专利名称：升麻及其有效部位、单体治疗乙肝的新用途及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药的新用途，特别是涉及升麻及其有效部位、单体治疗乙型肝炎及急慢性肝损伤、肝纤维化的新用途及其制备方法。
背景技术：
药典2000版一部P55记载升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cimicifugaheracleifolia Kom\兴安升麻Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim.\或升麻Cimicifu foetida L.的干燥根茎。秋季采挖。性味与归经辛、微甘，微寒。归肺、胃、大肠经。功能与主治发表透疹，清热解毒，升阳举气。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑；脱肛，子宫脱垂。用法与用量6-9克。
乙型肝炎又称为血清性肝炎、乙型病毒性肝炎(简称乙肝)，是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。通过血液与体液传播，具有慢性携带状态。中国是乙型肝炎最流行的国家，人群感染率高，在某些地区感染率达到35％以上，是当前危害人民健康最严重的传染病。我国HBsAg携带人口在1亿以上，占全世界HBsAg携带人口的50％。根据我国肝炎调查结果，估计我国乙肝病人约有2700万人，每年新发病人约有900万。
乙肝临床表现多样化，易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病人可转化为原发性肝癌。肝纤维化是诸多慢性肝病发展为肝硬化过程的共有病理变化，而慢性、持续性肝损伤是肝纤维化形成的前提。造成肝损伤的因素很多，一般因药物、大量酒精、过敏等造成急性肝损伤，乙肝、肝硬化、长服某些药物等可导致急慢性肝损伤。
目前市场上用于乙肝的药物中，干扰素是首选药，是国内外公认的较为有效的抗病毒药物。由于机体对干扰素的反应存在较大个体差异，不少研究结果表明，欧美国家患者疗效较佳，而东方(如中国、日本)患者疗效较差，大多数患者在干扰素治疗期间均有不同程度的副作用。另核苷类药物具改善肝组织学病变和肝功能的作用，其安全性和耐受性较好，但在长期应用过程中出现病毒基因的变异，从而降低对药物的敏感产生耐药现象，停药以后发病率相当高。
我国中药治疗乙肝的疗效已被大量的临床所证实，中药在抗病毒，调整机体免疫力、保护肝细胞等方面都可发挥较好的疗效，但是目前上市药物多为中药复方制剂，本发明治疗乙肝的药物为单味中药制剂，副作用小，同时具有多方面的药理作用。经多年的临床实践证明具有良好的抗病毒作用，并能降低血清AST含量、剂量依赖的减轻肝脏的纤维化和胆管增生，对再生结节有较明显的抑制作用，可缓解乙肝的进一步发展。本药物具有比较显著的对抗乙肝病毒、保护肝功能作用，除临床治疗乙肝外，对多种原因导致的急性、慢性肝损伤及肝纤维化具有保护作用。
发明内容
本发明的一个目的在于公开升麻及其提取物、升麻有效部位、升麻单体(升麻醇木糖苷)预防和治疗乙型肝炎及急慢性肝损伤、肝纤维化的新用途；本发明的另一个目的在于公开升麻提取物的制备方法；本发明的另一个目的在于公开升麻有效部位的方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明升麻提取物的制备方法为取升麻药材，加5-8倍量水，煮提1-3次，每次1-2小时，滤过，滤液浓缩至1-2∶1-2(生药量溶液)时，加入乙醇至含醇量为50-70％，醇沉放置20-36小时，回收溶剂得稠浸膏后，70-85℃冷冻干燥得干药膏。
