专利名称：香橙铁螯合还原酶基因的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种香橙铁螯合还原酶基因。
背景技术：
据世界卫生组织统计，全世界有超过30亿的人口面临缺铁的危险(Goto，1999)。在我国，尤其是婴幼儿营养性缺铁十分普遍，直接威胁国民整体健康。植物是人类的重要铁源，特别是农作物。植物吸收铁的主要形式是还原铁(Fe2+)。但是，铁在土壤中主要以氧化态铁(Fe3+)存在，能供植物利用的还原铁(Fe2+)非常有限，在偏碱或中性的土壤中尤为突出。世界范围内潜在性植物缺铁的土壤占土地面积的百分比高达25％-40％。在我国，南起四川盆地北至内蒙古草原地区，东自淮北平原西到黄土高原和甘肃、青海以及新疆一带的广大区域，都不同程度地存在着植物缺铁的问题(吴平，印莉萍等，2001)。由于铁是合成叶绿素所必需的元素，植物缺铁会造成叶绿体形态结构异常，叶绿素含量减少，光合速率降低，植株叶片失绿变黄，生长迟缓或至死，造成农产品产量降低和品质变劣，给农业生产带来严重损失。农作物中的果树作为一种重要的经济林木，一旦栽培到土壤中便多年不移动，因此有更为严重的缺铁累积效应。其中，我国南方的柑桔和北方的苹果表现最为突出。
研究已证明，铁螯合还原酶(FC-R)能将三价铁(Fe3+)还原为亚铁(Fe2+)，在金属运载蛋白的作用下将亚铁(Fe2+)运输到植物体内，从而使植物获得铁营养，增加植物体内铁的含量。分离克隆铁螯合还原酶基因以及构建其植物表达载体，并应用于柑桔、苹果、梨等果树和水稻、小麦、玉米、棉花、油菜、大豆、花生等作物，以及蔬菜、园艺、林业中，可解决植物营养缺铁问题，并可提高果树、大田作物以及蔬菜中铁的含量，改善其品质。这对改善人类的营养性缺铁，提高国民整体健康水平具有十分重要的意义。
在机理I类植物缺铁胁迫时，铁螯合还原酶基因的表达在根际产生特异的H+-ATPase而使土壤酸化，从而增加铁的可溶性。Holden等从番茄根表面的质膜上分离得到了铁螯合还原酶并证实在缺铁条件下，植物细胞膜上铁螯合还原酶(Fe-chelate reductase，FCR)的主要成分是一条35KD的多肽，分布在根尖区，其活性在缺铁胁迫下迅速提高。因此，植物对铁的还原能力与植物抗缺铁和对铁的吸收能力密切相关。铁螯合还原酶(FCR)基因在1999年首先被Robinson从拟南芥基因组中克隆到，该基因包括两个基因FRO1和FRO2。Robinson等将FRO2基因5’端的0.6kb片段导入frd1突变体(缺失FCR活性)中，使FCR的活性在低铁诱导下得到了恢复。Waters(2002)等通过设计特异引物，从豌豆根的mRNA中克隆了FRO1基因，利用酵母突变体证明FRO1具有铁螯合还原酶活性。拟南芥和豌豆都是草本植物，迄今为止，还未见有关木本植物铁螯合还原酶基因的研究报道。
发明内容
本发明申请人利用FRO2基因做探针，对比研究耐缺铁的资阳香橙、小金海棠和缺铁敏感的枳中FRO2基因的表达异同，结果表明在缺铁胁迫下，资阳香橙的根、茎、叶中，FRO2的表达显著增强。本发明的目的在于提供一种香橙铁螯合还原酶基因CjFRO2(Citrous junos Ferric-chelated Reductase)，该基因cDNA序列长2403bp，含有一个2103bp的开放阅读框，编码701个氨基酸，有一64bp的上游非编码序列和3′端polyA尾巴。同源性比较结果显示克隆的cDNA序列与已报道的铁螯合还原酶基因FRO2有较高的同源性，相同氨基酸为49％-52％，相似氨基酸为68％，将其命名为cjFRO2。基因序列及其所编码蛋白质的氨基酸序列下1 CGACGTCGCATGCTCCCGGCCGCCATGGCGGCCGCGGGAATTCGATTGGAGGAGCCAAAA61CAAGATGGGAAGCAGCGTAGTCTTAATTAGGACTATTTGCTTTGCTGTGTTTCTTGGCTG1 M G S S V V L I R T I C F A V F L G W121 GCTTCTGGTTTGGGCTCTGATACCAACTAAGGTTTATAAAAATACATGGACTCCTAAGCT20 L L V W A L I P T K V Y K N T W T P K L181 TAACAACAAGCTCAACTCAACATATTTTAGAGAACAAGGCACAAATCTTCTGCTTTTCTC40 N N K L N S T Y F R E Q G T N L L L F S241 GTTTCCAGTTATGCTCATAGCTCTTTTGGGTTGTGTCTATCTTCATCTTCAGAAGAAACC60 