专利名称：一种酸枣仁提取物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明是一种植物材料的提取物及其用途，具体地说是一种酸枣仁的提取物用于选择性抑制肿瘤细胞的生长。
背景技术：
酸枣仁作为药食两用的鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子，中国药典2000年版收载，功能与主治为补肝、宁心、敛汗、生津。用于虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴。已知酸枣仁中含有脂肪油(约32％)，皂甙(jujuboside)、黄酮(spinosin)、阿魏酸、三萜类化合物、有机酸、单糖、多糖、微量元素、氨基酸、Vc、蛋白质等物质。药理作用包括(1)对中枢神经的作用；(2)对心血管的作用；(3)对免疫功能的影响；(4)降血脂；(5)保护烫伤、抗辐射性损伤和预防高原反应等。
用不同的提取分离方法可以从酸枣仁中获取不同的活性组分，由此制备出多种功效的复方中药和保健用品如“英平康力加”的主要成份是美国原产野生西洋参和中国地产天然植物大枣、酸枣仁、麦冬等，用于驱除疲劳，改善睡眠，恢复天然免疫力，全面提升整体健康水平。“中西宝口服液”介绍的组方为复合氨基酸、酸枣仁、柏子仁、天冬、远志、珍珠母、生地黄等，适用于晚上睡眠不佳、白天精神状况不好、易疲劳的人群，尤其适合老年人及工作压力巨大的白领阶层。但是尚未有酸枣仁提取物具有选择性肿瘤活性的报道。
肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，目前治疗措施只有原发切除、化疗、放疗、免疫治疗等方法。临床上常用的化疗药物很多，如Taxol(紫杉醇)、camptothecin(喜树碱)、Doxorubicin(阿霉素)、Ellipticine(椭圆玫瑰树碱)、Homoharringtonine(高三尖杉酯碱)、mithramycin A(普卡霉素)、Podophyllotoxin(鬼臼酮)、Vinblastine(长春碱)、Vincrstine(长春新碱)等等。这些药在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有很大的毒副作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有选择性抗肿瘤活性的酸枣仁提取物和其选择性抗肿瘤活性的药学制剂。
本发明的提取物的制备方法将酸枣仁原料粉碎至大于20目的粗粉，用原料重量的2.0-4.0倍量的60-90℃石油醚等溶剂脱脂5～10小时，然后用原料重量的2.0-3.0倍的二氯甲烷溶剂回流提取10～15小时，提取液回收二氯甲烷至干，得到浅棕色粘性稠膏，即为所需的提取物，再与常用的辅料混合，制成颗粒。所述的溶剂包括二氯甲烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、石油醚或己烷。
本发明的酸枣仁提取物有效成份主要是三萜类化合物的混合体，可提供具有选择性抗肿瘤活性的药学制剂，它与药学上允许的辅料制成包括片剂、胶囊、混悬液、糖浆在内的剂型。
所述的辅料包括稀释剂(葡萄糖酸钙、硫酸钙、乳糖、纤维素、高岭土、甘露醇、氯化钠、淀粉、糖粉或羟丙基甲基纤维素)；粘合剂(淀粉、凝胶)；填充剂(蔗糖、葡萄糖或乳糖)；稳定剂(多糖类物质如阿卡胶、琼脂、海藻酸，合成树脂如卡波姆或纤维素醚)；溶剂(水、二甲亚砚-水(50∶50)、丙二醇或磷酸盐缓冲液)。
