治疗阴道及宫颈炎的中药组合物及制备方法和质量标准的制作方法

专利名称：治疗阴道及宫颈炎的中药组合物及制备方法和质量标准的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及该组合物的制备方法和质量标准，特别涉及一种用于治疗阴道及宫颈炎的中药组合物，同时涉及该组合物气雾剂的制备方法和质量标准。
背景技术：
阴道及宫颈炎为妇科的常见疾病，约占妇科门诊患者总数的40～50％，多由淋菌、沙眼衣原体及一般化脓性菌等病原体进入损伤部位(产后、刮宫、人流术及一些宫颈损伤，或不洁性交等)而发生感染，如若不能得到有效的治疗，迁延日久，病势加重，可对妇女的健康产生不良的后果，一则进而引起子宫内膜炎，甚至盆腔炎；二是宫颈糜烂(宫颈糜烂是慢性宫颈炎的一种形式)常可引起不孕症；三是宫颈糜烂每易形成的宫颈癌变。对宫颈糜烂的发病与治疗研究，是国内外医药界关注的重要课题。
对于阴道及宫颈炎的主要治疗方法有物理疗法、药物治疗及手术治疗。其中物理疗法中外治法包括电熨、冷冻、激光、红外线等，中药外治法主要有宫颈敷药法、阴道灌洗法，本发明所提供的中药组合物的气雾剂改变了以往中药外用的诸多不便，具有剂量小、分布均匀、奏效快、无局部用药的刺激性、使用方便等特点。

发明内容
本发明的目的在于公开一种中药组合物；本发明的另一个目的在于公开一种治疗阴道及宫颈炎的中药组合物及该组合物气雾剂的制备方法；本发明的第三个目的在于公开该中药组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现本发明药物组合物的原料药组成及配比如下黄柏55-65重量份莪术35-45重量份 枯矾6-9重量份上述原料优选配比为黄柏60重量份 莪术40重量份枯矾8重量份本发明气雾剂的制备方法为以上三味，莪术加8-12倍量水，浸泡1-1.5小时，加热提取挥发油4-6小时，收集挥发油，挥发油加0.7-0.8重量份吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加8-12倍量水，煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，滤液与提油后药液合并，80～90℃，真空度为-0.08～-0.09Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.10-1.20的清膏，加乙醇，使含醇量达50-70％，搅匀，静置12-36h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水30-40重量份加热煮沸0.5-1小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液，加入与混合药液的体积比1-1.7∶4的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液5-7重量份，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水80～90重量份，搅匀，静置40-50小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为2-4∶5的丙丁烷气体，即得。
本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。
鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种A取本药物组合物制备的药液2-3ml，加甲醇4-8ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取2-3ml缺黄柏的阴性样品加甲醇4-8ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％～28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。
B取本药物组合物制备的药液20-30ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50-60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至约1ml，作为供试品溶液；取20-30ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50-60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至约1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材2-3g，30～60℃加石油醚30-40ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，60～90℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰。
含量测定方法包括如下方法盐酸小檗碱含量测定方法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共950-1000ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠1.7-2.0g；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000。
对照品溶液的制备 称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.025-0.03mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 吸取正交浓缩液1.0-1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.0mg-1.63mg。
本发明含量测定试验中，阴性对照试验表明阴性无干扰；精密度试验RSD为0.34％，精密度良好；稳定性试验RSD为0.48％，表明样品溶液在24h内稳定性良好；重现性试验RSD为0.46％，表明本含量测定试验重现性良好；加样回收率为99.08％，RSD为1.87％。三批样品中盐酸小檗碱含量测定含盐酸小檗碱平均为1.63mg/ml。
宫糜消气雾剂(由本药物组合物制备而成)从阴道给药，对苯酚胶浆、和金黄色葡萄球菌致大鼠阴道及宫颈炎有明显的治疗作用，使模型大鼠的阴道和宫颈重量指数明显降低，病理损伤明显好转，体重恢复明显，与赋形剂组比较，有显著性差异；体外抑菌实验表明对金黄色葡萄球菌、加特纳氏菌、阴道棒状杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、肺炎克氏菌、绿脓杆菌、脆弱类杆菌、消化链球菌和白色念珠菌等10种细菌有明显的抑制作用，其中作用最强的是金黄色葡萄球菌和加特纳氏菌，其MIC50为1.56mg/ml。还能显著降低2，4-二硝基酚致大鼠体温升高，明显抑制冰醋酸和热板致小鼠的疼痛，说明宫糜消气雾剂①具有速效和定位作用；②药物的稳定性高；③给药剂量准确，副作用较小；④无局部用药的刺激性，同时具有明显的清热燥湿、化腐生肌的功效，对阴道及宫颈炎有良好的治疗作用。下述实验例进一步说明本发明。
实验例1莪术挥发油的提取考察按一个处方量称取莪术，加10倍量水浸泡1小时后，用挥发油测定器收集挥发油，观察不同时间出油情况，按药材采购来源不同进行3次试验，考察提油时间，结果见表1。
表1不同采购来源的药材挥发油收集情况

