专利名称:一种治疗智能减退、痴呆的中药组合物及其制备方法
技术领域:
本发明涉及一种中药组合物,特别涉及用于治疗智能减退、痴呆的中药组合物,同时涉及该组合物的制备方法。
背景技术:
老年期痴呆的发病过程不单纯是脑的局部病变和脑功能独立受损,而是全身性老化和病变的局部表现,常用的抗痴呆药物虽然有对症治疗的效果,但是对痴呆的预防和改善预后的效果不佳。
中医认为痴呆之发病,除因先天禀赋或热病伤神者外,凡于老年后逐渐发病者,均与肾、心、脾之患有关。肾为先天之,为元阴元阳之所在。藏精主骨生髓,脑为髓海,肾精充则髓海充盈;心藏神而主血脉,《灵枢雅容》心者,五脏六腑之大主也,精神之所舍也。《灵枢·本神》“心藏脉,脉藏神”,无形之神淡有形之精血所载,血脉通利,阴阳配合则精,神相得为安,所以《灵枢·神》说“心藏脉,脉舍神”;脾主运化,为后天之本,气血生化之源,统摄血液,运化水湿。若肾精不足,元阴元阳亏损,则不能生髓充脑,脑失所养,神明失健;心气虚则血脉不得通畅,肾精虚则水火不相既济,以致神不守舍,神明无主;脾虚则失健运,后天失养,精血化生无源,水谷精微停聚化为痰浊,蒙蔽清窍而神明不精。总之,痴呆一症,其病在脏以心,脾、肾为主,病机为精血不足,气滞而血脉不畅,痰浊蒙蔽所致。以虚为本,虚中扶实。对本病的治疗应针对上述病机而设。
医药对痴呆的治疗在理论上侧重整体调整,在临床方药的设计上重视生活质量的改善。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种新的治疗智能减退、痴呆的中药组合物;本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗智能减退、痴呆的中药组合物的方法。
本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)
红参50-200重量份 鹿茸30-80重量份人参皂甙15-50重量份何首乌150-500重量份黄精100-500重量份 丹参100-500重量份山楂100-500重量份 大黄10-50重量份。
所述大黄优选酒制大黄;人参皂甙优选人参茎叶皂甙;鹿茸优选冻干鲜鹿茸。
本发明中药组合物的制备方法为a.取红参,冻干鲜鹿茸,大黄,分别粉碎,过80-130目,备用;b.取人参茎叶皂甙粉,备用;c.取何首乌、山楂、黄精、丹参切片混合煎煮1-3次;每次加水4-8倍量,煎煮1-3小时;合并煎液滤过,在60℃温度下浓缩至相对密度为1.20-1.35的浸膏,与a,b之粉剂混合、干燥、粉碎、过筛;以70-80%乙醇制粒;于60-90℃温度下干燥;经过常规工序直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型,如片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸等。
本发明组合物标本兼顾,通补并施;达到补而不滞,通而不峻。集补阴阳,和气血、调脏腑,通经脉诸功效于一炉,对治疗智能减退、痴呆病有很好的效果;且无毒副作用。
以下实验例所用健神益智片为本发明组合物片剂;药理实验是从整体给药的促智行为效应,代谢调节作用,老化相关酶及异常代谢产物的调控;到与老年期痴呆相关的神经生长因子受体功能的分子生物学方面的变化进行了实验设计,从多方面证明健神益智片的临床效果药理学基础。
实验例1健神益智片对果蝇寿命的影响果蝇是研究衰老的常用实验模型,具有生存期短、繁殖快、管理简便以及有与人类相似的生长、发育、繁殖和衰老阶段等优点,而适用于抗衰老药物筛选研究。本实验采用不同浓度的健神益智片,由于方中人参为君药,为观察组方后之效应,故以人参为对照品,阳性对照药为维参锌,系卫生部批准之西药三类98卫药准字X-45号。加入培养基中,以对比观察不同药物,不同剂时量对果蝇寿命的影响。
材料和方法本实验采用天津医学院老年医学实验室提供的美国野生型果蝇作实验模型(1),培养基的成分含量比为每100g基础培养基含玉米10g,红糖13.5g,干酵母1g,琼脂1.5g,苯甲酸0.15g,溶于自来水,天然PH值。成虫培养在25±0.5℃,相对湿度65%的暗室培养箱中。实验开始后,每日统计一次果蝇死亡数目,每4天更换一次培养基,直至成虫全部死亡为止,以寿命表法统计,组间以方差检验寿命长短是否有显著性差异。
