专利名称：一种制备注射用参芪扶正冻干粉针剂的方法
技术领域：
本发明属中药制药领域，更具体是涉及一种制备注射用参芪扶正冻干粉针制剂的方法。
背景技术：
参芪扶正注射液是目前临床上应用较多的一种中药注射剂，它由党参和黄芪二味中药等量组方而成，临床上对气虚型的晚期肿瘤患者有良好的疗效，具有益肺健脾、补气养血的扶正作用，能明显改善病、患者的临床症状，提高生存质量。与化疗药物配合应用，具有增效减毒，提高自身免疫力的作用。现有的参芪扶正注射液采用水提醇沉法制备(中成药部颁标准WS-459(Z-065)和WS-387(Z-50)-99)，用水加热提取后醇沉，该工艺采用醇沉法除杂纯化，纯化效果不是十分理想，其有效成分的含量不高，并且在醇沉除杂的同时，党参和黄芪中的多糖被醇沉除掉，而党参多糖和黄芪多糖具有较好的提高免疫力的作用(张晓君，胡黎，赖小平等。党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响[J]。中药新药与临床药理2003，14〔3)174-176；刘星谐，王美英，吴厚生等。黄芪多糖的分离及其免疫活性的研究[J]。天然产物研究与开发，1994，16〔1)23；单俊杰，王顺春，刘涤等。黄芪多糖的化学和药理研究进展[J]。上海中医药大学学报2000，14〔3)61-65)；注射液存在运输不便，质量稳定性差等问题，需要对其进行改进。为进一步提高疗效，为临床提供更好的药品，拟采用水提法，配合有机溶剂萃取，提取、纯化党参和黄芪中的有效组分。
中药水提液中含有黄酮、苷类、皂苷等有效成分，同时也含有淀粉、多糖、蛋白质、粘液质、鞣质、色素、树脂、果胶等杂质，使得固体制剂服用量大，液体制剂(如口服液、注射剂)的澄明度不好。为克服这一缺点，提取时常采用纯化方法除杂。根据中药皂苷类成分在有机溶剂，特别是在正丁醇和异戊醇中有较大溶解度的特点，所以采用溶剂萃取法提取、纯化皂苷类成分，有机溶剂萃取后，利用碱水液洗涤有机溶液，可除去部分酸性杂质，达到分离纯化的目的。本发明采用水提法提取出党参和黄芪中的有效组分，先用醇沉法沉淀出党参和黄芪多糖；取沉淀多糖后的溶液，回收乙醇至无味，加适量蒸馏水使沉淀溶解，再用有机溶剂进行萃取，将皂苷类成分同溶液中水溶性较大的杂质分离，从而达到分离纯化的目的。本发明的制备工艺，在纯化除杂的同时，又保留了党参和黄芪中具有免疫增强作用的多糖类组分。因此，采用本发明制备的冻干粉针剂，具有有效组分含量高，制剂稳定性好的特点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备工艺合理、稳定性好、有效成分含量高的注射用参芪扶正冻干粉针制剂。其特征在于采用水提法提取党参和黄芪中的有效组分，水提液用70％-80％的乙醇沉淀，滤过，得沉淀和上清液；取沉淀用适量蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，滤过，沉淀加蒸馏水溶解制成1％的溶液，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位；水提液醇沉淀后的上清液，回收乙醇至无醇味，加适量蒸馏水，使沉淀溶解，过滤，用有机溶剂萃取三次，有机溶剂萃取液合并，用1％的氢氧化钠溶液水洗涤二次，弃去碱水液，有机溶剂萃取液减压回收溶剂，干燥，得到党参和黄芪总皂苷类有效部位。取党参和黄芪皂苷类有效部位2-10份，多糖类有效部位1-8份，加适量蒸馏水溶解，加冻干赋形剂5-50份、等渗调节剂6-60份，用注射用水配成溶液600-1400份，用0.1％的活性碳脱色，滤过，调节pH值至7-7.5，滤过，分装，灭菌，低温冷冻干燥，即得。采用本发明的制备工艺，党参和黄芪中的有效成分得到很好的纯化，其皂苷类有效部位中总皂苷的含量可达30-60％，具有活性成分含量高，制备快的优点。
本发明内容通过以下技术方案实现一、药材前处理将药材党参、黄芪分别拣选、洗净、烘干、粉碎成颗粒。
二、提取工艺取等量的党参、黄芪药材颗粒，用6-15倍量的去离子水提取(提取可以采用煎煮法、渗漉法和浸渍法)3次，提取液合并，滤过，滤液浓缩成每1ml相当于1.5g生药的药液，60％-80％醇沉，静置，滤过，得沉淀和滤过液；沉淀用适量蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，滤过，沉淀加蒸馏水溶解成1％的溶液，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，超滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位。水提液醇沉淀后的上清液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水使沉淀溶解，滤过，用有机溶剂萃取三次(有机溶剂可以是天然产物化学中用于提取皂苷类成分的任何有机溶剂，包括正丁醇和异戊醇)，萃取液合并，用1％的氢氧化钠水溶液洗涤二次，弃去碱水液，减压回收有机溶剂萃取液并浓缩至干，得党参和黄芪总皂苷类有效部位。
三、一种注射用参芪扶正冻干粉针剂的制备工艺1、一种注射用参芪扶正冻干粉针剂的配方按重量比组成为党参和黄芪皂苷类有效部位1-10份党参和黄芪多糖类有效部位1-8份冻干赋形剂5-60份等渗调节剂4-70份注射用水600-1400份2、一种注射用参芪扶正冻干粉针剂的优选配方按重量比组成为党参和黄芪皂苷类有效部位2-5份党参和黄芪多糖类有效部位2-5份冻干赋形剂20-40份等渗调节剂6-60份注射用水800-1200份取党参和黄芪皂苷类有效部位1-10份，多糖类有效部位1-8份，加适量注射用水溶解，加冻干用赋形剂5-60份，等渗调节剂4-70份，用注射用水配成600-1400份，加入0.1％的活性碳，煮沸15分钟，滤过，调节pH值至7-7.5，滤过，分装，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
