抗癌或抗病毒组合物的制作方法

专利名称：抗癌或抗病毒组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗癌或抗病毒组合物，尤其是一种包括治疗有效量的柠檬酸和/或锌和L-精氨酸以及药学可接受载体的抗癌或抗病毒组合物。
背景技术：
随着化疗的发展，癌症患者的存活和康复率的改善。然而，抗癌制剂存在毒性大并危害正常细胞的弊端。
为克服上述副作用，最近开展了很多研究以开发可替代性抗癌物质并选择性地抑制肿瘤细胞的增生，因此得到很多具有抗癌活性的候选药物。这些抗癌化合物包括公开在国际专利申请WO 96/40142，WO 97/13771和WO 95/23141中的物质。然而，新的开发出来的能够特异性抑制肿瘤细胞增生的抗癌化合物是通过化学合成手段得到，因此在体内可能具有严重的副作用。
传统抗癌制剂的弊端促使很多研究人员致力于开发副作用小、同时具有良好抗癌活性的抗癌物质，一些研究者已经找到具有抗癌活性的天然物质。本发明是基于这样的事实，即人类精液具有抑制卵巢上皮癌的抗癌作用。
卵巢上皮癌是卵巢癌中最常见的一种恶性肿瘤，是妇产科医学肿瘤学中的主要死亡因素。卵巢上皮癌的高死亡率是由于卵巢上皮癌的恶化隐蔽，导致大多数患者在发展到严重阶段时才表现出明显症状(Ozols，R.F.Semin.Oncol.，1995，Vol.22，p61.)。即使通过手术切除肿瘤或采用积极的化疗手段，由于药物耐受性很快出现，因此也只有20-30％的患者能够存活。
直到现在，导致卵巢上皮癌的原因和危险因素还没有被普遍认知。大量的研究表明，排卵频率和卵巢上皮癌的发展相关，这种关系表现在卵巢上皮癌多发生在年轻妇女和老年妇女(早初潮和晚绝经)、未婚妇女和先前未受孕妇女中这一事实(Franceshi et al.Int.J.Cancer，1991，Vol.49，p57；Taylor et al.Cancer，1959，Vol.12，pl207；Fraumeni et al.J.Natl.CancerInst.，1969，Vol.42，p455；Weiss et al.J.Natl.Cancer Inst.，1977，Vol.58，p913；Nergri et al.Int.J.Cancer，1991，Vol.49，p50；Stanford，J.L. Contraception 43，1991，p543；以及Franceshi etal.Iht.J.Cancer，1991，Vol.49，p61.)。普遍认为，口服避孕药对卵巢上皮癌的发展具有保护作用。
根据普遍的理论，卵巢上皮癌由于在排卵期间卵巢表皮的重复性破裂和修复而导致(Fathalla，M.F.Lancet.，1971，Vol.2，p163.)。在卵巢上皮面的修复过程中，转变了的上皮细胞发生自然变异，肿瘤抑制基因钝化，而肿瘤基因很易被致癌物质活化。
据报道，人类精液具有以下生理功能和抗癌作用。性交后，精浆对细胞毒性的淋巴细胞所引起的对精子的免疫性损害进行修复(Stities et al.Nature，1975，Vol.253，p727；James et al.Immunol.，1985，Vol.6，p61.)，人类精液抑制体液免疫的发展以及肿瘤在体内的生长(Anderson et al.Immunol.，1985，Vol.128，p535；and Michaelis et al.Anticancer Drugs，2000，Vol.11，p369.)。此外，人类精液对于宫颈上皮癌细胞中的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9 mRNA的生成也有一定作用，因此，据信其通过性行为对宫颈癌的进展有一定影响。(Jeremias etal.Am.J.Obstet.Gynecol.，1999，Vol.181，p591.)。根据最近的报道，牛精核糖核酸酶(BS-RNase)以时间和剂量依赖方式导致人类淋巴细胞和人类肿瘤细胞的凋亡。BS-RNase对那些耐受化疗药物的成神经细胞瘤(NB)细胞表现出选择性的细胞毒性(Cinatl et al.Anticancer Res.，2000，Vol.20，p853；Cinatl et al.Int.J.Oncol.，1999，Vol 15，plu01.)。
此外，Gjorgov对精液的抗癌作用进行了生态学研究，比较了各种病例，其中还进行了接触与人类精液减少和乳腺癌发生率的关系的研究。在该研究中，对屏障避孕方法(使用安全套)与使用避孕品(避孕药、子宫内装置(IUD)、安全期避孕法或输卵管接扎)的女性的乳腺癌发病率进行比较，结果是采用屏障避孕方法(使用安全套)的女性的乳腺癌发病率高出5.2倍(Gjorgov et al.Folia Med.，1998，Vol.40，p17.)。
精液中具有抗癌活性的主要成分包括白蛋白、乳铁传递蛋白、铁传递蛋白、免疫球蛋白、酸性磷酸酯酶、L-肉碱、L-精氨酸、L-组氨酸、柠檬酸、果糖、镁、锌、前列腺素和甘油磷酸胆碱(glycero phosphocholine)。
基于人类精液组分具有抗癌活性的事实，本发明人致力于开发一种抗癌制剂，该制剂具有优良的抗癌作用，且副作用低。
本发明人还注意到乳突淋瘤病毒引起宫颈癌的现象。
乳突淋瘤病毒是已知的可作用于动物体内多种组织的上皮细胞的病毒，并且诱导肿瘤，即通常所说的“疣”，其生长在手、足、皮肤和喉部等。至今，已经鉴定出100多种人类乳突淋瘤病毒(HPV)基因型，其中，有几种基因型被报道对感染部位具有特异性，并引起多种疾病(Broker et al.，Cold Spring HarborLaboratory，1989，p17.)。尽管大多数HPV感染不能被有效治疗，导致患者严重疼痛，但这些感染由于没有发展成致命疾病而没有得到重视。最近，几种HPV，尤其是HPV 16和18型被报道与生殖器官、口腔、皮肤等部位的恶性肿瘤的发病相关，其是宫颈癌中超过90％的子宫癌的主要致病因素，HPV 6b和11型也被披露可引起生殖器官的肿瘤″尖锐湿疣(或生殖器疣)″。此外，大量的表皮学研究的证据表明子宫癌是乳突淋瘤病毒感染导致，这些证据包括发现了子宫癌主要由性接触传播因素而发展致病的(Durst et al.，Natl.Acad.Sci.，1983，Vol.80，p3812.)；85-100％的恶性病变，如宫颈内皮癌(CIN)是由乳突淋瘤病毒引起的(Hansen，H.，Science，1991，Vol.254，pli73.)。