本发明升麻有效部位的制备方法为毛茛科升麻属植物大三叶升麻和/或兴安升麻和/或升麻的根茎，切片或粉碎，以甲醇、乙醇、正丁醇、异丁醇等醇类，或这些醇类的水溶液，或水，加热或冷浸提取1到5次，合并提取液，滤过。滤液浓缩到无醇味或呈一定的体积后，以水转移溶解，采用石油醚(60~90℃)、乙酸乙酯和/或正丁醇依次提取1到5次，合并乙酸乙酯和/或正丁醇的溶液，浓缩至干，所得含有皂苷的部位，即为本发明有效部位。
从升麻有效部位中进一步分析得知升麻醇木糖苷为有效单体；
升麻醇木糖苷化学名(3β，15α，16α，23R，24S)-16，23:16，24-diepoxy-15，25-dihydroxy-9，19-cyclolanostan-3-ylβ-D-xylopyranoside[结构式] [分子式及分子量]C35H56O9，620[物理性状]无色针晶，266-8℃(MeOH)(266-9、261-4℃)；[α]D27+69.7°(CHCl3∶CH3OH＝1∶1)，[α]D+8°(C＝1，吡啶)；元素分析C67.80，H9.10；IR vmax(KBr)3700-3040，1460，1380，1260，1170，1075，1045，980cm-1；1H NMR(C5D5N，400MHz)δ0.27(1H，d，J＝3.8Hz，19-H)，0.51(1H，d，J＝3.3Hz，19-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，21CH3)，1.04，1.13，1.17，1.29，1.45，1.47(各3H，s，CH3×6)，3.50(1H，dd，J＝12.1，4.0Hz，3-αH)，3.75(1H，s，24-H)，4.25(1H，s，15-βH)，4.73(1H，dd，J＝8.8Hz，23-H)，4.85(1H，d，J＝7.14Hz，1′-H)ppm；13C NMR(C5D5N，400MHz)δ32.7(1)，30.4(2)，88.9(3)，41.6(4)，47.9(5)，21.3(6)，26.7(7)，48.9(8)，20.0(9)，26.9(10)，26.7(11)，34.3(12)，32.1(13)，47.5(14)，80.4(15)，112.3(16)，59.9(17)，19.9(18)，31.2(19)，24.3(20)，19.8(21)，38.4(22)，72.0(23)，90.5(24)，71.6(25)，25.6(26)，26.0(27)，12.2(28)，26.7(29)，15.8(30)，107.6(1′)，75.6(2′)，78.4(3′)，71.3(4′)，67.1(5′)。
可将上述升麻提取物、升麻有效部位、升麻单体(升麻醇木糖苷)加上药剂学接受的辅料制成临床可接受的剂型，如片剂，胶囊，颗粒剂，口服液体制剂，皮下给药制剂，栓剂等剂型。
本发明中重量份/体积份与克/毫升相对应。
升麻及升麻提取物、升麻有效部位、升麻单体(升麻醇木糖苷)经药理作用研究，均有预防和治疗乙型肝炎及急慢性肝损伤、肝纤维化的作用；以下药理实验用以说明本发明的新用途。
药理作用研究本发明药物经主要药效学研究证实了具有较强的乙型肝炎及急慢性肝损伤、肝纤维化作用。
一、对动物Ccl4性肝损伤的保护作用表1 对小鼠Ccl4急性肝损伤的影响(第一批实验)组别 剂量(g/kg) 动物数GPT(U/L) P值模型组 - 10192.23±64.62双环醇 150mg 1083.81±30.98＜0.01升麻 11 10118.12±47.94 ＜0.05表2 对小鼠Ccl4急性肝损伤的影响(第一批病理))组别 肝细胞坏死 肝细胞退化变性 细胞浸润 增生修复模型组6/10(60％) 3/10(30％)6/10(60％) 5/10(50％)双环醇4/10(40％) 