专利名称：姜黄素在制备治疗肺病的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物在医药中的用途，具体地说，是姜黄素在制备治疗肺病的药物中的用途。
背景技术：
各种肺部疾患是一种严重危害人民健康的疾病。尘肺病是我国的主要职业病，2002年共报告尘肺病新病例12248例，较2001年增加了16.6％。在职业病总病例数中，尘肺病占82.6％。在各类尘肺病例中，煤工尘肺和矽肺仍为主要病种。截止2002年，我国尘肺病累积病例581377名，其中仍存活患者442200例。例如我国今年流行的非典肺炎SARS就造成了影响全国的疾病突发事件。又例如肺结核，据世界卫生组织报道，全球已有近1/3的人口已经感染了结核菌，每年新发生结核病人870万例，每年死于结核病达200万例。全球目前有结核病病人2000万例。在纪念“世界防治结核病日”之际，“制止结核病”世界行动组织公布的一项统计数字显示，目前全球每天仍然有5000人死于结核病，而每年罹患结核病的人超过800万。结核病仍然是危害人类健康的一种重要疾病。我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核病患者居世界第二位，其中80％在农村。结核病是我国农村因病致贫、因病返贫的主要疾病之一。据2000年调查显示，我国现有结核菌感染者4亿人，结核病患者500万人，其中传染性肺结核病患者200万人；每年因患结核病死亡的人数达到13万人。如不能有效控制，今后十年我国将新增结核病患者2000-3000万人，会严重制约我国经济和社会的发展。呼吸系统疾病是影响我国人口死亡率的重要病种。对国民经济和社会发展造成了很大的影响。开发治疗肺病的新药非常迫切和重要。
目前，国家还没有一种正式抗尘肺的化学药物。
我们单位开展了以柠檬酸铝为主的防治尘肺的药物研究二十多年。虽然柠檬酸铝对于尘肺有一定的疗效，但是还没有成为国家正式药物。
姜黄素是我国传统中药姜黄中的主要成份。也是食物色素之一。近年来人们不断开发姜黄素的药用价值。例如保肝作用和抗炎作用。
发明内容
本发明的目的是提供姜黄素的新用途，即在制备治疗肺病的药物中的新应用。
其中所述肺病包括各种原因引起的肺纤维化，包括各种肺间质疾病，尤其尘肺如矽肺，胶原性疾病所致肺纤维化，以及新近出现的冠状病毒变种引起的SARS导致的肺纤维化等。
不同病种的肺间质纤维化改变都从肺泡炎开始，在发展和修复过程中导致肺纤维化的倾向和机理有共同之处。本发明采用向气管单侧注入石英粉尘30mg/只的方法造成大鼠实验性矽肺模型。将大鼠随机分为矽肺组、姜黄素治疗组、姜黄素对照组、正常组等。处理组染尘后药物灌胃100mg/kg，观察期定为4周。动物在麻醉状态下解剖后迅速腹腔动脉取血，摘取肺脏及其他脏器，分作病理和生化分析。主要指标包括各脏器重量和脏器系数；肺羟脯氨酸含量；铜蓝蛋白活度单位；常规HE观察肺病理变化。最后结果矽肺组和治疗组单位肺羟脯氨酸含量、肺羟脯氨酸总量和铜蓝蛋白活度单位都存在显著性差异。四周的肺病理都有明显变化。药物对照组和正常组各项指标没有明显差异，从而，证实了本发明的姜黄素可有效用于抗肺纤维化。
本发明的另一目的是提供含有有效量的姜黄素的药物组合物，该药物组合物还可以含有药学可接受的载体，如赋型剂等，和其它一种或多种添加剂如香味剂，甜味剂等。
以姜黄素进行肺炎治疗时，它可以以粉剂、粒剂、片剂、胶囊、丸剂和液体药剂等形式口服给药。姜黄素的有效药剂，是通过与适当的药用掺混物，如赋形剂、粘合剂、渗透剂、润滑剂等混合而配制成的。其中，姜黄素的重量比优选不低于30％。
剂量随患者的病情、患者的年龄和体重而改变。在口服给药情况下，剂量通常为成年人100～1000mg/kg/天，优选为250～500mg/kg/天。
