专利名称：通过控制中间代谢物水平调节免疫应答的制作方法
技术领域：
本发明涉及调节和控制哺乳动物受试者免疫应答的方法。更具体而言，本发明涉及通过控制中间代谢物水平进行的免疫应答调节。这些方法可以有效应用于治疗免疫相关或免疫介导的疾病或异常、治疗感染受试者、或治疗癌症。
本申请引用或指出的所有专利、专利申请、专利文献、科学论文等在此全文引入以供参考，以便更全面描述本发明所属领域的现状。
背景技术：
近来确认大量遗传疾病具有涉及代谢途径的缺陷基因产物特征。这些缺陷具有双重影响，既限制了该途径正常终产物的获得，也因降低或取消其进一步加工而积聚中间物。尽管对于表现这种功能丧失或降低的个体通常有害并且往往致命，但是这为阻断该途径所致多重效应开启了理解之窗。其中一种遗传疾病是因分解葡糖脑苷脂能力下降而积聚该产物的高歇病(Gaucher’s Disease)。已经定位了导致该疾病状态不同表达程度的葡糖脑苷脂酶活性缺陷的多个突变位点。目前根据该疾病特定的表达表现型，将高歇病分为I、II或III型。
虽然这是一种涉及中间代谢物积聚的脂质储存或加工疾病，但该疾病的典型表现还是免疫系统缺陷。实际上，较早一篇描述该综合症的文章题为“Gaucher’s Diseaseadisease with chronicstimulation of the immune system“(Schoenfeld等人，1982 ArchPathol Lab Med106；388-391)。研究免疫系统已经发现了与促进或抑制免疫活性紧密相关的大量细胞因子。近来文章表明，高歇病患者的某些细胞因子以及免疫系统其它组分的血清水平变化显著。其中包括IL-1β、IL-1Ra、IL-2R、IL-6、IL-8、IL-10、M-CSF、sCD14、TNF-α、γ球蛋白以及β2微球蛋白(Lichtenstein等人1997 Blood Cells，Molecules and Diseases23；395-401，Barak等人，1997 EurCytokine Network10；205-210，Hollak等人，1997 Blood Cells，Molecules and Diseases23；201-212，Allen等人，1987 Q J Med90；19-25，Deibener等人，1998 Haematologica 199883；479-480)。应当指出，上述研究未证明这些标志反应的一致性，但一直已知高歇病表达的表现型非常多变。
这种对免疫标志的影响与葡糖脑苷脂水平的积聚直接相关。例如，前述某些研究已经包括了在利用糖脑苷酶(alglucerase)治疗患者前后所注意到的影响。这些研究发现，许多异常升高的免疫活化标志在治疗后恢复到更为正常的水平。此外，早期研究直接给培养生长的巨噬细胞应用葡糖脑苷脂，可诱导分泌IL-1。进一步注意到Lachmann等人的文章(剑桥Timothy Cox’s小组)(QJM 2000；93237-244)，其中描述了具有广泛肝纤维化的四名患者，强调肝硬变形成在高歇病患者中较为罕见，通常发生在经历脾切除术的患者中。许多未经治疗的高歇病患者肝肿大，大约20％还升高LFT(特别是肝细胞)，因此似乎某种物质在保护这些患者防止肝硬变发生。
引入α-葡糖脑苷脂也观察到刺激免疫系统(Kawano等人，1997science 278；1626-1629，Burdin et al.，1998 J.Immunol 161；3271-3281)。由于该化合物分离自海绵中，而不是通常在哺乳动物中发现的化合物，因此这显然是抗原诱导的系列事件。
发明概述本发明涉及调节和控制哺乳动物受试者免疫应答的方法。更具体而言，本发明涉及通过控制中间代谢物水平进行的免疫应答调节。这些方法可以有效应用于治疗免疫相关或免疫介导的疾病或异常、治疗感染受试者、或治疗癌症。在优选实施方案中，该哺乳动物受试者是人。
本发明提供治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含给予该受试者有效量的哺乳动物中间代谢物，以提高受试者中该代谢物的细胞内、或细胞外、或血清水平。
本发明进一步提供治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含给予该受试者有效量的可提高受试者中哺乳动物中间代谢物的细胞内、或细胞外、或血清水平的试剂。