本发明中样品抗肿瘤细胞毒性ED50值的测定采用MTT法，具体操作如下1.接种细胞用0.25％胰蛋白酶消化已培养好的细胞，用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液制成单细胞悬液，以每孔103～104个细胞接种于96孔板中，每孔200μl，并加入事先溶解于DMSO的样品，同时进行阳性对照；2.培养细胞37℃、5％CO2及饱和湿度条件下培养，培养时间依细胞而定；3.呈色每孔加MTT(5mg/ml)20μl，37℃，继续孵育4h，终止培养，吸除孔内上清液。对于悬浮细胞，需离心(1000rpm，5min)，然后弃去孔内培养液。每孔加入150μl DMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解；4.比色490nm处，酶标仪测定各孔的光吸收值，以药物浓度为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生长曲线，计算出对各种肿瘤的ED50值。
本发明的优点和效果本发明的提取物对肿瘤细胞的毒性是正常细胞的2-10倍，可以有效地抑制黑色素瘤细胞，即对黑色素肿瘤细胞的细胞毒作用强(ED50<20μg/ml>。表1给出本发明提取物与阿霉素对肿瘤细胞选择活性的测定结果；表2给出本发明提取物与常用抗肿瘤药物的细胞活性比较，从表中数据看出，酸枣仁提取物有望获得特异性黑色素瘤治疗药物。
具体实施例方式
下面通过具体实施例进一步阐述本发明的特点。
实例1本实例是制备酸枣仁提取物。
以酸枣仁1.0kg为原料，粉碎为10～20目左右的粗粉，置于连续提取器中，用2500ml石油醚(沸程60-90℃)脱脂5小时。药渣晾干后，用2000ml二氯甲烷连续回流提取11小时，浓缩二氯甲烷提取液至干，得浅棕色粘性稠膏。
实例2本实例是制备含有酸枣仁提取物的药学制剂。本发明的提取物与常用的辅料配比如下
具体制备方法将本发明的提取物与辅料混匀，过20目筛制粒，干燥后外加硬脂酸镁整粒，或装胶囊或压片，得到试验用药剂。
实例3本实例是实例2酸枣仁提取物对不同肿瘤细胞毒性的测定结果。用前述MTT法测定。具体结果见表1。
表1酸枣仁提取物抗肿瘤细胞选择活性(ED50μg/ml)
实例4本实例为临床常用药对黑色素瘤细胞毒性测定结果及其与酸枣仁提取物活性的比较，用前述MTT法测定，具体结果见表2。
表2酸枣仁提取物与常用肮肿瘤药物的黑色素瘤细胞活性比较(ED50μg/ml)
从实施例3、4可以证明，酸枣仁提取物对肿瘤细胞具有显著的选择活性。尽管酸枣仁提取物与临床药物相比，其抗肿瘤活性还不够高，可以预期，通过对有效成分的分离纯化或以有效成分的结构为先导化合物，进行结构改造，可以得到安全性好、作用专一的黑色素瘤治疗药物。
权利要求
1.一种酸枣仁提取物，其特征在于该提取物可由下述方法制备获得以酸枣仁为原料，将其粉碎至不小于20目粗粉，用原料重量的2.0-4.0倍的60-90℃的石油醚溶剂除去油脂，回收石油醚，得到酸枣仁油；药渣再用原料重量的2.0-3.0倍的二氯甲烷等溶剂回流提取10-15小时，回收溶剂，得浅棕色粘性稠膏，用常用的辅料混合，制成具有选择性抗肿瘤活性的颗粒。所述的溶剂包括二氯甲烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、石油醚或己烷。
2.权利要求1所述的酸枣仁提取物的用途，其特征在于提供具有选择性抗肿瘤活性的药学制剂，所述的制剂为药学上可接受基质的药学有效成份的酸枣仁提取物与药学上允许的辅料制成包括片剂、胶囊剂、混悬剂、糖浆剂在内的制剂。
全文摘要
本发明是一种酸枣仁提取物及其抑制肿瘤生长的应用，其特点在于以酸枣仁为原料，用包括二氯甲烷在内的溶剂进行提取，回收溶液即得到所需的提取物，该提取物作为药学有效成分制成具有选择性的抗肿瘤细胞药物。研究证实，它对肿瘤细胞的毒性是正常细胞的2－10倍，对黑色素瘤细胞尤其有效，因此可以作为有效抑制黑色素瘤细胞的专用药物进行开发。
文档编号A61P35/00GK1548132SQ03131060
公开日2004年11月24日 申请日期2003年5月15日 优先权日2003年5月15日
发明者马莉, 王振国, 周映霞, 陈力群, 周小静, 马 莉 申请人:北京群子源生物技术开发有限公司