0/10(0％) 6/10(60％) 6/10(60％)升麻 0/8(0％) 0/8(0％) 0/8(0％) 8/8(100％)表3 对小鼠Ccl4急性肝损伤的影响(第二批实验)组别 剂量(g/kg) 动物数GPT(U/L) P值正常组- 10 40.52±4.27模型组- 10 93.39±7.19联苯双脂 100mg 10 51.90±17.58* ＜0.05升麻大剂量11 10 53.76±29.49* ＜0.05升麻中剂量5.510 43.00±9.54** ＜0.01升麻小剂量3 10 57.86±28.22表4 对大鼠Ccl4急慢性肝损伤的影响(病理)组别 再生结节胆管增生纤维化 坏死模型组 0/8(0％)0/8(0％) 0/8(0％) 0/8(0％)双环醇 5/10(50％) 2/10(20％) 7/10(70％) 1/10(10％)升麻 1/8(12.5％) 0/8(0％) 4/8(50％) 1/8(12.5％)
小结表1、2、3、4中结果显示给药组动物血清中的GPT明显低于模型组，病理损害明显减轻，说明药物对Ccl4所致的急、慢性肝损伤有明显保护作用。
二、HBV DNA定量PCR分析(1)中药水煎剂连续作用于2.2.15细胞2d、4d、8d，培养上清中HBVDNA水平的PCR定量分析，结果图1所示结论培养液中HBV DNA含量有随时间增加而下降的趋势。
(2)含药物的血清连续作用于2.2.15细胞2d、4d、8d，培养上清中HBV DNA水平的PCR定量分析，结果图2所示结论该组中HBV DNA滴度有随时间增加而下降的趋势。
(3)空白血清连续作用于2.2.15细胞2d、4d、8d，培养上清中HBV DNA水平的PCR定量分析，结果图3所示结论空白血清持续作用对培养上清中的HBV DNA的滴度无影响(4)常规培养2d、4d、8d上清中HBV DNA水平的PCR定量分析，结果图4所示结论对照组的培养上清中HBV DNA的滴度有一定的上升趋势。
小结图1、2、3、4显示药物及药物的含药血清对HBV病毒的增殖有明显的抑制作用。
图1 A组药物水煎剂作用2d、4d和8d的结果图2 A组含药血清作用2d、4d和8d的结果图3 空白血清作用2d、4d和8d的结果图4 常规培养2d、4d和8d的结果实施例1制备升麻提取物取升麻药材2200克，加6倍量水，煮提2次，每次1.5小时，滤过，滤液浓缩至1∶1(生药量溶液)时，加入乙醇至含醇量为60％，醇沉放置24小时。回收溶剂得稠浸膏后，80℃冷冻干燥得干药膏。药膏粉碎、过筛、加入适量糊精，装入1号胶囊，制成1000粒胶囊，即得。每粒胶囊重0.35克，每克提取物含生药6.2克。
实施例2制备升麻有效部位取兴安升麻的干燥根茎1000g，粉碎，加95％乙醇1200ml，加热回流3小时，共提取3次，滤过。滤液减压浓缩至无醇味，加入蒸馏水至1000ml，置于分液漏斗中，以石油醚(60-90℃)400ml、300ml和300ml依次提取3次，再以乙酸乙酯(400ml、300ml和300ml)和正丁醇(400ml、300ml和300ml)依次提取。乙酸乙酯层和正丁醇层分别合并，减压回收溶剂至干，为各重85g和8g的浸膏。此两部分均为本专利的有效部位。
实施例3制备升麻有效部位取兴安升麻的干燥根茎1000g，粉碎，加石油醚(60-90℃)1200ml，加热回流2小时，滤过。药渣以石油醚(60-90℃)同法再次提取1次，滤过。药渣挥干溶媒后，以1200ml乙酸乙酯加热回流2小时，共提取3次。乙酸乙酯提取液合并，回收溶媒至干，得浸膏90克。此浸膏即为本专利的有效部位。