本发明还提供治疗哺乳动物受试者疾病的离体(ex vivo)方法。在该方法中，首先从受试者获取细胞。然后利用有效量的哺乳动物中间代谢物处理取出的细胞，以提高该细胞中代谢物的细胞内水平。然后将处理过的细胞转移给受试者。
本发明另一方面涉及治疗哺乳动物受试者疾病的方法。第一步，从受试者获取细胞，然后利用有效量的可提高细胞中哺乳动物中间代谢物细胞内水平的试剂离体处理。然后将处理过的细胞转移给受试者。
本发明另一方面还涉及治疗哺乳动物受试者疾病的方法。此处给予受试者有效量的哺乳动物代谢物，以调节或改变受试者免疫系统中的至少一个组分。
以下进一步详细描述了本发明其它多个方面和实施方案。
附图简述
图1显示高歇病和HCV感染对HCV特异性T细胞增殖分析的影响。
图2显示高歇病和HCV感染对HCV特异性IFNγ ELISPOT分析的影响。
图3显示高歇病和HCV感染对HCV特异性IL-10 ELISPOT分析的影响。
图4显示高歇病和HCV感染对IFNγ血清水平的影响。
图5显示高歇病和HCV感染对IL-4血清水平的影响。
图6显示高歇病和HCV感染对外周NKT淋巴细胞的影响。
发明详述本发明提供了通过改变哺乳动物受试者中间代谢物的细胞内或血清水平从而调节或控制所述受试者免疫系统的方法。该方法可提供所述受试者免疫系统一种或多种组分中的至少一种改变，并且这种改变可以特异性针对特定抗原或一组抗原，或者这可能属于一般性质，或甚而包含这两种影响。可以直接或间接实现这种免疫应答的控制或改变。直接方法可以包括将代谢物引入受试者。间接方法可以包括提高所述代谢物的合成速率，或抑制受试者中所述代谢物的体内降解。可以离体处理免疫细胞并重新引入受试者中，代替这种体内处理。本发明的方法可用于治疗免疫相关或免疫介导的疾病或异常。这些方法还可用于治疗癌症受试者或感染的受试者。参见1997年2月28日提交的美国专利申请08/808,629，还参见1999年7月16日提交的美国专利申请09/356294；以及2000年7月17日提交的欧洲专利申00 114901.2(EP 107 227 A1)。前述公开内容在此引入以供参考，并可进一步与本发明联合使用。
本发明认为代谢物或中间代谢物是哺乳动物系统酶促过程的产物。这种过程包括酶促合成、酶促降解、酶促修饰。这种产物可包括但不限于脂质、糖类、糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素之外的糖蛋白。这种产物可以在哺乳动物系统、非哺乳动物系统中产生、通过重组DNA产生、体外产生、合成制备或其任何组合。另外，通过增强该化合物的合成或抑制其降解，也可以在受试者中间接获得这种水平升高的代谢物。增强方法的例子包括引入前体、负责其合成的酶或这两者。抑制方法的例子包括引入降解酶的抑制剂或反义抑制。本发明可以使用的糖蛋白的例子包括但不限于糖基化的。代谢途径中的其它酶在以高水平存在时可能参与免疫调节。chiotriosidase就是例子，观察到其在高歇病患者中升高(Hollak等人，1994 J.Clin Invest.93；1288-1292)。
本发明另一方面在于，通过此处所述原理和方法、包括离体方法可实现调节免疫系统至少一种组分、或治疗感染或癌症受试者。
激素信号控制代谢和细胞过程的远程调节。先前已经认识到免疫系统的作用主要限于提供对外源因子或外源化合物的保护。这种效应可能伴有偶然与自身的相互作用(例如自身免疫异常)，产生有害影响。除了这种对外源物质的免疫监督之外，免疫系统也可能参与监督代谢过程。就此而言，免疫应答将识别某一或某些类型代谢物的异常水平，在免疫系统和异常水平之间提供反馈过程。因此这些代谢物可能提供信号，起免疫信使的作用。环AMP是一种类似的系统，已知其能够影响大量不同的代谢过程。