(注出油量为挥发油体积，单位为ml)从以上三批药材提挥发油数据可以看出，每个处方量的莪术可平均出1.86ml挥发油，5小时可平均提出1.80ml，占总提出量的95.74％，可基本认为提出完全。因此，莪术提取挥发油工艺可定为加10倍量水，浸泡1小时，加热提取挥发油5小时。收集的挥发油加8ml吐温-80乳化备用。
实验例2黄柏及莪术提油后药渣的水提工艺黄柏的主要有效成分为生物碱，且大都为季铵型生物碱，季铵型生物碱溶于水，因此黄柏的提取方法可采用加水直接煎煮提取；莪术提油后的药渣还含有水溶性成分，可与黄柏合并后加水提取。采用L9(34)正交表设计试验，来优选水提工艺参数，选取加水量，煎煮次数，煎煮时间三个因素，每个因素设3个水平，因素水平表见表2。
表2 黄柏及莪术药材的水提取因素水平表

表3 黄柏及莪术水提取正交试验及试验结果

从上述结果直观分析，煎煮次数影响最大，其次是加水量和煎煮时间，应选择A3B3C2，我们对各因素进行了方差分析，经方差分析，A因素(加水量)、B因素(煎煮次数)有显著性差异，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，为此，A、B因素应选取3水平；C因素水平间无显著性差异，从节约生产时间及能源，降低成本角度上出发，可选取C1水平；为此我们选择A3B3C1为较合理的水提取生产工艺，即加12倍量水，煎煮3次，每次1h。
实验例3水提液浓缩工艺的考察药液浓缩工艺一般常用为常压浓缩和减压浓缩，而工厂大工业化生产时多采用多效浓缩，即减压浓缩。因此我们采用抽真空减压浓缩模仿工业大生产，考察药液浓缩前后有效成分的变化，考察浓缩工艺是否合理。本工艺以盐酸小檗碱总量变化为考察指标，具体如下取31200ml已知含量(0.1295mg/ml)的药液，共含盐酸小檗碱4040.40mg，减压浓缩(80～90℃，真空度为-0.08～-0.09Mpa)至比重1.10(60℃)，共1300ml，测得盐酸小檗碱的含量为3.0912mg/ml，共含盐酸小檗碱4018.56mg，浓缩过程中盐酸小檗碱的保留率为99.45％，由此可见减压浓缩过程中盐酸小檗碱损失很小。因此，水提药液的浓缩采用减压浓缩，即工业生产中采用多效浓缩是可行的。
实验例4醇沉工艺的研究正交表我们采用L9(34)表，选择浸膏相对密度，醇沉浓度，醇沉时间为因素，确定3个水平，以醇沉后药液的盐酸小檗碱含量与醇沉前药液的盐酸小檗碱含量相比的盐酸小檗碱保留率为考察指标，因素水平表见表4。
表4 醇沉工艺因素水平表

