专利名称：一种新的命名为barb的杆状细菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型微生物及其用途和应用，尤其涉及一种从人的肿瘤细胞系K562细胞中分离培养得到的新菌种，该菌种具有假单孢菌属(Pseudomonas)的特征，并且与已知的假单孢菌种均有不同，暂将这一新菌种命名为BARB，即Bcr-Abl相关杆菌(BARB，Bcr-Abl associated rodbacteria)，BARB可诱导人的正常细胞和肿瘤细胞系产生Bcr-Abl融合基因。
背景技术：
1960年，Nowell和Hungerford在慢性髓系白血病(chronicmyelogenous leukemia)细胞内发现费城染色体(PhiladelphiaChromosome)1。1973年，Rowley发现费城染色体是由人的9号染色体和22号染色体之间易位形成的2。这两个染色体的重组导致了一个新的融合基因，在9号染色体上的Abl基因的部分基因与22号染色体上的Bcr部分基因组成了Bcr-Abl融合基因3-6。该融合基因在细胞的信号传导通路中起非常重要的作用7。在动物实验中已证明该融合基因可导致慢性髓系白血病样的疾病8-10。95％以上的慢性髓系白血病患者都带有Bcr-Abl融合基因11-13，针对Bcr-Abl融合基因的药物如Imatinib(Gleevec，STI571)可迅速缓解慢性髓系白血病14。目前普遍认为，Bcr-Abl融合基因与慢性髓系白血病的病因紧密相关。然而，Bcr-Abl的融合是怎样产生的，目前只有非常零星的研究。如有人认为辐射可造成Bcr-Abl融合15；也有人认为染色体上的Alu序列和一些duplicon与Bcr-Abl融合有关16-17，但这些都是一些假设，并没有严格的实验证明。
本发明从人的肿瘤细胞系K562细胞中，分离培养得到BARB，即Bcr-Abl相关杆菌(BARB，Bcr-Abl associated rod bacteria，Bcr-Abl相关杆菌)，该菌属具有假单孢菌属(Pseudomonas)的特征，研究提示BARB可导致人类细胞内9号染色体和22号染色体的染色体易位(chromosomal translocation)，这种染色体易位的结果产生了Bcr-Abl(p210bcr-abl)融合基因，这个融合基因及其编码蛋白质就是慢性髓系白血病的Bcr-Abl融合基因及其编码蛋白。
所用的参考文献如下1.Nowell，P.C.&Hungerford，D.A.A minute chromosome in human chronic granulocyticleukemia.Science.1321497-1501，1960.
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(一)明内容一种具有假单孢菌属特征的新的细菌，命名为BARB(Bcr-Ablassociated rod bacteria，Bcr-Abl相关杆菌)，其在武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO.M 204007，保藏日期为2004年1月19日，提议的分类命名为假单孢菌属，Pseudomonas sp.BARB。
菌种来源所述的杆状细菌BARB，生活在人的肿瘤细胞系K562细胞中(图2e)，分离出BARB的方法是将人的肿瘤细胞系K562细胞(由浙江大学肿瘤研究所提供)培养在RPMI-1640完全培养液中，培养温度为37℃，不更换培养液，培养30～60天，获得生长的细菌BARB。可再将获得细菌BARB用普通的LB培养液扩增，再将所述细菌BARB接种于羊血平板上使其长成集落。
BARB的生长特性BARB为非明酵菌，生长缓慢，初代培养35℃48小时以后长出细小、点状、圆形、凸起、灰白色的菌落，不溶血，72-96小时以后菌落长到直径2-3mm，表面干燥并联成一片，呈皱折状，整个菌落能推动，在液体培养基内，该细菌在液体表面生长，形成一层扩散的、灰白色的菌膜。能在麦康凯平板(Monc ConkeyAgar)生长，但在SS平板上不能生长。
BARB的形态为革兰氏阴性、短小的杆菌。长时间放置后再行涂片，细菌形态变得不规则，短小的和细长的杆菌均存在。在脑心浸液液体培养基中，细菌革兰染色呈链状。直径为0.5-1.0um，长为3um。鞭毛染色为单鞭毛，鞭毛位于菌体的一端。在电子显微镜下细菌的形态如短杆状，如图2c、图2d所示。
BARB的生化特性细菌氧化酶阳性，触酶试验阳性。
采用API生化鉴定板条、ATB、Vitek-AMS及Vitek-II生化鉴定系统(法国biomerium公司)及经典的手工方法加以鉴定。用Vitek-AMS及Vitek-II均不能鉴定BARB，因为该菌生长缓慢，而这两型仪器适合鉴定生长快速的细菌，用ATB和API生化板条鉴定BARB，结果显示BARB与Pseudomonas diminuta相似，但符合率不到90％。将全自动微生物生化分析仪和经典微生物生化鉴定数据总结如表1。