能够各自影响免疫系统的两种不同过程的叠加引起异常免疫状态，其出人意料的结果显现出对上述相互作用的支持。一种过程是HCV感染，HCV是一种引起受感染受试者免疫抑制性以及免疫反应性应答的物质(Ferrari C，Urbani S，Penna A，Cavalli A，Valli A，Lamonaca V，Bertoni R，Boni C，Barbieri K，Uggeri J，FiaccadoriF.Immunopathogenesis of hepatitis C virus infection.J Hepatol.1999；31 Suppl 131-8；Cerny A，Chisari FV.Pathogenesis ofchronic hepatitis Cimmunological features of hepatic injuryand viral persistence.Hepatology.1999 Sep；30(3)595-601；以及Rehermann B.Cellular immune response to the hepatitis Cvirus.J Viral.Hepat.1999 Jul；6 Suppl 131-5)。另一过程是前述高歇病，因中间代谢物水平升高而致许多免疫异常。这些出人意料的结果来自于一组分析，其中包括有(n＝5)和没有(n＝17)HCV感染的高歇病患者、慢性HCV的非高歇病患者(n＝15)以及天然的对照(n＝11)。这些患者的结果如图1-6所示。这些分析包括HCV特异性T细胞增殖(图1)；HCV特异性IFNγ ELISPOT(图2)；HCV特异性IL-10ELISPOT(图3)；IFNγ血清水平(图4)；IL-4血清水平(图5)；以及外周NKT淋巴细胞测定(图6)。
进行上述分析的方法如下T细胞增殖分析按Gotsman等人，2000.Antiviral Research，4817-26以及Akbar等人Immunology 1993；78468-475所述，如下进行样品采集、制备和测试利用Ficoll梯度分离方法分离外周血单核细胞(PBMC)。将处于100uL RPMI 10％ FCS中的1×105细胞加入位于两块平板的4组三复孔中-A(三复孔1和2)及B(三复孔3和4)。在A板中，三复孔1只包含细胞和培养基；三复孔2包含细胞、HCV NS3抗原(10μg/孔)和培养基；在第2块板中，三复孔3包含细胞和培养基；三复孔4包含细胞+PHA(2.5μg/mL)+培养基。两天(B板)及五天(A板)以后，向各孔中加入甲基-H3胸苷(Amersham Pharmacia，GB)(1μCi/mL)。细胞温育18小时，然后冰冻、去冰冻并收集。计算存在或缺少抗原情况下T细胞培养物掺入的放射性(按每分钟计数(cpm)表示)比值，按三复孔±SEM的平均刺激指数(SI)给出数据。该分析的结果如图1所示。
IFN-γ ELISPOT分析按Gotsman等人(如前所述)以及Akbar等人(如前所述)所述，使用HCV特异性ELISPOT分析方法(Mabtech，Nacka，Sweden)测定HCV IFN-γ斑点形成细胞(SPC)。简言之，使用包被有高蛋白质结合的疏水性PVDF膜(聚偏二硫乙烯，polyvinylidenedisulfide)的96孔过滤板(Millipore Corp.，Bedford，MA，USA)。利用抗IFN-γ包被抗体(15mg/ml，Mabtech，Nacka，Sweden)于40℃包被平板24小时。利用Ficoll梯度分离方法分离外周血单核细胞(PBMC)。在96孔板中利用RPMI 1640和10％ FCS培养细胞(1×105细胞/孔)。利用HCV NS3(A)、植物凝集素(2.5μg/ml)(B)或不含抗原的RPMI制备3组三复孔。平板于37℃和5％ CO2下温育48小时。洗涤以后，将稀释的生物素化抗体(7-B6-1-biotin，Mabtech，Nacka，Sweden)加入过滤的含0.5％FCS的PBS中，至1μg/ml，总体积100μl/孔。平板于室温下温育3小时。洗涤以后，加入100ml链亲和素碱性磷酸酶，室温下温育90分钟。洗涤以后，加入底物(BCIP/NBT，BioRad，Richmond，USA)至30分钟，直至出现暗红紫色斑点。洗涤并干燥以后，由两名独立的研究人员利用解剖显微镜计数代表IFN-γ分泌克隆的深色斑点。结果表示为减去不含病毒抗原孔的平均斑点数之后，每105淋巴细胞中IFN-γ分泌细胞的三复孔平均值。该分析的结果如图2所示。
IL-10 ELISPOT分析该分析按上文IFN-γ所述进行，只是使用抗IL-10包被抗体和抗IL-10(第二表位)生物素化抗体。该分析的结果如图3所示。
