专利名称：布拉他辛在制备抑制艾滋病病毒的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及化合物布拉他辛bullatacin的新用途，尤其涉及在医药领域中的用途。
廿世纪八十年代，美国自番荔枝及其他番荔枝科植物中提取、分离、得到化合物布拉他辛bullatacin，并申请了用于治疗肿瘤和防治害虫的发明专利(U.SPatent No.5,229,419，Jul.20，1993)，其分子式为C37H66O7，分子量622，化学结构式为 该物质为无色结晶或无色固体物，熔点77～78℃，UV入max211.5nm(MeOH)。可溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯，难溶于石油醚，不溶于水中。布拉他辛用于抑制SIV、HIV-1病毒及治疗艾滋病AIDS方面则未见报导。
实际上，本发明涉及布拉他辛bullatacin在制备抑制艾滋病病毒的药物中的应用。
本发明提出的将布拉他辛bullatacin应用在用于抑制艾滋病病毒的药物中，其作用机理完全不同于目前临床治疗HIV感染/艾滋病及其他病毒性感染的治疗药物，该药物对SIV(猴艾滋病病毒)、HIV感染的细胞有强烈的抑制病毒复制、清除病毒的作用。
下面通过具体实施例及药理试验对本发明作进一步的说明。
正式试验药物系列稀释，与SIVmac和CEMx174细胞共同培养3天换同等稀释度药物培养液1次，6天记录细胞病变(CPE)，培养上清作系列病毒滴定，细胞涂片作荧光抗原细胞计数。同样作AZT阳性对照药(2μM)和SIVmac病毒对照。
结果判定标准以荧光阳性细胞抑制率、病毒产量下降log2倍数(均与SIVmac病毒对照比较)和细胞病变程度互相参考判定。
表1布拉他辛抗SIV细胞培养实验结果
表1，显示药物在基本无毒、但仍保留轻度细胞毒性下有很好的抑制SIV作用。实施例2布拉他辛bullatacin抗HIV-1细胞培养实验细胞毒实验布拉他辛乳剂，药物浓度为5ug/ml，可直接用纯净水或细胞培养液稀释至所需浓度。每孔加入含生长旺盛的MT-4细胞悬液104个/100ul，加入按10倍系列稀释度药物培养液后于37℃ 5％CO2孵箱中培养5天，MTT染色试验后用酶标仪以550nm和620nm双波长自动读取吸收值(OD值)，先分别计算各稀释度OD均值和标准差SD，再以下式计算各稀释度药物对MT-4细胞毒性，以Bliss法求得乳剂对MT-4细胞的50％毒性浓度CC50。结果见表2。 表2布拉他辛乳剂对MT-4细胞的50％毒性浓度测定药物浓度(μg/ml) OD均值 标准差SD 存活细胞率(％)5×10-10.0100 0.0035 12.535×10-20.0143 0.0025 17.955×10-30.0260 0.0053 32.575×10-40.0580 0.0010 72.655×10-50.0840 0.0062 100Cell Ctrl 0.0798 0.0121以Bliss法求得乳剂对MT-4细胞的50％毒性浓度CC50＝3.9×10-3μg/ml。布拉他辛bullatacin抗HIV-1细胞培养实验每孔加入含生长旺盛的MT-4细胞悬液104个/50ul，按药样2倍系列稀释加入药物培养液后，将100TCID50的HIV-1病毒液50ul加入除正常细胞对照孔外的各孔中，试验细胞板于37℃ 5％CO2孵箱中，培养5天后进行MTT染色试验，用酶标仪以550nm和620nm双波长自动读取吸收值(OD值)。首先计算各稀释度OD均值和标准差，再以下式计算各稀释度药物对HIV感染细胞的保护率 达到50％保护的浓度为50％有效浓度(EC50)。EC50的计算是根据各稀释度保护率，利用正规机率单位法(Bliss法)计算EC50的统计程序求出。实验结果见表3。