子宫癌患者体内存在HPV 16和18型的分别占50-70％和15-25％，超过25％的感染有HPV-16的癌症患者和超过50％的感染有HPV-18的癌症患者发展成转移性肿瘤(Lorincz et al.，Obstetrics and Gynecology，1992，Vol.79，p328.)。
因此，基于子宫癌是乳突淋瘤病毒引起的事实，本发明意欲利用具有抗癌作用的人类精液中的抗病毒物质预防并治疗各种病毒感染而致的疾病，这些物质包括柠檬酸、锌和L-精氨酸。

发明内容
基于排卵期中减少与人精液的接触是引起卵巢上皮癌发病的病理风险因素的事实，本发明人认为人类精液能够有效去除恶性转化的上皮细胞。本发明人还发现了一种组合物，其含有具有抗癌作用的人类精液，该组合物能够抑制由乳突淋瘤病毒感染导致的宫颈癌细胞中病毒蛋白的生成。
因此，本发明提供了如下的抗癌或抗病毒组合物。
本发明一方面提供了一种抗癌组合物，其包括治疗有效量的柠檬酸和/或锌和L-精氨酸以及药学可接受载体。
本发明另一方面提供了一种抗病毒组合物，其包括治疗有效量的柠檬酸和/或锌和L-精氨酸以及药学可接受载体。
附图简要说明通过以下详细描述并结合附图的说明，能够更清楚地理解本发明的上述和其它目的、特征以及优点。


图1显示了本发明的包括柠檬酸和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类卵巢腺癌细胞系SKOV-3(来自于恶性瘤者腹水)(▲)和人类神经胶母细胞瘤细胞系U87(◆)的生存能力的作用，其中细胞的生存能力通过MTT检测进行分析；图2显示了本发明的包括锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类卵巢腺癌细胞系SKOV-3(▲)和人类神经胶母细胞瘤细胞系U87(◆)的生存能力的作用，其中细胞的生存能力通过MTT检测进行分析；图3显示了本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类卵巢腺癌细胞系SKOV-3(▲)、人类卵巢腺癌细胞系NIHOVCAR-3(◆)和人类卵巢表皮正常上皮细胞系NOSE(■)的生存能力的作用，其中细胞的生存能力通过MTT检测进行分析；图4显示了本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类宫颈癌细胞系Ca Ski(▲)、HeLa(◆)和C-33 A(■)的生存能力的作用，其中细胞的生存能力通过MTT检测进行分析；图5是流式分析的结果，其显示了本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类宫颈癌细胞系Ca Ski的细胞周期的影响；图6是流式分析的结果，其显示了本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类宫颈癌细胞系HeLa的细胞周期的影响；图7是流式分析的结果，其显示了本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物对人类宫颈癌细胞系C-33 A的细胞周期的影响；图8是显示从人类宫颈癌细胞系Ca Ski、HeLa和C-33 A中提取的DNA的琼脂糖凝胶电泳结果的照片，上述细胞已经过本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物的处理；图9是显示采用免疫印记法对人类宫颈癌细胞系Ca Ski、HeLa和C-33 A中的P53蛋白表达进行分析的照片，上述细胞已经过本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物的处理；图10是显示采用免疫印记法对人类宫颈癌细胞系Ca Ski、HeLa和C-33 A中的P21蛋白表达进行分析的照片，上述细胞已经过本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物的处理；图11是显示采用免疫印记法人类宫颈癌细胞系Ca Ski、HeLa和C-33 A中的C-Myc蛋白表达进行分析的照片，上述细胞已经过本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物的处理；图12显示了人类宫颈癌细胞系Ca Ski、HeLa和C-33 A中用DAPI染色的细胞核，上述细胞已经过本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗癌组合物的处理；图13显示了人类宫颈癌细胞系Ca Ski和HeLa中人类乳突淋瘤病毒(HPV)16或18型的E6和E7蛋白的表达水平，上述细胞已经过本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗病毒组合物的处理；图14显示了将本发明的包括柠檬酸、锌和L-精氨酸为活性组分的抗病毒组合物施用至尖锐湿疣女性患者的阴户对尖锐湿疣进行治疗的效果；图15显示了将本发明的包括柠檬酸和/或锌和L-精氨酸为活性组分的抗病毒组合物用于感染肠道病毒的细胞时对细胞病变的抑制效应的结果；图16显示了将本发明的包括柠檬酸和/或锌和L-精氨酸为活性组分的抗病毒组合物用于感染脊髓灰质炎病毒的细胞对细胞病变的抑制效应的结果。
具体实施例方式
本发明的一个方案在于提供一种包括柠檬酸和L-精氨酸作为活性组分的抗癌组合物。
上述抗癌组合物的特征在于其包括的活性组分柠檬酸的重量含量为0.01-20％，优选为0.5-5％，L-精氨酸的重量含量为0.01-20％，优选为0.5-10％，所述重量比基于组合物的总重量，还包含药学可接受载体。抗癌组合物中的载体包括制药领域常用的载体、辅料和溶媒。
本发明的另一个方案在于提供一种包括锌和L-精氨酸作为活性组分的抗癌组合物。