IFN-γ和IL4血清水平测定使用Genzyme Diagnostics试剂盒(Genzyme Diagnostics，MA，USA)，按照厂家说明书，利用“夹心”ELISA测定这些血清水平。这些分析的结果如图4和5所示。
外周血NKT淋巴细胞的流式细胞术分析利用Ficoll梯度分离方法分离外周血单核细胞(PBMC)。分离之后立即将双份2-5×104细胞/500μL PBS放入Falcon 2052管中，与4ml 1％ BSA温育10分钟，1400rpm离心5分钟。将细胞重悬于含1∶20 FITC抗人CD3和CD56抗体(Pharmingen，USA)的10μL FCS，每10分钟一次混合30分钟。细胞在1％ BSA中洗涤两次，保持在4℃至读数。利用荧光活化细胞分选仪(FACSTAR Plus，Becton Dickinson)对每组1×104细胞进行分析性细胞分选。只计数活细胞，从所得水平减去来自无抗体处理淋巴细胞的背景荧光。在前向及侧向散射设置通道，排除死细胞和红细胞。利用Consort 30双色等值线绘制程序(Becton Dickinson，Oxnard，CA)或CELLQuest Program 25分析数据。
这些分析及图形表明，存在水平升高的代谢物导致这些受试者的免疫特征显著改变。出人意料的是，如果该状态伴有另一免疫系统激发(HCV感染)，则对HCV+受试者免疫特征的影响比代谢物未升高的受试者更为显著。这种差别表明，两种状态叠加时，其自身处于免疫系统多种组分之中。因此本发明一个方面在于，处理受试者以便获得水平升高的代谢物，从而实现所述受试者免疫组分的至少一种改变。这种改变可能提供增强的免疫应答、或降低的免疫应答、或这两者。所述改变可能发生于免疫系统的不同组分，并可能提供不同组分的不同方向，例如某些组分增强而另一些下降。举例来说，Th1活性的升高经常伴有Th2应答下降，反之亦然。也可能两组进行的方向相同。例如，图2、3和4中IFN-γ(Th1应答的标志)和IL-10(Th2应答的标志)均显示升高。本发明另一方面在于，治疗受感染个体、特别是具有HCV、HBV或HIV感染的受试者，可以经处理获得水平升高的代谢物，以便防止疾病的进一步发展。就HBV或HCV而言，否则这种发展将会引起纤维症和肝破坏。就HIV而言，这种发展引起免疫能力丧失。
本发明可以按多种方式进行。例如，可以通过静脉内、肌内、皮下、腹膜内或口服途径，将影响代谢物水平的代谢物或试剂引入受试者。或者，可以利用离体方法处理，包括从受试者中取出细胞，利用代谢物处理该细胞，并将该细胞再导入患者。可以按这种方式取出并处理的细胞的例子包括但不限于外周血单核细胞(PBMCs)、树突细胞、T细胞、NK细胞、NKT、CD1d细胞、或单独或其组合。这种离体处理可另外包括其它处理，例如接触细胞因子、生长因子、基质、抗原或其它促进生长或免疫应答的因子。
导入细胞中间代谢物的代谢物或试剂的有效量应取决于所述化合物各自的药代动力学(pharmokinetic)特性，以便在所需时间内在所述受试者中获得足够水平的该代谢物。该代谢物水平可高于正常水平足以诱导受试者应答的一段时间。例如，高雪氏受试者的代谢物水平可作为该水平的基准。
根据本发明，可以使用中间代谢物、例如葡糖神经酰胺(glucosylceramide)治疗各种疾病，包括癌症、感染性疾病以及任何免疫介导的病原性疾病。例如就小细胞肺癌而言，可通过给予葡糖神经酰胺，使免疫系统至少一种组分升高到特异性活化NKT细胞群体的程度，从而治疗受试者。在这些条件下，按这种方式改变对癌症的免疫应答，以使癌细胞复原、或破坏、或导致被破坏，受试者开始缓和或癌症显著缩小。从受试者取出NKT细胞并在允许细胞存活和生长的条件下使细胞体外接触葡糖神经酰胺，也可获得类似效应。将这些离体处理的细胞转回受试者时，这些细胞将指导可导致癌症缓和或显著缩小的免疫应答。
体内或离体使用合适的代谢物治疗其部分病理学基于受试者免疫应答的任何疾病可获得这种效应。这类疾病可包括HBV、HCV、HIV或其它基于免疫介导的发病机理的病毒感染。本发明也可用于控制由免疫应答引起发病的癌症。治疗自身免疫或免疫介导起源的疾病也是本发明的目的。其中包括但不限于I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎(Crohn’s disease)、动脉硬化、溃疡性结肠炎以及对于本领域熟练的专业人员显而易见的其它疾病。
