专利名称：天然降压生物活性成分制备及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含天然降压生物活性成份制剂的制备及应用。尤其涉及一种从免疫乳牛分泌的牛奶中制备含天然降压生物活性成份制剂的方法及应用。
发明技术背景医学界把高血压分为原发性高血压(即高血压病)和继发性高血压(即症状性高血压)两大类。继发性高血压是指由于某些疾病引起的高血压，高血压仅仅是这种疾病的症状之一。原发性高血压是常见病、多发病，其发病机理至今为止尚未完全探明，可能与压力、肥胖、吸烟、高血脂、运动减少、高脂肪饮食、遗传等有关。临床上以动脉血压升高为主要特征，随着病情加重，常常使心、脑、肾等脏器受累，发生功能性或器质性改变，如高血压性心脏病、心力衰竭、脑血管意外，肾功能衰竭等，是影响人类健康的最大元凶之一。
目前有多种降低血压的药物用于控制和降低血压，包括利尿剂、β-受体阻滞剂、钙拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素II拮抗剂等五大类，这些药物虽能有效降低血压，但是，长期服用都有各种副作用，其中某些副作用还很严重，而且有些药物价格昂贵，很多病人不能长期坚持服用，据统计，很大一部份病人，约40％的高血压病人其血压未能得到良好控制。高血压病人盼望着用既能有效降低血压，又不引发任何毒付作用的天然药物来控制血压。
动物实验证明，在高敏感免疫状态的乳牛分泌的牛奶中，存在着一种能有效降低血压又不引发任何毒付作用的天然生物活性成份。
从免疫接种的牛奶中制备某些生物活性物质已经有很多报导，美国专利(4324782)报导了治疗龋齿的方法，美国专利(4636384)报导了从高敏感免疫状态乳牛牛奶中制备改善心血管和肺功能的生物活性物质的方法。
本发明所要解决的技术问题是，制备有效降低血压的天然生物活性成份制剂，应用于原发性高血压的治疗。
发明内容
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是，选择合适的抗原，制备多价抗原复合疫苗，免疫接种健康乳牛，并激发其进入高敏感免疫状态，通过血清学检测确认接种乳牛的高敏感免疫状态后，收集其分泌的牛奶，采用超滤设备分离过滤，制备降压活性成份，并应用于高血压的治疗。
本发明的技术特征是，只有在乳牛处于高敏感免疫状态时乳牛分泌的牛奶中才含有较高浓度的降压生物活性成份，普通乳牛分泌的牛奶中虽然也含有这一成份，但含量较低，因此，为了获得较高浓度的降压活性成份，乳牛必须被进行足够剂量疫苗免疫接种，并通过重复的追加接种，以维持乳牛的高敏感免疫状态。
本发明的技术特征是，用于乳牛免疫接种的抗原，可以是任何类型的抗原，只要这些抗原能引起乳牛免疫系统的应答，这些抗原包括但不限于细菌、病毒、螺旋体、衣原体、寄生虫、孢子体、真菌等，最好的抗原组合是细菌多价抗原，复合疫苗最好由多种灭活细菌制备，不仅可以激发乳牛体内高敏感免疫状态，还能在牛奶中产生高含量降压生物活性成份，接种疫苗按照已知的方式制备。
本发明的技术特征是，免疫接种乳牛的方法，可以采用任何能够激发乳牛体内免疫系统应答的方法，包括，肌肉注射、静脉注射、乳房内注射、腹膜内注射、肛门给药、口服等多种形式，最好的接种方式是肌肉内注射，疫苗浓度为1.time.10.sup.8 cell/ml，接种剂量每次5ml，每两周重复追加接种一次，每次注射方式和剂量相同，共接种五次左右，以保持接种乳牛高敏感免疫状态。
本发明的技术特征是，检测接种乳牛是否处于高敏感免疫状态是必需的，有很多已知的免疫学方法可以用于此测试，最好的方法是在接种前后收集血清，用接种的多价灭活细菌抗原来检测血清中是否存在与抗原发生粘集反应的抗体，以及抗体的滴度，只有已产生高敏感免疫状态的乳牛的牛奶才能作为原材料，来制备天然降压生物活性成份。
本发明的技术特征是，为了保持接种乳牛的高敏感免疫状态，定期重复追加接种是必需的，追加接种疫苗的剂量、浓度与初次接种相同，重复追加接种的周期为每两周追加一次，在追加接种期间，仍应定期检测接种乳牛血清中抗体滴度，以判断其免疫状态，一旦免疫接种乳牛出现免疫耐受现象，即应仃用该乳牛的牛奶作为原材料，为了提高接种效果，可以联合应用多种接种方式，如在肌肉注射的同时联合静脉注射、乳房内注射或口服。
本发明的技术特征是，测试牛奶中天然降压生物活性成份是必需的，测试方法是采用层析柱分离其纯净物后进行仪器分析和测试，或通过动物实验直接测试其降血压效果。
本发明的技术特征是，分离和纯化降压生物活性成份的方法及步骤是，收集牛奶并脱脂，凝固并去除酪旦白，用分子量为10,000的超微滤膜分离过滤并去除分子量大于10,000的旦白质，用离子交换柱捕获分子量＜10,000带负电荷的分子，最终用分子筛净化分离，调PH至10.5，收集沉淀物，用冷冻干燥装置制备干粉，其中富含天然降压生物活性成份。
本发明的技术特征是，本发明方法制备的天然降压生物活性物质可以帮助高血压患者降低血压，既适用于原发性高血压患者，也适合继发性高血压患者，还适合于伴有其他疾病的高血压患者，既可以用来治疗高血压，也可以用于预防发生高血压，既可以单独应用，也可以与其他具有降压作用的成份联合应用。