F P V M L I A L LG C V Y L H L Q K K P301 CAATAAGCTTCAATCCAAACGTAAGATGAGGAGCCCTCGTTTATTTTTCTCTCAGCGGCC80 N K L Q S K R K M R S P R L F F SQ R P361 GGTGCTAGTAATGGCTCCTTTGGGAATAGTTACAGCAATAGAGCTTACAATTGCAGTAAT100 V L V M A P L G I V T A I E L T I A V M421 GTTTGTCGCATTCTTGATATGGGCTCTTGCTAATTATTTGTATGTCAGCTTTGGTCATCT120 F V A F L I W A L A N Y L Y V S F G H L481 CCACATGCATAAAGCAGGAGAGAAAGTATGGCAAGCCAAGTTTCGAAGTGTATCATTAAG140 H M H K A G E K V W Q A K F R S V S L R541 ACTTGGATACATTGGAAACACATGCTGGGCATTTCTCTTCTTTCCAGTAACTCGAGGATC160 L G Y I G N T C W A F L F F P V T R G S601 ATCAATTTTGCCTCTTGTTGGACTCACTTCGGAATCGAGTATCAAGTATCATATATGGCT180 S I L P L V G L T S E S S I K Y HI W L661 AGGGCATCTCTCCAACGCCCTTTTTGCTTTGCACGCCGTTGGATTTTTAATTTACTGGGC200 G H L S N A L F A L H A V G F L I Y W A721 CATGACCAATCAGATGGCTGAGGTGCTAGAATGGAGCGAAACTTATGTATCAAATGTAGC220 M T N Q M A E V L E W S E T Y V S N V A781 TGGAGTAATAGCTATTGCAATTGCAACGGTGATTTGGGCAACGAGTTTACCTCGCTTCAG240 G V I A I A I A T V I W A T S L P R F R841 ACGAAAGATGTTCGAGCTTTTCTTCTACACTCACCACCTCTACATTCTTTACATCATATT260 R K M F E L F F Y T H H L Y I L Y I I F901 CTACGTATTGCACGCCGGCCCTGCCTACTTTTGCATGATCCTTCCGGGGATCTTCCTCTT280 Y V L H A G P A Y F C M I L P G I F L F961 TGCCGTCGATCGTTACTTGCGATTCCTACAGTCCCGAAACCGGGCTAGATTGCTCTCCGC300 A V D R Y L R F L Q S R N R A R L L S A1021 TCGCGCCTTGCCATGTGGTGTAGTTGAATTGAACTTCTCCAAAAGTCCAGGATTGTATTA320 R A L P C G V V E L N F S K S P GL Y Y1081 TAATCCCACAAGCATACTATTTGTAAATGTGCCAAGCATTTCCGAGCTGCAGTGGCACCC340 N P T S I L F V N V P S I S E L QW H P1141ATTTACTGTAACTTTCAATTGTAATATGGAGCAAGACAAGCTCAGCATTTTAATCAAAAC360 F T V T F N C N M E Q D K L S I L I K T1201TGAGGGAAGTTGGACTCAAAAGCTATACCAGCAAATTTCTTCTTCTGTAGACCGTCTTGA380 E G S W T Q K L Y Q Q I S S S V D R L E1261GGTGTCTGTTGAAGGACCCTATGGTCCTAATTCGGCTCATTTTCTGAGGCATGAGTCGCT400 V S V E G P Y G P N S A H F L R H E S L1321GGTGATGGTGAGCGGAGGCAGTGGCATTTCTCCTTTTATTTCCATAGTCCGCGAGCTTAT420 V M V S G