药品配制健神益智片及维参锌粉(维参锌由人参、花粉、维生素E及硫酸锌组成为卫生部批准之新抗老化剂。1988卫药准字X-45号)各取1g、2g药品分别加入99g、98g、培养基中,加热混合搅拌,令最终浓度为1%、2%两个浓度梯度。人参果皂甙,纯品含量80%,称12.5mg,溶解后加入100g培养基中,令最终浓度0.01g%。人参浸膏,含量23%,称6g溶于12ml乙醇中,取1ml加入100g培养基中(加热除乙醇),令最终含量为0.115%。
实验分组取果蝇(处女蝇)800只,乙醚麻醉后随机分组,共分7组,每组100只,其中雌雄各半,分装于14个培养基中,每管50只,雌雄分装。
A组阴性对照组B组维参锌1%C组维参锌2%D组健神益智片低剂量组1%E组健神益智片高剂量组2%F组人参果皂甙0.01%对照组G组人参浸膏0.115%对照组各组果蝇在分组培养基中培养,每日记录死亡果蝇数,直至果蝇全部死亡为止。
实验结果应用寿命表法进行果蝇寿命统计,组间差异应用方差分析(3)结果表明健神益智片在雄性果蝇组只有高剂量组有效(Z=5.17 P<0.01;2%组Z=4.20 P<0.01)。见表1及表2。
表1健神益智片对雄性果蝇寿命的影响
Z0.01=2.33Z0.05=1.64(按寿命表法统计)表2健神益智片对雌性果蝇寿命的影响
Z0.99=2.33 Z0.95=1.64实验例2健神益智片对单胺氧化酶、过氧化脂持、超氧化物歧酶的影响及抗幅射作用过氧化脂质、超氧化物歧酶是测定体内自由基清除能力的重要生化药理指标。单胺氧化酶(Monoamino Oxidase MAO)是一类广泛存在于生物体不同组织中的胺基氧化酶,它具有催化不同类型的单胺氧化脱氨的作用。有人发现人脑、血小板中单胺氧化酶(MAO、EC、1、4、1、3)的活性,随着年龄的增长而明显增高,从而影响脑内单胺类递质的功能。特别是七十年代以来,由于发现衰老过程,老年性痴呆疾及帕金森氏病与单胺氧化酶B(MAO-B)的活性有密切关系,因此人们一直寻求应用适当的单胺氧化酶抑制剂(MAOI)来选择性的抑制MAO-B,以治疗老年性痴呆和帕金森氏病。
过氧化脂质(LPO)是脂类化合物中或游离的不饱合脂肪酸受自由基作用生成的过氧化物。随着增龄和在某些病理情况下,例如老年期痴呆、幅射损伤、紫外线照射和衰老等情况下自由基增高时引起过氧化脂质的增高,尤其脑内LPO的增加与老年期痴呆患者脑内老年斑形成有关(2),同时与超氧化物歧化酶(SOD)活性降低有关,SOD是消除自由基的主要酶类之一,从而减少过氧化脂质的积蓄。因此测定血清或组织中的LPO和SOD可以了解自由基的代谢情况。
为验证健神益智片的抗自由基的作用,及进一步探讨其抗老年痴呆的作用,我们应用正常大鼠,老年大鼠和60Co照射小鼠,造成了自由基模型,测定MAO、LPO、SOD水平。
材料与方法正常动物Wistar大白鼠体重160±10g,老龄鼠为10个月龄,青年鼠为2个月龄。
健神益智片高剂量组2g/kg,低剂量组1g/kg及阳性对照药维参锌2g/kg体重,给药35天后放血处死。
抗幅射实验,ICR纯系小鼠,体重25-30g,以配对设计分组,设正常,放射对照,健神益智片低、高剂量组(低剂量1g/kg,高剂量2g/kg)及阳性对照组维参锌(2g/kg)给药7天后,一次性60Co 450拉德照射,照射后给药3天处死动物。取血、脑、肝作MAO-B、LPO、SOD测定。
一、MAO-B的测定取组织称重→加10倍体积的予冷的PH7.4,0.2M,PB缓冲液研磨成匀浆1000×g离心10分→除沉淀取上清液4℃下17000g离心30分→取沉淀用0.3ml 0.2M缓冲液悬浮即得粗酶。在带有磨口盖的试管中加入0.3ml 80mM苄胺,2.4ml、0.2M PH7.4 PB再加入0.3ml粗酶→37℃保温振荡3小时→加60%PCA 0.3ml终止反应,再加环己烷3ml振荡→8000转/离心→取上清液测242nm波长光密度值。
二、LPO的测定鼠肝及脑分别作10%组织匀浆取0.1ml→加8.1%SDS<p>