表1.用经典微生物生化检验与全自动微生物生化分析仪(API20NE，RapID，andVITEK-Ams60)分析BARB表1中-表示阴性；+表示阳性；±表示在多次实验中有阳性或阴性的结果。
综上所叙，BARB的特征与假单孢菌属中的diminuta菌种非常相似，但与diminuta有三点不同，首先，BARB在液体表面生长，形成一层扩散的、灰白色的菌膜，而diminuta没有这一特征；其次，BARB可分解果糖，虽然比较缓慢，单diminuta不能分解果糖；最后，在BARB中检测到尿素酶的活性，而diminuta无尿素酶的活性。因此，BARB可能为假单孢菌属的一种新的细菌。
BARB的16S rRNA特性用细菌的16S rRNA的序列可比较精确地鉴定细菌的属和种。将BARB的16S rRNA的PCR产物的序列与基因库NCBI中的16S rRNA序列比对，发现与假单孢菌属中一些菌如Pseudomonasdiminuta有91％的同源性，但不完全相同，BARB可能属于假单孢菌属(Pseudomonas)并与diminuta不同的一种新的杆状细菌。BARB的16SrRNA的部分核苷酸序列如下(BARB的16S rRNA片断1)
CGACCCTGGCGGCAGGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGCCCTTGGGGGCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATGTGCCCTTTGGTACGGAACAACACAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATGTGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGCCATTGGAGCAGCCCGCGTTGGATTAGGTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGCCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTGCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGCAGCCATGCCGCGTGAATGATGAAGGTCTAGGATTGTAAAATTCTTTCACCGGGGAAGATAATGACGGTACCCGGAGAAGAAGTCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATTACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCGGATGTTTAAGTCGGGGGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCTCGGAATTGCCTTCGATACTGGACATCTTGAGTACGGGAGAGGTGAGTGGAACTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCACTGGCCCGTTACTGACGCT；BARB的16S rRNA的又一部分核苷酸序列如下(BARB的16S rRNA片断2)TTCGCTGACCCTACCGTGGTCGGCTGCCTCCATTGCTGGTTAGCGCACCGCCTTCGGGTAAAGCCAACTCCCATGGTGCGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGCACTCGAGTTGCAGAGTGCAATCCGAACTGAGACGACTTTTAGGGATTAGCTCCGCTTCGCAGCATCGCAACCCTCTGTAGTCGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCACCCCGTAAGGGCCATGAGGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGCTTACCACCGGCGGTCCCATTAGAGTGCCCAACTTAATGATGGCAACTAATGGCGAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTCCCTGTCCCCGAAGGGAAAACTGGATCTCTCCAGCGATCAGGGCATGTCAAAAGGTGGTAAGGTTCTGCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCCTTGAGTTTTAATCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCGTCACCGACATGCATGCATGCCGACAACTAGCACTC。
