专利名称：冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及生物活性多维强化剂。具体地说是以冬虫夏草菌液态发酵制成的多维强化剂的制备方法。
为了实现上述任务，本发明采用以下解决方案药用菌冬虫夏草为名贵中药材，其保健功能和药物治疗作用早被中医开发利用，现代科学的研究证实冬虫夏草确有十分广泛的药理活性，特别是冬虫夏草具有免疫调节作用，即通过增强机体免疫功能，起到抑制肿瘤、抗病毒感染、保护呼吸系统、消化系统、心脑血管系统及神经系统等重要作用。由于遗传、发育、生理等多种因素，在儿童、妇女、老人人群中经常发生免疫力低下、内分泌系统机能衰退之类的疾病。本发明选用冬虫夏草菌为生物活性强化剂的载体，使产品具备了调节免疫力的重要功能。
现有强化剂缺陷的解决方案在于采用微生物转化的方法，将化学物质吸收转化为生物大分子螯合态的生物活性强化剂，使其具有生物同源性、平衡性，且冬虫夏草菌富含多种维生素如维生素D，有促进吸收作用，有利于提高其生物利用度。
同时，由于免疫系统功能差会影响消化系统对营养素的消化吸收，通过研究证明本发明具有增强免疫力，调节消化系统的功能。
冬虫夏草菌具有富集、转化矿质元素的能力，能将铁、锌、钙、硒、铬等化学元素转化为生物活性强化剂。
本发明通过实验证实冬虫夏草菌对矿物质的吸收转化a、配制如下培养基蛋白胨 1.5g葡萄糖 4.5gKH2PO40.1gMgSO40.02gVB10.001g以FeSO4添加铁 0.01g以ZnSO4添加锌 0.008g以CaCl2添加钙 0.4g以NaSeO3添加硒 0.00092g以CrCl3添加铬 0.00002g添加水溶化后定容至100ml；以每瓶100ml分装300ml三角瓶，120℃灭菌30分钟后冷却至30℃以下；b、向上述培养基中接种2％体积的液体冬虫夏草菌种，在26-30℃条件下摇瓶培养80小时，取出发酵液，以10000g高速离心30分钟，分别收集上清夜和菌体沉淀；c、菌体沉淀加1ml浓硝酸和10ml水，加热硝化，定容至100ml，以原子吸收法测定铁、锌、钙、硒、铬的含量；将上清液超滤(超滤膜截留2000以上大分子)，用同样方法测定滤液的钙含量；d、结果冬虫夏草菌体中上述五种矿质元素的含量占添加量的百分比分别为铁99.9％；锌99.6％；硒99.3％；铬99.2％；钙78.2％。
超滤液中钙元素的含量为添加量的6.03％。
上述结果说明对于低添加量的铁、锌、硒、铬等离子，冬虫夏草菌体几乎可以全部吸收至细胞内，根据生物学知识，它们是可以与维生素一起构成多种辅酸和激素的重要成分的；对于添加量较高的钙离子，有约80％吸收至细胞内，其余主要与胞外生物大分子物质螯合，只有百分之几为游离钙离子。根据微生物学和细胞生物学知识，真核细胞膜上有Ca-泵，这种跨膜蛋白主要存在于细胞质膜和内质网膜上，它将钙离子泵入内质网中，内质网中有4种以上钙结合蛋白，每个钙结合蛋白分子可与30个左右钙离子螯合。内质网中的这些钙结合蛋白浓度可达30-100mg/ml，能结合、贮存大量钙离子。细胞外的发酵液中含有大量多糖、有机酸、蛋白质等生物大分子，它们同样可以与钙离子螯合。
根据上述构思及实验结果，实现本发明目的采用如下技术方案使用的微生物生产药用成分的子囊菌纲麦角菌科虫草属(Cordyceps(Fr.)Link)的各种菌种，它们既不是约束性的也不是排它性的。
具体的菌株可以是在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC AF99009的冬虫夏草(Cordyceps Sinensis)菌株。上述菌种的有关性质可以参阅中国典型培养物保藏中心(CCTCC)菌种目录，本发明不再赘述。任何人可直接向该保藏中心购得该菌种。
生物活性多维强化剂是由冬虫夏草菌经液态发酵、浓缩干燥制备而成，其步骤是a、培养基制配以碳源、氮源、矿质元素制备液体培养基，每100ml培养基中添加下列成分(重量份)铁0.001～0.1锌0.001～0.1钙0.1～1.0硒0.000001～0.0001铬0.000001～0.0001；b、将配制好的培养基灭菌，120℃灭菌30分钟后冷却至30℃以下；c、在培养基中加入2～10％的冬虫夏草菌液体菌种；d、将上述培养液在20℃～30℃下通气搅拌培养50～100小时，获得液态产品；e、将液态发酵产品经浓缩、干燥，破壁粉碎成粉末状产品。
所述培养基中的碳源包含2～8％的糖类如葡萄糖、蔗糖、糖蜜，或是淀粉类如谷类淀粉、玉米粉、红薯粉的一种或六种以下组成；氮源包括1～4％酵母粉、黄豆粉、花生饼粉、玉米浆的一种或四种以下组成；
碳、氮比为10∶1～40∶1；矿质元素为钾、镁、磷、钠、硫等物质适量；所述的生物活性多维强化剂，可以以饮料、口服液、咀嚼片、糖果、胶囊或其它剂型用于制备治疗和预防儿童免疫力低下，儿童缺钙、缺铁性贫血；妇女体弱、生理性贫血；老人免疫力衰退、骨质疏松等各种病症的药品或保健食品中的应用。