表1调度器系统硬件配置具体实施时,调度器的两个调度机分别用一根网线联入集群服务器外端的共享介质集线器,同时用一根网线联入内部的交换机。机器启动后,对Linux Virtual Server进行相应配置,并启动所述的双机容错调度软件,即可开始正常工作。
表4健神益智片对老年大鼠脑LPO的影响
表5健神益智片对老年组大鼠肝LPO的影响
表6健神益智片对青年大鼠肝LPO的影响
表7健神益智片对ICR纯系小鼠经60Co照射后肝脏LPO的变化
表8灌服健神益智片后ICR小鼠经60Co照射后血清SOD的变化
结果与讨论上述实验结果表明,健神益智片具有明显的抑制单胺氧化酶B的作用及减少过氧化脂质的功能,其作用机理有待近一步研究。
实验结果又表明健神益智片在人工自由基增多的条件下能使LPO降低,这可能是保护SOD活性的结果,在抗自由基作用,可以解释一部分健神益智片的作用机理。
实验例3健神益智片对正常小鼠智能(记忆—条件反射)的影响第一次试验材料与方法动物昆明种小白鼠(白求恩医大动物实验室提供)体重18-22g仪器DS-Z条件反射电控仪药物健神益智片低剂量组1g/kg高剂量组2g/kg阳性对照药人参茎叶皂甙60mg/kg取昆明种小白鼠50只,雌雄各半,体重为18-22g。
首先用DS-Z条件反射电控制仪小鼠,从而进行选择,对于一些劣鼠淘汰,选好的鼠进行分组,每组10只小鼠,共4组以蒸馏水为空白对照,以人参茎叶皂甙为阳性对照组。10%健神益智片灌胃0.5ml/day为高剂量组。以5%健神益智片灌胃0.5ml/day,为低剂量组。连续给药7天,第8天给药1小时后用DS-Z条件反射电控仪重复记忆。
表1健神益智片对小鼠记忆条件反射的促进作用
健神益智片低剂量组X2=2.7P>0.05高剂量组X2=11.37 P<0.01人参皂甙组0.5%X2=8.35 P<0.01人参皂甙对中枢神经系统的作用已有广泛而肯定的研究结论,尤其是条件反射形成过程有调节作用(1)。本项记忆实验原理是以形成条件反射为神经活动之生理学基础,因此人参皂甙可以做为衡量本实验是否成功可靠的阳性对照。本实验结果表明,健神益智片及人参皂甙均可加强条件反射的形成。
实验例3健神益智片对老龄鼠记忆—条件反射的作用(第二次实验)材料与方法动物DBA/2纯系老年小白鼠(大连市医药科学研究所动物室提供)体重30±2g 月龄18月药物健神益智片 阳性对照药人参皂甙(茎叶)仪器Y型反射箱,底部为栅板,栅条间距为12mm实验时将小鼠放入箱内,通电后学会主动逃避反应,灯光信号表示安全区(不通电),安全区的方位以无规则次序变化,小鼠的正常反应是迅即跳回安全区。
方法取老年小白鼠(18月龄),体重30±2g,50只雌雄各半,进行预选,淘汰离散度太大的小鼠,留下40只,分5组,每组8只。
第I组人参茎叶皂60mg/kg;第II组健神益智片高剂量2.4g/kg;第III组健神益智片中剂量1.6g/kg;IV组健神益智片低剂量0.8g/kg;第V组生理盐水对照组每日胃内给药一次,连续给药八天,并于最后一天给药后1小时,测重复记忆力。记录10次电击动物的正确数,共8次,累计数(80次)记录进行比较。
结果见下表健神益智片对老年鼠重复记忆的影响;训练后(训练前)
健神益智片和人参皂甙则均有促进老年鼠条件反射—记忆的作用。
实验例4健神益智片对记忆障碍小鼠学习记忆环节的作用(第三次实验)实验材料动物昆明种小白鼠,体重20±2g各半,由白求恩医科大学动物室提供。
药品及试剂健神益智片0.38/片,由大连市保健品科研生产联合体提供。阳性对照药维参锌胶囊,由长春制药厂生产。东莨菪碱,由中国医学科学院药物研究所提供。环己酰亚胺为sigma公司产品。
方法与结果一、对东莨菪碱造成小鼠记忆获得障碍的影响(跳台法)取小鼠60只,随机分为六组,如表1所示剂量灌胃给药,每日1次,正常对照组及模型组每日给予等体积蒸馏水,药称15天,末次给药后20min除正常对照组外,其余五组均腹腔注射东莨菪碱5mg/kg,10min后进行小鼠跳台训练,适应3min,训练5min,24小时后重测,记录各鼠错误反应次次数,结果见表1。
表1健神益智片对东莨菪碱(0.005g/kg)小鼠记忆障碍模型的作用(第一次实验)