党参和黄芪总皂苷类有效部位中总皂苷的含量测定采用香草醛比色法测定党参和黄芪皂苷类有效部位中总皂苷的含量。
1、对照品的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。
2、标准曲线的制备分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.4mg/ml)0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50ml于具塞试管中，水浴挥去甲醇，精密加入5％的香草醛冰醋酸0.2ml，再精密加入高氯酸0.8ml，密塞，于70℃水浴中恒温加热20分钟，取出，冷却，精密加冰醋酸5.00ml，摇匀，于560nm处分别测定吸收度，得回收方程C＝1.54+283.20A，结果表明，黄芪甲苷对照品在40-200μ份/ml范围内呈良好线性关系。R＝0.9988。
3、样品测定 取党参和黄芪总皂苷类有效部位0.10g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇微热使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取0.20ml，挥干溶剂，照标准曲线项下自加5％的香草醛冰醋酸0.2ml操作，以相应溶剂为空白，测定吸收值，据回归方程计算出总皂苷的含量，测得总皂苷的含量为52％。
二、下面通过本发明的一种参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液对小鼠腹腔巨噬细胞功能的比较，对本发明作进一步说明。
1、实验材料与仪器昆明种雄性小鼠50只，由第一军医大学实验动物中心提供，体重20～25g；参芪扶正冻干粉针，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供；参芪扶正注射液，丽珠集团利民制药厂生产。
2、实验方法与结果小鼠36只随机分为3组生理盐水对照组、参芪扶正冻干粉针剂组、参芪扶正注射液组。每日1次，0.2ml/次(参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液两药注射时所含生药量相当)，连续ip给药7d，末次给药1d后，小鼠腹腔注射5％鸡红细胞1ml，50分钟后处死小鼠，取腹腔液抹片，瑞氏染色，镜检计数100个阳性吞噬细胞，计算吞噬指数。眼球采血，制备血涂片，自然干燥，按常规方法进行α-醋酸萘酚酯酶染色(ANAE)，镜检计数200个淋巴细胞，计算ANAE+T淋巴细胞百分率。实验结果见表1。
表1 参芪扶正对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的影响(x±s，n＝12)剂量组别吞噬指数 吞噬百分率(％)(mg/kg)对照组 - 1.80±0.1540.10±5.11参芪扶正冻干粉针 100 3.06±0.34** 88.36±5.08**参芪扶正注射液 100 2.42±0.52* 60.10±4.60**
与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01本发明的一种参芪扶正冻干粉针剂在组方上与参芪扶正注射液相同，但在制备工艺上进行了改进，使参芪扶正冻干粉针剂在提取成分中加入了能增强人体免疫的多糖成份，而且对党参和黄芪中的皂苷类成分进行了提取，从而在药效学方面也表现出了更好的效果。
具体实施例实施例11、处方党参40g黄芪40g2、工艺取处方量党参、黄芪药材颗粒，加10倍量水煎煮提取3次，滤过，滤液浓缩成每1ml相当于1.5g生药的药液，加入乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，得沉淀和上清液；沉淀用适量蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，滤过，沉淀加蒸馏水溶解制成1％的溶液，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，超滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位；水提液醇沉后的上清液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水适量使沉淀溶解，过滤，用正丁醇萃取三次，正丁醇萃取液合并，用1％的氢氧化钠水溶液洗涤二次，弃去碱水液，减压回收正丁醇并浓缩至干，得党参和黄芪总皂苷类有效部位。取党参和黄芪总苷类有效部位1g，多糖类有效部位1g，加适量注射用水使溶解，加注射用甘露醇25g，乳糖10g，注射用氯化钠8g，加注射用水配成1000ml的溶液，加入0.1％的活性碳，煮沸15分钟，滤过，调节pH值至7-7.5，滤过，分装，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