在药物的安全性方面，大鼠的急性经口LD50＞5g/kg。长期给予大鼠500mg/kg80天未发现毒性。另外在体外和动物体内长期给药姜黄素具有一定抗肿瘤发生的作用，也提示其有比较好的安全性。
本发明的优点是首次发现姜黄素用一定治疗实验性尘肺的作用。尘肺是一种以肺部炎症反应和纤维化为主的肺部。由于姜黄素具有一定抗纤维化的作用，提示在其它有肺部纤维化病变的应用价值。我国有尘肺患者40多万人。
另外，姜黄素制备方法简单，结构比较简单，理化性质研究的比较透彻。
附图简述
图1是药效学试验中各组的每克肺羟脯氨酸含量结果图，其中，a，与正常组比较p＜0.05，b，与矽肺组比较，p＜0.05。
图2是药效学试验中各组的肺羟脯氨酸总量结果图。其中，a，与正常组比较p＜0.05，b，与矽肺组比较，p＜0.05。
图3是各组的铜蓝蛋白活度结果图其中，a，与正常组比较p＜0.05，b，与矽肺组比较，p＜0.05。
下面提供的实施例用于进一步阐明本发明，而不构成对本发明范围的限制。
实施例取姜黄素(Sigma公司，纯度95％)100g，羟乙基纤维素10g，压片制成片剂，放在常温干燥的器皿中备用。
本发明姜黄素的药效学试验材料与方法动物雄性Wistar大鼠。体重180-200克。北大医学部动物科学部提供。
按实验方式不同，将动物按体重随机分为七组，每一实验组分为病理组织化学观察和生化测定两部分。每组各用5只大鼠。观察期为4周。
1.矽肺组乙醚麻醉大鼠，单侧气管注入30mg石英粉，四周后处死。
2.姜黄素治疗组染尘后的2天始姜黄素灌胃100mg/kg天，四周后处死。
3.姜黄素对照组正常大鼠，姜黄素灌胃100mg/kg天，四周后处死。
4.正常对照四周组不给任何药剂，四周后处死。
5、西药治疗组染尘后的2天始布洛芬灌胃100mg/kg天，四周后处死。
6、西药对照组正常大鼠，布洛芬灌胃100mg/kg天，四周后处死。
石英粉和姜黄素石英粉由中国预防科学院提供。粉尘直径＜5μm占99.5％以上。游离二氧化硅含量为97.7％(焦磷酸法测定)。
姜黄素由化学试剂Sigma公司提供，纯度为95％。
主要仪器和设备1.切片机 2.显微镜 3.天平 4.分光光度计主要测定方法与指标1.肺样本制备处死动物均在各实验观察期注射姜黄素后第三天进行。腹注1ml 1.5％戊巴比妥溶液麻醉动物。然后股动脉放血处死大鼠。迅速解剖动物，取出心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺，肉眼观察变化，在去离子水中漂洗去掉血液成分。用滤纸吸去水分，称量各脏器；将脏器分为两部分，一部分准备进行病理组织切片，另一作生化分析部分则放入低温冰箱中保存。
2、观察指标心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺重量和脏器系数3、肺肺羟脯氨酸含量(mg)含量的测定4、铜蓝蛋白活度的测定5、常规HE观察肺病理变化数据处理方法使用SPSS公司出品的SPSS8.0统计软件进行成组方差分析。
结果与分析肺脏给药四周后实验结果(1)肺湿重和肺脏器系数矽肺组和治疗组都明显升高，与正常组存在显著性差异。药物对照组与正常组无差别。矽肺组明显升高，与药物对照组和治疗组两组都存在显著性差别。
(2)肺羟脯氨酸总量(图2)和每克肺羟脯氨酸含量(图1)姜黄素对照组、矽肺组和姜黄素治疗组都明显升高，与正常组存在显著性差异。矽肺组明显升高，与药物对照组、治疗组存在显著性差别。
(3)铜蓝蛋白活度(图3)矽肺组明显升高，并且与正常组存在显著性差异。姜黄素对照组、姜黄素治疗组两组与正常组无差别，姜黄素治疗组优于西药治疗组和对照组。矽肺组明显升高，与姜黄素对照组和姜黄素治疗组存在显著性差异。
