治疗肝纤维化和丙型肝炎病毒感染的方法

专利名称：治疗肝纤维化和丙型肝炎病毒感染的方法
技术领域：
本发明涉及肝纤维化和丙肝病毒感染治疗领域。
背景技术：
由于对肝脏的慢性毒性损害，如丙肝病毒(HCV)感染、自体免疫损伤和长期暴露于毒物，如酒精等会引发肝纤维化。慢性毒损伤导致肝细胞损伤和伴随慢性炎症的修复的重复循环。在不定的时段里，由于宿主创伤修复应答的结果使异常的细胞外基质进行性地积累。如果不加控制，这会导致纤维物质沉积增加，直至肝脏结构被扭曲，并危及肝脏的再生能力。疤痕组织在肝脏内进行性地积聚最终引起了组织病理学上所描绘的硬化，被定义为遍布整个肝脏中纤维间隔的形成，同时伴有微节结形成。
丙型肝炎病毒(HCV)感染在美国是最常见的慢性血源性感染。虽然新发感染的数量已经下降，但据疾病控制中心(Centers for Disease Control)统计，美国有390万(1.8％)受感染的病人，慢性感染的负担是实实在在的。慢性肝脏疾病是美国第十位的成人死亡原因，共计每年大约有25,000人死亡，约占所有死亡人数的1％。研究表明40％的慢性肝脏疾病与HCV有关，导致每年8,000到10,000人的死亡。与HCV有关的终末期肝病是成人肝移植最常见的指征。
随着治疗效果的明显改善，对慢性丙型肝炎病毒的抗病毒治疗在过去十年中很快得到应用。但是，即使是施用聚乙二醇化的IFN-α加利巴韦林的联合治疗，仍有40％到50％的病人治疗失败。这些病人通常被称为“治疗失败”病人，包括无反应者(指治疗期间病毒滴度居高不下的病人)和复发病人(指治疗初期病毒滴度下降，但随后在治疗过程中上升或在治疗结束后上升的病人)。至今这些病人没有有效的治疗选择。特别是肝活检有晚期纤维化或肝硬化的病人有发展为晚期肝脏疾病并发症的高度危险，这些并发症包括腹水、黄疸、曲张静脉出血、脑病和进行性肝衰竭，同时这些病人有发展为肝细胞性肿瘤的显著增加的危险。
慢性HCV感染的高流行对于美国未来的慢性肝脏疾病负荷是一个重大的公众健康问题。来自国家健康和营养检测调查中心(NHANES III)的数据显示从20世纪60年代后期到20世纪80年代初期，特别在20-40岁的人群中，新的HCV感染率大幅度上升。据估计患有20年或以上的长期HCV感染的人群从1990年到2015年会上升4倍多，从750,000到三百万以上。30或40岁感染人群的比例将会有更大的增长。由于HCV-相关的慢性肝病的风险与感染持续的时间有关，对于感染20年以上的患者具有硬化进行性增加的危险，这将导致在1965-1985间感染的患者中，与硬化有关的发病率和死亡率明显增加。
该技术领域很需要治疗肝病如肝纤维化以及治疗HCV感染的方法。本发明旨在解决该需求，并提供相关的优点。
文献METAVIR(1994)Hepatology 2015-20；Brunt(2000)Hepatol.31241-246；Alpini(1997)J.Hepatol.27371-380；Baroni等(1996)Hepatol.231189-1199；Czaja等(1989)Hepatol.10795-800；Grossman等(1998)J.Gastroenterol.Hepatol.131058-1060；Rockey和Chung(1994)J.Invest.Med.42660-670；Sakaida等(1998)J.Hepatol.28471-479；Shi等(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410663-10668；Baroni等(1999)Liver 19212-219；Lortat-Jacob等(1997)J.Hepatol.26894-903；Llorent等(1996)J.Hepatol.24555-563；美国专利5,082,659；欧洲专利申请EP294,160；美国专利4,806,347；Balish等(1992)J.Infect.Diseases 1661401-1403；Katayama等(2001)J.Viral Hepatitis 8180-185；美国专利5,082,659；美国专利5,190,751；美国专利4,806,347；Wandl等(1992)Br.J.Haematol.81516-519；欧洲专利申请294,160号；加拿大专利1,321,348；欧洲专利申请276,120；Wandl等(1992)Sem.Oncol.1988-94 Balish等，(1992)J.Infectious Diseases1661401-1403；Van Dijk等，(1994)Int.J.Cancer 56262-268；Sundmacher等，(1987)Current Eye Res.6273-276。
发明概述本发明提供了治疗丙肝病毒(HCV)感染的方法；减少肝纤维化的方法；在患有肝纤维化的个体中增强肝功能的方法；减少与HCV有关的并发症和肝脏硬化的发病率的方法；减少病毒负荷的方法。所述方法通常包括同时给予治疗有效量的IFN-α和IFN-γ。
本发明的特征本发明的特征在于一种治疗丙肝病毒(HCV)感染的方法，通常包括同时给予实现持续病毒应答有效量的IFN-α和IFN-γ。
本发明的特征在于一种减少个体肝纤维化的方法，通常包括同时给予减少肝纤维化有效量的IFN-α和IFN-γ。一些实施方案中，肝纤维化的程度通过肝活体检查的治疗前和治疗后分阶段测定，其中在将治疗前的肝活体检查和治疗后的活性检查相比时，如通过标准化的评分系统所测定的，肝纤维化的阶段减少至降低一个单位。
本发明还有一个特征是在患有肝纤维化的个体中增强肝功能的方法，通常包括给予增加肝功能有效量的IFN-α和IFN-γ。肝功能可通过测定选自血清转氨酶水平、凝血酶原时间、血清胆红素水平、血小板数、血清白蛋白水平、门静脉压的改善、腹水的减少、脑病水平的下降和内静脉曲张的程度下降等参数来显示。
本发明的再一个特征是减少肝硬化并发症发病率的方法，通常包括对患有肝纤维化的个体给予减少肝硬化并发症发病率有效量的IFN-α和IFN-γ。肝硬化并发症的例子是门静脉压高压症、进行性肝功能不全和肝细胞癌。
在采取上述方法时，对个体施用了IFN-α和IFN-γ。在一些实施方案中，IFN-α和IFN-γ是在同一制剂中施用的。在其它实施方案中，IFN-α和IFN-γ是在分开的试剂中施用的。当以分开的制剂施用时，IFN-α和IFN-γ可基本上同时施用，或在施用一种后约24小时内施用第二种。在许多实施方案中，IFN-α和IFN-γ是以多剂量皮下施用的。