上述抗癌组合物的特征在于其包括的活性组分锌的重量含量为0.001-5％优选为0.01-1％，L-精氨酸的重量含量为0.01-20％，优选为0.5-10％，所述重量比基于组合物的总重量，还包含药学可接受载体。抗癌组合物中的载体包括制药领域常用的载体、辅料和溶媒。
本发明的进一步方案在于提供了一种包括柠檬酸、锌和L-精氨酸作为活性组分的抗癌组合物。
上述抗癌组合物的特征在于其包括的活性组分柠檬酸的重量含量为0.01-20％，优选为0.5-5％，锌的重量含量为0.001-5％，优选为0.01-1％，L-精氨酸的重量含量为0.01-20％，优选为0.5-10％，所述重量比基于组合物的总重量，还包含药学可接受载体。抗癌组合物中的载体包括制药领域常用的载体、辅料和溶媒。
各方案中选择使用柠檬酸、锌和L-精氨酸，可以以下列形式的本发明的抗癌组合物使用，但并不限于这些形式。
本发明的柠檬酸的形式可以是从各种植物的种子或果实汁中提取得到的，其中柠檬酸的存在形式是游离型。柠檬酸还可以利用黑曲霉菌(Aspergillusniger)通过表面发酵方法或深层发酵方法进行制备，这样的柠檬酸也可用于本发明的抗癌组合物中。在制备柠檬酸过程中，利用糖蜜作为能源进行发酵，还需使用各种离心分离器，包括带有自动清洗碗的离心器，带有喷嘴碗和螺旋玻璃水瓶的离心器。
本发明所使用的锌的形式可以是从牡蛎、甲壳类、鱼类、动物产品，如瘦肉以及各种蔬菜产品，包括谷类、豆类、坚果类以及种子中提取得到的任何形式，这些物质中锌的含量丰富。本发明的抗癌组合物中的锌可以是多种形式。硫酸锌最广泛用于临床试验中，但其它形式的锌离子也易于吸收而被人体利用。锌的可使用形式的实例还包括与吡啶羧酸盐、乙酸盐、柠檬酸钠、甘油酸盐和单甲硫氨酸进行鳌合的锌离子。
本发明使用的L-精氨酸可以是通过发酵制备或从蛋白中提取得到的任何形式，优选为发酵制备得到的形式。发酵制备L-精氨酸可包括利用抗精氨酸类似物的微生物发酵(Agricultural Biological Chemistry，1972，Vol.36，p1675；Journal of General Applied Microbiology，1973，Vol.19，p339；Japanese Pat.Publication No.3391-1973 and U.S.Pat.No.3723249)，L-精氨酸可直接从碳源和氮源中得到，如利用制备谷氨酸的微生物，其属于短杆菌属(Brevibacterium)或棒状杆菌(Corynebacterium)(Japanese Pat.Laid-open Publication Nos.Sho57-163487，Sho60-83593 and Sho62-265988)，利用制备氨基酸的微生物并具有改进了的生长特性通过细胞融合进行制备(Japanese Pat.Laid-open Publication No.Sho58-158185)，或利用转染了载有编码参与L-精氨酸生物合成的酶的基因的重组表达载体的微生物进行合成(Japanese Pat.Laid-open Publication No.Sho63-79597，Japanese Pat.Publication No.66989/1985 and U.S.Pat.No.4,775,623)。
抗癌组合物通过诱导肿瘤细胞凋亡而具有刺激肿瘤细胞的细胞死亡或抑制肿瘤细胞增殖的活性。与坏死不同，坏死意味着病理性细胞死亡，凋亡是内在基因控制下的程序性细胞死亡，其是通过由特定的外在或内在因素活化的与凋亡相关的基因的编码程序所诱导。凋亡诱导基因的活化导致程序性细胞死亡基因的翻译产物的生物合成或降解，最终导致细胞死亡。研究DNA分裂时，通常采用生化方法观察DNA片段化情况来评价细胞的凋亡，或采用分子生物学方法检测与凋亡相关的蛋白质。最近有大量报道阐述诱导肿瘤细胞凋亡的物质控制着肿瘤细胞的死亡，并有效抑制癌症的增殖。
本发明利用了前述方法以确定了由本发明的抗癌组合物是通过凋亡机理来特异性诱导细胞死亡的。也就是说，在本发明的抗癌组合物处理后的肿瘤细胞中提取得到的DNA样品中发现有DNA片段化(图8)。且，在本发明的抗癌组合物处理后的肿瘤细胞中还检测到与凋亡相关的蛋白质(图9，10和11)。本发明的抗癌组合物所识别的与凋亡相关的蛋白质是P21、P53和C-Myc蛋白。本领域共知，P53蛋白的表达导致了P21蛋白的合成从而抑制刺激细胞进行分化的因子的活性。因此，P53和P21蛋白通过抑制细胞分化而阻止癌症的发展。C-Myc是一种致癌蛋白，其刺激肿瘤细胞中的DNA复制，从而激活肿瘤细胞的细胞分化。
由于本发明的抗癌组合物具有诱导肿瘤细胞凋亡的抗癌作用，因此，将本发明中被用于治疗卵巢上皮癌这个示例性癌症的该组合物用于治疗其他类型的癌症，对于本领域技术人员而言是显而易见的。
因此，本发明的抗癌组合物可被用于治疗下列各种癌症，但并不限于这些种类膀胱癌、乳腺癌、肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、脑瘤、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状上皮细胞癌)；淋巴系统性造血性肿瘤，包括白血病、急性淋巴白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、多毛状细胞淋巴瘤和勃克氏淋巴瘤；骨髓中造血性肿瘤和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞白血病；中枢和外周神经系统中的肿瘤，包括星细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、色素性干皮症、角化棘皮瘤、滤泡性甲状腺癌和卡波济氏肉瘤。
本发明的抗癌组合物优选用于抑制或治疗肺癌、脑瘤、乳腺癌、大肠癌、妊娠绒毛膜癌(gestational choriocarcinoma)、子宫癌和卵巢癌，尤其优选的是卵巢上皮癌。
本发明的进一步方案在于提供一种包括柠檬酸和L-精氨酸作为活性组分的抗病毒组合物。