表1 给药四周肺脏实验结果(x±s，n＝5)测定指标 正常对照组 姜黄素对照组矽肺4周组 姜黄素治疗组 布洛芬治疗组肺湿重1.570±0.2011.770±0.3434.782±0.793a4.037±1.395ab4.633±0.297a(g)肺脏器系数(％) 0.518±0.0410.745±0.1422.131±0.370a1.284±0.853a，b1.806±0.235a肺羟脯氨酸总量(mg) 1.646±1.6464.191±2.287a13.320±5.187a8.786±3.694a，b8.724±2.828a，b每克肺羟脯氨酸含量1.053±0.2382.312±1.018a3.273±0.222a2.143±0.148a，b1.916±0.681a，b(mg/g)铜蓝蛋白活度(U) 31.840±8.617 34.140±6.584 68.567±6.407a16.165±12.017b47.720±19.241ba与正常对照组比较，P＜0.05b与矽肺四周组比较，P＜0.052.其他脏器给药四周实验结果
(1)体重矽肺组、药物对照组、治疗组三组明显降低，与正常对照组存在显著性差异。
(2)心脏脏器系数(％)矽肺组、治疗组两组明显升高，与正常对照组存在显著性差异；矽肺组明显升高，与药物对照组存在显著性差异。
(3)肾脏重量矽肺组明显降低，与正常对照组存在显著性差异。肾脏脏器系数(％)矽肺组、药物对照组、治疗组明显升高，与正常对照组存在显著性差异。
(4)胸腺脏器系数(％)矽肺组明显升高，与正常对照组、药物对照组、治疗组存在显著性差异。
表2 其他脏器给药四周实验结果(x±s，n＝5)正常对照组矽肺4周组 中药对照组 中药治疗4周组 布洛芬治疗组体重(g) 303±16 226±32a239±28a246±45a259±32a心脏重量(g) 1.028±0.124 0.930±0.051 0.830±0.106 0.978±0.1760.g41±0.135心脏脏器系数 0.340±0.03 0.414±0.042a0.348±0.019 0.400±0.063a0.364±0.040(％)肝脏重量(g) 9.937±0.136 8.312±1.002 8.444±0.798 8.875±2.410 9.048±1.200肝脏脏器系数 3.278±0.250 3.691±0.335 3.550±0.188 3.634±0.958 3.485±0.076(％)脾脏重量(g) 0.736±0.176 0.669±0.224 0.821±0.463 0.714±0.203 0.821±0.128脾脏脏器系数 0.241±0.046 0.290±0.066 0.334±0.149 0.290±0.059 0.316±0.019(％)肾脏重量(g) 1.961±0.110 1.695±0.189a1.818±0.166 1.817±0.142 1.909±0.257肾脏脏器系数 0.648±0.021 0.752±0.040a0.771±0.122a0.748±0.085a0.735±0.032a(％)胸腺重量(g) 0.300±0.049 0.461±0.185 0.293±0.126 0.337±0.2090.374±0.109胸腺脏器系数 0.099±0.015 0.203±0.069a0.119±0.038 0.130±0.059b0.146±0.042(％)a与正常对照组比较，P＜0.05b与矽肺4周组比较，P＜0.05病理结果本实验用常规HE染色法观察了矽肺病变和纤维化程度。矽肺组病变的结节部分在纤维化程度上重于姜黄素治疗组。且病变范围大。矽结节较典型。