表3布拉他辛乳剂对HIV-1感染细胞的保护作用药物浓度OD均值 标准差SD 保护率(μg/ml) (抑制率)(％)0.980×10-30.1047 0.004667.450.490×10-30.1070 0.009670.950.245×10-30.1017 0.009162.940.123×10-30.0833 0.013335.390.061×10-30.0823 0.008533.89细胞对照0.1263 0.0143病毒对照0.0598 0.0196表3可见，乳剂的抑制率为62.94％～70.95％，以Bliss法求得抑制HIV-1的半数有效浓度EC50＝0.184×10-3g/ml，其治疗指数TI＝CC50/EC50＝3.9/0.184＝21。
恒河猴9只，5～6kg/只，4～8岁，外观健康，体检无浅表淋巴结肿大，血清学检测SIV、SRV和STLV-1病毒抗体阴性，结核菌阴性，痢疾菌阴性。试验组和对照组每组各3只。用SIVmac251病毒液5MID100(5个100％猴感染剂量)静脉注射感染猴。
治疗实验实验猴感染后1小时给药，布拉他辛组用药剂量为2.5μg/只猴/次，即0.5ml/次(乳剂)加注射用水1ml稀释后腹腔注射日二次，连用8周。对照组10％脂肪乳1.5ml/猴/次，日二次，腹腔注射。AZT阳性药对照组200mg/猴/天，口服，连用4周。停药后各组一直观察至105天。
按感染后7、10、14、17、21、28、42、56、79、105天检查各组实验猴血常规，CD4+淋巴细胞亚群、血浆病毒滴度、全血病毒滴度、淋巴结、肝肾功能等。病毒滴度检查须进行CEMx174细胞培养(每孔加入2×105个/ml，0.4ml)观察细胞病变(CPE)，以CPE阳性为指标，连续4周无CPE为阴性。实验结果如下表4各组猴WBC和CD4T淋巴细胞亚群值(ul)
由表可见，布拉他辛组除1号猴受腹泻影响WBC、CD4数值下降外，其余两只猴在105天时均超过治疗前，特别是CD4+数值上升了50％以上，显著优于AZT及对照组。
表5各组猴感染(治疗)后血浆病毒滴度(TCID/ml)
表6各组猴感染治疗后(天)血浆病毒滴度平均值(log10)与对照组猴比较
注与对照组比“-”比对照组下降“+”比对照组上升表7各组猴感染(治疗)后全血病毒滴度(TCID/ml)
表8各组猴感染治疗后(天)全血病毒滴度平均值(log10)与对照组猴比较
注与对照组比“-”比对照组下降“+”比对照组上升由表5、6、7、8可以看出，用布拉他辛2.5ug/猴(乳剂)治疗，无论是血浆病毒滴度下降还是全血病毒滴度下降都优于阳性对照药AZT200mg/猴的治疗结果，表明布拉他辛在猴体内有确切的治疗作用。
小鼠的LD50为266ug/kg，95％可信限220～293ug/kg。
表9布拉他辛腹注给药小鼠死亡情况
2.大鼠急性毒性试验实验用Wistar大鼠，体重140～150g。按寇氏法进行实验设计与统计。设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，一次ip给药0.5ml/100g体重。给药后观察7天。
大鼠的LD50为520ug/kg，95％可信限440～610ug/kg。
表10布拉他辛腹注给药大鼠死亡情况
猴体内治疗SIV急性感染用药剂量2.5ug/只猴/次，只相当于小鼠的LD50的1/106.4，大鼠LD50的1/208。
上述配方中(1)溶解于(2)中，得到每ml含布拉他辛1ug的针剂。
权利要求
1.具有下述结构式(I)的化合物布拉他辛bullatacin在制备抑制艾滋病病毒的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及化合物布拉他辛bullatacin在医药领域中的新用途，即在制备抑制艾滋病病毒的药物中的应用。本发明提出的将布拉他辛bullatacin应用在用于抑制艾滋病病毒的药物中，其作用机理完全不同于目前临床治疗HIV感染/艾滋病及其他病毒性感染的治疗药物，该药物对SIV(猴艾滋病病毒)、HIV感染的细胞有强烈的抑制病毒复制、清除病毒的作用。
文档编号A61K31/365GK1460473SQ03126770
公开日2003年12月10日 申请日期2003年6月5日 优先权日2003年6月5日
发明者杨帆 申请人:杨芃, 杨帆