专利名称：红景天在制备治疗或预防老年痴呆症药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及红景天(Rhodiola rosea L.)及其提取物，具体的说是涉及红景天及其提取物用于制备治疗或预防老年性痴呆症(Alzheimer disease)的药物。
二.
背景技术：
老年性痴呆症(AD)是一种中枢神经系统原发性、退行性疾病，其典型病理特征是老年斑(SP)与神经纤维缠结(NFTs)及患者大脑皮层高级机能的后天性全面受损，临床上主要表现为进行性痴呆、记忆和认知功能减退。AD症起病隐袭，逐步进展，早期仅为记忆力减退，后期以严重的痴呆和死亡为结局。随着世界人口的老龄化，发病率呈逐年上升的趋势，AD症已成为第4大引起人类死亡的疾病，严重危害着老年人的身心健康与生命质量。治疗AD症药物的研究越来越受到世界医药研究机构的重视。
AD的发病机制非常复杂，病因至今尚不十分清楚。但大量研究表明它与细胞衰老、神经递质异常、神经生长因子功能低下以及多基因缺陷有关。在治疗药物方面，由于发病机理不明，缺乏有效的药物筛选模型，多属于对症治疗。目前AD治疗药物大致可分为拟胆碱药物、促进乙酰胆碱释放药物、生长因子促进剂、抗Aβ肽药物，以及脑功能改善药物等。至今还没有根治或逆转病程的理想药物，目前临床上用于AD治疗的首选药物多属于胆碱酯酶抑制剂(参见高之旭，徐一峰.阿尔茨海默病的药物治疗及疗效评价，中国新药与临床杂志，2000，19(1)46～48)，如他克林(tacrine，商品名Cognex，派可致)是第1个经美国食品和药物管理局(FDA)199 3年批准专门用于治疗AD的药物。他克林是一种口服中枢性，可逆性胆碱酯酶抑制剂，它能通过延缓由结构功能完整的胆碱能神经元分泌的乙酰胆碱的降解，增加脑内突触间的乙酰胆碱含量而治疗AD。另外，多奈哌齐(donepezil)，美曲膦酯(metrifonate)和加兰他敏(galantamine)和石杉碱甲(huperzine A，，商品名哈伯因，双益平)等也属于这类药物。但这些药物普遍存在较为严重的不良反应——胆碱能反应，如恶心、呕吐、心动过缓等，有些还直接导致肝细胞损伤，患者服药期间需不断跟踪检测ALT和警惕肝毒性，这些缺点严重制约着这类药物的广泛使用，因此寻找疗效好、毒副作用小的天然活性物质仍是这类新药的研究热点。
红景天系景天科多年生草本或亚灌木植物，具有活血止血，清肺止咳之功效。红景天的化学成分有甙类、黄酮类、香豆素类、生物碱类、氨基酸和微量元素等[参见Ding ShuLi，Zhu Zhaoyi.World Phytomedicines，1992，7(5)198～203；Ming Haiquan，XiaGuangcheng，Zhang Ruijun.Chinese Traditional and Herbal Drugs，1988，19(5)37～42]。其中已公认的有效成分有红景天甙(salidroside)及其甙元酪醇(tyrosol)，二苯甲基六氢吡啶等。现代药理研究表明红景天具有明显的抗缺氧、抗寒冷、抗疲劳、抗微波辐射、抗衰老、抗肿瘤等作用[参见Ding ShuLi，Zhu Zhaoyi.World Phytomedicines，1992，7(5)198～203；Ming Haiquan，Xia Guangcheng，Zhang Ruijun.ChineseTraditional and Herbal Drugs，1988，19(5)37～42]。
三.