附肺羟脯氨酸含量的测定用氯胺T法，以羟脯氨酸水平来代表胶原蛋白含量。将全肺切碎混匀，称取1g肺组织，匀浆后定容到10ml，吸取1ml，再加入6当量HCl1.5ml，混匀后20磅高压消化1小时，取出消化液后加入10当量NaOH0.9ml，再用1当量HCl或NaOH调PH值至5-7左右，最后用蒸馏水定容到5ml。按下表向各管添加液体。
表3 肺羟脯氨酸含量的测定方法空白 标1标2标3标4标5标6样品离心液(ml) 0.1羟脯氨酸标准液(ml) 0 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.10蒸馏水(ml) 1.00 0 0.20 0.40 0.60 0.80 0.90柠檬酸缓冲液(ml)0.50.50.50.50.50.50.50.5氯胺T(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1混匀，充分氧化6分钟过氯酸(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1混匀，终止氧化5分钟对二甲氨基苯甲醛1 1 1 1 1 1 1 1(ml)混匀，100℃水浴2分钟冰水冷却，562nm波长比色绘制标准曲线，计算各样品羟脯氨酸含量铜蓝蛋白的测定将所取血液离心制成血清，每一份样品均分样品管和空白管，每管加液如下表4 铜蓝蛋白的测定方法样品管空白管血清(ml) 0.05 0.050.1M醋酸缓冲液(ml) 2.0 1.00.1％叠氮钠溶液(ml)0 1.0加液后将各管和0.25％对苯二胺盐酸在37℃水浴放置5分钟，向各管加0.25％对苯二胺盐酸1ml，37℃水浴30分钟，再向每管加1.5M叠氮钠1滴，530nm波长下用0.5cm比色杯比色。用下式计算铜蓝蛋白活性铜蓝蛋白活性单位(光密度/30分钟100毫升血清)＝光密度×100/血清0.1毫升＝光密度×100肺羟脯氨酸含量包括肺羟脯氨酸总量和单位肺羟脯氨酸含量。而肺羟脯氨酸含量代表了肺胶原的含量，肺胶原的含量正代表了矽肺纤维化的程度。从以上结果可以看出，单位肺羟脯氨酸含量有显著性差异，姜黄素治疗组优于矽肺组。
关于血清铜蓝蛋白，矽肺组明显升高，并且与正常组存在显著性差异。姜黄素对照组、治疗组两组与正常组无差别。姜黄素对照组和治疗组两组都与矽肺组存在显著性差别。这是因为铜蓝蛋白作为一种炎症反应蛋白，可以保护细胞膜防止过氧化，炎症反应越强烈，铜蓝蛋白活度越高，反之亦然。矽肺组动物体内发生严重的炎症反应，铜蓝蛋白活度增高。而药物对照组、正常组不言而喻，其体内几乎不存在炎性反应，因此铜蓝蛋白活度也低。对于治疗组，开始时机体炎症反应较强，在给予姜黄素抗炎治疗后，炎性减弱，铜蓝蛋白活度降低。
权利要求
1.姜黄素在制备治疗肺病的药物中的应用。
2.根据权利要求1的应用，其中所述肺病包括各种原因引起的肺纤维化，例如包括各种肺间质疾病，尤其尘肺如矽肺，胶原性疾病所致肺纤维化，以及新近出现的冠状病毒变种引起的SARS导致的肺纤维化等。
3.可用于抗肺纤维化的含有有效量的姜黄素的药物组合物。
4.根据权利要求3的药物组合物，特征在于姜黄素的含量不少于30wt％。
全文摘要
本发明涉及姜黄素在制备治疗肺病的药物中的应用，所述肺病包括各种原因引起的肺纤维化，例如包括各种肺间质疾病，尤其尘肺如矽肺，胶原性疾病所致肺纤维化，以及新近出现的冠状病毒变种引起的SARS导致的肺纤维化等。
文档编号A61P11/00GK1579377SQ0314975
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月5日 优先权日2003年8月5日
发明者张宝旭 申请人:北京大学