G S G I S P F I S I V R E L I1381ATTTCAAAGCAATAACAACCCGGACTATAAAATTCCAAATGTGCACCTAATTTGTGTCTT440 F Q S N N N P D Y K I P N V H L I C V F1441CAAGAAATCTGCTGACTTATCCATGTTAAATATCATGTTGCCAGTTTCCGATGCGCCTAC460 K K S A D L S M L N I M L P V S D A P T1501GGAACTTGCGAAACTGCAGTTGCAAATCGAAGCCTATGTCACTAGAGACTCAGAGCAGCC480 E L A K L Q L Q I E A Y V T R D S E Q P1561TAAAACAGACACCCAGAAAGAACTTCAATCTATTTGGCTCAAGTCAAATCCATCAGACTC500 K T D T Q K E L Q S I W L K S N P S D S1621ACCGGTTTCCGGAGCTCTAAGCTGTAACAGTTGGCTGTGGCTTGCTGTAGTCACAGCGTC520 P V S G A L S C N S W L W L A V V T A S1681ATCATTCGTTATGTTTCTCCTCTTGTTGGGCATTGTCACTCGTTTCTACATATACCCCAT540 S F V M F L L L L G I V T R F Y I Y P I1741TGAGCGAAATGGCACTGAAGTTTACCATTATTCCTACAAGTGTCTCTGGGATATGTTTCT560 E R N G T E V Y H Y S Y K C L W D M F L1801TGTTTGTGTTTGTGTTTTCTTGGCTTCCAGTGCTGTTTACTTGTGGCTTAAGAAACAACA580 V C V C V F L A S S A V Y L W L K K Q Q1861GAATGCTATCGAAGTGAAGCAAATTCAGAACATGGAGGTGCCAACACCAAAAACATCACC600 N A I E V K Q I Q N M E V P T P K T S P1921GGCTTCATGGTTTTATACTGCGGATAGAGAGCTCGAAGAAAGCCTTCCTAATCAATGTCT620 A S W F Y T A D R E L E E S L P N Q C L1981TGTTCAAGCCACCAAATTTCATTTCGGTGAAAGACCCAATCCCAATAAAATACTGCTTGA640 V Q A T K F H F G E R P N P N K I L L D2041CGTAAAAGGAACAGACGTGGGAGTTTTAGTATGTGGTCCGAGGAAGATGCGGCATGAGGT660 V K G T D V G V L V C G P R K M R H E V2101TGCAAAGATTTGTTCATCTGGGTTGGCTGATAATCTGCACTTTGAGTCTATTAGTTTCAG680 A K I C S S G L A D N L H F E S I S F S2161CTGGTGATGCATGTGTTGTACGATCTGTAATCAATGGTGTAAAATATATATAAAGCCATC700 W *2221CTCTTAGGGCTTGATGGcTTAGCGTAACTTTTTTGCTCCACAGTGCTTATTCATCAGATA2281GCAATTTGTGCTATTCCGTCAGTTTAATTTGAAAAGTACTTCGAAAATGATTTTGATATG2341TTGTAAACTGTTGAATGAATAATCAAAAAGGCAGTTTCAGGTTAGCAGAATAAAAAAAAA2401AAA其中氨基酸序列末端的“*”表示终止密码子，不编码任何氨基酸。
该发明香橙铁螯合还原酶基因CjFRO2的克隆及其植物表达载体(pBIcjFRO2)的构建通过以下步骤实现1、香橙铁螯合还原酶基因cjFRO2的克隆①以资阳香橙为材料，缺铁诱导培养后，提取诱导根总RNA，分离纯化获得mRNA，以mRNA为模板，反转录获得其cDNA；②根椐已公布的铁螯合还原酶FRO2的cDNA序列设计简并引物，以上述cDNA为模板，采用YADE(Y-shaped Adaptor Dependent Extension)法，获得香橙的铁螯合还原酶基因cDNA序列，将其亚克隆到pGEM-T中，得到香橙铁螯合还原酶基因cjFRO2。