上述抗病毒组合物的特征在于其包括的活性组分柠檬酸的重量含量为0.001-20％，优选为0.01-5％，L-精氨酸的重量含量为0.001-20％，优选为0.01-10％，所述重量比基于组合物的总重量，还包含药学可接受载体。抗病毒组合物中的载体包括制药领域常用的载体、辅料和溶媒。
本发明的另一个方案在于提供一种包括锌和L-精氨酸作为活性组分的抗病毒组合物。
上述抗病毒组合物的特征在于其包括的活性组分锌的重量含量为0.0001-5％，优选为0.001-1％，L-精氨酸的重量含量为0.001-20％，优选为0.01-10％，所述重量比基于组合物的总重量，还包含药学可接受载体。抗病毒组合物中的载体包括制药领域常用的载体、辅料和溶媒。
本发明的进一步方案在于提供了一种包括柠檬酸、锌和L-精氨酸作为活性组分的抗癌组合物。
上述抗癌组合物的特征在于其包括的活性组分柠檬酸的重量含量为0.001-20％，优选为0.01-5％，锌的重量含量为0.0001-5％，优选为0.001-1％，L-精氨酸的重量含量为0.001-20％，优选为0.01-10％，所述重量比基于组合物的总重量，还包含药学可接受载体。抗病毒组合物中的载体包括制药领域常用的载体、辅料和溶媒。
本发明的抗病毒组合物的活性可以通过对癌细胞系中的病毒蛋白的表达进行分析而确定。也就是，用本发明的抗病毒组合物对癌细胞系进行处理后，分离出细胞系中的蛋白，然后采用本领域熟知的分子生物学技术对病毒蛋白进行分析。还可以通过将组合物直接用于病毒感染部位以评价对病毒感染的抑制或治疗效果以验证本发明的抗病毒组合物的活性。
本发明的实施方案中，对HPV 16或18型中的乳突淋瘤病毒蛋白E6和E7进行了分析，这些蛋白是熟知的子宫癌的致病性蛋白。在该实施例中，本发明的抗病毒组合物表现出减少宫颈癌细胞系中的E6和E7蛋白表达(图13)。当将本发明的抗病毒组合物用于患有HPV感染所致生殖器疣的女性患者的阴户时，该组合物表现出对生殖器疣的治疗作用(图14)。而且，当用本发明的抗病毒组合物处理感染有肠病毒或脊髓灰质炎病毒的细胞时，由于对病毒的抑制作用，因而没有出现细胞病变效果(CPE)(图15和16)。
本发明的抗病毒组合物还可用于预防或治疗由病毒感染引起的多种疾病。因此，可被本发明的抗病毒组合物预防或治疗的由病毒感染引起的非限定性疾病实例包括，由乳突淋瘤病毒感染导致的皮肤上生长的疣，这样的疣刺激细胞在皮肤表皮上进行局部繁殖，从而使角蛋白层增大；在生殖器周围或肛门附近感染乳突淋瘤病毒而引起的尖锐湿疣。本发明的抗病毒组合物还具有抑制病毒繁殖的作用，因此抑制导致艾滋病(获得性免疫缺陷综合征)的AIDS病毒、流感病毒、引起脑膜炎的肠道病毒、引起小儿麻痹的脊髓灰质炎病毒。
在一个优选方案中，本发明的抗病毒组合物可以预防或治疗由乳突淋瘤病毒、AIDS病毒、肠道病毒或脊髓灰质炎病毒引起的疾病。
本发明的抗癌或抗病毒组合物(以下称作本组合物)的载体包括制药领域常用载体、辅料和溶媒，在此通称为药学可接受载体。本发明的抗癌组合物中使用的药学可接受载体非限定性地包括离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白、缓冲剂(如，磷酸钠、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸钾、植物饱和脂肪酸的部分甘油酯混合物)、水、盐或电解质(如，硫酸精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠和锌盐)、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、含纤维素物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠，多芳基化物、蜡、聚乙烯—聚氧丙烯—嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。
本发明组合物的给药途径可以是任何一种常规途径，只要组合物能够到达所治疗的组织。因此，本组合物可以通过以下方式给药局部、口服、胃肠外、眼内、皮下、直肠内和腔内(intraluminally)，并可制成以下剂型液体、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、持续释放制剂、膏、霜等。本发明的“胃肠外给药”包括皮下、鼻内、静脉内、腹腔内、肌内、关节内、滑液内、胸内、心脏内、鞘内、病损内以及颅内注射或输注技术。
在一个实施方案中，当制成固体制剂用于口服时，本组合物可包括，除活性成分外，稀释剂(如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉或马铃薯淀粉)、润滑剂(如硅土、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或钙、和/或聚乙二醇)、粘结剂(如淀粉、阿拉伯胶、凝胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮)、分解剂(如淀粉、海藻酸、藻酸盐或羧甲淀粉钠)、成形混合剂(formalmixtures)、染料、甜味剂、湿润剂(如卵磷脂、聚山梨醇酯、月桂基硫酸盐)以及常用的制药用惰性物质。口服固体剂型可以通过本领域已知方法，如包括混合、制粒、压片和包糖衣或包膜的步骤进行制备。
当本组合物被制成液体口服剂型如溶液、乳剂、悬浮液、糖浆或酏剂时，本组合物可包括常用惰性稀释剂(如纯化的水、乙醇)。如果需要，液体组合物可进一步包括赋形剂，如湿润剂和乳化剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂。
本组合物还可制成水溶液进行胃肠外给药。优选使用的是适宜的缓冲溶液，如Hank′s液、林格液或生理缓冲盐。水性注射悬浮液中可以添加能增加悬浮液黏度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇和右旋糖苷。此外，活性组分的悬浮液，如油性注射悬浮液，包括亲脂性溶剂或载体，如诸如芝麻油的含脂肪的油、如油酸乙脂、甘油三酸酯或脂质体的合成性脂肪酸酯。聚阳离子型非脂溶性氨基聚合物也可被用作溶媒。任选地，悬浮液可包括适宜的稳定剂或能增加组分的稳定性的药物从而获得高浓度的组分。