IFN-γ的剂量约为每剂25μg到300μg。共有序列IFN-α的有效剂量约为每剂3μg、9μg、15μg、18μg或27μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效剂量为每剂3百万国际单位(MIU)-10MIU。PEG化的IFN-α2a的有效剂量为每剂90-180μg。PEG化的IFN-α2b的有效剂量为每剂每千克体重0.5μg-1.5μg。许多实施方案中，IFN-α和IFN-γ至少要施用3个月，而且可以施用更长时间。
一些实施方案中，IFN-γ是在IFN-α治疗的整个过程中施用的。其它实施方案中，IFN-γ的施用期与IFN-α的治疗期重叠，例如可在IFN-α治疗开始之前进行IFN-γ治疗并在IFN-α治疗结束前结束；IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始之后进行并在IFN-γ治疗结束后结束；IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始之后进行并在IFN-α治疗结束前结束；或IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始之前进行并在IFN-α治疗结束后结束。
在其它实施方案中，除IFN-α和IFN-γ还施用了利巴韦林。
定义本文使用的术语“肝纤维化”指由于各种慢性肝炎感染导致的肝脏中疤痕组织的生长。
术语“个体”、“宿主”、“对象”和“病人”在本文中可互换使用，指哺乳动物，包括但不限于灵长目，包括猿猴和人，特别是人类。
本文使用的术语“肝功能”指肝的正常功能，包括但不限于，合成功能，包括但不限于，合成蛋白质，如血清蛋白(如白蛋白，凝血因子，碱性磷酸酶，转氨酶(如丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰转肽酶等)，合成胆红素，合成胆固醇和合成胆酸；肝的代谢功能，包括，但不限于，碳水化合物代谢，氨基酸和氨代谢，激素代谢和脂肪代谢；外源性药物解毒；血液动力学功能，包括内脏和门静脉的血液动力学；等等。
术语“持续病毒应答”(SVR；也称为“持续应答”或“耐久性应答”)在这里是指个体对治疗HCV感染的治疗方案的反应，根据血清HCV滴度测定。通常，“持续病毒应答”是指在治疗停止后的至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月的时间内在患者血清中未检测到HCVRNA(例如，每毫升血清少于约500、少于约200、或少于约100个基因组拷贝)。
术语“治疗失败病人”(或“治疗失败”)在本文中通常指对先前的针对HCV治疗的反应无效的HCV感染病人(称为“无反应者”)或对先前的治疗一开始有反应(如初期病毒反应(IVR))，但没有维持治疗反应的人(称为“复发者”)。先前的治疗通常包括IFN-α单一治疗或IFN-α联合治疗，其IFN-α联合治疗可能包括施用IFN-α和一种抗病毒药剂如病毒唑。
用于本文中的术语“治疗”，“医治”，以及诸如此类的术语指获得所需要的药理和/或生理效果。该效果就其防止一种疾病或症状的全部或部分而言可能是预防性的，和/或就其部分或完全地治疗一种疾病和/或由疾病引起的不良影响而言可能是治疗性的。“治疗”在本文中包括对所有哺乳动物疾病的任何治疗，特别是人类的疾病，包括(a)防止疾病或疾病的症状在那些对该疾病有易感性但尚未诊断为罹患该病的个体上发生(如包括与原发疾病伴发的或引起的疾病(就象慢性HCV感染的背景会导致肝纤维化。(b)抑制疾病，就是阻止疾病的发展，(c)减轻疾病，就是造成疾病的消退。
术语“个体”、“宿主”、“对象”和“病人”在本文中可互换使用，指哺乳动物，包括但不限于鼠科、猿类、人类、哺乳类畜牧动物、哺乳类运动动物和哺乳类宠物。
在本发明被进一步阐述前，应当理解这一发明不应被限定于所描述的具体实施方案，因为它们肯定会有变化。同样也应当理解本文中的术语只是用来描述具体实施方案的，而不是限定它们的，因为本发明的范围只是被所附的权利要求所限定。
本文中提供的数值范围，应当理解为每个在其范围内的数值，直到下限数值单位的十分之一，除非上下文清楚地表述，否则在该范围上下限之间的数值和在所述范围间任何其他确定的数值或介于其中的数值都包含在发明中。这些较小范围的上下限数值可被单独包含在较小范围内，同时它们也包含在发明中，属于在所述范围内任何被(较小范围)特别除外的范围。所述的范围包括其一个或全部二个限定值，排除该一个或全部二个限定值的范围也包含在本发明中。
除非另加定义，本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的熟练技术人员对它们的普遍理解相同。虽然有许多与本文所述相近或等同的方法和材料能用于实践或测试本发明，但本文所述的是优先施用的方法和材料。所有本文提及的公开文献是作为参考来透露和描述与所引用公开文献有关的方法和/或材料而写入本文的。
必须注意，除非有上下文清楚表述，否则本文及所附的权利要求中的单数形式都包含复数内容。例如，本文中提及的“一种方法”包括该方法的复数形式，本文中提及的“剂量”包括一种或多种剂量和本领域中熟练技术人员所知晓的等价物，等等。
本文所讨论的公开文献只是因为它们的公开早于本发明申请的申请日。本文不应被推断为承认本发明无权借助在先发明而产生于上述公开文献前，而且，所提供的公开文献的日期可能与实际
公开日不同，该实际
公开日也许需要独立的确定。
发明详述本发明提供了治疗丙肝病毒(HCV)感染的方法；治疗肝纤维化的方法，包括降低临床肝纤维化，降低肝纤维化发生的可能性，以及降低与肝纤维化有关的参数。所述方法通常包括对有此需要的个体施用治疗有效量的IFN-α和IFN-γ。这种联合治疗的协同效果远高于单独的IFN-α和IFN-γ治疗。在许多实施例中，特别感兴趣的是治疗人。
肝纤维化是与肝硬化有关的并发症，如门静脉高压症、进行性的肝功能不全和肝细胞癌等的先兆。降低肝纤维化因此可降低这类并发症的发病率。因此，本发明进一步提供了降低个体形成与肝硬化有关的并发症的可能性的方法。