***P<0.001 **p<0.01 *p<0.05(与模型组比较)表2健神益智片对东莨菪碱(0.005g/kg)小鼠记忆障碍模型的作用(重复实验)
二、对环己酰亚胺造成小鼠记忆巩固障碍的影响(跳台法)取小鼠60只,分组及给药方法同前,与末次给药30min后,各鼠均进行跳台训练,训练后立即注射环己酰亚胺120mg/kg,24h后进行测验,结果见表3。
表3健神益智片对环己酰亚胺(0.12g/kg)造成小鼠记忆巩固障碍的影响(第一批实验)
***P<0.001 **p<0.01 *p<0.05(与模型组比较)表4健神益智片对环己酰亚胺(0.12g/kg)所造成记忆巩固的影响(第二批实验)
上述实验结果表明,健神益智片各剂量组对东莨菪碱造成小鼠记忆获得障碍及环己酰胺造成小鼠记忆巩固障碍,均有不同程度的改善作用,说明健神益智片能够提高小鼠学习记忆能力。
实验例5健神益智片对化学性学习记忆障碍的保护作用本实验用樟柳碱导致小鼠学习记忆障碍,用跳台和暗回避法观察小鼠学习记忆能力,观察了健神益智片对这种化学性记忆障碍的保护作用。
动物昆明种小鼠18-22克,购自中国医学科学院动物中心,随机分为五组,每组10只。
药物健神益智片由广东省南海市罗村镇华卫药业有限公司提供,分为1g/kg 2g/kg 4g/kg三组每天灌胃一次,连续一周。
尼地平由山东新华制药厂提供,1mg/kg(用土温80数滴研磨蒸馏水混悬)灌胃一次。
樟柳碱为昆明制药厂生产,用蒸馏水溶解,5mg/kg腹腔注射,学习实验前15分给药。
方法给药第八天进行学习试验,次日进行记忆试验,分别记示录潜伏期和错误次数作为评价学习记忆功能的指标,进行统计学处理。
结果1.跳台实验
*P<0.05与对照组比较 **P<0.01与对照组比较以上实验结果可见在跳台实验中健神益智片1g/kg 2g/kg组记忆成绩潜伏期和错误次数与对照组比较均有明显改善,最适剂量为1-2g/kg。
2.水迷宫学习实验动物昆明种小鼠18-22克,随机分为五组每组15只药物健神益智片分1,2,4g/kg三组及对照,脑复康0.5mg/kg,每天灌胃一次方法装置包括水迷宫及自动记录仪两部分,迷宫线路终点没有梯子供动物爬出水面,水温控制在25℃左右。实验分阶段进行第一阶段,用一挡板在A处(第一转弯处)挡死,使动物在开始训练,此阶段约需训练2次,待对照组动物有80%以上通过后即转入第二阶段,训练加长路程,从B(第二转弯处)开始,此阶段也需训练2次,对照组动物可有80%以上达到终点。
给药第八天进行水迷宫学习实验,于每天学习前继续给药。第一次训练前需将小鼠放在梯子附近使其自行爬上三次,以后每次训练前,均将小鼠放在梯子附近使其自行爬上一次。每只小鼠每天训练一次,每次时间限定在3min,记小鼠到达终点的时间及进入盲端的次数(即错误数)。
健神益智片对水迷宫学习的影响
*P<0.05 **P<0.05与对照组相比水迷宫学习实验中1g/kg组可随训练次数的增加,在第2-4天明显减少水迷宫学习所需时间;2g/kg 4g/kg组训练初期能明显提高学习成绩。
健神益智片对小鼠自主活动的影响动物昆明种小鼠18-22克,购自中国医学科学院动物中心药物由广东省南海市罗村镇华卫药业有限公司提供剂量4g/kg将药物浓度用水配成200mg/ml,口服按0.2ml/10g体重2g/kg用4g/kg浓度的药液稀一倍1g/kg用2g/kg浓度的药液稀一倍仪器XZ-4型小鼠自主活动计数器,中国医学科学院药物研究所制方法将动物平均分为四组每组12只,各组分灌胃(每批各2只)对照灌同容量的水,1小时后四组并行测定自主活动,每洞2只,记录10分钟动物活动挡光次数,并统计处理。
结果
健神益智片镇痛作用观察动物、药物及剂量同自主活动实验仪器TF-光热测痛仪中国医学科学院药物研究所制方法动物灌胃1小时后,用TF-光热测痛仪测定动物耐痛效果,记录小鼠甩尾潜伏时间,进行统计学处理。
结果
通过以上两种实验说明健神益智片对中枢神经无兴奋或抑制作用,亦无镇痛作用,在跳台试验中,由于药物对中枢的抑制或提高痛,可影响实验结果,出现假阳性,现结果可排除两方面的非特异性干扰。