正交试验及试验结果 见表5。
表5 醇沉工艺正交试验结果

从上述结果直观分析，相对密度影响最大，其次是醇沉浓度和醇沉时间，应选择A1B3C3，我们对各因素进行了方差分析，经方差分析，A因素(相对密度)、B因素(醇沉浓度)有显著性差异，A1＞A2＞A3，B3＞B2＞B1，为此，A因素应选取1水平、B因素应选取3水平，C因素水平间无显著性差异，C因素从表看C3最好，但从醇沉实验过程看，C3醇沉时间长，生产周期延长，C1醇沉时间过短，醇沉界面不太好，药液不易滤过，而且C因素与A、B因素相比影响最小，因此从方便生产的角度选择C2，为此我们选择A1B3C2为较合理的醇沉生产工艺，即水提液浓缩至比重为1.10(60℃)，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过。
实验例5醇沉药液回收乙醇工艺的考察醇液浓缩工艺一般采用减压回收浓缩，因此我们考察减压回收浓缩过程中药液的盐酸小檗碱含量的变化，确定浓缩工艺是否合理。本工艺以盐酸小檗碱总量变化为考察指标，具体操作如下取4100ml已知含量(0.8358mg/ml)的药液，共含盐酸小檗碱3426.78mg，减压回收乙醇(60～85℃，真空度为-0.08～-0.09Mpa)至无醇味，共835ml，测得盐酸小檗碱的含量为4.0483mg/ml，共含盐酸小檗碱3380.33mg，醇沉液回收浓缩过程中盐酸小檗碱的保留率为98.64％，由此可见减压回收浓缩过程对盐酸小檗碱含量影响较小。因此，醇沉药液回收乙醇可采用减压回收是可行的。
实验例6增溶剂的选择将黄柏、莪术提取液与枯矾水溶液混合，加入莪术挥发油乳化溶液混合均匀，放置观察，发现有沉淀产生，经检测沉淀主要成分为盐酸小檗碱。药液中须加入增溶剂增加盐酸小檗碱的溶解度。常用的水相增溶剂有乙二醇、丙二醇、丙三醇等。为了确保药液的稳定性，我们选择不同的增溶剂及用量与药液混合均匀，置三角烧瓶中，观察药液稳定性情况，结果见表6。
表6 不同增溶剂与药液配伍后药液的稳定性

从上表结果看采用乙二醇作为增溶剂，且其与药液的比例为10∶40时，可很好的保证药液的稳定性。经过三批中试产品初步稳定性试验考察，采用该增溶剂本品基本稳定。
实验例7成膜剂的选择因本品为泡沫型气雾剂，药液喷出时须成泡沫状，因此药液中须加入成膜剂，才能使药液喷出时成泡沫状。而常用的成膜剂有聚乙二醇(PEG)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、聚维酮K30(PVP)等。为了确保药液喷出时成泡沫状，我们选择不同的成膜剂及用量与药液混合均匀，置铝罐中，密封，充入丙丁烷气，喷出，观察药液喷出时成泡沫情况，结果见表7。
表7 不同成膜剂与药液配伍后的试验结果

从上表结果看采用50％聚维酮K30(PVP)为成膜剂，且其与药液的比例为7∶100时，可很好的保证药液的成膜性。经过三批中试产品初步稳定性试验考察，采用该成膜剂本品基本稳定。
实验例8抛射剂量的确定本品为泡沫型气雾剂，药液须借抛射剂的压力，以泡沫状形式喷出，因此药液灌装后须压入抛射剂，才能使药液正常喷出。常用的抛射剂有氟氯烷，低级烷烃(如丙烷、丁烷、异丁烷等)，压缩惰性气体(如CO2、N2等)等。压缩惰性气体虽价廉、无毒，但蒸气压较高，要求容器有较高的耐压性，还应它们的溶解性和配方特点性均存在一定的问题。氟氯烷类即氟利昂类化合物蒸气压较低，对容器耐压要求不高，灌装工艺也较简单，但氟氯烷类化合物稳定，在大气层不易分解，当升至大气层的顶端受到紫外线的作用而分解出活性的元素氯，破坏大气层中的臭氧层，造成环境污染。低级烷烃类分子量小，蒸气压适宜，价格低，来源广，因此选用低级烷烃丙丁烷作为本制剂的抛射剂。为了确保药液喷出时成泡沫状，且保证药液能基本全部喷出，须充入一定量的丙丁烷气体，将配好的药液灌封于铝罐中，每瓶50ml药液，然后充入不同重量的丙丁烷气体，喷出，观察药液喷出时成泡沫情况及药液的喷出总量，结果见表8。
表8 不同重量抛射剂与药液配伍后药液的喷出试验结果