本发明的进一步描述在一个实施方案中，本发明提供了治疗哺乳动物受试者、例如人的疾病的方法，其中给予该受试者有效量的哺乳动物中间代谢物或试剂。受试者中代谢物的细胞内、或细胞外、或血清水平由此升高。中间代谢物可包含脂质或缀合生物分子。后者可采取糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素之外的糖蛋白形式。所述糖脂可以包含单糖神经酰胺，例如葡糖神经酰胺或半乳糖苷神经酰胺。
可以利用本领域已知的常规方法、包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内或口服途径，如下文进一步所述给予中间代谢物或试剂。
至于本发明能够治疗的疾病，其中包括癌症、感染以及免疫功能障碍。感染可以各种各样，包括其病原学本质为病毒性或细菌性的感染。病毒性感染包括，例如HBV、HCV和HIV。免疫障碍可以是自身免疫紊乱的形式，包括以下任一种I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化以及溃疡性结肠炎。
本发明还提供治疗哺乳动物受试者、例如人的疾病的方法，其中包含给予该受试者、例如人有效量的可提高受试者中哺乳动物中间代谢物的细胞内、或细胞外、或血清水平的试剂。如前所述，该中间代谢物可包含脂质或缀合生物分子，例如糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素之外的糖蛋白。糖脂包含单糖神经酰胺。优选葡糖神经酰胺或半乳糖苷神经酰胺。
与前述方法相同，可以利用许多常规方法进行给药，包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内和口服方法。
适于本方法的疾病包括癌症、感染(病毒性，例如HBV、HCV和HIV，或细菌性)以及免疫功能障碍。后者可包含自身免疫紊乱，特别是I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎。
在前述方法中，所述试剂可提高受试者中哺乳动物中间代谢物的生成速率，或者降低受试者中所述哺乳动物中间代谢物降解或转化速率。
本发明还提供治疗哺乳动物受试者疾病的离体方法。在该方法中，从受试者中获取细胞，并利用有效量的哺乳动物中间代谢物处理，以提高该细胞中代谢物的细胞内水平。此后利用常规方法、例如静脉内给药，将处理过的细胞转回该受试者。
如前所述，该中间代谢物可包含脂质或缀合生物分子，后者包括糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素之外的糖蛋白。有用的糖脂包括单糖神经酰胺，例如葡糖神经酰胺和半乳糖苷神经酰胺。
本发明可以治疗的疾病包括，例如癌症、感染和免疫功能障碍。上文已经详细描述了这些疾病。
可以处理并转回受试者的细胞性质多样，可包括例如外周血单核细胞(PBMCs)、树突细胞、T细胞、干细胞、NK细胞、NKT细胞和CD1d细胞。
本发明另一方面提供了治疗哺乳动物受试者的方法，其包含从该受试者获取细胞的第一步；然后利用有效量的可提高细胞中哺乳动物中间代谢物细胞内水平的试剂处理该细胞。处理之后将细胞转回到受试者。
上文已经描述了中间代谢物，无需赘述。
离体处理之后，一般通过静脉内方法将细胞转回到受试者。
各种疾病和痛苦的描述上文已给出，适用于本方法。
如上所述，实施本方法时，可能希望该试剂提高受试者中哺乳动物中间代谢物的生成速率，或者该药物降低受试者中哺乳动物中间代谢物的降解或转化速率。
尽管上文已经描述，但应当指出，从受试者获取的细胞可包含以下任一种细胞外周血单核细胞(PBMCs)、树突细胞、T细胞、干细胞、NK细胞、NKT细胞和CD1d细胞。
本发明另一方面还在于治疗哺乳动物受试者、例如人的疾病的方法，其包含给予该受试者有效量的哺乳动物代谢物的步骤，以便调节或改变受试者免疫系统中至少一种组分。所述免疫系统组分可包含细胞、体液或细胞因子成分，并且可以是特异性或非特异性的调节或改变。
上文已经描述了中间代谢物，此处无需赘述。如前所述，可以利用常规方法进行给药，包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内和口服方法。