发明内容
本发明的主要目的在于提供具有防治老年痴呆症的红景天有效部位以用于制备防治老年痴呆的药物。
本发明人将红景天的根及根茎用水提取，提取液浓缩后加乙醇醇析，得到上清液(HJ-1)和沉淀(HJ-2)。
本发明人再将红景天根及根茎用乙醇提取，浓缩后加水控溶，然后分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到HJ-3、HJ-4、HJ-5和水层HJ-6。
本发明人研究了红景天各有效部位在体外对胆碱酯酶的抑制活力，及其对AD模型动物脑内胆碱酯酶水平以及其空间识别障碍和学习记忆能力的影响。
本发明人研究发现红景天各有效部位对AD有防治作用。研究发现红景天能显著降低AD模型动物脑内胆碱酯酶活力；红景天对AD模型动物能改善学习记忆行为。因此红景天能用于制备治疗老年痴呆症的药物，且红景天毒副作用极小。
因此，本发明的技术方案是红景天在制备治疗和预防老年痴呆症药物中的应用。
上述的用途，可以是用红景天的水提取物制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天水提取液经醇析后所得的上清液制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天水提取液经醇析后所得的沉淀物制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天的醇提取物制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液再经乙酸乙酯提取所留下的水溶液制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液，经乙酸乙酯提取所留下的水溶液再用丁醇提取的丁醇提取物制备所述的药物。
上述的用途，可以是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液，经乙酸乙酯提取所留下的水溶液再用丁醇提取留下的水溶液制备所述的药物。
上述的用途，可以是与一种或多种可药用载体或稀释剂配制，以常规方法制备片剂、糖衣丸、胶囊、注射溶液、溶液、乳液、油膏、乳膏、吸入剂、气雾剂或栓剂形式的药物。
四
图1是红景天醇提部分提取流程图。
五具体实施例方式
实施例1红景天有效部位的提取1.HJ-1和HJ-2的制备取红景天根及根茎，5～10倍量体积的水提取两次，每次40分钟至1小时，滤液抽滤浓缩至小体积，往浓缩液中加入95％乙醇，调整醇含量至80％，冷置析沉，高速离心。上清液经减压浓缩至干得干粉即为HJ-1，沉淀部份挥干溶剂得干粉即为HJ-2。
2.HJ-3、HJ-4、HJ-5和HJ-6的制备取红景天根及根茎，5～10倍量体积的医用酒精提取两次，每次40分钟至1小时，滤液浓缩至无醇味，加热水适量控溶，然后分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到III、IV、V和水层VI。四部分挥干溶剂分别得到干粉即为HJ-3、HJ-4、HJ-5和HJ-6各部分(见图1)。
例2体外红景天对胆碱酯酶的抑制活性1.胆碱酯酶的制备[参见Liu Jing，Zhang Haiyan，Tang Xican.Effects ofsynthetic(-)-huperzine A on cholinesterase activities and mouse water mazeperformance.Acta Pharmacologica Sinica.1998，19(5)413～416；Wang Hong，TangXican.Anticholinesterase effects of huperzine A，e2020，and tacrine in rats.ActaPharmacologica Sinica.1998，19(1)27～30]参照文献从新鲜血液中制备红细胞膜，并用Tris-HCL缓冲液悬浮，分装后于.-20℃保存，并用folin酚法测定蛋白含量。