本方法通常包括给予治疗有效量的IFN-α和IFN-γ。本文使用的“治疗有效量的”IFN-α和IFN-γ的联合表示IFN-α和IFN-γ的这样的量，它能有效地治疗HCV感染；达到持续性的病毒应答；降低肝纤维化；和/或能有效地降低个体形成肝纤维化可能性；和/或有效地降低与肝纤维化有关的参数；和/或能有效地减少与肝硬化有关的疾病。
丙肝病毒本发明提供了治疗HCV的方法。所述方法通常包括对个体施用IFN-α和IFN-γ，施用量可有效降低个体的病毒负荷，从而实现持续病毒应答。
上述方法能否有效治疗HCV感染可通过测定病毒负荷来确定，或通过测量与HCV感染有关的参数，包括但不限于肝纤维化、血清转氨酶水平的升高和肝脏的坏死炎症活性。肝纤维化的指示剂将在下文讨论。
检测病毒负荷可以通过检测血清中的病毒滴度或病毒水平来测定。这些方法包括但不限于定量聚合酶链式反应(PCR)和分支DNA(bDNA)测试。已经开发了测定HCVRHN的病毒负荷(滴度)的定量测定方法。包括检测HCVRNA的病毒负荷(滴度)的定量反转录PCR(RT-PCR)(Amplicor HCV MonitorTM，Roche MoledularSystems，新泽西)和分支DNA(脱氧核糖核酸)信号放大检测(QuantiplexTMHCVRNA Assay(bDNA)，Chiron公司，Emeryville，加利福尼亚)在内的许多这种测定法可在市场购得。见如Gretch等(1995)Ann.Intern.Med.123321-329。
通常，IFNα和IFNγ的有效量是可将病毒负荷有效降低至不可测水平，如至每毫升血清小于约500、小于约1000、小于约500或小于约200基因组拷贝的量。一些实施方案中，IFNα和IFNγ的有效量是可将病毒负荷有效降低至每毫升血清小于约100个基因组拷贝的量。在许多实施方案中，本发明的方法可实现持续病毒应答，即在治疗停止后的至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月的时间内病毒负荷被降至不可测水平。
如上所述，上述方法能否有效治疗HCV感染可通过测定与HCV感染有关的参数，如肝纤维化，来确定。测定肝纤维化程度的方法将在下面讨论。一些实施方案中，肝纤维化的血清标记水平说明了肝纤维化的程度。
一个非限制性的例子是用标准测定法测定血清丙氨酸转移酶(ALT)水平。通常，ALT水平小于约45国际单位被认为是正常的。一些实施方案中，IFNα和IFNγ的有效剂量是可将ALT水平有效降至每毫升血清45IU以下的量。
与未治疗个体或用安慰剂治疗的个体的肝纤维化的标记物的血清水平相比，治疗有效量的IFN-α和IFN-γ是使标记物的血清水平降低至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。测量血清标记物的方法包括基于免疫学的方法，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫分析等，它们使用对给定的血清标记物具有特异性的抗体。
纤维化用IFN-α和IFN-γ治疗是否能有效地降低肝纤维化通过许多成熟的检测肝纤维化和肝功能的任何技术来测定。是否减少了肝纤维化通过分析肝活组织检查样品来决定。肝的活组织检查的分析包括评估两个主要部分通过“分级”评估坏死炎症来测定疾病的严重程度和进展中的疾病活动性，通过分“阶段”来评估纤维化的损害和实质或脉管改变的损伤以反应长期疾病的进展。参见，如Brunt(2000)Hepatol.31241-246；和METAVIR(1994)Hepatology 2015-20。基于肝活组织检查的分析可给出评分。有许多标准化的评分系统，它们可定量地评估纤维化的程度和严重性。这些评分系统包括METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig和Ishak评分系统。
METAVIR评分系统基于肝活组织检查的各种特征分析，包括纤维化(门静脉纤维化、小叶中心纤维化和硬化)；坏死(粉碎性和裂片性坏死，嗜酸性收缩和气胀变性)；炎症(门静脉管炎症、门静脉淋巴聚合和门静脉炎症的分布)；胆管改变；和Knodell指数(对外周门静脉坏死、小叶坏死、门静脉炎症、纤维化和总体疾病活性的评分)。METAVIR系统中的每个阶段的定义如下0分，没有纤维化；1分，门静脉管星状扩张但没有形成隔膜；2分，门静脉管扩张，有少量隔膜形成；3分，有许多隔膜，没有硬化；4分，硬化。
Knodell评分系统也称为肝炎活性指数，根据组织学特征分为4类I.外周门静脉和/或桥坏死；II.小叶内变性，灶性坏死；III.门静脉炎症；和IV.纤维化。在Knodell分阶段系统中，评分如下0分，没有纤维化；1分，轻度纤维化(纤维性门静脉扩张)；2分，中度纤维化；3分，严重纤维化(桥纤维化)；4分，硬化。分数越高，肝组织损伤越严重。Knodell(1981)Hepatol.1431。
Scheuer评分系统的评分如下0分，没有纤维化；1分，扩大的、纤维化的门静脉管；2分；外周门静脉或门静脉-门静脉隔膜，但具有完整的结构；3分，纤维化，结构被扭曲，但没有明显的硬化；4分，可能或肯定硬化。Scheuer(1991)J.Hepatol.13372。
Ishak评分系统如Ishak(1995)J.Hepatol.22696-699所述。阶段0，没有纤维化；阶段1，一些门静脉区域纤维性扩张，有或没有短纤维隔膜；阶段2，大多数门静脉区域有纤维性扩张，有或没有短纤维隔膜；阶段3，大多数门静脉区域有纤维性扩张，偶有门静脉到门静脉(P-P)桥；阶段4，门静脉区域纤维性扩张，有明显的P-P桥和门静脉到中心(P-C)桥；阶段5，明显的P-P和P-C桥，偶有小节结(不完全硬化)；阶段6，硬化，可能的或肯定的。抗纤维疗法的益处也可用Child-Pugh评分系统进行测定和评估，该评分系统包括一个多组成点系统，该系统基于血清胆红素水平异常，血清白蛋白水平异常，凝血酶原时间异常，腹水的存在和严重程度，和脑病的存在和严重程度。根据这些参数异常性的存在和严重程度，患者可分为三类A、B或C，其严重程度递增。
在一些实施方案中，治疗有效量的IFN-α和IFN-γ是能使治疗前和治疗后肝活组织检查比较中纤维化阶段改变一个单位或更多单位的IFN-α和IFN-γ的量。在特定的实施方案中，治疗有效量IFN-α和IFN-γ能减少肝纤维化程度至少一个单位(METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig或Ishak评分系统中的单位)。