本方法可适用于前述疾病，不再赘述。
本领域技术人员根据本发明上文详细说明书以及实施例无疑将提出许多显而易见的改变。本发明的范围和实质完全包含所有这些改变，更具体地如下文权利要求书所定义。
权利要求
1.治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含给予所述受试者有效量的哺乳动物中间代谢物，以提高所述受试者中该代谢物的细胞内、或细胞外、或血清水平。
2.权利要求1的方法，其中所述中间代谢物包含脂类或缀合生物分子。
3.权利要求2的方法，其中所述缀合生物分子包含糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素外的糖蛋白。
4.权利要求3的方法，其中所述糖脂包含单糖神经酰胺。
5.权利要求4的方法，其中所述单糖神经酰胺包含葡糖神经酰胺和半乳糖苷神经酰胺。
6.权利要求1的方法，其中所述给药步骤通过包含静脉内、肌内、皮下、腹膜内或口服途径的方法进行。
7.权利要求1的方法，其中所述疾病包含癌症、感染或免疫功能障碍。
8.权利要求7的方法，其中所述感染为病毒性或细菌性感染。
9.权利要求8的方法，其中所述病毒性感染包含HBV、HCV或HIV。
10.权利要求7的方法，其中所述免疫功能障碍包含I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎。
11.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物受试者包含人。
12.治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含给予所述受试者有效量的提高所述受试者中哺乳动物中间代谢物的细胞内、或细胞外、或血清水平的试剂。
13.权利要求12的方法，其中所述中间代谢物包含脂类或缀合生物分子。
14.权利要求13的方法，其中所述缀合生物分子包含糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素外的糖蛋白。
15.权利要求14的方法，其中所述糖脂包含单糖神经酰胺。
16.权利要求15的方法，其中所述单糖神经酰胺包含葡糖神经酰胺或半乳糖苷神经酰胺。
17.权利要求12的方法，其中所述给药步骤通过包含静脉内、肌内、皮下、腹膜内或口服途径的方法进行。
18.权利要求12的方法，其中所述疾病包含癌症、感染或免疫功能障碍。
19.权利要求18的方法，其中所述感染为病毒性或细菌性感染。
20.权利要求19的方法，其中所述病毒性感染包含HBV、HCV或HIV。
21.权利要求18的方法，其中所述免疫功能障碍包含I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎。
22.权利要求12的方法，其中所述试剂提高所述受试者中该哺乳动物中间代谢物的生成速率。
23.权利要求12的方法，其中所述试剂降低所述受试者中该哺乳动物中间代谢物的降解或转化速率。
24.权利要求12的方法，其中所述哺乳动物受试者包含人。
25.治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含a)从所述受试者获取细胞；b)利用有效量的哺乳动物中间代谢物处理所述细胞，以提高所述细胞中该代谢物的细胞内水平；以及c)将该处理过的细胞转移给所述受试者。
26.权利要求25的方法，其中所述中间代谢物包含脂类或缀合生物分子。
27.权利要求26的方法，其中所述缀合生物分子包含糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素外的糖蛋白。
28.权利要求27的方法，其中所述糖脂包含单糖神经酰胺。
29.权利要求28的方法，其中所述单糖神经酰胺包含葡糖神经酰胺和半乳糖苷神经酰胺。
30.权利要求25的方法，其中所述转移步骤通过静脉内途径进行。
31.权利要求25的方法，其中所述疾病包含癌症、感染或免疫功能障碍。
32.权利要求31的方法，其中所述感染为病毒性或细菌性感染。
33.权利要求32的方法，其中所述病毒性感染包含HBV、HCV或HIV。