2.药物对胆碱酯酶抑制活力的测定根据Ellman比色法[参见Liu Jing，Zhang Haiyan，Wang Liming，TangXican.Inhibi tory effects of huperzine B on cholinesterase activity in mice.ActaPharmacologica Sinica.1999，20(2)141～145；朴景华，蒲小平，马建等.类叶升麻苷对东莨菪碱所致记忆获得性障碍的改善作用，中国药理学通报，2001，17(6)625～7]，以Tacrine为阳性对照，称取定量的药物，溶于水中，定容后稀释成不同的浓度作为待侧液。待侧液与碘化乙酰胆碱各1ml加入试管，加水至4ml，37℃保温5分钟。加0.1ml酶液，于37℃反应8分钟。加3％SDS液1ml终止反应，加DTNB 0.1ml显色。于440nm测定吸收度。以剩余酶活力的百分数对药物浓度的负对数作图。根据一系列浓度的药物的抑制曲线求得PI50。
3.结果(见表1)由结果可见HJ-1、HJ-2、HJ-3、HJ-5和HJ-6部分对胆碱酯酶有抑制作用，其中HJ-5对胆碱酯酶有抑制作用最强。
表1.红景天(HJ-1、HJ-2、HJ-3、HJ-5和HJ-6)对胆碱酯酶活力的抑制作用组别 PI50(g/mL)他克林 8.628×10-8HJ-1 0.083HJ-2 0.16HJ-3 0.28HJ-5 0.027HJ-6 0.096实施例3体内红景天对胆碱酯酶的抑制活性[参见扑景华、蒲小平、马建等，类叶升麻苷对东莨菪碱所致记忆获得性障碍的改善作用，中国药理通报，2001，17(6)625-7]1.给药方案动物昆明种小白鼠红景天各有效部位分别用1％的CMC-Na混悬均匀。昆明种小白鼠(18～20g)随机分为15组(每组12只雌雄各半)。分别为假损伤组(0.4ml 1％CMC-Na)，模型组(0.4ml1％CMC-Na)，阳性对照组哈伯因组(0.5mg/kg)，HJ-1低剂量组(1.27g/kg)，HJ-1中剂量组(3.81g/kg)，HJ-1高剂量组(11.41g/kg)，HJ-2低剂量组(1.27g/kg)，HJ-2中剂量组(3.81g/kg)，HJ-2高剂量组(11.41g/kg)，HJ-5低剂量组(1.27g/kg)，HJ-5中剂量组(3.81g/kg)，HJ-5高剂量组(11.41g/kg)，HJ-6低剂量组(1.27g/kg)，HJ-6中剂量组(3.81g/kg)和HJ-6高剂量组(11.41g/kg)。给药两周，每日灌胃一次，直至末次给药，开始造模。
2.AD动物模型的建立末次给药后1h，模型组、阳性对照组及给药组腹腔注射东莨菪碱(2mg/kg)，假损伤组腹腔注射等容量的生理盐水，相同条件下测试。待行为学实验完成后，处死小鼠，立即取脑，在冰上快速分离皮层。称重后立即在液氮中冷冻保存。用相当于组织重量9倍体积的匀浆介质(0.01mol/L蔗糖，0.01mol/L Tris-HCl，0.01mol/L EDTA 2Na，pH 7.4)将皮层制成组织匀浆，将匀浆4℃ 3000～4000rpm离心15min，取上清参照试剂盒说明书测定胆碱酯酶活性。样品蛋白含量采用folin酚法测定。
3.结果(见表2)实验结果显示，模型组皮层组织的chE活性明显高于假损伤组(Sham Group)(P＜0.01)。各红景天提取物不同剂量组均有拮抗chE活性增高的作用(P＜0.01)，类似于哈伯因能降低AD动物大脑皮层胆碱酯酶的活性。
表.2小鼠皮层组织的chE活性组别 剂量(mg/kg d-1) 动物数 chE活性(U/mgprot)Sham 0.4ml 1％CMC-Na(po)12 3.629±1.652AD Model 0.4ml 1％CMC-Na(po)12 6.889±2.29##哈伯因 0.5mg/kg(po) 12 2.611±0.593**HJ-1 1.27(po) 12 4.307±2.083**3.81(po) 12 3.188±0.988**11.41(po) 12 4.457±1.792**HJ-2 1.27(po) 12 4.284±2.004**3.81(po) 12 3.439±1.085**11.41(po) 12 2.806±0.978**HJ-5 1.27(po) 12 3.985±1.425**3.81(po) 12 3.544±1.405**11.41(po) 12 4.277±1.582**HJ-6 1.27(po) 12 5.668±2.7333.81(po) 12 4.085±1.768**11.41(po) 12 4.039±2.724**与假损伤组相比##P＜0.01；AD模型组相比**P＜0.01实施例4红景天改善AD模型动物空间辨别学习记忆行为
1.给药方案同实例32.AD动物模型的建立同实例33.空间辨别学习记忆实验小鼠中造模前，通过初筛选取达标者，再通过连续几天的学习强化记忆，造模后将设定总时间为5min，超过5min不能游出者按5min计，记录小鼠自迷宫起点游至安全台所需时间和途中进入盲端的错误次数为衡量学习获得能力的指标。