BARB对抗菌素的敏感性BARB的特征还在于，对万古霉素(vancomycin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、复方新诺明较敏感，而对amikacin，amoxicillin，ampicillin，aztreonam，cefaime，ticarcillin，cefoxitin，cefpodoxime，ceftaziding，chroramphenicol，gentamicin，imipenem，nitrofurantoin，norfloxacin，peperacillin，and cefoperazone等抗菌素不敏感。
BARB的功能用BARB感染人的正常细胞如脐带血单核细胞、外周血单核细胞、和成纤维细胞和人的肿瘤细胞系如HL60和U937，一定时间后，上述细胞内就发生Bcr与Abl的融合，产生Bcr-Abl(p210Bcr-Abl)融合基因及其基因产物p210Bcr-Abl蛋白质。
所述的杆状细菌BARB的用途，BARB的功能是能诱导人的正常细胞和人的细胞系产生Bcr-Abl(p210bcr-abl)融合基因，因此，BARB诱导人细胞内发生Bcr和Abl两个基因融合，可作为人的细胞内染色体易位的研究模型。该模型可用于人染色体易位(chromosomal translocation)中涉及Bcr和Abl等基因融合的分子生物学、生物化学、细胞学、肿瘤学、病因学等等的研究，也可用此模型研制和开发药物、试剂盒和试剂。特别是可用此模型制备试剂盒和试剂以筛选药物，如本发明试验可知BARB对万古霉素、左氧氟沙星、复方新诺明较敏感，而对amikacin，amoxicillin，ampicillin，aztreonam，cefapime，ticarcillin，cefoxitin，cefpodoxime，ceftaziding，chroramphenicol，gentamicin，imipenem，nitrofurantoin，norfloxacin，peperacillin，and cefoperazone等抗菌素不敏感。
实施例2～实施例6实验结果充分表明BARB能诱导人的细胞内染色体易位而造成Bcr-Abl融合。在现有技术中，没有任何一个报道有关细菌可诱导人类细胞内Bcr-Abl融合；在此之前，没有任何报道有关在人的K562细胞中提取和分离到细菌；BARB与人类细胞有非常良好的共生关系，这也是过去没有任何报道的。这进一步表明BARB是人类从自然中分离的新菌种。
BARB诱导人细胞内发生Bcr和Abl两个基因融合，这两个基因的融合是正常细胞向白血病细胞转化的关键步骤，因此，更具体的BARB可用于建立白血病的模型。用该模型研制和开发用于白血病或与白血病相关的药物、试剂盒(包括临床检验试剂盒)、试剂。
还可用杆状细菌BARB与其它微生物或化合物组合制成相关的药物、试剂、或试剂盒(包括临床检验试剂盒)；总之可制成含有所述杆状细菌BARB的生物制品。
本发明的有益效果体现在(1)本发明不仅从人的肿瘤细胞系K562细胞中，分离培养得到新菌种BARB，而且揭示了BARB可导致人类细胞内9号染色体和22号染色体的染色体易位(chromosomal translocation)，这种染色体易位的结果产生了Bcr-Abl(p210bcr-abl)融合基因，这个融合基因及其编码蛋白质就是慢性髓系白血病的Bcr-Abl融合基因及其编码蛋白，为人类进一步认识肿瘤及相关疾病提供研究基础和模型，该模型可用于研制药物、试剂盒、试剂。(2)可利用BARB诱导制造研究模型。(3)BARB可用于建立白血病的模型。
图1BARB的菌落外观照片。
图2BARB的光学和电子显微镜的形态鉴定a.K562细胞的Giemsa染色，箭头所指为杆状细菌样颗粒；b.K562细胞内分离提取到的细菌经过扩增后用革兰氏染液染色，呈革兰氏阴性；c.BARB的扫描电子显微镜照片；d.BARB的透射电子显微镜照片；e.BARB在K562细胞中的透射电镜照片。
图3用BARB处理人的成纤维细胞后，用PCR法检测细胞内Bcr和Abl基因的融合。
图4用BARB处理HL60、U937和人的脐带血的单核细胞后，用PCR法检测细胞内Bcr和Abl基因的融合。
图5为PCR(a)和Western Blot(b)检测BARB处理的正常人脐带血和正常人外周血的单核细胞内Bcr-Abl融合基因和融合蛋白质-p210Bcr-Abl。
图6为BARB处理正常人外周血后检测细胞内的Bcr-Abl融合基因及其基因产物。