实验例6健神益智片对骨髓细胞及蛋白质代谢的影响生命在其个体发育、生长乃至衰老过程中都与DNA复制的质与量的改变有关,在衰老过程中不但有DNA复制的错误,而且还有速度的快慢变化。抗衰老药物应能使DNA复制得到调节,使DNA复制的速率得以改善。
本实验选骨髓细胞为靶细胞(1)(2),因为骨髓细胞是DNA复制最活跃的细胞之一,对药物的反应较为敏感,我们采且放射性前体掺入法可直接反映出骨髓内DNA、RNA与蛋白质的更新率。本文观查不同状态的实验动物,即在正常动物及用60Co照射后,骨髓细胞受抑制状态下的动物中药物的调节作用。
材料与方法动物用昆明种小鼠观察健神益智片对正常小鼠骨髓细胞的核酸和蛋白质的影响。雌雄各半,体重在25-30g随机分组。60Co照射模型用ICR纯系小鼠,雌雄各半,体重为22-25g,按体重配对分组。60Co照射小鼠,照射剂量为450拉德。分为阳性对照(维参锌2g/kg及4g/kg);治疗组健神益智片1g/kg及(低)2g/kg(高)给药途径及疗程灌胃15天后进行实验。
3H标记物;1、3H-TdR掺入DNA,放射强度23Ci/mM由北京原子能所提供。84年3月标记;2、23Ci/mMUR掺入RNA,放射强度23Ci/mM由北京原子能所提供。84年3月标记;3、3H-亮氨酸掺入蛋白质。放射强度25.33Ci/mM由北京原子能所提供。84年3月标记实验方法小鼠拉颈处死后,立即在无菌条件下取双股骨髓,用Eagle氏液冲洗骨髓腔后再过4号针头以除去较大的血凝块之后配成X×107/ml的细胞液浓度,备用。每个给药组分别做DNA、RNA和蛋白掺入,分别取0.8mlEagle培养液,加入0.1ml骨髓细胞和0.1ml标记物,培养液总体积为1ml混匀后置37℃温箱中培育4小时后置49型玻璃纤维滤膜上抽滤,经2.5ml生理盐水,5%三氯醋酸及无水乙醇抽洗膜片后,置70℃干燥1小时,置闪烁瓶内,加入二甲苯闪烁液(PPO 25g,POPOP 0.5g,二甲苯1000ml)5ml,经暗适应后测定cpm值,之后计算X×106细胞液中的微克分子浓度。
表I健神益智片对正常小鼠骨髓细胞核酸及蛋白质代谢的影响
ΔP<0.05 ΔΔP<0.01表II60Co照射(450拉德)后健神智片对小鼠骨髓细胞核酸及蛋白质代谢的影响
ΔP<0.05 ΔΔP<0.01测定核酸与蛋白质代谢的方法很多,但放射性同位素前体掺入法是近年来发展较快的一门技术。采且骨髓胞为靶细胞应用放射性同位素掺入的方法也很多。例如体内给药,体外掺入法;体内给药,体内掺入法等等。本文采用体内给药,体外同位素掺入的方法。这种方法可以药物在体内的综合作用下,观察各种抗衰老药物对骨髓细胞的影响,又能在体外控制同位素的用量。操作简便,可以不经提取直接测定,这也可以避免由于标记物在体内的吸收不均匀和代谢的个体差异。通过不同状态的动物对不同抗衰老药物的研究,证明了本实验方法的可靠性和特异性。尤其可以看到动物在病理状态下,如用放射菌素D或60Co照射后抗衰老药的调节作用。同时我们也看到健神益智片在60Co照射后骨髓细胞受到一致的情况下呈现出对骨髓细胞DNA、RNA和蛋白质合成的促进作用。
实验例7健神益智片对老龄DBA/2小鼠脑细胞膜神经生长因子受体(R-NGF)的影响脑细胞的生存及维持正常机能,与神经生长因子(NGF)的正常作用密切相关(1),首先要有足够的NGF以旁分泌的形式作用于脑细胞;其次是神经细胞膜中的NGF受体的功能及数目要正常。已知在脑衰老或神经细胞退化性痴呆状态,脑细胞NGF受体可有变化。本项研究试图观察在整体给药(健神益智片)的情况下,对脑细胞膜NGF受体的影响,以探讨健神益智片益智作用的机理。
材料与方法材料1.1动物,DBA/2小鼠,18月龄,40只,体重X±SD=30.08±3g。
1.2低温超速度离心机,日立。SGR20BB,55P-72。
1.3紫外分光光度计,岛津UV-26501.4γ-计数器、瑞典、LKB、1275MINI-GAMMA。
1.5恒温冷室。
1.6 49型玻璃纤维泸膜,上海红光造纸厂。
1.7 Eppdooff试管1.8125I-NGF,中国原子能总公司北方同位素公司标记,放射强度为75ci/mM。
1.9 NGF,由中国康复中心基础研究所提取,纯度为电泳纯。附合sigma标准。