2、香橙铁螯合还原酶基因植物表达载体pBIcjFRO2的构建将亚克隆到pGEM-T载体上的cjFRO2基因，用EcoRI和KpnI限制性内切酶消化并回收2376bp的片段，与相同内切酶酶切后的pBS-SK载体相连接，并转化获得中间载体pBSFRO2。然后用XbaI和KpnI双酶切割中间载体pBSFRO2，回收获得约2.4kb的目的基因片段，将表达载体pBI121用XbaI和SacI双酶切，回收载体部分，将回收的表达载体、目的基因片段以及KpnI和SacI接头进行连接转化，即得cjFRO2基因的植物表达pBIcjFRO2。
步骤①中所述资阳香橙为四川省资阳县出产的一种橙，耐缺铁性强。
步骤②中所述简并引物为5’aagctgcagtggca(ct)cc(agct)tt(ct)ac3’步骤②中所述YADE(Y-shaped Adaptor Dependent Extension)法，为本发明申请人发明的方法，相关文献已发表，为现有技术。
该基因与拟南芥和豌豆中的FRO1和FRO2有明显的不同。首先，从DNA序列以及氨基酸序列的同源性比较上，它们之间仅有40％——60％的同源性，说明该基因是不同与其他FRO的一种新基因；其次，该基因来源于特别耐缺铁的资阳香橙，可能该基因编码的铁螯合还原酶具有更强的还原三价铁的能力。
该发明的优点在于，从耐缺铁的资阳香橙中将该基因克隆，然后构建其植物表达载体并应用于植物中，可通过基因工程改良粮食作物、蔬菜和果树的缺铁性状从而生产更加优质的农产品，为人类改善铁素营养，促进人类整体健康水平的提高。
具体实施例方式
实施例以资阳香橙为材料，缺铁诱导培养后，提取诱导根总RNA，分离纯化获得mRNA，以mRNA为模板，反转录获得其cDNA。用铁螯合还原酶FRO2的cDNA序列设计简并引物5’aagctgcagtggca(ct)cc(agct)tt(ct)ac3’，以上述cDNA为模板，采用YADE(Y-shaped Adaptor Dependent Extension)法，获得香橙的铁螯合还原酶基因cDNA序列，将其亚克隆到pGEM-T中，得到香橙铁螯合还原酶基因cjFRO2。将亚克隆到pGEM-T载体上的cjFRO2基因，用EcoRI和KpnI限制性内切酶消化并回收2376bp的片段，与相同内切酶酶切后的pBS-SK载体相连接，并转化获得中间载体pBSFRO2。然后用XbaI和KpnI双酶切割中间载体pBSFRO2，回收获得约2.4kb的目的基因片段，将表达载体pBI121用XbaI和SacI双酶切，回收载体部分，将回收的表达载体、目的基因片段以及KpnI和SacI接头进行连接转化，即得cjFRO2基因的植物表达pBIcjFRO2。
权利要求
1.一种香橙铁螯合还原酶基因CjFRO2(Citrous junos Ferric-chelatedReductase)，其特征在于该基因cDNA序列长2403bp，含有一个2103bp的开放阅读框，编码701个氨基酸，有一64bp的上游非编码序列和3′端polyA尾巴，其基因序列下cgacgtcgca tgctcccggc cgccatggcg gccgcgggaa ttcgattgga ggagccaaaa 60caagatggga agcagcgtag tcttaattag gactatttgc tttgctgtgt ttcttggctg 120gcttctggtt tgggctctga taccaactaa ggtttataaa aatacatgga ctcctaagct 180taacaacaag ctcaactcaa catattttag agaacaaggc acaaatcttc tgcttttctc 240gtttccagtt atgctcatag ctcttttggg ttgtgtctat cttcatcttc agaagaaacc 300caataagctt caatccaaac gtaagatgag gagccctcgt ttatttttct ctcagcggcc 360ggtgctagta atggctcctt tgggaatagt tacagcaata gagcttacaa ttgcagtaat 420gtttgtcgca ttcttgatat gggctcttgc taattatttg tatgtcagct ttggtcatct 480ccacatgcat aaagcaggag agaaagtatg gcaagccaag tttcgaagtg tatcattaag 540acttggatac