图7为用100μm/ml万古霉素(Vancomycin)处理BARB后，将BARB与人的脐带血单核细胞共温肓，然后用PCR技术检测细胞内Bcr与Abl基因融合。可见经过100μm/ml万古霉素处理后，BARB失去介导细胞内Bcr-Abl融合的功能。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但不能将方案中所涉及的方法及技术参数理解为对本发明的限制。
实施例1BARB的分离将K562细胞(由浙江大学肿瘤研究所提供)培养在RPMI-1640完全培养液中，不更换培养液，37℃培养30-60天，细菌生长。获得的细菌可用普通的LB培养液扩增。将BARB接种于羊血平板上使其长成集落。
BARB的鉴定(1)BARB的菌落外观如图1所示，长出的菌落呈粗糙型。
(2)用革兰氏染色将经过扩增后细菌BARB用革兰氏染液染色，呈革兰氏阴性(图2b)。
(3)图2c和图2d为BARB在扫描和透射电子显微镜下照片。图2e为BARB在K562细胞中的透射电镜照片(4)用各种全自动微生物生化分析仪和常规生化检验对BARB做了详细的分析，结果见表1，结果表明BARB具有假单孢菌属(Pseudomonas)的特征，但与所知的假单孢属中的菌种均有不同，这说明BARB为一种新的菌种。
(5)BARB的16S rRNA的部分序列，见方案部分描述的BARB的16SrRNA的部分核苷酸序列BARB的16S rRNA片断1，BARB的16S rRNA片断2，与假单孢菌属中的一些细菌有高度同源性，但不完全相同，也说明BARB为一种新的菌种。
实施例2BARB的功能鉴定(一)用BARB感染人的细胞取人的脐带血和外周血，用Ficoll-Hypaque分离其中的单个核细胞。将细胞与BARB混合共同培养在IMDM完全培养液中，35℃培养3-7天后，用RT-PCR，Western Blot和FISH法检测，人的脐带血和外周血的单个核细胞内就发生Bcr与Abl的融合(见图5，图6)。
图5为PCR(a)和Western Blot(b)检测BARB处理的正常人脐带血和正常人外周血的单核细胞内Bcr-Abl融合基因-p210Bcr-Abl。M，分子标记；1-10，10个健康妇女的脐带血单核细胞；11-12，2个健康人的外周血单核细胞；-，未经BARB处理的细胞；+，BARB处理的细胞有一条292bp的PCR条带(a)和p210Bcr-Abl蛋白条带(b)。
图6为BARB处理正常人外周血后检测细胞内的Bcr-Abl融合基因及其基因产物。a，为Bcr-Abl的PCR检测；b，为Bcr-Abl融合蛋白的Western blot检测；c，为FISH技术检测正常的Bcr和Abl信号；d，为FISH技术检测Bcr-Abl融合基因。M，为分子量标记；13 & 14，为2个正常人外周血单核细胞；-，为未经BARB处理的细胞；+，为BARB处理的细胞。
检测结果说明BARB可诱导人的细胞系产生Bcr-Abl融合基因。
实施例3BARB的功能鉴定(二)用BARB感染人的肿瘤细胞系HL60和U937和人的脐带血单核细胞将细胞与BARB混合共同培养在RPMI1640完全培养液中，一定时间后，用RT-PCR法检测，细胞内就发生Bcr与Abl的融合(见图4)。图4中可见，用BARB处理过的细胞有一条分子量为292bp的PCR扩增产物，而其对照没有这一条带。M，分子标记；UCBMC，人的脐带血的单核细胞；-，未经BARB处理的细胞；+，用BARB处理过的细胞，292bp的PCR产物经过测序分析，确定为Bcr-Abl融合基因产物。这说明BARB可诱导人的细胞系产生Bcr-Abl融合基因。
实施例4将人的正常成纤维细胞与BARB共同培养一定时间后，可检测到细胞内Bcr-Abl的融合基因产物，见图3。
图3为PCR(a)和Western Blot(b)检测BARB处理的正常人脐带血和正常人外周血的单核细胞内Bcr-Abl融合基因-p210Bcr-Abl。图3中M表示分子标记；-表示未经BARB处理的细胞；+表示BARB处理的细胞有一条292bp的PCR产物，经过测序分析，确定为Bcr-Abl融合基因产物。
实施例5用100μm/ml万古霉素(Vancomycin)处理BARB后，将BARB与人的脐带血单核细胞共温肓，然后用PCR技术检测细胞内Bcr与Abl基因融合。可见100μm/ml万古霉素处理后不能引起BARB介导的细胞内Bcr-Abl融合。当BARB用100μg/ml的万古霉素处理后就失去诱导细胞内Bcr与Abl的融合的功能(见图7)。