在另一个实施方案中，本组合物优选的形式是灭菌注射剂，如灭菌注射用水性或油性悬浮液。这些悬浮液可利用适宜的分散剂或潮湿剂(如吐温80)和悬浮剂，根据本领域已知的方法进行制备。灭菌注射剂还可以是非毒性胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌注射溶液或悬浮液，如1，3-丁二醇中的溶液。可接受溶媒和溶剂包括甘露醇、水、林格液、等渗氯化钠溶液。此外，灭菌的难挥发油可常规性地被用作溶剂或悬浮基质。基于该目的，任何新型的难挥发油都可被利用，其包括合成的单或二甘油酯。还有，脂肪酸，如油酸和其甘油酯衍生物，也可用于制备注射型制剂中，同样是制药可接受天然油(如，橄榄油或蓖麻油)，尤其是其聚氧乙酸盐衍生物。
前述水性组合物的灭菌主要通过过滤器过滤除去细菌，与消毒剂混合或辐射灭菌。灭菌后的组合物可通过如冷冻干燥进行硬化而得到硬化产品。使用时，将硬化组合物溶于无菌水中或灭菌的稀释液中。
本发明的另一个实施方案中，抗病毒组合物优选的形式是皮下给药剂型，其包括治疗有效量的活性组分以及药学可接受载体。术语“皮下给药”是指将药物组合物局部用于皮肤时，药物组合物中的治疗有效量的活性组分被输送至皮肤内。
本发明的皮下给药剂型包括霜、膏、洗剂、凝胶剂、外用液、贴剂、擦剂、外用粉剂、气雾剂、皮下吸收剂。这些剂型在药物化学领域的指南性书籍中有描述(Remington′s Pharmaceutical Science，15tel′Editions，1975，Mack PublishingCompany，Easton，Pennsylvania，18042，Chapter 87Blaug，Seymour)。
代表性地，本发明的霜剂包括冷霜、润肤剂、剃须膏、抛光霜和手霜。优选为抛光霜，该霜剂是水包油型(o/w)，通常含有硬脂酸和水。当抛光霜用于皮肤上时，水被蒸发掉，留下的是薄的硬脂酸层。冷霜是半固体白色的油包水型(w/o)，其由鲸蜡醇、蜂蜡、白蜡、硼酸纳和蒸馏水组成。本发明的膏剂通常分为烃基质、吸收基质、可除水基质和水溶性基质，以及制药领域熟知的所有膏剂型。本发明的膏剂通常分为悬浮液和乳液，通常通过乳化剂或其他适宜的稳定剂制备得到。制药领域的技术人员所熟知的所有膏剂型也包括在本发明中。
参考上面描述，作为本发明的示例性皮下给药制剂的霜、膏、凝胶剂和贴剂将在下面进行描述。
作为皮下给药制剂的代表性实例的霜剂的制备如下所述。将油相和水相分别加热至65-75℃，所述的油相由醇、蜂蜡、山梨醇单油酸酯等组成，水相由山梨醇溶液、聚山梨醇酯、对羟基苯甲酸甲酯(methylparabene)、对羟基苯甲酸丙酯、甘油、氢氧化钾、蒸馏水等组成。在搅拌中将油相缓慢加到水相中，得到粗乳液。该乳液被冷却到不发生挥发和降解的温度下进行匀化，以指定的速度搅拌直至凝结。
膏剂可以大规模生产，也可以小规模制备。当采用特定的制剂方法制备膏剂时，主要依赖于膏中成分的理化性质决定制备方法。当小规模制各膏剂时，各组分可以采用几种方法进行混合。当大规模生产时，可采用熔化方法，将膏中所有或部分组分熔化，然后在指定速度下搅拌冷却直至凝结。未熔组分在冷却时通常需要混合步骤。通常，膏剂是在低温下制备的，以使对热不稳定的物质或易挥发物质不发生降解或挥发。
凝胶剂的制备如下所述。将羟丙甲纤维素(Metocel)分散在预热到80-90℃的蒸馏水中。温化12小时后，将凝胶剂组合物分散到蒸馏水中得到分散溶液。然后，将氢氧化钠溶液加到分散溶液中，调节溶液的PH值至中性。然后将所得溶液与对羟基苯甲酸甲酯、羟丙甲纤维素(metocel)、聚羰乙烯、丙二醇等混合，从而得到凝胶剂。
贴剂可通过将贴剂组合物在适宜容器如研钵中研磨成粉，然后与凡士林等均匀混合而制备。
本发明的皮下给药制剂可通过已知的物理和化学方法促进活性组分柠檬酸、锌和L-精氨酸的经皮下吸收。适宜的物理方法主要包括加热、通电和超声，优选的方法是化学方法。本发明的化学方法中可采用的皮下吸收促进剂列于下表1中。
表1代表性皮下吸收促进剂及其类型

本发明中的“治疗有效量”是指本组合物在治疗某种癌症时，活性组分呈现出改善或治疗作用的量。本组合物的治疗有效量根据患者的年龄和性别、治疗部位、给药频率、给药时间、剂型和辅料类型的不同而不同。通常，对于注射剂，本组合物的给药量为50-5000mg，优选为100-4000mg，最优选为250-3000mg，每天给药超过1-5次。对于口服给药制剂，本组合物通常的给药量为1-2,000mg，优选为250-1,000mg，最优选为300-500mg，每天给药1-5次。对于皮下给药制剂，为获得预防或治疗效果，本组合物通常的给药量为500-2000mg，每天给药一次或两次，给药2-3周。
本发明参照下列实施例，同时结合附图进行详细说明。以下实施例只是用于举例说明而并非用于限定本发明。
实施例1注射剂的制备本发明的组合物包括各种活性组分的多种组合，其制备如下。根据下述表2的混合比例选择性地混合柠檬酸(Sigma，美国)、锌(Sigma，美国)、和L-精氨酸(Sigma，美国)，再将每种混合物溶于无菌水中。将混合物灌注到小药瓶中(100mg)。
表2本发明组合物的活性成分含量(wt％)

实施例2片剂的制备根据表2的混合比例选择性地混合柠檬酸(Sigma，美国)、锌(Sigma，美国)、和L-精氨酸(Sigma，美国)，将每种混合物与30wt％的乳糖、5wt％的硬脂酸镁、10wt％的羟乙酸淀粉钠、以及无菌水相混合。所得混合物在搅拌中，于30-60℃下，温育1小时，然后冷却至室温。利用常规方法将混合物压片，得到的片剂每片含有350mg的粉末混合物。
实施例3透皮给药制剂的制备本发明的抗病毒组合物被制成透皮给药剂型。将2wt％柠檬酸、0.1wt％锌、5wt％L-精氨酸溶于烧杯中的1L乙醇中，-20℃下放置24小时。然后，收集得到的凝结物，将其用作皮下给药制剂的活性成分。凝结物约为10倍浓缩。
(1)霜的制备油相硬脂酸 13wt％硬脂醇 1wt％乙醇 1wt％制备的凝结物 5wt％水相甘油 10wt％对羟基苯甲酸甲酯 0.1wt％对羟基苯甲酸丙酯 0.05wt％氢氧化钾 0.9wt％纯化水 加至100wt％油相和水相都根据上述组成进行制备，分别加热至65℃。然后，将油相缓慢加到水相中，同时搅拌，得到粗乳液。搅拌中冷却该乳液，直至凝结，得到霜剂。