1.10 folin酚试剂1.12标准牛血清白蛋白(BSA)1.13手术器械2.1给药及膜蛋白制备将DBA/2小鼠随机分为4组I对照组;I健神益智片2g/kg;III健神益智片4g/kg;IV人参茎叶皂甙100mg/kg。以蒸馏水配成混悬液,每天一次连续灌胃15天(对照组灌蒸馏水)。处死小鼠,取全脑立即放入液氮中保存。在4℃冷室内操作。实验时取液氮冰冻之鼠脑加10倍体积的PBS缓冲液匀浆,1000×g离心率两次(各10`),弃沉渣;再以7700×g离心一次,10`,弃沉渣;上清以100000×g离心一次,60`,弃上清。将沉淀颗粒悬浮在适量PBS缓冲液中,分装小管,-80℃冰箱贮存,取少量,以Lowry氏法测定蛋白含量。
3、受体结合试验125I-NGF共取10个点自0.010nM~1.20nM,非标记NGF用1000倍竞争,小鼠脑细胞膜蛋白每管加入量为2mg,总反应体积为200μl,每管体积以PBG-BSA补齐。在4℃冷室内操作,加样完毕摇匀,置37℃水浴30`后立即入冰水中止反应,经49型玻璃纤维滤膜收集细胞膜,以6ml PBG液冲洗三次,将膜片置γ-定标仪计数,在抽滤前测定125I-NGF总计数(F值)。每组均为复管。测定后取均值,按下列公式转换为f=Pmol/mg膜蛋白。
=12.2×106×61.5%×75×2]]>=4.883×10-9nM/mg]]>η=γ计数器效率=61.5%以上f×实测cpm值即为每管受体结合蛋白。
结果各组总结合有饱和现象,用Scalchard作图曲线分析,显示脑细胞膜NGF受体具有双受体特征,即低容量高亲和力受体和高容低亲和力受体,各组规律相同。健神益智片及人参皂甙对两型受体均有提高其特异性受体结合率(SD/F)之作用,健神益智片并呈现量效关系(2g组提高率为12.84倍和11.33倍,4g组为17.22和21.53);同时可以降低KD值,即提高亲和常数Ka。(表1)以上结果表明,健神益智片可以提高老年DBA/2小鼠脑细胞膜R-NGF与NGF的结合率和亲和力,这一现象有助于NGF的生理作用,也提示健神益智片可以在受体水平调节细胞代谢,以达到其促智防痴呆作用。
表1健神益智片对老龄DBA/2小鼠脑细胞膜浆蛋白中NGF受体的影响
I低容量高亲和力受体;II高容量低亲和力受体( )给药组SD/F与正常对照组之比值实验例8健神益智片对小鼠脑缺血性记忆障碍的影响临床观察发现,健神益智片具有补益气血,增髓添精,活血通滞,健脑益智功效。临床用于中老年记忆及智能减退,老年性痴呆有较好疗效。对脑缺血,脑血栓及脑梗塞患者的记忆力减退和智力下降亦有一定疗效。为给本品的临床应用进一步提供实验依据,本研究采用小鼠脑血管性学习记忆障碍模型观察了健神益智片对小鼠脑缺血性记忆障碍的影响。
1.实验材料1.1实验动物昆明种健康雄性小鼠,体重22-28g,由大连医科大学实验动物中心提供。
1.2药品健神益智片(批号961101)由咸阳步长药业有限公司提供。
人参;皂甙 由大连医药科学研究所秦丽雅博士惠赠。
1.3仪器小鼠被动回避反应箱跳台为13×13×17cm3装置,箱内底板设有可通交流电(36V)的铜栅,其内一角放置一直径为4cm高4.5cm的本质圆台,为小鼠逃避电击的安全区。
JJC-2型 生理实验多用仪上海国泰电讯器材厂出品MF-47 电流表 杭洲解放仪表电机厂出品BLBA W 921-4030 计时器(日本产)MT-28 电子体温计(日本产)2.实验方法2.1实验动物分组昆明种雄性小鼠随机分为五组伪手术组n=10缺血模型组 n=12人参皂甙组 n=12(60mg/kg,ig)健神益智1组 n=12(1g/kg,ig)健神益智2组 n=11(3g/kg,ig)2.2脑缺血再灌注模型制备小鼠称重,戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg,i.P.)。仰位固定,颈部正中剪开皮肤,分离两侧颈总动脉,游离迷走神经。以无损伤微型动脉夹夹闭双侧颈总动脉20min,然后放开动脉夹,再灌注20min,再次夹闭20min后解除阻断。第一次夹闭颈总动脉时,于距尾尖1cm处剪断尾尖放血0.3ml。在整个缺血过程中以电子体温计监测体温,小鼠体温需在36℃以上为合格模型。缝合皮肤,精心饲养,术中注意无菌操作,伪手术组不阻断颈总动脉,不放血,其它操作同它组。