次级的或非直接的肝功能指数也可用来评估IFN-α和IFN-γ治疗的效果。根据特定的胶原质着色和/或肝纤维化的血清标记对肝脏纤维化定量程度的形态测定计算机化的半自动评估也可作为患者治疗方法的效果的指征进行测定。次级的肝功能指数包括，但不限于，血清转氨酶水平、凝血酶原时间、胆红素水平、血小板数、门静脉压、白蛋白水平和Child-Pugh评分的评估。与未治疗的个体或用安慰剂治疗的个体的肝功能指数相比，有效量的IFN-α和IFN-γ是使肝功能指数增加至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。本领域的熟练的技术人员可使用标准的分析方法(许多都可市售，且在临床上常规使用)容易地测得这类肝功能指数。
肝纤维化的血清标记也可作为本发明治疗方法的效果的指征进行测量。肝纤维化的血清标记物包括，但不限于，透明质酸盐、N-末端前胶原III肽、7S域的IV型胶原、C-末端前胶原I肽和层粘连蛋白。另外的肝纤维化的生物化学标记物包括α-2-巨球蛋白、结合珠蛋白、γ球蛋白、载脂蛋白A和γ谷氨酰转肽酶。
与未治疗个体或用安慰剂治疗的个体的肝纤维化的标记物的血清水平相比，治疗有效量的IFN-α和IFN-γ是使标记物的血清水平增加至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。本领域熟练的技术人员可使用标准的分析方法(许多都可市售，且在临床上常规使用)容易地测得这类肝纤维化的血清标记物。测量血清标记物的方法包括基于免疫的方法，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫分析等，它们使用对给定的血清标记物具有特异性的抗体。
也可使用功能性肝保留的定量试验来评估用IFN-α和IFN-γ治疗的效果。这些试验包括靛氰绿清除(ICG)、半乳糖消除能力(GEC)、氨基比林呼吸试验(ABT)、安替比林清除试验、单乙基甘氨酸-xylidide(MEG-X)清除试验和咖啡因清除试验。
本文使用的“与肝硬化有关的并发症”指代谢失调的肝病的后遗症，即它们在肝纤维化后发生，并是肝纤维化发展的结果，它们包括，但不限于，形成腹水、静脉曲张出血、门静脉高压症、黄疸、进行性肝功能不全、脑病、肝细胞癌、肝衰竭需要肝移植和与肝有关的死亡。
治疗有效量的IFN-α和IFN-γ是与未治疗个体或用安慰剂治疗的个体相比，能有效减少与肝硬化有关的疾病(如个体形成这些疾病的可能性)的发病率至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。
用IFN-α和IFN-γ治疗是否能有效地减少与肝硬化有关的疾病的发病率可由该领域熟练的技术人员容易地测定。
肝纤维化的减少能增加肝功能。因此，本发明提供了提高肝功能的方法，通常包括给予治疗有效量的IFN-α和IFN-γ。肝功能包括，但不限于，合成蛋白质，如血清蛋白(如白蛋白，凝血因子，碱性磷酸酶，转氨酶(如丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰转肽酶等)，合成胆红素，合成胆固醇和合成胆酸；肝的代谢功能，包括，但不限于，碳水化合物代谢，氨基酸和氨代谢，激素代谢和脂肪代谢；外源性药物解毒；血液动力学功能，包括内脏和门静脉的血液动力学；等等。
肝功能是否增加可由本领域熟练的技术人员使用成熟的肝功能试验容易地确定。这样，如白蛋白，碱性磷酸酶，丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、胆红素等肝功能标记物的合成可通过用标准的免疫学和酶分析测量血清中这些标记物的水平进行评估。用标准方法通过门静脉楔入压和/或耐受力可测量内脏循环和门静脉的血液动力学。代谢功能可通过测量血清中氨水平进行测定。
肝脏通常分泌的血清蛋白是否在正常的范围内可通过使用标准的免疫学和酶分析方法测量这类蛋白质的水平来决定。本领域熟练的技术人员知道这类血清蛋白的正常范围。下列是非限定性实例。丙氨酸转氨酶的正常范围是约45IU/升血清。天冬氨酸转氨酶的正常范围是约5-40单位/升血清。胆红素用标准分析测量。正常的胆红素水平通常低于约1.2mg/dL。血清白蛋白水平用标准分析测量。正常的血清白蛋白范围是约35-55g/L。用标准分析测定凝血酶原时间的延长。正常的凝血酶原时间比对照长约不足4秒。
治疗有效量的IFN-α和IFN-γ是能有效提高肝功能至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％或更多的量。例如，治疗有效量的IFNγ是能将肝功能的血清标记物的升高水平减少至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％或更多的量，或将肝功能的血清标记物水平降低到正常范围里。治疗有效量的IFNγ也是能将肝功能的血清标记物的降低水平增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％或更多的量，或将肝功能的血清标记物水平提高到正常范围里。
干扰素-α任何已知的IFN-α都可用于本发明。术语“干扰素-α”在这里是指可抑制病毒复制和细胞增殖以及调节免疫应答的相关多肽家族。术语“IFN-α”包括天然产生的IFN-α；合成的IFN-α；衍生的IFN-α(如PEG化的IFN-α，糖基化的IFN-α等)以及天然产生的IFN-α或合成的IFN-α的类似物；实质上任何IFN-α都具有天然产生的IFN-α一样的抗病毒特性。
合适的α干扰素包括但不限于天然产生的IFN-α(包括但不限于天然产生的IFN-α2a、IFN-α2b)；重组干扰素-α2b，如Schering公司(Kenilworth，N.J.)的Intron-A干扰素；重组干扰素-α2a，如Hoffmann-La Roche公司(Nutley，N.J.)的Roferon干扰素；重组干扰素-α2c，如Boehringer Ingelheim医药有限公司(Ridgefield，Conn)的Berofor alpha 2干扰素；干扰素-αn1，一种自然α干扰素的提纯混合物，如日本Sumitomo公司的Sumiferon；如Glaxo-ukllcome Ltd.，London，英国的Wellferon干扰素-αn1(INS)；干扰素-αn3，一种天然α干扰素的混合物，由Interferon Science制造和Purdue Frederick公司(Norwalk，Conn)提供，商品名为Alferon。