(2)膏的制备凡士林 80wt％硬脂醇 3wt％白蜡 9wt％胆固醇 3wt％制备的凝结物 5wt％将硬脂醇、白蜡、胆固醇和制备的凝结物在蒸汽浴中融化。将凡士林加到混合物中，加热所得混合物直至液化。然后，冷却所得溶液，同时搅拌，直至凝结，得到膏剂。
(3)凝胶剂的制备羟丙甲纤维素(Metoce190 H.C.4000) 0.8wt％聚羰乙烯(Carbopo1934) 0.24wt％丙二醇 16.7wt％对羟基苯甲酸甲酯 0.015wt％制备的凝结物 5wt％氢氧化钠 加至pH＝7.0纯化水 加至100wt％将羟丙甲纤维素分散到热水(80-90℃)中，在冰箱中冷却过夜，得到液态溶液。另外，将羟丙甲纤维素和凝结物分散到水中，用氢氧化钠溶液调节pH7.0，然后加水至最终体积为40ml。同样，单独将对羟基苯甲酸甲酯溶于丙二醇中。将上述三种溶液混合得到凝胶剂。
(4)贴剂的制备氧化铁 25wt％淀粉 25wt％Kelamin 5wt％制备的凝胶 5wt％凡士林 加至100wt％用氧化铁滴定Kelamin，将凝结物和淀粉在研钵中研成粉末，与凡士林均匀混合，得到贴剂。
实施例4包括活性组分柠檬酸和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞存活的影响评价对包括活性组分柠檬酸和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞的生长和存活的影响进行评价。制备多种组合物，其中柠檬酸的浓度列于下表3，用这些组合物处理肿瘤细胞以观察细胞存活情况。试验采用了SKOV-3细胞(人卵巢腺瘤细胞系(来自恶性瘤患者的腹水)，ATCC No.HTB-77)和U87(人神经胶母细胞瘤细胞系，ATCC No.HTB-14)。
将SKOV-3和U-87细胞置于96-孔板中，细胞密度为3×103个细胞，在加有10％(v/v)FBS(胎牛血清)，100μg/ml链霉素、100U/ml青霉素和100μg/ml的L-精氨酸的DMEM(Dulbecco′s modified Eagle′s medium，Life Technology，Inc.，U.S.A.)中培养12个小时。
用含有各种浓度的柠檬酸和L-精氨酸的各组合物处理培养的细胞，并在37℃，5％CO2下培养24小时，各组合物的制备方法同实施例1。然后评价细胞的存活情况。
表3组合物中柠檬酸和L-精氨酸的含量(wt％)

通过已知的MTT(3-(4，5二甲基噻唑-2-基)-2，5-2H-四唑溴化物)检测分析细胞的存活力(Hansen，M.B.et al.，J.Immunol.Methods，172，203-210(1989))。将20μl的MTT溶液(溶于PBS(磷酸盐缓冲液)中的10mg/ml MTT)加到各孔中，将培养板在37℃下培养4小时。将培养基去除后，向每孔中加入200μl的DMSO(二甲基亚砜)以融解甲臢(formazan)晶体，随后在室温下振摇10分钟。用Bio-Rad型3550分析仪(Richmond，CA.)测量540nm的吸收度。将没有经过包含柠檬酸的组合物处理后的细胞作为对照。结果见图1。
如图1所示，当用含有柠檬酸和L-精氨酸的组合物处理肿瘤细胞系SKOV-3(▲)和U-87(◆)时，发现细胞存活力与活性成分柠檬酸和L-精氨酸的浓度成反比。尤其是，用组合物5进行处理的肿瘤细胞存活率下降至60％以下，而用组合物7处理的细胞存活率下降至20％以下。
实施例5包括活性组分锌和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞存活的影响评价对包括活性组分锌和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞的生长和存活的影响进行评价。制备多种组合物，其中锌和L-精氨酸的浓度列于下表4，用这些组合物处理肿瘤细胞以观察细胞存活情况。试验采用了SKOV-3和U87细胞。细胞培养、用组合物处理肿瘤细胞及分析细胞存活率的方法同实施例4，结果见图2。
表4组合物中锌和L-精氨酸的含量(wt％)

如图2所示，当用含有锌和L-精氨酸的组合物处理肿瘤细胞系SKOV-3(▲)和U-87(◆)时，发现细胞存活率与活性成分锌和L-精氨酸的浓度成反比。特别是，用组合物5进行处理的肿瘤细胞存活率下降至50％以下，而用组合物7处理的细胞存活率下降至20％以下。
实施例6包括活性组分柠檬酸、锌和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞存活的影响评价对包括活性组分柠檬酸、锌和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞的生长和存活的影响进行评价。制备多种组合物，其中柠檬酸、锌和L-精氨酸的浓度列于下表5，用这些组合物处理肿瘤细胞以观察细胞存活情况。试验采用了SKOV-3，NIH:OVCAR-3(人卵巢腺瘤细胞系，ATCC No.HTB-161)和NOSE(人卵巢表皮正常上皮细胞系)。细胞培养、用组合物处理肿瘤细胞及分析细胞存活率的方法同实施例4，结果见图3。
表5组合物中柠檬酸、锌和L-精氨酸的含量(wt％)

如图3所示，当用含有柠檬酸、锌和L-精氨酸的组合物处理肿瘤细胞系SKOV-3(▲)、NIH:OVCAR-3(◆)和NOSE(■)时，发现细胞存活率随活性成分柠檬酸、锌和L-精氨酸的浓度成反比。特别是，用组合物6处理时，SKOV-3和NIH:OVCAR-3的存活率下降至20％以下，而用组合物6和7处理的NOSE细胞，其存活率仍保持50％以上。该结果表明抗癌组合物对肿瘤细胞的作用具有特异性，从而最终导致肿瘤细胞死亡。