从上表结果看，抛射剂的多少与药液的成膜情况无影响，只是与药液的喷出量有影响，当每瓶灌封50ml药液时，充入25g(相当于30ml)丙丁烷气体，即可保证药液完全喷出。经过三批中试产品稳定性试验考察，采用该剂量抛射剂可保证本品药液完全喷出。
实验例9黄柏的薄层层析供试品溶液的制备 取本药物组合物药液2ml，加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
缺黄柏阴性对照品溶液的制备 取2ml缺黄柏的阴性样品同法制备。
盐酸小檗碱对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
黄柏对照药材溶液的制备 取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得。
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％～28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。试验证明三批样品的色谱中，分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。而缺黄柏的阴性对照液对被测成分黄柏无干扰，故黄柏薄层鉴别成立。
实验例10莪术的薄层层析供试品溶液的制备 取本药物组合物药液20ml，置分液漏斗中，加30～60℃石油醚40ml，振摇(如乳化再加无水乙醇50ml，振摇)，静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；缺莪术阴性对照品溶液的制备 取20ml缺莪术的阴性样品同法制备。
莪术对照药材溶液的制备 取莪术对照药材2g，加30～60℃石油醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰。试验证明三批样品的色谱中，分别在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。而缺莪术的阴性对照液对被测成分莪术无干扰，故莪术薄层鉴别成立。
实验例11盐酸小檗碱含量测定测定波长的选择对盐酸小檗碱对照品溶液(0.01mg/ml)进行紫外光谱扫描，结果显示，盐酸小檗碱在265nm处有最大吸收峰，且HPLC法在265nm波长处检测，盐酸小檗碱峰无干扰，故选择265nm为检测波长。
色谱条件的选择选择以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(50∶50，每1000ml流动相含十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相；能够较好地达到盐酸小檗碱与其他成分分离，故选择用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(50∶50，每1000ml流动相含十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相；柱温室温；流速1.0ml/min；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
实验例12标准曲线的绘制与线性范围考察对照品溶液的制备称取盐酸小檗碱对照品5.00mg，置50ml量瓶中，加50％甲醇适量振摇使溶解，再加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，即得浓度为0.09814mg/ml的对照品溶液。
标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液1.25，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0μl，注入液相色谱仪，记录色谱图与峰面积，结果见表9。
表9 盐酸小檗碱的量(μg)与峰面积(A)相关性

结果表明盐酸小檗碱在0.12～1.47μg范围内，其对照品的量与峰面积呈良好的线形关系。
实验例13样品测定取宫糜消气雾剂样品，按正文含量测定项下的方法测定盐酸小檗碱含量，分别制备对照品溶液与供试品溶液，分别精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图与峰面积值，计算盐酸小檗碱含量，结果见表10。
表10 宫糜消气雾剂盐酸小檗碱测定结果(n＝2)

根据宫糜消气雾剂中盐酸小檗碱含量测定结果表明，三批样品中含盐酸小檗碱平均为1.63mg/ml，考虑到药材的来源，以及制剂生产，贮藏等各种因素，加之工业化大生产的特点，将含量限(幅)度暂定在下限，故暂定宫糜消气雾剂含量限度为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.0mg。
实验例14对苯酚胶浆致阴道及宫颈炎模型动物的治疗作用取体重200～250g雌性大鼠，按体重均分成正常组(等容量赋形剂，用棉球适当堵塞)宫颈炎康栓阳性药物组(0.40g/kg，0.04g/100g体重，按体公斤体重计算，相当临床人每天用量1.2g的20倍量)，宫糜消气雾剂小(0.27g生药/kg，108％，0.025ml/100g体重)、中(0.54g生药/kg，108％，0.05ml/100g体重)、大剂量(1.08g生药/kg，108％，0.1ml/100g体重)组(按公斤体重计算，相当于临床人每天用3.24g生药的5、10和20倍)，用药前称体重，然后每鼠阴道内注射0.1ml/100g体重苯酚胶浆，每天1次，连续3次成模，正常组注射等容积蒸馏水，肉眼可见用苯酚胶浆后大鼠阴道口红肿、有的有脓性物流出，然后各组按剂量从阴道给药(用棉球适当固定，以下试验中相同)，连续7天，共10天，末次药后1小时称体重后，用20％乌拉坦麻醉，腹主动脉取血，用血流变仪测相关指标，然后取阴道及宫颈称重计算重量指数，再取一块组织备检，用10％中性甲醛固定，石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察，试验结果见表11、12、13。
表11 宫糜消气雾剂对苯酚胶浆阴道及宫颈炎模型动物的阴道和宫颈重量指数的影响(x±s)