术语“IFN-α”还包括共有序列IFN-α。共有序列干扰素-α(也称为“CIFN”和“IFN-con”)包括但不限于如美国专利4,897,471和4,695,621公开的以氨基酸序列命名的IFN-con1、IFN-con2、IFN-con3；以及通过检测天然产生的干扰素α的共有序列而确定的共有序列干扰素(如Infergen，Amgen，Thousand Oaks，加利福尼亚)。编码IFN-con的DNA可按照上述专利或其他标准方法的描述进行合成。CIFN的使用特别引人瞩目。
术语“IFN-α”还包括经过衍生(如经过化学修饰)以改变某些性质如血清半衰期的IFN-α的衍生物。因此，术语“IFN-α”包括糖基化的IFN-α；用聚乙二醇衍生化的IFN-α(“PEG化的IFN-α”)等等。PEG化的干扰素-α及其制备方法描述在美国专利5,382,657；5,981,709；5,824,784；5,985,265和5,951,974。PEG化的IFN-α包括PEG与上述任何IFN-α分子的结合物，所述IFN-α分子包括但不限于干扰素-α2a(Roferon，Hoffmann-La Roche，Nutley，新泽西)，干扰素-α2b(Intron，Schering-Plough，Madison，新泽西)，干扰素-α2c(Berofor Alpha，Boehringer Ingelheim，Ingelheim，德国)；以及通过检测天然产生的干扰素α的共有序列而确定的共有序列干扰素(Infergen，Amgen，Thousand Oaks，加利福尼亚)。
干扰素-γ可从公共数据库，如Genbank，杂志出版物等得到编码IFN-γ多肽的核酸序列。虽然对各种哺乳动物的IFN-γ感兴趣，但对于治疗人体疾病，一般使用人蛋白。人IFN-γ编码序列可在Genbank中找到，登录号为X13274；V00543和NM_000619。在Genbank中可发现相应的基因组序列，登录号J00219；M37265和V00536。参见，例如，Gray等(1982)Nature 295501(Genbank X13274)和Rinderknecht等(1984)J.B.C.2596790。
IFN-γ1b(Actimmune；人干扰素)是140个氨基酸的单链多肽。它在大肠杆菌中重组制备，其未糖基化。Rinderknecht等(1984)J.Biol.Chem.2596790-6797。
用于本发明组合物的IFN-γ可为任何天然的IFN-γ、重组IFN-γ及其衍生物，只要它们具有IFN-γ活性，特别是人IFN-γ活性即刻。如本技术领域所知，人IFN-γ显示了干扰素特性的，抗病毒和抗增殖性质，以及许多其它免疫调节活性。虽然IFN-γ基于上述提供的序列，但其蛋白质的形成和分解蛋白过程中会形成其加工变体。由Gray等(同上)提供的未加工的序列由166个氨基酸(aa)构成。虽然在大肠杆菌中产生的重组IFN-γ开始被认为有146个氨基酸(在氨基酸20开始)，但结果发现天然的人IFN-γ在残基23后酶切，产生143氨基酸的蛋白质，或144氨基酸(若如细菌表达所需存在末端的甲硫氨酸)。在纯化过程中，成熟蛋白质在残基162(参见Gray等序列)后的C末端处再酶切，得到139个氨基酸的蛋白质或140氨基酸的蛋白质(若有起始的甲硫氨酸存在，如若需要细菌表达)。N-末端的甲硫氨酸是由mRNA翻译的“起始”信号AUG编码的人工物品，AUG在大肠杆菌表达的具体情况下不会被加工除去。在其它的微生物系统或真核表达系统中，可去除甲硫氨酸。
对于用于本发明的方法，可使用任何天然的IFN-γ肽、它们的修饰物和变体，或一种或多种肽的组合。感兴趣的IFN-γ肽包括片段，并可在相对于全序列的羧基末端进行各种截断。只要氨基酸24-约149(从未加工的多肽残基开始计数)存在，这类片段就继续展示人γ干扰素的特性。在氨基酸155后可用外来的序列代替氨基酸序列而不会丧失活性。参见，例如美国专利5,690,925，在此引入供参考。天然IFN-γ部分包括分别从氨基酸残基24-150；24-151；24-152；24-153；24-155和24-157扩展出来的分子。任何这些变体，和本领域已知且具有IFN-γ活性的其它变体可用于本发明的方法。
IFN-γ多肽序列可用本领域已知的各种方法进行改变，以在序列中产生目标性的改变。变化的多肽通常与这里提供的序列基本上相似，即至少一个氨基酸不同，或可能至少两个氨基酸不同，但不会超过约10个氨基酸不同。序列改变可以是取代、插入或删除。系统地引入丙氨酸或其它残基的扫描变异可用来测定关键的氨基酸。感兴趣的特定氨基酸替代包括保守和非保守的改变。保守氨基酸替代典型地包括下列基团(甘氨酸，丙氨酸)；(缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸)；(天冬氨酸，谷氨酸)；(天冬酰胺，谷氨酰胺)；(丝氨酸，苏氨酸)；(赖氨酸，精氨酸)；或(苯丙氨酸，酪氨酸)。
可以或不能改变基本氨基酸序列的感兴趣的修饰包括多肽的化学衍生化，如乙酰化或羧基化；引入或除去糖基化位点的氨基酸序列的改变；使蛋白质对PEG化敏感的氨基酸序列的改变等等。还包括糖基化修饰，如通过在其合成和加工过程中或进一步加工的步骤中修饰多肽的糖基化方式进行的修饰，例如，通过将多肽暴露于影响糖基化的酶，如哺乳动物糖基化或去糖基化的酶。也包含具有磷酸化氨基酸残基的序列，如，磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸。
包括在本发明中是业已用普通化学技术修饰的多肽，以改进它们对蛋白水解降解的耐受性，使其溶解度性质最优化，或使它们更适合作为治疗剂。例如，可环化肽的骨架以增加稳定性(参见Friedler等(2000)J.Biol.Chem.27523783-23789)。可使用的类似物包括非天然产生的L-氨基酸残基，如D-氨基酸或非天然产生的合成氨基酸。蛋白质可被PEG化以增加稳定性。
使用本领域已知的常规方法，通过重组方法体外合成制备多肽，或从诱导的或天然产生蛋白质的细胞中分离得到多肽。具体的序列和制备方法可由其方便性、经济性、所需的纯度等来决定。如果需要，在合成期间或表达期间可向多肽中引入各种基团，这可使其与其它分子或表面连接。这样，半胱氨酸可用来制备硫醚、组氨酸，供与金属离子络合物连接的羧基用来形成酰胺或酯，氨基用来形成酰胺等等。