2.3跳台实验小鼠术前4d及术后6d给药组分别给予相应药物。伪手术组及缺血模型组给予等容量生理盐水(0.1ml/10g体重)。术后6d小鼠自由活动均恢复常态进行跳台试验。先将小鼠置于箱内,自由活动2min以熟习环境,然后通电(36v),小鼠受电击后即可跳上平台回避。记录5min内跳下台的次数(错误次数)及在台下受电击的时间总和,以上述指标作为训练成绩。24h后重复试验,以其错误次数和受电击时间总和作为记忆试验成绩。
2.4数据处理实验数据通过计算机POMS-04软件处理,数据X±SE表示,各组与缺血模型组比较进行t检验。
3.实验结果结果表明缺血模型组电击时间和较伪手术组明显增加(P<0.01),其错误次数也明显多于伪手术组(p<0.01),表明小鼠因脑缺血造成记忆障碍模型可靠。人参皂甙组电击时间总和与缺血对照组有明显差异(p<0.05),错误次数则无明显差异。健神益智片小剂量组电击时间总和明显小于缺血组(P<0.05),提示有增强记忆作用。本品大剂量可使电击时间总和远小于缺血组(P<0.01),错误次数也明显减少(P<0.01),结果提示,健神益智片对缺血性记忆障碍有一定的改善作用。结果见附表。
附表健神益智片对小鼠脑缺血性记忆障碍的影响(X±SE)观察指标 训练成绩组别 电击时间总和(sec)错误次数伪手术组(n=10)7.90±0.83** 1.90±0.23*缺血模型组(n=12) 27.49±4.55 2.66±0.18人参皂甙组(n=12) 15.55±2.64* 2.33±0.18Δ健神1组(n=12) 19.66±3.35Δ2.16±0.20Δ健神2组(n=11) 24.09±3.52Δ2.45±0.24Δ与缺血对照组比较ΔP>0.05 *P<0.05 **P<0.01
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1片剂红参100g 冻干鲜鹿茸50g人参(茎叶)皂甙25g何首乌250g黄精250g 丹参250g山楂250g 大黄(酒制)25g制备方法1.取红参,鹿茸,大黄,分别粉碎,过100目,备用。
2.取人参茎叶皂甙粉,按其含量折合到处方量,备用。
3.取何首乌、山楂、黄精、丹参切片混合煎煮2次。第一次加水6倍量,煎煮2小时;第二次加水4倍量煎煮2小时,合并两次煎液滤过,在60℃温度下浓缩至相对密度为1.30-1.31的浸膏,与1,2之粉剂混合、干燥、粉碎、过筛。以75%乙醇制粒。于70-80℃温度下干燥。按0.5%比例加入硬脂酸镁,混匀,压片,包糖衣即得健神益智片1000片。
4.方中各药材,除人参茎叶皂甙为辽宁省地方标准外,均为药典品。
4.1红参规格40支,人参皂甙含量>5%,TLC点完整。
4.2鹿茸三叉梅花鹿茸,采用药典陈氏法鉴别。按霍玉书专利方法(中国专利申请号93121547;公开号1104095)进行冷冻干燥后,控温研磨成为100目以上的细粉入药。
4.3其他药材应按药典标准进行鉴定,合格者方可入药。
功能与主治补益气血,增髓添精,活血通滞,健脑益智,用于智能减退及老年期痴呆。
实施例2胶囊剂红参80g 冻干鲜鹿茸40g人参(茎叶)皂甙20g何首乌180g黄精150g 丹参150g山楂150g 大黄(酒制)18g制备方法a.取红参,鹿茸,大黄,分别粉碎,过100目,备用。
b.取人参茎叶皂甙粉,按其含量折合到处方量,备用。
c.取何首乌、山楂、黄精、丹参切片混合煎煮2次。第一次加水6倍量,煎煮2小时;第二次加水4倍量煎煮2小时,合并两次煎液滤过,在60℃温度下浓缩至相对密度为1.30-1.31的浸膏,与a,b步骤之粉剂混合、干燥、粉碎、过筛。以75%乙醇制粒。于70-80℃温度下干燥。经常规制得胶囊剂1000粒。功能与主治补益气血,增髓添精,活血通滞,健脑益智,用于智能减退及老年期痴呆。
实施例3颗粒剂红参150g 冻干鲜鹿茸70g人参(茎叶)皂甙35g何首乌350g黄精400g 丹参350g山楂400g 大黄(酒制)35g制备方法a.取红参,鹿茸,大黄,分别粉碎,过100目,备用。
