阿比朵尔在制备预防和治疗sars病毒药物中的用途的制作方法

专利名称：阿比朵尔在制备预防和治疗sars病毒药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及阿比朵尔新的药物用途，具体而言是涉及该化合物在制备预防和治疗SARS病毒药物中的应用。
背景技术：
目前所知，冠状病毒科(Coronaviridae)只感染脊椎动物，与人和动物的许多疾病有关。人冠状病毒分别属于OC43和229E两个抗原型，它是引起人类上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒，尚无特异性治疗和预防手段。SARS全称是严重急性呼吸综合症，它与一种新的从未在人类或动物中发现过的冠状病毒相关。
盐酸阿比朵尔是非核苷类抗病毒新药，是一种防治甲型和乙型流感及其它急性呼吸道病毒感染的高效药物，通过激活2，5-寡聚腺苷酸合成酶，特异性抑制病毒囊膜与宿主细胞膜的融合，从而阻断流感病毒的复制。相比其他类抗流感病毒药物具有以下特点1、对流感病毒甲型、乙型均有效。2、兼有直接抑制病毒复制和诱导内源性干扰素的双重作用。3、毒性低、耐受性良好。
阿比朵尔具有以下药效学性质1、抗流感病毒本品对甲型和乙型流感病毒均有抑制作用。酶联免疫吸附试验显示它对甲型和乙型流感病毒的抑制率分别为80％和60％，对所有甲型流感病毒的抗原亚型均有活性。
国内体外试验结果显示阿比朵尔对流感病毒甲型的H1N1、H2N2、临床分离株均有抑制作用，其50％抑制病毒病变浓度(IC50)分别为1.22±0.015、1.50±0.056和1.65±0.12μg/mL；其治疗指数(TI)分别为37.6±0.48、30.6±1.13和27.9±1.94。表明阿比朵尔有直接抗甲型流感病毒作用。
体内试验结果显示连续给药7～8次，阿比朵尔15～125mg/kg，使小鼠平均生活日明显延长、死亡率显著降低、病变明显减轻，而且其作用明显优于阳性对照药病毒唑。表明阿比朵尔对整体动物具有显著的抗流感病毒作用。
2、诱生干扰素作用国内试验结果表明小鼠灌胃给予阿比朵尔31.3～125mg/kg或腹腔注射阿比朵尔15～45mg/kg后，其血清中均出现一定浓度的IFN，峰值出现在给药后18h，以后滴度下降，表明阿比朵尔具有诱生干扰素作用。
国外文献报道阿比朵尔对人和动物都有诱生干扰素作用，给药24h可见最大滴度。人口服阿比朵尔服300mg/kg，24小时的干扰素滴度为160IU/mL。
3、免疫调节作用国内试验结果阿比朵尔灌胃给药5d，剂量为25～100mg/kg·d使正常昆明种小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数显著增加；50～100mg/kg·d，使氢化可的松所致免疫低下昆明种小鼠碳廓清K值明显增加，剂量为12.5～50mg/kg·d使环磷酰胺所致免疫低下昆明种小鼠DTH反应明显增加，表明给予阿比朵尔不同剂量对正常及免疫低下昆明种小鼠的非特异性免疫功能、体液免疫功能和免疫低下小鼠的细胞免疫功能均有一定的促进作用。
国外文献报道阿比朵尔在体内外试验中对巨噬细胞吞噬功能有明显的激活作用，对迟发型超敏反应和宿主移植反应等细胞免疫功能，对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的体液免疫功能均有明显的促进作用。
本品毒性很低。国外文献报道大鼠和豚鼠单剂口服2000mg/kg，耐受良好，表明口服急性毒性很低，估计LD50＞3000mg/kg。小鼠口服LD＝340mg/kg慢性毒性试验，大鼠100-125mg/kg，狗25mg/kg，口服给药6个月，均未出现病理学变化。对兔和豚鼠长期用药也是安全的。
体内外试验均表明本品无诱变作用。大鼠繁殖毒性研究表明本品无致畸作用。

发明内容
鉴于上述阿比朵尔的作用，我们通过体外病毒初筛实验来证明阿比朵尔对SARS病毒是否敏感，是否对SARS有效，从而获得治疗因SARS病毒感染引起的呼吸道疾病的药物，这一设想得到了以下实验强有力的支持，取得预期效果。
具体实施例方式
本发明阿比朵尔对预防和治疗冠状病毒有效，尤其对预防和治疗SARS病毒有效，而且优选盐酸阿比朵尔。
实施例1、盐酸阿比朵尔体外抗SARS病毒初筛试验一、实验材料1、药品盐酸阿比朵尔原料药2、细胞非洲绿猴肾细胞(Vero E6)，由军事医学科学院微生物流行病研究所病毒室细胞库提供3、病毒SARS病毒，BJ-01株，由军事医学科学院微生物流行病研究所病毒室提供4、培养基DMEM培养基加10％小牛血清二、试验的基本条件病毒测定在生物安全三级实验室。
三、病毒毒力测定Vero E6细胞接种于96孔板，每孔100μ1，含细胞2×104，37□培养24h，细胞长成单层，加入10倍稀释9个浓度的病毒培养基，37□，5％CO2温箱培养，每天用显微镜观察细胞病变(CPE)，每浓度4孔，用Reed-Muench法计算病毒半数感染剂量(TCID50)。
四、药物对细胞毒性的测定Vero E6细胞接种于96孔板，每孔100μl，含细胞2×104，37□培养24h，细胞长成单层。药物设3个浓度即100、50、10μg/ml(终浓度)，每浓度4孔，设正常细胞对照。每天观察给药细胞病变，观察到7天，确定药物的无毒浓度。
五、药物抗病毒药效测定VeroE6细胞接种于96孔板，每孔100μl，含细胞2×104个/孔，37℃培养24h，细胞长成单层。每孔加100μl病毒(100TCID50)，吸附2小时后，弃去病毒。然后加入不同浓度待测药物。将最大无毒浓度以下的药物对倍稀释5个浓度，分别加入细胞板中，每孔100μl，每浓度4个孔，37℃5％CO2温箱继续培养。同时设病毒对照、细胞对照、药物对照。当病毒对照孔出现明显病变时，用CPE法判断药效。
六、结果1、病毒毒力测定病毒的TCID50是10-7；2、药物对细胞毒性的测定阿比朵尔的无毒浓度为10μg/ml，在此浓度下细胞形态与正常照相同，没有出现病变(表1)；3、药物抗病毒作用药物浓度为10μg/ml时对病毒有完全的抑制作用(表2)。
表1阿比朵尔的细胞毒性测定结果

“+”为细胞病变“-”为细胞正常表2阿比朵尔抗SARS病毒的作用

“-/4”为4个孔均为阴性，“+/4”为4个孔均为阳性
权利要求
1.阿比朵尔在制备预防和治疗SARS病毒药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中的阿比朵尔优选盐酸阿比朵尔。
全文摘要
本发明涉及阿比朵尔在制备预防和治疗SARS病毒药物中的应用。阿比朵尔已经作为抗流感病毒药物广泛应用，本发明通过体外细胞实验证明，阿比朵尔对SARS病毒具有显著的抑制作用，因此本品可以作为预防和治疗SARS病毒的药物应用于临床。
文档编号A61P11/00GK1552321SQ0313714
公开日2004年12月8日 申请日期2003年6月5日 优先权日2003年6月5日
发明者李建青, 张宏武, 刘超, 王荣端, 申东民, 李银贵 申请人:中奇制药技术(石家庄)有限公司