也可根据常规的重组体合成方法来分离和纯化多肽。可从表达宿主中制备溶解产物，用HPLC、排阻层析、凝胶电泳、亲和层析或其它纯化技术来纯化溶解产物。大多数情况下，使用的组合物包含至少20％重量的所需产品，更通常的是至少约75％重量，优选的是至少95％重量的所需产品，对于治疗用组合物，相对于制备和纯化方法中产生的污染来说，通常包含至少约99.5％重量的所需产品。通常情况下，百分数是基于总蛋白的百分数。
剂量、制剂和给药途径IFN-α和IFN-γ以与可接受的赋形剂进行制剂来给药。本技术领域已知各种药学上可接受的赋形剂，在此不需要详细讨论。药学上可接受的赋形剂在各种公开物(如A.Gennaro(2000)“雷明顿制药科学与实践(RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy)”，第20版，Lippincott，Williams，&Wilkins；药物剂型和药物传递系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)(1999)H.C.Ansel等编，第7版，Lippincott，Willlams，&Wilkins；以及药物赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.Kibbe等编辑，第3版，Amer.Pharmaceutical Assoc.)中业已作了大量的描述。
药学上可接受的赋形剂，如赋形剂、佐剂、载体或稀释剂是公众容易获得的。此外，药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、稳定剂、湿润剂等，也是公众容易获得的。
在本发明方法中，活性剂可使用任何能够产生所需治疗效果的常规方法给予宿主。这样，该药剂可掺入各种制剂供治疗给药。更具体的是，本发明的药物通过与合适的药学上可接受的载体或稀释剂组合来配制成药物组合物，它们可配制成固体、半固体、液体或气体形式，如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。
结果，可通过各种途径给药，包括口服、颊内给药、直肠给药、非胃肠道给药、腹腔内给药、皮内给药、经皮肤给药、气管内等给药。
在药物剂型中，药剂可以它们的药学上可接受的盐形式给予，或它们可单独或以适当的合方式，以及与其它药学活性化合物组合使用。下列方法和赋形剂仅用于举例，并非用作限定。
对于口服制剂，可单独使用药剂或与适当的添加剂组合制成片剂、粉末、颗粒剂或胶囊剂，例如，与常规的添加剂，诸如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或土豆淀粉组合；与诸如晶体纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶等的粘合剂组合；与诸如滑石粉或硬脂酸镁的润滑剂组合；需要时，与稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂和调味剂组合。
通过将药剂溶解、悬浮或乳化在水性或非水性溶剂中，如植物油或其它相似的油、合成的脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸酯或丙二醇，将药剂配制成用于注射的制剂；需要时，与常规的添加剂，如助溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂混合。
此外，通过将药剂与各种基质，如乳化的基质或水溶性基质混合可制备栓剂。本发明的化合物可通过栓剂直肠给药。栓剂可包括诸如可可脂、碳蜡和聚乙二醇的赋形剂，这些赋形剂在体温下熔化，在室温下固化。
用于口服或直肠给药的单位剂型可为糖浆剂、酏剂和悬浮剂，其中每个剂量单位，例如一茶匙的量、一大汤匙的量、一个片剂或一个栓剂包含预定量的含有一种或多种抑制剂的组合物。相似的是，注射用或静脉给药的单位剂量在组合物中可包含抑制剂，该组合物为存在于无菌水、生理盐水或另一种药学上可接受的载体中的溶液。
本文使用的术语“单位剂型”指适合用于人和动物患者的单一剂量的身体上不连续的单位，每个单位含有预定量的本发明化合物，该量是通过以足以产生与药物可接受的稀释剂、载体有关的所需效应的量计算的。本发明的新颖的单位剂型依赖于所用的特定化合物和所欲达到的效果，以及与宿主中每个化合物有关的药物动力学。
所有实施方案中，IFN-γ是与至少一种剂量的IFN-α同时施用的。术语“同时”在这里是指IFN-α和IFN-γ是独立施用的，且在施用另一种药剂约5-15秒之内、在约15-30秒之内、在约30-60秒之内、在约1-5分钟之内、在约5-15分钟之内、在约15-30分钟之内、在约30-60分钟之内、在约1-2小时之内、在约2-6小时之内、在约6-12小时之内、在约12-24小时之内或在约24-48小时之内施用。
一些实施方案中，IFN-γ在IFN-α治疗的整个过程中施用。在其它实施方案中，IFN-γ的施用期与IFN-α的治疗期重叠，例如可在IFN-α治疗开始之前进行IFN-γ治疗并在IFN-α治疗结束前结束；IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始之后进行并在IFN-γ治疗结束后结束；IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始之后进行并在IFN-α治疗结束前结束；或IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始之前进行并在IFN-α治疗结束后结束。
IFN-γ的有效剂量范围为约0.5-500μg/m2，通常是约1.5-200μg/m2，取决于患者个体的大小。该活性基于106国际单位(IU)/50μg蛋白质。IFN-γ可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上连续施用。