实施例6巢式PCR检测BARB感染的细胞中的Bcr-Abl的融合实施例2，3，4，5中BARB感染过的细胞，1×106细胞融解于0.5mlTrizol，提取RNA。用于cDNA合成的引物为(5’-GGC AAG AGT TAC ACG TTCCTG ATC-3’)；用于巢式PCR的引物为(第一轮sense 5’-GGC AAG AGTTAC ACG TTC CTG ATC-3’，antisense 5’-GTG ATT ATA GCC TAA GACCCG GAG-3’)和(第二轮sense 5’-GGA GCT GCA GAT GCT GAC CAA C-3’，antisense 5’-GGC CAC AAA ATC ATA CAG TGC-3’).PCR的反应条件为先将模板在94℃变性，然后进行35轮PCR反应(94℃30Sec秒，58℃30秒和72℃45秒)。然后用琼脂糖凝胶电泳分析292bp的Bcr-Abl融合基因的PCR产物。
实施例7免疫印迹法(Western Blot)法检测BARB感染的细胞中的Bcr-Abl的融合蛋白。
取实施例2中BARB感染过的细胞，1×107细胞用细胞裂解液裂解，测定其中的蛋白质含量。210μg蛋白做SDS-PAGE电泳，然后用Santa Cruz公司的试剂做Western Blot.所用的试剂为c-Abl(鼠抗人Bcr-Abl的单克隆抗体)，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG的第二抗体，化学发光试剂，以上试剂均来自美国Santa Cruz公司。
实施例8荧光原位杂交技术(FISH，fluorescent in-situhybridization)检测细胞内Bcr-Abl融合基因取实施例2中BARB感染过的细胞，Bcr-Abl的基因探针购自美国Vysis公司，检测细胞内的Bcr-Abl融合基因的技术流程按照美国Vysis公司的方法。Bcr，Abl，和Bcr-Abl的信号在装有QFISH的DAPI-FITC-Texas Red三色荧光显微镜LEICA550QCW下俘获。
实施例916S rRNA的PCR检测与测序取实施例1中BARB，提取DNA，用PCR法检测其中的16S rRNA.引物序列如下，(正向引物5’-AGA GTT TGA TCC TGG CTA G-3’反向引物5’-ACG GNT ACC TTG TTA CGA CTT-3’)。PCR的反应条件为先将模板在94℃变性，然后进行35轮PCR反应(94℃30Sec秒，52℃30秒和72℃45秒)，然后用琼脂糖凝胶电泳分析1500bp左右的16S rRNA的PCR产物，并对此PCR产物进行测序。
序列表.seq<120>Title一种新的命名为BARB的杆状细菌及其应用<130>AppFileReference<140>CurrentAppNumber<141>CurrentFilingDate<210>Sequence1<211>Length668<212>TypeDNA<213>OrganismNameBARB的16S rRNA1<400>PreSequenceStringcgaccctggcggcaggcctaatacatgcaagtcgagcggcccttcggggcagcggcggacgggtgagtaacgcgtgggaatgtgccctttggtacggaacaacacagggaaacttgtgctaataccgtatgtgcccttcgggggaaagatttatcgccattggagcagcccgcgttggattaggtagttggtgaggtaaaggctcaccaagccgacgatccatagctggtctgagaggatgatcagccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttgcgcaatgggcgaaagcctgacgcagccatgccgcgtgaatgatgaaggtcttaggattgtaaaattctttcaccggggaagataatgacggtacccggagaagaagtcccggctaacttcgtgccagcagccgcggtaatacgaagggggctagcgttgctcggaattactgggcgtaaagggcgcgtaggcggatgtttaagtcgggggtgaaagcccggggctcaacctcggaattgccttcgatactggacatcttgagtacgggagaggtgagtggaactccgagtgtagaggtgaaattcgtagatattcggaagaacaccagtggcgaaggcgactcactggcccgttactgacgct<210>Sequence2<211>Length663<212>TypeDNA<213>OrganismNameBARB的16S