸；P1，P4-二(咪唑[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-呋喃核糖5’-)四磷酸，四铵盐；P1-(肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(胞苷β-D-呋喃阿拉伯糖5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(尿苷5’-)P4-(黄苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧尿苷5’-)-P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1，P4-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)四磷酸2P4；P1，P4-二(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-)四磷酸；2’(3’)-苯甲酰-P1，P4-二(尿苷5’-)四磷酸；P1，P4-二(2’，3’)-苯甲酰尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(8-氮杂腺苷-5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(2’-脱氧尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(阿拉伯糖胞苷5’-)四磷酸；P1-(腺苷5’-)P4-(4-硫代甲基尿苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5’-)四磷酸以及P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸的二核苷酸四磷酸。
10.如权利要求1所述的方法，其中，所述P2Y受体拮抗剂和用于治疗水肿性视网膜疾病的初步处理或佐剂一起施用。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述初步处理选自手术、格栅(grid)和病灶激光光凝术以及药物疗法。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述手术选自巩膜扣带术、充气性视网膜固定术、玻璃体切割术和黄斑易位。
13.如权利要求11所述的方法，其中，所述药物疗法选自皮质类固醇、碳酸酐酶抑制剂、消炎剂以及可促进与玻璃体和视网膜连接的胶原组织和纤维组织消化的药物。
14.如权利要求6所述的方法，其中，所述二核苷酸多磷酸化合物被制备在选自水性、凝胶、类凝胶和固体制剂的制剂中。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述凝胶或类凝胶制剂选自OE透明质酸、和批准可供眼内手术应用的含有透明质酸的制剂。
16.如权利要求1所述的方法，其中，所述施用是所述药物组合物经由携带赋形剂的局部施用，所述赋形剂选自液滴、洗液、凝胶、软膏、喷雾和脂质体。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述局部施用包括通过一种装置将所述药物组合物灌输进所述眼表面，所述装置选自泵-导管系统、连续或选择性释放装置和隐性眼镜。
18.如权利要求1所述的方式，其中，所述施用是所述药物组合物的全身施用。
19.如权利要求18所述的方法，其中，所述药物组合物的全身施用是通过鼻滴、鼻喷雾或雾化的液体将液体或液体悬液施用到所述受试者的口或鼻咽通气管，或者以口服形式、注射形式或栓剂形式给所述受试者用药，或对所述受试者施用凝胶、乳膏、粉末、泡沫、晶体、脂质体、喷雾或液体悬液形式的内操作(intra-operative)滴注物，这样治疗有效量的所述化合物便通过全身吸收和循环与所述受试者的眼组织接触。
20.如权利要求18所述的方法，其中，所述药物组合物的全身施用是通过施用可注射形式的所述化合物实现的，这样治疗有效量的所述化合物便通过全身吸收和循环与所述受试者的眼组织接触。
21.如权利要求20所述的方法，其中，所述药物组合物是通过注射进玻璃体或推注，通过在玻璃体内持续灌输，通过持续释放进玻璃体腔，通过眼球后结膜下注射、释放或灌输，通过穿过巩膜(transcleral)注射，通过持续穿过巩膜释放或灌输，通过眼表面滴注或通过急性或慢性注射或灌输向所述受试者施用的。
22.如权利要求21所述的方法，其中，所述对玻璃体的注射是以50-100微升的注射体积进行一次或多次玻璃体内注射。
23.如权利要求21所述的方法，其中，所述P2Y受体拮抗剂以每只眼睛0.10-4.0毫克的量施用。
24.如权利要求1所述的方法，其中，所述药物组合物被含在眼制剂内施用，所述眼制剂含有有效量的所述P2Y受体拮抗剂，或其药学上可接受的盐，以及生理上适用的赋形剂，所述赋形剂选自电介质水溶液、聚醚、聚乙烯、丙烯酸的聚合物、羊毛脂和糖胺聚糖；其中所述制剂可促进与水肿性视网膜疾病有关的视网膜下和视网膜空间中病态液体的去除。