IFN-α的有效剂量约为每剂3μg、9μg、15μg、18μg或27μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效剂量为每剂3百万国际单位(MIU)-10MIU。PEG化的IFN-α2a的有效剂量为每剂90-180μg。PEG化的IFN-α2b的有效剂量为每剂每千克体重0.5μg-1.5μg。IFN-α可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上连续施用。
一些实施方案中，IFN-α在第一剂量方案中施用，然后是第二剂量方案。IFN-α的第一剂量方案(也称为“诱导方案”)通常包括给予高剂量的IFN-α。例如，对于共有序列IFN-α(CIFN)，第一剂量方案包括给予约9μg、15μg、18μg或27μg的CIFN。第一剂量方案可包括单剂量事件，或至少两次或多次剂量。IFN-α的第一剂量方案可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上连续施用，以便获得所需的IFN-α的平均日血清浓度。
IFN-α的第一剂量方案可施用至少约4周、至少约8周或至少约12周，IFN-α的第二剂量方案(也称为“维持剂量”)通常包括给予低剂量的IFN-α。例如，对于CIFN，第二剂量方案包括给予至少约3μg、9μg、15μg或18μg的CIFN。第二剂量方案可包括单剂量事件，或至少两次或多次剂量。
IFN-α的第二剂量方案可每日施用、隔日施用、一周三次或基本上连续施用，以便获得所需的IFN-α的平均日血清浓度。
一些实施方案中，采用了IFN-α的“诱导”/“维持”剂量方案，其中包括“引导”剂量的IFN-γ。在这些实施方案中，在IFN-α治疗开始之前施用IFN-γ约1-14天、约2-10天或约3-7天。这段时期被称为“引导”期。在其中一些实施方案中，在整个IFN-α治疗阶段连续进行IFN-γ治疗。在其它实施方案中，IFN-γ治疗在IFN-α治疗结束前结束。在这些实施方案中，IFN-γ治疗的总时间(包括“引导”期)约为2-30天、约4-25天、约8-20天，约10-18天，或约12-16天。再在其它实施方案中，一旦IFN-α治疗开始就结束IFN-γ治疗。
在其它实施方案中，IFN-α是以单剂量方案施用的。在这些实施方案中，IFN-α的剂量通常约为3-15μg或约9-15μg。IFN-α的剂量通常每日施用、隔日施用、一周三次或基本上连续施用。所述IFN-α剂量可施用，例如，至少约24周至至少约48周，或更长时间。
在一些实施方案中，当采用IFN-α的单剂量方案时包括IFN-γ的“引导”剂量。在这些实施方案中，IFN-γ在IFN-α治疗开始后施用了约1-14天、约2-10天或约3-7天。在其中一些实施方案中，在整个IFN-α治疗阶段连续进行IFN-γ治疗。在其它实施方案中，IFN-γ治疗在IFN-α治疗结束前结束。在这些实施方案中，IFN-γ治疗的总时间(包括“引导”期)约为2-30天、约4-25天、约8-20天，约10-18天，或约12-16天。再在其它实施方案中，一旦IFN-α治疗开始就结束IFN-γ治疗。再在其它实施方案中，一旦IFN-α治疗开始就结束IFN-γ治疗。
本领域熟练的技术人员容易地理解，剂量水平会随特定化合物的功能、症状的严重程度和患者对副作用的敏感性而改变。所给化合物的优选剂量容易由精通此领域的技术人员通过各种方法确定。
本领域熟练的技术人员容易地理解，剂量水平会随特定化合物的功能、症状的严重程度和患者对副作用的敏感性而改变。所给化合物的优选剂量容易由精通此领域的技术人员通过各种方法确定。优选的方法是测量给定化合物的生理效价。
在一些实施方案中，IFN-α和IFN-γ以同一制剂同时施用。在其它实施方案中，IFN-α和IFN-γ是分别施用的，如以单独制剂给予。在其中一些实施方案中，IFN-α和IFN-γ是单独给予的，且是同时给予的。在其它实施方案中，IFN-α和IFN-γ是单独给予的，且在施用一种制剂后约5-15秒之内、在约15-30秒之内、在约30-60秒之内、在约1-5分钟之内、在约5-15分钟之内、在约15-30分钟之内、在约30-60分钟之内、在约1-2小时之内、在约2-6小时之内、在约6-12小时之内、在约12-24小时之内或在约24-48小时之内给予第二种制剂。
可采用IFN-α和IFN-γ的多剂量方案，例如可每月一次、每月两次、每月三次、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天施用IFN-α和IFN-γ，治疗期为约1天至1周、约2-4周、约2-4个月、约2-4个月、约4-6个月、约6-8个月、约8个约至1年，约1-2年、约2-4年或更长时间。在感兴趣的特定实施方案中，施用IFN-α和IFN-γ约48周，每周3次。
当药剂是多肽、聚核苷酸(如编码IFN-α和IFN-γ的聚核苷酸)时，它可通过许多途径，包括病毒感染、微注射或小泡融合引入组织或宿主细胞。对于肌内给药也可使用喷射注射，如Furth等(1992)，Anal Biochem 205365-368所述。DNA可包被在金微颗粒上，通过文献(参见，如Tang等(1992)，Nature 356152-154)所述的颗粒轰击装置或“基因枪”皮内输递，其中，金微轰击粒子用治疗用DNA包被，然后轰入皮肤细胞。在这些实施方案中，特别感兴趣的是使用肝特异性启动子优选地驱动肝脏细胞中操作连接的IFN-α和IFN-γ编码序列的转录。
其它治疗剂在一些实施例中，方法还包括施用病毒唑。病毒唑，1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三氮唑-3-甲酰胺，由ICN医药有限公司，Costa Mesa，加利福尼亚，提供。该药记载于第11版默克手册(Merck Index)，化合物第8199号。该药的制造与配方可见于美国专利4,211,771。本发明也考虑到施用病毒唑的衍生物(见美国专利6,277,830)。病毒唑可以用胶囊或片剂的形式口服施用，或以与IFN-α相同或不同的施用形式或以与IFN-α相同或不同的途径施用。当然，这两种药剂的其他施用形式也可加以考虑，如鼻喷雾剂、透皮剂型、静脉内剂栓剂、缓释剂型等等。只要释出合适的剂量，不破坏活性成份，任何施用形式都会起作用。
病毒唑通常每日的施用范围从约30mg到约60mg、从约60mg到约125mg、从约125mg到约200mg、从约200mg到约300mg、从约300mg到约400mg、从约400mg到约1200mg、从约600mg到约1000mg或从约700mg到约900mg。