实施例22、处方党参40g 黄芪40g2、工艺取处方量党参、黄芪药材颗粒，加10倍量水煎煮提取3次，滤过，滤液浓缩成每1ml相当于1.5g生药的药液，加入乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，得沉淀和上清液；沉淀用适量蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，滤过，沉淀加蒸馏水溶解制成1％的溶液，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，超滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位；水提液醇沉后的上清液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水适量使沉淀溶解，过滤，用正丁醇萃取三次，正丁醇萃取液合并，用1％的氢氧化钠水溶液洗涤二次，弃去碱水液，减压回收正丁醇并浓缩至干，得党参和黄芪总皂苷类有效部位。取党参和黄芪总苷类有效部位10g，多糖类有效部位8g，加适量注射用水使溶解，加注射用甘露醇25g，乳糖10g，注射用氯化钠8g，加注射用水配成1000ml的溶液，加入0.1％的活性碳，煮沸15分钟，滤过，调节pH值至7-7.5，滤过，分装，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
实施例31、方党参40g黄芪40g2、工艺取处方量党参、黄芪药材，粉碎成粗粉，加少量水湿润，装入渗漉筒，加5倍量水浸泡过夜，以50倍量水渗漉，收集渗漉液，浓缩成每1ml相当于1.5g生药的药液，加入乙醇使含醇量达到70％，静置，滤过，得沉淀和上清液。沉淀用适量蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，滤过，沉淀加蒸馏水溶解制成1％的溶液，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，超滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位；水提液醇沉后的上清液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水适量使沉淀溶解，过滤，用正丁醇萃取三次，正丁醇萃取液合并，用1％的氢氧化钠水溶液洗涤二次，弃去碱水液，减压回收正丁醇并浓缩至干，得党参和黄芪皂苷类有效部位。取党参和黄芪总苷类有效部位3g，多糖类有效部位3g，加适量注射用水使溶解，加注射用甘露醇25g，乳糖10g，注射用葡萄糖50g，用注射用水配成1000ml的溶液，加入0.1％的活性碳，煮沸15分钟，滤过，调节pH值至7-7.5，过滤，分装，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
实施例41、处方党参40g黄芪40g2、工艺取处方量党参、黄芪药材，粉碎成细粉，加15倍量水浸渍提取3次，滤过，滤液浓缩至每1ml相当于1.5g生药的药液，加入乙醇使含醇量达到70％，静置，滤过，得沉淀和上清液。沉淀用适量蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，滤过，沉淀加蒸馏水溶解制成1％的溶液，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，超滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位；取水提液醇沉后的上清液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水适量使沉淀溶解，过滤，用异戊醇萃取三次，异戊醇萃取液合并，用1％的氢氧化钠水溶液洗涤二次，弃去碱水液，减压回收异戊醇并浓缩至干，得党参和黄芪皂苷类有效部位。取党参和黄芪总苷类有效部位4g，多糖类有效部位4g，加适量注射用水使溶解，加注射用甘露醇25g，乳糖10g，注射用氯化钠8g，用注射用水配成1000ml的溶液，加入0.1％的活性碳，煮沸15分钟，滤过，调节pH值至7-7.5，滤过，分装，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
权利要求
1.一种制备注射用参芪扶正冻干粉针剂的方法，其特征在于通过水煎煮或渗漉法或浸渍法提取、有机溶剂萃取纯化党参和黄芪中的有效组分，并加适量赋形剂经冷冻干燥制成冻干粉针剂，其特征在于(1)水提取后含有效组分的药液用70％-80％乙醇沉淀，滤过，得多糖沉淀有效部位和上清液；上清液回收乙醇，用有机溶剂萃取皂苷类成分，减压浓缩后得党参和黄芪总皂苷类有效部位。(2)一种注射用参芪扶正冻干粉针剂的配方按重量比组成为党参和黄芪总皂苷类有效部位1-10份党参和黄芪多糖类部位1-8份冻干赋形剂5-50份等渗调节剂4-70份注射用水600-1400份
2.权利要求1所述的一种制备注射用参芪扶正冻干粉针剂的方法，优选配方按重量比组成为党参和黄芪总皂苷类有效部位3-6份党参和黄芪多糖类有效部位2-4份冻干赋形剂20-40份等渗调节剂6-55份注射用水800-1200份
3.权利要求1所述用有机溶剂萃取皂苷，其特征在于有机溶剂为正丁醇或异戊醇。
4.根据权利要求1中所述参芪扶正注射用冻干粉针剂，其特征在于其冻干赋形剂是选自甘露醇和乳糖中的一种或二种的混合物。
5.权利要求1所述的等渗调节剂，其特征在于它可以是注射用氯化钠或者葡萄糖。
全文摘要
一种制备注射用参芪扶正冻干粉针剂的方法，其特征在于采用水提法提取党参和黄芪的有效组分，采用醇沉得多糖有效部位；有机溶剂萃取得总皂苷类有效部位。取多糖有效部位和总皂苷类有效部位，配成溶液，加适量赋形剂，滤过，分装，灭菌，低温冷冻干燥得注射用参芪扶正冻干粉针剂。本发明的参芪扶正冻干粉针剂有效成含量高，稳定性好，疗效显著。
文档编号A61P35/00GK1546151SQ200310120040
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月2日 优先权日2003年12月2日
发明者张正生 申请人:张正生