rRNA2<400>PreSequenceStringttcgctgaccctaccgtggtcggctgcctccattgctggttagcgcaccgccttcgggtaaagccaactcccatggtgcgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccgacttcatgcactcgagttgcagagtgcaatccgaactgagacgacttttagggattagctccgcttcgcagcatcgcaaccctctgtagtcgccattgtagcacgtgtgtagcccaccccgtaagggccatgaggacttgacgtcatccccaccttcctccggcttaccaccggcggtcccattagagtgcccaacttaatgatggcaactaatggcgagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacagccatgcagcacctgtgtccctgtccccgaagggaaaactggatctctccagcgatcagggcatgtcaaaaggtggtaaggttctgcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcccttgagttttaatcttgcgaccgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttagctgcgtcaccgacatgcatgcatgccgacaactagcactc<210>Sequence3<211>Length24<212>TypeDNA<213>OrganismName引物1<400>PreSequenceStringggcaagagtt acacgttcct gatc24<210>Sequence4<211>Length24<212>TypeDNA<213>OrganismName引物2<400>PreSequenceStringgtgattatag cctaagaccc ggag24<210>Sequence5<211>Length22<212>TypeDNA<213>OrganismName引物3<400>PreSequenceStringggagctgcag atgctgacca ac 22<210>Sequence6<211>Length21
序列表.seq<212>TypeDNA<213>OrganismName引物4<400>PreSequenceStringggccacaaaa tcatacagtg c 11<210>Sequence7<211>Length19<212>TypeDNA<213>OrganismName引物5<400>PreSequenceStringagagtttgat cctggctag 19<210>Sequence8<211>Length21<212>TypeDNA<213>OrganismName引物6<400>PreSequenceStringacggntacct tgttacgact t 1权利要求
1.一种新的命名为BARB杆状细菌，其在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO.M 204007，保藏日期为2004年1月19日。
2.如权利要求1所述的名为BARB的杆状细菌，其特征在于所述的BARB的16S rRNA的部分核苷酸序列如下CGACCCTGGCGGCAGGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGCCCTTCGGGGCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATGTGCCCTTTGGTACGGAACAACACAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATGTGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGCCATTGGAGCAGCCCGCGTTGGATTAGGTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGCCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTGCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGCAGCCATGCCGCGTGAATGATGAAGGTCTTAGGATTGTAAAATTCTTTCACCGGGGAAGATAATGACGGTACCCGGAGAAGAAGTCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATTACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCGGATGTTTAAGTCGGGGGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCTCGGAATTGCCTTCGATACTGGACATCTTGAGTACGGGAGAGGTGAGTGGAACTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCACTGGCCCGTTACTGACGCT；BARB的16S