在一些实施例中，在IFN-α治疗的全过程中都施用病毒唑。在其它实施方案中，病毒唑不在IFN-α治疗的全过程中施用，例如仅在IFN-α治疗的第一阶段施用，仅在IFN-α治疗的第二阶段施用，或在IFN-α治疗的其它阶段施用。
可治疗的疾病本发明提供了通过对有此需要的个体给予治疗有效量的IFN-α和IFN-γ来治疗HCV感染的方法。根据本发明方法治疗的个体包括临床上已被诊断出患有肝纤维化的个体，被诊断带有HCV的个体，以及临床上还没有出现肝纤维化，但具有形成肝纤维化危险的个体。这类个体包括感染HCV的个体。
临床上已被诊断感染HCV的个体在许多技术方案中特别受到关注。感染了HCV的个体被发现在其血液中具有HCV RNA和/或在他们的血清中有抗HCV抗体。临床上已被诊断感染HCV的个体包括首次被诊断感染的个体(例如，以前未对HCV进行治疗的个体)和在以前的HCV治疗中失败的个体(“治疗失败”个体)。治疗失败个体包括无反应者(指治疗期间病毒滴度居高不下的病人)和复发病人(指治疗初期病毒滴度下降，但随后在治疗过程中上升或在治疗结束后上升的病人)。
同样感兴趣的有HCV-阳性个体(如上所述)，所述个体由于慢性HCV感染而具有严重纤维化或早期硬化(非-代偿失调的，为Child’s-Pugh的A级或更低)，或晚期硬化(代偿失调的，为Child’s-Pugh的B级或C级)，且尽管以前已用基于IFN-α的疗法治疗但仍是病毒血症，或者他们不能耐受基于IFN-α疗法的治疗，或者他们对这类疗法有禁忌症。在特别感兴趣的实施方案中，患有阶段3或4(METAVIR评分系统)的肝纤维化的HCV-阳性个体适合用本发明的方法进行治疗。在其它的技术方案中，适合用本发明方法治疗的个体是患有具有临床表征的代偿失调的硬化的患者，包括患有极晚期肝硬化的患者，等待肝移植的患者。在另外的实施方案中，适合用本发明方法治疗的个体包括患有轻度的纤维化，包括早期纤维化的患者(METAVIR、Ludwig和Scheuer评分系统中的阶段1和2；或Ishak评分系统中的阶段1，2或3)。
虽然本发明参照其特定的技术方案进行了描述，应当理解，在不背离本发明的真实精神和范围的情况下可进行各种改变和替代等价物。另外，可进行许多修饰以使具体的情况、材料、组成、方法、加工步骤适应本发明的目的、精神和范围。所有这类修饰都在本发明权利要求范围内。
权利要求
1.一种在个体中减少肝纤维化的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效减少肝纤维化的量的IFN-α和IFN-γ。
2.一种在个体中治疗丙肝病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效实现持续病毒应答的量的IFN-α和IFN-γ。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝纤维化程度分期衡量，其中肝纤维化期，如用标准评分系统测定的，降低至少一个单位。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中所述IFN-α和IFN-γ同时施用。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且在施用IFN-α和IFN-γ中的一种的24小时内施用另一种。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以多剂量施用。
7.一种提高肝纤维化个体肝功能的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效提高肝功能的量的IFN-α和IFN-γ。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述肝功能通过测定选自血清转氨酶水平、凝血酶原时间、血清胆红素水平、血小板数、病毒负荷和血清白蛋白水平的参数来指征。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以连续剂量施用。
10.一种降低肝硬化并发症发病率的方法，其特征在于，所述方法包括给予肝纤维化个体有效减少肝硬化并发症发病率的量的IFN-α和IFN-γ的组合。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以多剂量施用。
12.一种在个体中治疗丙肝病毒的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体治疗有效量的IFN-α和IFN-γ。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，丙氨酸氨基转移酶水平被降至约每毫升血清约45国际单位以下。
14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，个体的病毒负荷被降至约每毫升血清约500个基因组拷贝以下。
15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中所述IFN-α和IFN-γ同时施用。
16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中所述IFN-α和IFN-γ分别施用。
17.如权利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25-300μg的量皮下施用，IFN-α以约3-27μg的量施用，且其中IFN-α和IFN-γ以连续剂量施用。
18.一种降低丙肝病毒感染个体的病毒负荷的方法，其特征在于，所述方法包括施用有效降低病毒负荷的量的IFN-α和IFN-γ。
全文摘要
本发明提供了减少肝纤维化的方法；在患有肝纤维化的个体中增加肝功能的方法；降低与HCV和肝硬化有关的并发症的发病率的方法；减少病毒负荷的方法，以及治疗HCV感染的方法。这些方法通常包括同时给予治疗有效量的IFN－α和IFN－γ。
文档编号A61P31/14GK1564693SQ02819488
公开日2005年1月12日 申请日期2002年10月3日 优先权日2001年10月5日
发明者H·H·许 申请人:印特缪恩股份有限公司