4.结果(见表3)表.3红景天提取物对AD模型小鼠空间辨别学习记忆行为的改善作用组别剂量(mg/kg d-1) 动物数游抵平台的时间(s) 错误次数Sham0.4ml 1％CMC-Na(po) 1234±18.26 2.5±1.58A模型组 0.4ml 1％CMC-Na(po) 12100.55±32.98##19.86±10.73##哈伯因 0.5mg/kg(po) 1240±18.68**3.3±1.89**HJ-11.27(po) 1268.9±83.2 7.8±22.043.81(po) 1257.5±41**6.2±7.03**11.41(po)1249.3±38.9**7.93±9.74**HJ-21.27(po) 1247.55±20.77**4.18±2.41**3.81(po) 1252.73±24.68**4.55±2.94**11.41(po)1251.45±27.93**5.27±2.64**HJ-51.27(po) 1246.2±53.8**7.6±10.27**3.81(po) 1266.4±32.4*6.2±15.03*11.41(po)1234±31.2**7.93±9.74**HJ-61.27(po) 1255.55±27.20**4.82±2.68**3.81(po) 1241.55±22.52**3.55±1.92**11.41(po)1257±25.80**5.00±2.73**与假损伤组相比##P＜0.01；与模型组相比**P＜0.01，*P＜0.05水迷宫实验显示，模型组小鼠反应错误次数与游抵平台的时间较假损伤组(ShamGroup)明显增加(P＜0.01)，各红景天提取物不同剂量组均有改善作用(P＜0.05)，与哈伯因的效果类似。
权利要求
1.红景天在制备治疗和预防老年痴呆症药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征是用红景天的水提取物制备所述的药物。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征是用红景天水提取液经醇析后所得的上清液制备所述的药物。
4.根据权利要求2所述的用途，其特征是用红景天水提取液经醇析后所得的沉淀物制备所述的药物。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征是用红景天的醇提取物制备所述的药物。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液制备所述的药物。
7.根据权利要求7所述的用途，其特征是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液再经乙酸乙酯提取所留下的水溶液制备所述的药物。
8.根据权利要求8所述的用途，其特征是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液，经乙酸乙酯提取所留下的水溶液再用丁醇提取的丁醇提取物制备所述的药物。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征是用红景天醇提取物加水控溶，氯仿提取后的水溶液，经乙酸乙酯提取所留下的水溶液再用丁醇提取留下的水溶液制备所述的药物。
10.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述用途是制备片剂、糖衣丸、胶囊、注射溶液、溶液、乳液、油膏、乳膏、吸入剂、气雾剂或栓剂形式的药物。
全文摘要
将红景天的根及根茎用水提取，提取液浓缩后加乙醇醇析，得到上清液(HJ－1)和沉淀(HJ－2)。本发明再将红景天根及根茎用乙醇提取，浓缩后加水控溶，然后分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到HJ－3、HJ－4、HJ－5和水层HJ－6。体外研究发现HJ－1、HJ－2、HJ－3、HJ－5和HJ－6部分对胆碱酯酶有抑制作用，其中HJ－5对胆碱酯酶有抑制作用最强。体内研究发现红景天能显著降低AD模型动物脑内胆碱酯酶活力；红景天对AD模型动物能改善学习记忆行为。因此红景天能用于制备治疗老年痴呆症的药物，且红景天毒副作用极小。
文档编号A61K9/08GK1528387SQ03158349
公开日2004年9月15日 申请日期2003年9月27日 优先权日2003年9月27日
发明者安鲁凡 申请人:安鲁凡