attggaaaca catgctgggc atttctcttc tttccagtaa ctcgaggatc 600atcaattttg cctcttgttg gactcacttc ggaatcgagt atcaagtatc atatatggct 660agggcatctc tccaacgccc tttttgcttt gcacgccgtt ggatttttaa tttactgggc 720catgaccaat cagatggctg aggtgctaga atggagcgaa acttatgtat caaatgtagc 780tggagtaata gctattgcaa ttgcaacggt gatttgggca acgagtttac ctcgcttcag 840acgaaagatg ttcgagcttt tcttctacac tcaccacctc tacattcttt acatcatatt 900ctacgtattg cacgccggcc ctgcctactt ttgcatgatc cttccgggga tcttcctctt 960tgccgtcgat cgttacttgc gattcctaca gtcccgaaac cgggctagat tgctctccgc 1020tcgcgccttg ccatgtggtg tagttgaatt gaacttctcc aaaagtccag gattgtatta 1080taatcccaca agcatactat ttgtaaatgt gccaagcatt tccgagctgc agtggcaccc 1140atttactgta actttcaatt gtaatatgga gcaagacaag ctcagcattt taatcaaaac 1200tgagggaagt tggactcaaa agctatacca gcaaatttct tcttctgtag accgtcttga 1260ggtgtctgtt gaaggaccct atggtcctaa ttcggctcat tttctgaggc atgagtcgct 1320ggtgatggtg agcggaggca gtggcatttc tccttttatt tccatagtcc gcgagcttat 1380atttcaaagc aataacaacc cggactataa aattccaaat gtgcacctaa tttgtgtctt 1440caagaaatct gctgacttat ccatgttaaa tatcatgttg ccagtttccg atgcgcctac 1500ggaacttgcg aaactgcagt tgcaaatcga agcctatgtc actagagact cagagcagcc 1560taaaacagac acccagaaag aacttcaatc tatttggctc aagtcaaatc catcagactc 1620accggtttcc ggagctctaa gctgtaacag ttggctgtgg cttgctgtag tcacagcgtc 1680atcattcgtt atgtttctcc tcttgttggg cattgtcact cgtttctaca tataccccat 1740tgagcgaaat ggcactgaag tttaccatta ttcctacaag tgtctctggg atatgtttct 1800tgtttgtgtt tgtgttttct tggcttccag tgctgtttac ttgtggctta agaaacaaca 1860gaatgctatc gaagtgaagc aaattcagaa catggaggtg ccaacaccaa aaacatcacc 1920ggcttcatgg ttttatactg cggatagaga gctcgaagaa agccttccta atcaatgtct 1980tgttcaagcc accaaatttc atttcggtga aagacccaat cccaataaaa tactgcttga 2040cgtaaaagga acagacgtgg gagttttagt atgtggtccg aggaagatgc ggcatgaggt 2100tgcaaagatt tgttcatctg ggttggctga taatctgcac tttgagtcta ttagtttcag 2160ctggtgatgc atgtgttgta cgatctgtaa tcaatggtgt aaaatatata taaagccatc 2220ctcttagggc ttgatggctt agcgtaactt ttttgctcca cagtgcttat tcatcagata 2280gcaatttgtg ctattccgtc agtttaattt gaaaagtact tcgaaaatga ttttgatatg 2340ttgtaaactg ttgaatgaat aatcaaaaag gcagtttcag gttagcagaa taaaaaaaaa2400aaa 2403