b.取人参茎叶皂甙粉,按其含量折合到处方量,备用。
c.取何首乌、山楂、黄精、丹参切片混合煎煮2次。第一次加水6倍量,煎煮2小时;第二次加水4倍量煎煮2小时,合并两次煎液滤过,在60℃温度下浓缩至相对密度为1.30-1.31的浸膏,与a,b步骤之粉剂混合、干燥、粉碎、过筛。以75%乙醇制粒。于70-80℃温度下干燥。经常规制得颗粒剂。功能与主治补益气血,增髓添精,活血通滞,健脑益智,用于智能减退及老年期痴呆。
权利要求
1.一种治疗治疗智能减退、痴呆的中药组合物,其特征在于该中药组合物主要是由下述原料药制成的红 参50-200重量份 鹿 茸30-80重量份人参皂甙15-50重量份何首乌150-400重量份 黄 精100-400重量份 丹 参100-400重量份山 楂100-400重量份 大 黄10-50重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物主要是由下述原料药制成的红 参100重量份 鹿 茸50重量份人参皂甙25重量份何首乌250重量份 黄 精250重量份 丹 参250重量份山 楂250重量份 大 黄25重量份。
3.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物主要是由下述原料药制成的红 参80重量份 鹿 茸40重量份 人参皂甙20重量份何首乌180重量份 黄 精150重量份 丹 参150重量份山 楂150重量份 大 黄18重量份。
4.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物主要是由下述原料药制成的红 参150重量份 鹿 茸70重量份人参皂甙35重量份何首乌350重量份 黄 精400重量份 丹 参350重量份山 楂400重量份 大 黄35重量份。
5.如权利要求1-4所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物原料药中所述大黄优选酒制大黄;人参皂甙优选人参茎叶皂甙;鹿茸优选冻干鲜鹿茸。
6.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤a.取红参,鹿茸,大黄,分别粉碎,过80-130目,备用;b.取人参茎叶皂甙粉,备用;c.取何首乌、山楂、黄精、丹参切片混合煎煮1-3次;每次加水4-8倍量,煎煮1-3小时;合并煎液滤过,在60℃温度下浓缩至相对密度为1.20-1.35的浸膏,与a,b之粉剂混合、干燥、粉碎、过筛;以70-80%乙醇制粒;于60-90℃温度下干燥;经过常规工序直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸中的任一种。
7.如权利要求6所述的中药组合物的制备方法,其特征在于片剂方法包括以下步骤a.取红参,鹿茸,大黄,分别粉碎,过100目,备用;b.取人参茎叶皂甙粉,按其含量折合到处方量,备用;c.取何首乌、山楂、黄精、丹参切片混合煎煮2次;第一次加水6倍量,煎煮2小时;第二次加水4倍量煎煮2小时,合并两次煎液滤过,在60℃温度下浓缩至相对密度为1.30-1.31的浸膏,与a,b步骤之粉剂混合、干燥、粉碎、过筛;以75%乙醇制粒;于70-80℃温度下干燥;按0.5%比例加入硬脂酸镁,混匀,压片,包糖衣即得。
全文摘要
本发明公开了一种治疗智能减退、痴呆的中药组合物及其制备方法。该组合物主要由红参、冻干鲜鹿茸、人参皂甙、何首乌、黄精、丹参、山楂、大黄组成。该中药组合物制备中,对不同原料药分别采用制粉、煎煮方法,使得有效成分的充分溶出,并避免贵重药材浪费;最后并经过科学的工序直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型,包括片剂胶囊、滴丸、颗粒剂;本发明组合物对治疗智能减退、痴呆病有很好的效果,且无毒副作用。
文档编号A61K9/48GK1621078SQ20031011379
公开日2005年6月1日 申请日期2003年11月25日 优先权日2003年11月25日
发明者霍玉书 申请人:霍玉书