rRNA的又一部分核苷酸序列如下TTCGCTGACCCTACCGTGGTCGGCTGCCTCCATTGCTGGTTAGCGCACCGCCTTCGGGTAAAGCCAACTCCCATGGTGCGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGCACTCGAGTTGCAGAGTGCAATCCGAACTGAGACGACTTTTAGGGATTAGCTCCGCTTCGCAGCATCGCAACCCTCTGTAGTCGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCACCCCGTAAGGGCCATGAGGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGCTTACCACCGGCGGTCCCATTAGAGTGCCCAACTTAATGATGGCAACTAATGGCGAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTCCCTGTCCCCGAAGGGAAAACTGGATCTCTCCAGCGATCAGGGCATGTCAAAAGGTGGTAAGGTTCTGCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCCTTGAGTTTTAATCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCGTCACCGACATGCATGCATGCCGACAACTAGCACTC。
3.如权利要求1所述的名为BARB的杆状细菌，其特征在于所述的BARB革兰氏染色阴性，不溶血，菌体粗糙型，为短杆状细菌；所述的BARB在脑心浸液液体培养基中，革兰染色呈链状，BARB的直径为0.5～1.0μm，长为3μm，鞭毛染色为单鞭毛，鞭毛位于菌体的一端；BARB的生化试验细菌氧化酶阳性，触酶试验阳性，经典的微生物生化检验说明其具有假单孢菌属(Pseudomonas)的特征。
4.如权利要求1所述的名为BARB的杆状细菌，其特征在于将BARB感染人的肿瘤细胞系如HL60和U937和人的正常细胞如人的脐带血单核细胞和外周血单核细胞等，一定时间后，细胞内就发生Bcr与Abl的融合，产生Bcr-Abl(p210Bcr-Abl)融合基因及其基因产物p210Bcr-Abl蛋白质。
5.一种如权利要求1所述的杆状细菌BARB的用途，其特征在于所述的BARB用于诱导人体染色体易位，人的正常细胞和人的细胞系产生Bcr-Abl融合基因，可作为人的细胞内染色体易位的研究模型。
6.如权利要求5所述的杆状细菌BARB的用途，其特征在于所述研究模型为可用于白血病研究的模型。
7.如权利要求5所述的杆状细菌BARB的用途，其特征在于所述研究模型在药物研究和开发中的应用。
8.如权利要求7所述的杆状细菌BARB的用途，其特征在于所述的研究模型在药物筛选中的应用。
9.如权利要求5所述的杆状细菌BARB的用途，其特征在于所述的研究模型在试剂及试剂盒中的应用。
10.一种含有如权利要求1所述杆状细菌BARB的生物制品。
全文摘要
本发明涉及一种新型微生物及其用途和应用，尤其涉及一种从人的肿瘤细胞系K562细胞中分离培养得到的新菌种，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO.M 204007，保藏日期为2004年1月19日。该菌种具有假单孢菌属(Pseudomonas)的特征，并且与已知的假单孢菌种均有不同，暂将这一新菌种命名为BARB，即Bcr－Abl相关杆菌(BARB，Bcr－Abl associated rod bacteria)，BARB可诱导人的正常细胞和肿瘤细胞系产生Bcr－Abl融合基因。这个融合基因及其编码蛋白质就是慢性髓系白血病的Bcr－Abl融合基因及其编码蛋白，为人类进一步认识肿瘤及相关疾病提供研究基础和模型，该模型可用于研制药物、试剂盒、试剂，可利用BARB诱导制造研究模型。
文档编号A61K35/66GK1737113SQ20041001606
公开日2006年2月22日 申请日期2004年1月21日 优先权日2004年1月21日
发明者胡汛 申请人:胡汛