2.一种香橙铁螯合还原酶基因CjFRO2编码的蛋白质，其特征在于该蛋白质具有如下的氨基酸序列Met Gly Ser Ser Val Val Leu Ile Arg Thr Ile Cys Phe Ala Val Phe1 5 10 15Leu Gly Trp Leu Leu Val Trp Ala Leu Ile Pro Thr Lys Val Tyr Lys20 25 30Asn Thr Trp Thr Pro Lys Leu Asn Asn Lys Leu Asn Ser Thr Tyr Phe35 40 45Arg Glu Gln Gly Thr Asn Leu Leu Leu Phe Ser Phe Pro Val Met Leu50 55 60Ile Ala Leu Leu Gly Cys Val Tyr Leu His Leu Gln Lys Lys Pro Asn65 70 75 80Lys Leu Gln Ser Lys Arg Lys Met Arg Ser Pro Arg Leu Phe Phe Ser85 90 95Gln Arg Pro Val Leu Val Met Ala Pro Leu Gly Ile Val Thr Ala Ile100 105 110Glu Leu Thr Ile Ala Val Met Phe Val Ala Phe Leu Ile Trp Ala Leu115 120 125Ala Asn Tyr Leu Tyr Val Ser Phe Gly His Leu His Met His Lys Ala130 135 140Gly Glu Lys Val Trp Gln Ala Lys Phe Arg Ser Val Ser Leu Arg Leu145 150 155 160Gly Tyr Ile Gly Asn Thr Cys Trp Ala Phe Leu Phe Phe Pro Val Thr165 170 175Arg Gly Ser Ser Ile Leu Pro Leu Val Gly Leu Thr Ser Glu Ser Ser180 185 190Ile Lys Tyr His Ile Trp Leu Gly His Leu Ser Asn Ala Leu Phe Ala195 200 205Leu His Ala Val Gly Phe Leu Ile Tyr Trp Ala Met Thr Asn Gln Met210 215 220Ala Glu Val Leu Glu Trp Ser Glu Thr Tyr Val Ser Asn Val Ala Gly225 230 235 240Val Ile Ala Ile Ala Ile Ala Thr Val Ile Trp Ala Thr Ser Leu Pro245 250 255Arg Phe Arg Arg Lys Met Phe Glu Leu Phe Phe Tyr Thr His His Leu260 265 270Tyr Ile Leu Tyr Ile Ile Phe Tyr Val Leu His Ala Gly Pro Ala Tyr275 280 285Phe Cys Met Ile Leu Pro Gly Ile Phe Leu Phe Ala Val Asp Arg Tyr290 295 300Leu Arg Phe Leu Gln Ser Arg Asn Arg Ala Arg Leu Leu Ser Ala Arg305 310 315 320Ala Leu Pro Cys Gly Val Val Glu Leu Asn Phe Ser Lys Ser Pro Gly325 330 335Leu Tyr Tyr Asn Pro Thr Ser Ile Leu Phe Val Asn Val Pro Ser Ile340 345 350Ser Glu Leu Gln Trp His Pro Phe Thr Val Thr Phe Asn Cys Asn Met355 360 365Glu Gln Asp Lys Leu