实施例7包括活性组分柠檬酸、锌和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞存活的影响评价对包括活性组分柠檬酸、锌和L-精氨酸的抗癌组合物对肿瘤细胞的生长和存活的影响进行评价。采用的组合物为实施例5制备的几种组合物，其中柠檬酸、锌和L-精氨酸的浓度列于表5，用这些组合物处理肿瘤细胞以观察细胞存活情况。试验采用了Ca Ski(ATCC No.CRL-1550)、HeLa(ATCC No.CCL-2)和C-33(ATCC No.HTB-31)。细胞培养、用组合物处理肿瘤细胞及分析细胞存活率的方法同实施例4，结果见图4。
如图4所示，当用含有柠檬酸、锌和L-精氨酸的组合物处理肿瘤细胞系Ca Ski(▲)、HeLa(◆)和C-33A(■)时，发现细胞存活率随活性成分柠檬酸、锌和L-精氨酸的浓度升高而降低。具体而言，用组合物5处理肿瘤细胞，其存活率下降至60％以下，而用组合物7处理的肿瘤细胞，其存活率降至20％以下。
实施例8用本发明的抗癌组合物处理的流式分析通过流式分析评价实施例1制备的本发明的抗癌组合物对DNA分裂的作用。
将WI 38、OVCAR-3和SK-OV-3细胞置于96孔培养板中，细胞密度为2×106个细胞，将100μl实施例1制备的抗癌组合物(表1的组合物3)加入各孔中，如实施例4的方法，将板培养6小时和24小时。对照为未受抗癌组合物处理的细胞。收集细胞，用预冷却的PBS清洗两次。然后用100％乙醇在4℃下固定24小时。将所得细胞悬浮于500μl的PBS中，用20μg/ml的RNase在37℃下处理30分钟，在冰上冷却10分钟。用50μg/μl的PI(碘化丙啶)染色分离出的DNA，用流式细胞分析仪(Becton Dickinson FACS system，美国)分析DNA的分裂情况。用冷却了的15mW氩激光器加强丙啶的荧光，用617长通光滤波器收集发射光。用ModFit软件(ModFit，Verity Software House，Topsham，ME，U.S.A.)确定细胞周期。结果见图5、6和7。
如图5、6和7所示，在抗癌组合物处理后的Ca Ski、HeLa和C-33 A细胞系中，G1期(DNA合成)的细胞百分数减少。G0-G1(亚G1)期的细胞增多，而S期(DNA合成)和G2-M期(有丝分裂)的细胞生成显著减少，表明产生凋亡。
实施例9本发明的抗癌组合物处理细胞的DNA条带(DNA ladder)检测DNA条带检测适用于研究本发明抗癌组合物导致的细胞死亡(实施例8所观察的)的机理。将Ca Ski，HeLa和C-33 A细胞置于96孔培养板中，细胞密度为2×106个细胞，将100μl实施例1制备的抗癌组合物(表1的组合物3)加入各孔中，如实施例4的方法将培养板培养6、12、24和48小时。然后，分别收集细胞，用常规方法分离DNA，如(Leszczynski D.et.al.Photochem.Photobiol.，1996，Vol.64，p936-.)中的方法。将收集的细胞悬浮于由0.5％SDS(十二烷基硫酸钠)、2mM EDTA(四乙酸乙二胺)、100mg/ml的蛋白酶K和50mM Tris-HCl缓冲液(pH8.0)组成的裂解缓冲液中，在55℃培养3小时，然后用等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)进行提取。用0.1体积的乙酸铵和2.5体积的冷却的纯粹的乙醇沉淀DNA，然后在-20℃放置过夜。将DNA沉淀溶于TE缓冲液(1M Tris-HCl缓冲液中含0.5M EDTA，pH8.0)中，然后在37℃，用100mg/ml的RNase A处理1小时。将得到的DNA样品在含有0.5μg/ml的溴化乙啶(EB)的1.5％琼脂糖胶上进行分离，分离电压为60V，分离1个小时，然后置于UV灯下。结果见图8。
如图8所示，在本发明抗癌组合物处理的Ca Ski、HeLa和C-33 A细胞中，处理12小时和24小时后，可观察到约100-bp的DNA条带。通常，细胞凋亡时，核小体在核小体单元之间的连接部分断裂分离，得到约100-bp的DNA条带。这些结果表明本发明的抗癌组合物导致细胞死亡的机理是导致细胞凋亡。
实施例10用本发明的抗癌组合物处理的细胞中的致癌蛋白和与凋亡相关的蛋白的表达分析分析致癌蛋白C-Myc和与凋亡相关的蛋白P53和P21的表达类型以研究抗癌组合物诱导细胞死亡的机理。
Ca Ski、HeLa和C-33 A细胞置于96孔培养板中，细胞密度为2×106个细胞，将100μl实施例1制备的抗癌组合物(表1的组合物3)加入各孔中，如实施例4的方法，将板培养30分钟、6小时、12小时、24小时和48小时。培养后，分别收集细胞，用裂解缓冲液(10mM Tris，1mM EDTA，ImM DTT，1mMPMSF，蛋白酶抑制剂)裂解细胞。将细胞裂解物进行SDS-电泳，将分离出的蛋白质转移到ECL硝化纤维膜(Amersham Life Science，U.K.)上。用封闭液(TBST，含有5％脱脂奶；10mMTris-HCI，pH8.0.150mM NaCl，0.1％吐温20)，在4℃封闭膜过夜。然后，利用免疫印记分析研究与凋亡相关的蛋白。将P21，P53和C-Myc的一级抗体用封闭液稀释至1∶500。封闭后的膜与稀释的一级抗体在4℃下反应过夜，然后在室温下，加入以1∶5000的比例用封闭液稀释的二级抗体(山羊抗兔IgG-HRP；Santa Cruz Biotechnology，USA)，反应1个小时。用一级和二级抗体处理完毕后，清洗各膜3次，每次清洗15分钟，然后置于ECL Hyperfilm(Amersham Life Science，U.K.)上。结果见图9、10和11。
如图9和10所示，抗癌组合物处理后的细胞中，随着时间的延长，P21和P53蛋白抑制细胞分裂的表达逐渐增强。如图11所示，用抗癌组合物处理后的细胞中，C-Myc蛋白激活肿瘤细胞分裂的表达随着时间的延长而逐渐减小。这些结果表明本发明的抗癌组合物抑制肿瘤细胞的增生并最终导致肿瘤细胞的凋亡。
实施例11本发明的抗癌组合物处理后的细胞的核染色为了研究本发明的抗癌组合物诱导细胞死亡(如实施例8所观察到的)的机理，对抗癌组合物处理后的细胞的核进行染色。