实施例4制备升麻有效部位取兴安升麻的干燥根茎1000g，粉碎，加蒸馏水3000ml、1500ml和1500ml依次煮沸1.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至约1000ml，置于分液漏斗中，400、300、300体积份石油醚提取以除去低极性的物质后，以正丁醇(400ml、300ml和300ml)依次提取3次。合并正丁醇层，减压回收溶剂至干，为重约90g的浸膏。此浸膏即为本专利的有效部位。
权利要求
1.升麻在制备预防或治疗急性或慢性肝损伤药物中的应用。
2.升麻在制备预防或治疗肝纤维化药物中的应用。
3.升麻在制备降低谷丙转氨酶药物中的应用。
4.升麻在制备抑制HBV病毒增殖药物中的应用。
5.升麻在制备预防或治疗急性或慢性乙型肝炎药物的应用。
6.如权利要求1-5所述的应用，其特征在于升麻可以是其提取物或其有效部位或升麻醇木糖苷。
7.一种升麻的提取物，其特征在于是通过以下方法制备的取升麻药材，加5-8倍量水，煮提1-3次，每次1-2小时，滤过，滤液浓缩至生药量∶溶液＝1-2∶1-2时，加入乙醇至含醇量为50-70％，醇沉放置20-36小时，回收溶剂得稠浸膏后，70-85℃冷冻干燥得干药膏。
8.如权利要求7所述的提取物，其特征在于是通过以下方法制备的取升麻药材2200克，加6倍量水，煮提2次，每次1.5小时，滤过，滤液浓缩至生药量∶溶液＝1∶1时，加入乙醇至含醇量为60％，醇沉放置24小时，回收溶剂得稠浸膏后，80℃冷冻干燥得干药膏。
9.一种升麻的有效部位，其特征在于是通过以下方法制备的取升麻药材，切片或粉碎，用醇或醇水溶液或水，加热或冷浸提取1到5次，合并提取液，滤过，滤液浓缩到无醇味或呈一定的体积后，以水转移溶解，采用60-90℃石油醚、乙酸乙酯和/或正丁醇分别提取1到5次，合并乙酸乙酯和/或正丁醇的上层溶液，浓缩至干，所得含有皂苷的部位，即为本发明的有效部位。
10.如权利要求9所述的有效部位，其特征在于所述用于提取的醇类可以是甲醇、乙醇、正丁醇、异丁醇中的任一种或它们的混合物。
11.如权利要求10所述的有效部位，其特征在于是通过以下方法制备的取兴安升麻的干燥根茎1000重量份，粉碎，加95％乙醇1200体积份，加热回流3小时，共提取3次，滤过。滤液减压浓缩至无醇味，加入蒸馏水至1000体积份，置于分液漏斗中，以60-90℃石油醚400、300、300体积份依次提取3次，再以400、300、300体积份乙酸乙酯和400、300、300体积份正丁醇依次提取，乙酸乙酯层和正丁醇层分别合并，减压回收溶剂至干得有效部位。
12.如权利要求10所述的有效部位，其特征在于是通过以下方法制备的取兴安升麻的干燥根茎1000重量份，粉碎，加60-90℃石油醚1200体积份，加热回流2小时，滤过；药渣以60-90℃石油醚同法再次提取1次，滤过；药渣挥干溶媒后，以1200体积份乙酸乙酯加热回流2小时，共提取3次，乙酸乙酯提取液合并，回收溶媒至干，得有效部位。
13.如权利要求10所述的有效部位，其特征在于是通过以下方法制备的取兴安升麻的干燥根茎1000重量份，粉碎，加蒸馏水3000、1500和1500体积份依次煮沸1.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至约1000体积份，置于分液漏斗中，400、300、300体积份石油醚提取以除去低极性的物质后，以400、300和300体积份正丁醇提取3次，合并正丁醇层，减压回收溶剂至干，得有效部位。
全文摘要
本发明公开了升麻及其有效部位、升麻醇木糖苷在预防和治疗乙型肝炎及急慢性肝损伤、肝纤维化的新用途；同时公开升麻提取物及有效部位的制备方法。
文档编号A61K31/7048GK1589858SQ0315592
公开日2005年3月9日 申请日期2003年8月27日 优先权日2003年8月27日
发明者图娅, 崔晓兰, 巢志茂 申请人:于水