Ser Ile Leu Ile Lys Thr Glu Gly Ser Trp Thr370 375 380Gln Lys Leu Tyr Gln Gln Ile Ser Ser Ser Val Asp Arg Leu Glu Val385 390 395 400Ser Val Glu Gly Pro Tyr Gly Pro Asn Ser Ala His Phe Leu Arg His405 410 415Glu Ser Leu Val Met Val Ser Gly Gly Ser Gly Ile Ser Pro Phe Ile420 425 430Ser Ile Val Arg Glu Leu Ile Phe Gln Ser Asn Asn Asn Pro Asp Tyr435 440 445Lys Ile Pro Asn Val His Leu Ile Cys Val Phe Lys Lys Ser Ala Asp450 455 460Leu Ser Met Leu Asn Ile Met Leu Pro Val Ser Asp Ala Pro Thr Glu465 470 475 480Leu Ala Lys Leu Gln Leu Gln Ile Glu Ala Tyr Val Thr Arg Asp Ser485 490 495Glu Gln Pro Lys Thr Asp Thr Gln Lys Glu Leu Gln Ser Ile Trp Leu500 505 510Lys Ser Asn Pro Ser Asp Ser Pro Val Ser Gly Ala Leu Ser Cys Asn515 520 525Ser Trp Leu Trp Leu Ala Val Val Thr Ala Ser Ser Phe Val Met Phe530 535 540Leu Leu Leu Leu Gly Ile Val Thr Arg Phe Tyr Ile Tyr Pro Ile Glu545 550 555 560Arg Asn Gly Thr Glu Val Tyr His Tyr Ser Tyr Lys Cys Leu Trp Asp565 570 575Met Phe Leu Val Cys Val Cys Val Phe Leu Ala Ser Ser Ala Val Tyr580 585 590Leu Trp Leu Lys Lys Gln Gln Asn Ala Ile Glu Val Lys Gln Ile Gln595 600 605Asn Met Glu Val Pro Thr Pro Lys Thr Ser Pro Ala Ser Trp Phe Tyr610 615 620Thr Ala Asp Arg Glu Leu Glu Glu Ser Leu Pro Asn Gln Cys Leu Val625 630 635 640Gln Ala Thr Lys Phe His Phe Gly Glu Arg Pro Asn Pro Asn Lys Ile645 650 655Leu Leu Asp Val Lys Gly Thr Asp Val Gly Val Leu Val Cys Gly Pro660 665 670Arg Lys Met Arg His Glu Val Ala Lys Ile Cys Ser Ser Gly Leu Ala675 680 685Asp Asn Leu His Phe Glu Ser Ile Ser Phe Ser Trp690 695 700
全文摘要
一种香橙铁螯合还原酶基因CjFRO2(Citrousjunos Ferric－chelated Reductase)，该基因以耐缺铁的资阳香橙为材料，通过一系列生物技术方法得到。该基因cDNA序列长2403bp，含有一个2103bp的开放阅读框，编码701个氨基酸，有一64bp的上游非编码序列和3′端polyA尾巴。同源性比较结果显示克隆的cDNA序列与已报道的铁螯合还原酶基因FRO2有较高的同源性，相同氨基酸为49％－52％，相似氨基酸为68％。将该基因及其植物表达载体应用于植物中，可通过基因工程改良粮食作物、蔬菜和果树的缺铁性状从而生产更加优质的农产品，为人类改善铁素营养，促进人类整体健康水平的提高。
文档编号C12N9/02GK1482245SQ0313772
公开日2004年3月17日 申请日期2003年6月20日 优先权日2003年6月20日
发明者李德谋, 肖月华, 侯磊, 罗小英, 周泽扬, 裴炎 申请人:西南农业大学