本发明的技术特征是，本发明制备的天然降压生物活性成分可以用多种方式、剂型给患者施用，可以直接以牛奶或奶粉形式施用，也可以与各种医药等级的辅料混合制备各种片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、油剂、冲剂等剂型服用，还可以作为食品添加到各种食品中去，成为治疗高血压的功能性食品，但在加工过程中温度不能超过140°F，否则会破坏其生物活性。
本发明的有益效果是，本发明方法制备的天然降压生物活性成份，在降压同时无任何毒付作用，适合患者长期服用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明实例1制备复合细菌疫苗从美国菌种培养中心(American Type Culture Collection)获得下列菌种金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus，ATCC#.11631)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis.155)、酿脓葡萄球菌1型(streptococcus pyogenes.Typel.8671)、3型(Type3.10389)、5型(type5.12347)、8型(Type8.12349)、12型(type12.11434)、14型(type14.12972)、18型(type18.12357)、22型(type22.10403)、产气杆菌(Aerobacteraerogenes.884)、大肠杆菌(Escherichia Coli.11126)、肠炎(沙门)杆菌(Salmonellaenteritidis 13076)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa 7700)、肺炎杆菌(KlebsiellaPneumoniae.9590)、鼠伤寒(沙门)杆菌(Salmonella typhimurium.13311)、出血杆菌(Haemophilus typhimurium.9333)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris 13315)、志贺痢疾杆菌(Shigella dysenteriae.13313)、肺炎双球菌(Diplococcus pneumoniae.6303)、变异链球菌(Strep.sanguinis 10556)、小链球菌(Strep.Mitis.6249)、出血链球菌(Strep.Sanguinis.10556)、唾液链球菌(Strep.Salivarius.13419)、缺乳链球菌(Strep.Agalactiae.13813)。每种细菌接种按照规定，采用合适的培养液，在37℃恒温下培养48小时，观察培养是否正常，如果细菌在培养基中生长良好，用离心机分离培养液，细菌用无菌生理盐水冲洗五次，用60℃温度灭活2小时，杀死所有细菌，从已灭活的细菌中采集样本继续在培养基中培养(37℃下培养2小时)，确认无细菌存活，收集的细菌冷冻干燥成为细菌粉，上述每种粉称取1g，用500ml生理盐水混悬，并反复稀释，直至配制成浓度为2.times.10.sup.8bacterial cells/ml的溶液，(在660nm上显示1.0光密度单位)。
实施例2用复合疫苗免疫接种乳牛选择健康乳牛，用实施例1配制的复合细菌疫苗免疫接种乳牛，采用肌肉注射方式，在臀部肌肉注射5ml疫苗，每隔二周用相同剂量追加注射一次，共重复追加五次，在第一次注射后5天，采集接种乳牛的牛奶，采用放射免疫法测定复合抗原的抗体滴度，并与未免疫接种前采集的牛奶进行对比，发现免疫接种后复合抗原的抗体滴度增加百倍，证明接种乳牛处于高敏感免疫状态。
实施例3制备降压生物活性成份收集20公升免疫接种乳牛的牛奶，用脂肪分离机去脂，脱脂奶用中空纤维分离器(分子量为10,000)分离过滤牛奶，流速在自动计量器上的读数为80，入口压力为30psi，出口压力为25psi，收集分离过滤液，直接送入冷冻干燥装置，制备为干粉。
实施例4验证降压活性成份的降压作用取实施例3制备的降压生物活性成份20mg，放在自愿者的舌尖上，分别测量前后血压值，在放置降压成份后30分钟左右，受试者的血压(收缩压)下降30％，重复试验数次，效果相似。
实施例5验证降压生物活性成份临床疗效随机选取高血压患者10人，每天服用实施例3制备的降压生物活性成份10g(用水冲服)连续服用12周，结果显示，90％的病人血压下降效果明显，平均降压效果达到8％～10％，无任何付作用发生。
权利要求
1.本发明涉及一种含天然降压生物活性成份制剂的制备及应用。尤其涉及一种从免疫乳牛分泌的牛奶中制备含天然降压生物活性成份制剂的方法及应用，其特征是，选择合适的抗原，制备多价抗原复合疫苗，免疫接种健康乳牛，并激发其进入高敏感免疫状态，通过血清学检测确认接种乳牛的高敏感免疫状态后，收集其分泌的牛奶，采用超滤设备分离过滤，制备降压活性成份，并应用于高血压的治疗。