34.权利要求31的方法，其中所述免疫功能障碍包含I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎。
35.权利要求25的方法，其中从所述受试者获得的细胞包含外周血单核细胞(PBMCs)、树突细胞、T细胞、干细胞、NK细胞、NKT细胞和CD1d细胞。
36.权利要求25的方法，其中所述哺乳动物受试者包含人。
37.治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含a)从所述受试者获取细胞；b)利用有效量的提高所述细胞中哺乳动物中间代谢物细胞内水平的试剂处理该细胞；以及c)将该处理过的细胞转移给所述受试者。
38.权利要求37的方法，其中所述中间代谢物包含脂类或缀合生物分子。
39.权利要求38的方法，其中所述缀合生物分子包含糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素外的糖蛋白。
40.权利要求39的方法，其中所述糖脂包含单糖神经酰胺。
41.权利要求40的方法，其中所述单糖神经酰胺包含葡糖神经酰胺和半乳糖苷神经酰胺。
42.权利要求37的方法，其中所述转移步骤通过静脉内途径进行。
43.权利要求37的方法，其中所述疾病包含癌症、感染或免疫功能障碍。
44.权利要求43的方法，其中所述感染为病毒性或细菌性感染。
45.权利要求44的方法，其中所述病毒性感染包含HBV、HCV或HIV。
46.权利要求43的方法，其中所述免疫功能障碍包含I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎。
47.权利要求37的方法，其中所述试剂提高所述受试者中该哺乳动物中间代谢物的生成速率。
48.权利要求37的方法，其中所述试剂降低所述受试者中该哺乳动物中间代谢物的降解或转化速率。
49.权利要求37的方法，其中从所述受试者获得的细胞包含外周血单核细胞(PBMCs)、树突细胞、T细胞、干细胞、NK细胞、NKT细胞和CD1d细胞。
50.治疗哺乳动物受试者疾病的方法，其包含给予所述受试者有效量的哺乳动物中间代谢物，以调节或改变所述受试者免疫系统中的至少一个组分。
51.权利要求50的方法，其中所述免疫系统组分包含细胞、体液或细胞因子成分。
52.权利要求50的方法，其中所述调节或改变是特异性或非特异性的。
53.权利要求50的方法，其中所述中间代谢物包含脂类或缀合生物分子。
54.权利要求53的方法，其中所述缀合生物分子包含糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素外的糖蛋白。
55.权利要求54的方法，其中所述糖脂包含单糖神经酰胺。
56.权利要求55的方法，其中所述单糖神经酰胺包含葡糖神经酰胺和半乳糖苷神经酰胺。
57.权利要求50的方法，其中所述给药步骤通过包含静脉内、肌内、皮下、腹膜内或口服途径的方法进行。
58.权利要求50的方法，其中所述疾病包含癌症、感染或免疫功能障碍。
59.权利要求58的方法，其中所述感染为病毒性或细菌性感染。
60.权利要求59的方法，其中所述病毒性感染包含HBV、HCV或HIV。
61.权利要求58的方法，其中所述免疫功能障碍包含I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎。
62.权利要求50的方法，其中所述哺乳动物受试者包含人。
全文摘要
本发明涉及调节罹患疾病例如癌症、感染(例如病毒性感染、细菌性感染)或免疫功能障碍特别是自身免疫疾病(例如糖尿病、节段性回肠炎、类风湿性关节炎、动脉硬化和溃疡性结肠炎)的哺乳动物受试者(例如人)的免疫应答的新方法。更具体而言，本发明涉及产生升高水平的中间代谢物，例如脂类或缀合生物分子例如糖脂、脂蛋白以及除抗体、细胞因子或激素之外的糖蛋白。通过在患病受试者中引入中间代谢物、或通过给予后可导致其水平升高的试剂进行治疗。治疗方法可以是体内或离体。
文档编号A61P31/20GK1541711SQ20041000726
公开日2004年11月3日 申请日期2004年2月27日 优先权日2003年2月27日
发明者Y·艾兰, Y 艾兰, M·马格利特, 窭 , D·L·恩格尔哈特, 恩格尔哈特, E·拉巴尼, 湍 申请人:Enzo治疗公司