25.具有结构式I的化合物 其中X是氧、亚甲基、二卤亚甲基或亚氨；n＝0，1或2；m＝0，1或2；n+m＝0，1，2，3或4；Z＝OH或H；Z’＝OH或H；Y＝OH或H；Y’＝OH或H；和B和B’各自独立为如结构式Ia或Ib所定义的嘌呤残基或嘧啶残基，分别通过9-或1-位连接；结构式Ia 其中R1是氢、氯、氨基、单取代的氨基、二取代的氨基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代，其中硫上的取代基含有最多20个不饱和或饱和的碳原子；R2是羟基、链烯基、氧代、氨基、巯基、硫酮、烷基硫代、芳基硫代、烷芳基硫代、酰基硫代、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰氧基、单取代的烷基氨基、杂环基、单取代的环烷基氨基、单取代的芳烷基氨基、单取代的芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基、二烷基氨基、酰基氨基或二酰基氨基，Rx是O、H或缺少；R2和Rx可任选地一起形成1，N6-乙烯腺嘌呤衍生物的五元稠合咪唑环，乙烯部分的4-或5-位被如下定义的烷基、芳基或芳烷基部分任意取代；R3是如下定义的氢、叠氮、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷基硫代、芳基硫代或烷芳基硫代；或是T(C1-6烷基)OCONH(C1-6烷基)W，其中T和W独立为氨基、巯基、羟基或羧基；或是它们药学上可接受的酯、酰胺或盐；或者缺少；J是碳或氮，条件是当J是氮时，R3不出现；其中，所述烷基是直链、支链或环状的；其中，所述芳基可任选地被低级烷基、芳基、氨基、单-或二烷基氨基、NO2、N3、氰基、羧基、酰胺基、亚磺酰氨基、磺酸、磷酸盐或卤素基团取代；结构式Ib 其中R4是羟基、氧代、巯基、硫酮、氨基、氰基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二C1-4烷基氨基，其中所述烷基可任选地连接形成杂环；R5是氢、酰基、苯甲酰基、C1-6烷基、C1-5烷酰基、芳酰基或缺少；R6是羟基、氧代、巯基、硫酮、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-6烷基硫代、S-苯基、芳基硫代、芳基烷基硫代、三唑基氨基、C1-6烷基氨基、C1-5双取代的氨基、或二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任选地连接形成杂环或连接形成取代的环，如吗啉环、吡咯环等；或者R5和R6一起在嘧啶环的3和4位之间形成3，N4-乙烯胞嘧啶衍生物的五元稠合咪唑环，其中所述乙烯部分在4-或5-位被C1-4烷基、苯基或苯氧基任意取代；其中所述C1-4烷基、苯基或苯氧基至少一个氢被选自以下基团的部分任意取代，这些基团是卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、羧基、氰基、硝基、亚磺酰氨基、磺酸盐、磷酸盐、磺酸、氨基、C1-4烷基氨基和二-C1-4烷基氨基，其中所述二烷基可任选地连接形成杂环；R7选自氢、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基或苯基；取代的C2-8炔基、卤素、取代的C1-4烷基、CF3、C2-3链烯基、C2-3炔基、丙烯氨基、溴乙烯、乙基丙烯酸盐或丙烯酸和C2-8链烯基；或者R6和R7一起形成5或6元通过R6的N或O或S连接的饱和或不饱和的环，该环任意含有本身具有官能度的取代基；以及R8选自氢、氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4烷氧基、C7-12芳基烷氧基、C1-4烷基硫代、C7-12芳基烷基硫代、羧酰胺甲基、羧甲基、甲氧基、硫代甲基、苯氧基和硫代苯基；条件是当R8是氨基或取代的氨基时，R7是氢；以及结构式I的呋喃糖部分选自3’-脱氧呋喃核糖基、2’，3’-双脱氧呋喃核糖基、呋喃阿拉伯糖基、3’-脱氧呋喃阿拉伯糖基、呋喃木糖基、2’-多于呋喃木糖基和呋喃来苏糖基。
26.选自P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(6-巯基嘌呤核苷5’-)P4-(2’-脱氧尿苷5’-)四磷酸；P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(阿拉伯糖胞苷5’-)四磷酸；P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(6-硫代己基嘌呤核苷5’-)四磷酸；P1-(6-二十烷氧基嘌呤核苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸；P1-(阿拉伯糖腺苷5’)P4-(尿苷-5’-)四磷酸；P1-(呋喃来苏糖基胸苷5’)P4-(尿苷-5’-)四磷酸和P1-(呋喃来苏糖基尿嘧啶-5’-)P4-(尿苷-5’-)四磷酸的化合物。
全文摘要
本发明提供了治疗水肿性视网膜疾病的方法。所述方法包括施用含有P2Y受体拮抗剂的药物组合物以促进将视网膜下和视网膜空间中病态的外来液体除去，从而减少与视网膜剥离和视网膜疾病有关的所述液体的累积。上述P2Y受体拮抗剂可以和通常用于治疗水肿性视网膜疾病的治疗剂和佐剂一起施用。所述对本发明有效的药物组合物含有对胞外水解有增强抗性的P2Y受体激动药，如二核苷酸多磷酸化合物。
文档编号A61P9/10GK1575181SQ02804303
公开日2005年2月2日 申请日期2002年1月29日 优先权日2001年1月30日
发明者W·M·彼德森, B·R·叶尔克萨 申请人:印斯拜尔药品股份有限公司