将灭菌盖玻片置于60-mm的培养皿中，其中的Ca Ski、HeLa和C-33 A细胞的密度为1×104个细胞，培养过夜。然后，用100μl实施例1制备的抗癌组合物(表1的组合物3)处理细胞。24小时后，用PBS清洗细胞两次，用3.7％的甲醛固定细胞。再用PBS清洗三次，用4μg/ml的DAPI(4’，6’-二乙酰基-2-苯基吲哚)溶液(Sigma，USA)在室温下，染色10分钟。用PBS清洗三次，蒸馏水清洗两次，在荧光显微镜(Olympus Optical Co.，Ltd.，USA)下观察固定在盖玻片上的染色细胞。结果见图12。
如图12所示，在未经抗癌组合物处理的Ca Ski，HeLa and C-33 A细胞中可观察到正常核。但是，经抗癌组合物处理的三种细胞都显示了凋亡引起的核的形态变化，如染色质浓缩，核破裂，核收缩。具体而言，浓缩的染色质边缘不完整，浓缩的染色质无序分散在核四周。这些结果表明，本发明的抗癌组合物以特异性方式诱导肿瘤细胞的凋亡。
实施例12子宫癌细胞中的乳突淋瘤病毒表达的评价为了确定本发明的抗病毒组合物是否减少子宫癌细胞系中的乳突淋瘤病毒蛋白的表达，对HPV 16或18型的E6和E7蛋白的表达进行分析。
将Ca Ski和HeLa细胞置于96孔培养板中，细胞密度为2×106个细胞，将100μl实施例1制备的抗癌组合物(表1的组合物3)加入各孔中，如实施例4的方法，将板培养6小时、12小时、24小时和48小时。培养后，分别收集细胞，用裂解缓冲液(10mM Tris，1mM EDTA，ImM DTT，1mM PMSF，蛋白酶抑制剂)裂解细胞。将细胞裂解物进行SDS-电泳，将分离出的蛋白质转到ECL硝化纤维膜(Amersham Life Science，U.K.)上。用封闭液(TBST，含有5％脱脂奶；10mMTris-HCI，pH8.0.150mM NaCl，0.1％吐温20)在4℃封闭膜过夜。
然后，利用免疫印记分析研究HPV 16或18型的E6和E7蛋白。将HPV16型的E6和HPV 18型的E7的一级抗体(Santa Cruz Biotechnology，USA)以1∶500稀释在封闭液中。封闭后的膜与稀释的一级抗体在4℃下反应过夜，然后在室温下加入以1∶5000的比例稀释在封闭液中的二级抗体(山羊-抗-兔IgG-HRP；Santa Cruz Biotechnology，USA)，反应1个小时。一级和二级抗体处理完毕后，清洗各膜3次，每次清洗15分钟，然后置于ECL Hyperfilm(Amersham Life Science，U.K.)上。结果见图13。
如图13所示，抗病毒组合物处理后的细胞中，随着时间的延长，致癌蛋白HPV 16型的E6的表达逐渐减少。抗病毒组合物处理后的细胞中，随着时间的延长，致癌蛋白HPV 18型的E7的表达逐渐减少。该结果表明本发明的抗病毒组合物对子宫癌细胞中的致癌蛋白HPV 16或18型的E6和E7的表达具有抑制作用。
实施例13本组合物对乳突状瘤病毒导致的尖锐湿疣的治疗效果将1g实施例3制备的膏剂(实施例3的透皮制剂(2))施用至尖锐湿疣女性患者的阴户，每日用药两次。根据生殖器疣的病变大小治疗2-12周。图14显示了其中一名患者给药前后的生殖器疣照片。
实施例14对由肠道病毒和脊髓灰质炎病毒导致的细胞病变效应的分析为了表明本发明的抗病毒组合物能够抑制病毒的增殖，对用抗病毒组合物处理后的感染有肠道病毒或脊髓灰质炎病毒的细胞的病变效应进行测定。
使Vero E6细胞(非洲绿猴肾细胞)在含有10％FBS的MEM培养基中，于37℃在培养箱中进行培养。在实验之前，将细胞置于48孔板中一天，细胞密度为1×105个细胞。在以肠道病毒和脊髓灰质炎病毒对细胞进行感染前用PBS清洗培养的细胞。以菌斑试验测定肠道病毒和脊髓灰质炎病毒，然后在-70℃下储藏，直至使用。将6pfu的肠道病毒和脊髓灰质炎病毒分别在37℃的培养箱中放置1个小时，用PBS清洗，然后置入细胞培养基质中，再培养24个小时。用本发明的抗病毒组合物(表1的组合物)处理感染了病毒的细胞，评价是否抑制了细胞病变效应。将仅用柠檬酸、锌或人精液处理的细胞作为对照。结果见图15和16。
当用本发明的抗病毒组合物处理细胞时，细胞病变效应的抑制率超过60％。而仅用柠檬酸、锌或人精液处理的对照细胞的病变效应的抑制率低于50％。
该结果表明，本发明的抗病毒组合物抑制病毒增殖，最终导致感染病毒的细胞死亡。
权利要求
1.一种抗癌组合物，其包括治疗有效量的柠檬酸和/或锌和L-精氨酸以及药学可接受载体。
2.如权利要求1所述的抗癌组合物，其中，柠檬酸的含量占组合物总重量的0.01-20％，和/或锌占组合物总重量的0.001-5％，和L-精氨酸占组合物总重量的0.01-20％。
3.如权利要求1或2所述的抗癌组合物，其中将所述组合物施用至选自患有肺癌、脑瘤、乳腺癌、大肠癌、妊娠绒毛膜癌、子宫癌和卵巢上皮癌的个体中。
4.如权利要求3所述的抗癌组合物，其中将所述组合物施用至患有子宫癌或卵巢上皮癌的个体中。
5.如权利要求1-4任意一项的抗癌组合物，其中所述组合物为口服或肠胃外给药剂型。
6.一种治疗癌症的方法，其包括将权利要求1-5任意一项的抗癌组合物施用至癌症患者中，以诱导肿瘤细胞的凋亡。
7.一种抗病毒组合物，其包括治疗有效量的柠檬酸和/或锌和L-精氨酸以及药学可接受载体。
8.如权利要求7所述的抗病毒组合物，其中，柠檬酸的含量占组合物总重量的0.001-20％，和/或锌占组合物总重量的0.0001-5％，和L-精氨酸占组合物总重量的0.001-20％。
9.如权利要求7或8所述的抗病毒组合物，其中将所述组合物应用于乳突淋瘤病毒、AIDS病毒、肠道病毒和脊髓灰质炎病毒。
10.如权利要求7-9任意一项的抗病毒组合物，其中，所述组合物为口服抗病毒制剂或肠胃外给药的霜剂、膏剂、凝胶剂或贴剂。
11.一种抗病毒的方法，其包括将权利要求7-10任意一项的抗病毒组合物施用至患有由感染病毒而导致疾病的患者中，以降低病毒蛋白的表达。
全文摘要
本发明公开了一种抗癌或抗病毒组合物，其包括治疗有效量的柠檬酸和/或锌和L－精氨酸以及药学可接受载体。本发明的抗癌组合物具有强抗癌作用，而无副作用。本发明的抗病毒组合物用于治疗由病毒感染导致的疾病。
文档编号A61K33/30GK1708310SQ200380102452
公开日2005年12月14日 申请日期2003年10月31日 优先权日2002年10月31日
发明者朴来玉 申请人:朴来玉