2.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，只有在乳牛处于高敏感免疫状态时乳牛分泌的牛奶中才含有较高浓度的降压生物活性成份，普通乳牛分泌的牛奶中虽然也含有这一成份，但含量较低，因此，为了获得较高浓度的降压活性成份，乳牛必须被进行足够剂量疫苗免疫接种，并通过重复的追加接种，以维持乳牛的高敏感免疫状态。
3.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，用于乳牛免疫接种的抗原，可以是任何类型的抗原，只要这些抗原能引起乳牛免疫系统的应答，这些抗原包括但不限于细菌、病毒、螺旋体、衣原体、寄生虫、孢子体、真菌等，最好的抗原组合是细菌多价抗原，复合疫苗最好由多种灭活细菌制备，不仅可以激发乳牛体内高敏感免疫状态，还能在牛奶中产生高含量降压生物活性成份，接种疫苗按照已知的方式制备。
4.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，免疫接种乳牛的方法，可以采用任何能够激发乳牛体内免疫系统应答的方法，包括，肌肉注射、静脉注射、乳房内注射、腹膜内注射、肛门给药、口服等多种形式，最好的接种方式是肌肉内注射，疫苗浓度为1.time.10.sup.8 cell/ml，接种剂量每次5ml，每两周重复追加接种一次，每次注射方式和剂量相同，共接种五次左右，以保持接种乳牛高敏感免疫状态。
5.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，检测接种乳牛是否处于高敏感免疫状态是必需的，有很多已知的免疫学方法可以用于此测试，最好的方法是在接种前后收集血清，用接种的多价灭活细菌抗原来检测血清中是否存在与抗原发生粘集反应的抗体，以及抗体的滴度，只有已产生高敏感免疫状态的乳牛的牛奶才能作为原材料，来制备天然降压生物活性成份。
6.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，测试牛奶中天然降压生物活性成份是必需的，测试方法是采用层析柱分离其纯净物后进行仪器分析和测试，或通过动物实验直接测试其降血压效果。
7.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，分离和纯化降压生物活性成份的方法及步骤是，收集牛奶并脱脂，凝固并去除酪旦白，用分子量为10,000的超微滤膜分离过滤并去除分子量大于10,000的旦白质，用离子交换柱捕获分子量＜10,000带负电荷的分子，最终用分子筛净化分离，调PH至10.5，收集沉淀物，用冷冻干燥装置制备干粉，其中富含天然降压生物活性成份。
8.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，为了保持接种乳牛的高敏感免疫状态，定期重复追加接种是必需的，追加接种疫苗的剂量、浓度与初次接种相同，重复追加接种的周期为每两周追加一次，在追加接种期间，仍应定期检测接种乳牛血清中抗体滴度，以判断其免疫状态，一旦免疫接种乳牛出现免疫耐受现象，即应仃用该乳牛的牛奶作为原材料，为了提高接种效果，可以联合应用多种接种方式，如在肌肉注射的同时联合静脉注射、乳房内注射或口服。
9.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明制备的天然降压生物活性成分可以用多种方式、剂型给患者施用，可以直接以牛奶或奶粉形式施用，也可以与各种医药等级的辅料混合制备各种片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、油剂、冲剂等剂型服用，还可以作为食品添加到各种食品中去，成为治疗高血压的功能性食品，但在加工过程中温度不能超过140°F，否则会破坏其生物活性。
10.按照权利要求1所述的方法，本发明的技术特征是，本发明方法制备的天然降压生物活性物质可以帮助高血压患者降低血压，既适用于原发性高血压患者，也适合继发性高血压患者，还适合于伴有其他疾病的高血压患者，既可以用来治疗高血压，也可以用于预防发生高血压，既可以单独应用，也可以与其他具有降压作用的成份联合应用。
全文摘要
本发明涉及一种含天然降压生物活性成分制剂的制备及应用，尤其涉及一种从免疫乳牛分泌的牛奶中制备含天然降压生物活性成分制剂的方法及应用，其特征是，选择合适的抗原，制备多价抗原复合疫苗，免疫接种健康乳牛，并激发其进入高敏感免疫状态，通过血清学检测确认接种乳牛的高敏感免疫状态后，收集其分泌的牛奶，采用超滤设备分离过滤，制备降压活性成分，并应用于高血压的治疗。
文档编号A61K35/20GK1557337SQ200410015848
公开日2004年12月29日 申请日期2004年1月15日 优先权日2004年1月15日
发明者高春平 申请人:高春平