每100g强化剂产品中含有下列组分(重量份)菌体蛋白质25.0～45.0总糖(包括菌体多糖)2.0～10.0碳水化合物20.0～40.0总脂 2.0～10.0矿物质15.0～25.0水分 4.0～10.0铁0.1～1.0锌0.1～1.0钙2.0～20.0硒0.0005～0.005铬0.0005～0.005维生素A 0.001～0.04维生素B1 0.02～0.1维生素B2 0.02～0.1维生素B5 0.2～1.5维生素B6 0.01～0.2维生素B12 0.0005～0.001维生素C 1.0～5.0维生素D 0.0005～0.005维生素E 0.00001～0.0001叶酸 0.0001～0.005本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果生产工艺简单，采用微生物转化的方法，将人体不易吸收利用的化学元素吸收转化为生物大分子整合态的生物活性强化剂，使其具有生物同源性，平衡性，有利于提高产品的生物利用度。同时利用冬虫夏草菌能生物合成多种维生素的特性，使产品兼具补充多种维生素，促进营养吸收的功能。再加上冬虫夏草特有的免疫调节药理活性，使产品具备了多重功效，可广泛用于制备治疗和预防儿童免疫力低下，儿童缺钙、缺铁性贫血；妇女体弱、生理性贫血；老年人免疫力衰退、内分泌失调引起的骨质疏松等各种病症的药品或保健食品中的应用。
具体实施例方式实施例1采用的菌种CCTCC AF99009a、配制液体培养基蔗糖 4.0g黄豆粉2.0g玉米粉4.0gKH2PO40.15gMgSO40.02g豆油 0.1g以FeSO4添加铁0.010g以ZnSO4添加锌0.008g以CaCl2添加钙0.400g以NaSeO3添加硒 0.00002g以CrCl3添加铬0.00002g添加水溶化后定容至100ml；120℃灭菌30分钟后冷却至30℃；b、向上述培养基中加入2体积％的液体菌种；c、将上述物质在28℃条件下通气搅拌培养80小时，获得冬虫夏草发酵液；d、用薄膜蒸发器将上述发酵液浓缩至原体积的20％左右，将浓缩发酵液用组织破碎机破碎菌丝，再以真空喷雾干燥方法干燥，最后用超微粉碎机破壁粉碎成粉末，获得冬虫夏草生物活性多维强化剂。
测定产品中各物质含量，每100g强化剂中含有下列组分(重量份组成)表1.一般分析成分 ±％蛋白质32 15总糖(包括菌体多糖)8 15总脂 4 10碳水化合物30 10矿物质20 20水分 6.0010表2.矿物质成分 (±25％)
铁 0.5锌 0.4钙 20.
硒 0.001铬 0.001表3.维生素成分 (±25％)维生素A 0.02维生素B1 0.075维生素B2 0.08维生素B5 1.0维生素B6 0.1维生素B120.0008维生素C 4.0维生素D 0.002维生素E 0.00008叶酸 0.00权利要求
1.一种冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法，包括下列步骤a、培养基制配以碳源、氮源、矿质元素制备液体培养基，每100ml培养基中添加下列重量份成分铁0.001～0.1锌0.001～0.1钙0.1～1.0硒0.000001～0.0001铬0.000001～0.0001；b、将配制好的培养基灭菌，120℃灭菌30分钟后冷却至30℃以下；c、在培养基中加入2～10％的冬虫夏草菌液体菌种；d、将上述培养液在20℃～30℃下通气搅拌培养50～100小时，获得液态产品；e、将液态发酵产品经浓缩、干燥，破壁粉碎成粉末状产品。
2.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法，其特征在于培养基中的碳源包含2～8％的糖类如葡萄糖、蔗糖、糖蜜，或是淀粉类如谷类淀粉、玉米粉、红薯粉的一种或六种以下组成。
3.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法，其特征在于氮源包括1～4％酵母粉、黄豆粉、花生饼粉、玉米浆的一种或四种以下组成。
4.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法，其特征在于碳、氮比为10∶1～40∶1。
5.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法，其特征在于矿质元素为钾、镁、磷、钠、硫。
全文摘要
本发明公开了一种冬虫夏草生物活性多维强化剂的制备方法，以冬虫夏草菌为生物载体，首先是配制培养基，以碳源、氮源、砂质元素制备培养基；其次是将配制好的培养基灭菌；第三是在培养基中加入冬虫夏草液体菌种；第四是在一定温度条件下通气培养一定时间，获得液态产品；第五是将液态产品浓缩、干燥、破壁粉碎成粉末状产品。本发明工艺简单，操作方便，可广泛用于儿童免疫力低下，儿童缺钙、缺铁性贫血；妇女体弱、生理性贫血；老年人免疫机能衰退、内分泌失调引起的骨质疏松症的预防和治疗。
文档编号A61P1/00GK1443569SQ0310629
公开日2003年9月24日 申请日期2003年2月28日 优先权日2002年3月8日
发明者胡征 申请人:胡征