与赋形剂组比#P＜0.05，与模型组比**P＜0.01表12 宫糜消气雾剂对苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎炎症治疗作用疗效积分(x±s)

与赋形剂组比#P＜0.05 ##P＜0.01，与模型组比*P＜0.05 **P＜0.01
表13 宫糜消气雾剂对苯酚胶浆致阴道及宫颈炎模型大鼠体重的影响(x±s)

与赋形剂组比#P＜0.05，与模型组比*P＜0.05 **P＜0.01由表11、12、13可见，用苯酚胶浆可引起大鼠阴道及宫颈炎症状明显，体重减轻，与赋形剂组比，有显著性差异，说明模型成立；用宫糜消气雾剂后，使模型大鼠的阴道和宫颈重量指数明显降低，病理损伤明显好转，体重恢复明显，与赋形剂组比，有显著性差异，说明宫糜消气雾剂对苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎炎症治疗作用效果明显。
实验例15对金黄色葡萄球菌致阴道及宫颈炎模型动物的治疗作用取体重200～250g雌性大鼠，按体重均分成正常组(等容量赋形剂)宫颈炎康栓阳性药物组(0.04g/100g体重)，宫糜消气雾剂小(0.27g生药/kg，108％，0.025ml/100体重，)、中(1.00g生药/kg，108％，0.05ml/100体重)、大剂量(1.08g生药/kg，108％，0.10ml/100体重，)组，用金黄色葡萄球菌(4×109CFU)每鼠阴道内黏膜下注射2各点，每点0.2ml，每天1次，连续3天成模，正常组注射等容积生理盐水。肉眼可见用金黄色葡萄球菌的大鼠阴道口红肿、有的有脓性物流出，然后各组按剂量阴道给药，连续7天，共10天，末次药后1小时称重，处死动物，取阴道及宫颈称重计算重量指数，再取一块组织备检，用10％中性甲醛固定，石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察，试验结果见表14、15、16。
表14 宫糜消气雾剂对金黄色葡萄球菌阴道及宫颈炎模型动物的阴道和宫颈重量指数的影响(x±s)

与赋形剂比##P＜0.01 与模型组比**P＜0.01(下同)表15 宫糜消气雾剂对金黄色葡萄球菌致大鼠阴道及宫颈炎炎症治疗作用的疗效积分(x±s)

与赋形剂组比#P＜0.05 ##P＜0.01，与模型组比*P＜0.05 **P＜0.01表16 宫糜消气雾剂对金黄色葡萄球菌阴道及宫颈炎模型动物体重的影响(x±s)

与赋形剂组比##P＜0.01 与模型组比**P＜0.01由表14、15、16可见，用金黄色葡萄球菌可引起大鼠阴道及宫颈炎症状明显，体重减轻，与赋形剂组组比，有显著性差异，说明模型成立；用宫糜消气雾剂后，使模型大鼠的阴道和宫颈重量指数明显降低，病理损伤明显好转，体重恢复明显，与赋形剂组比，有显著性差异，说明宫糜消气雾剂对金黄色葡萄球菌致大鼠阴道及宫颈炎炎症治疗作用效果明显。
实验例16体外抗菌MIC试验供试菌种中标准菌株来自北京生物制品检验所菌种保存中心，其余菌株均由安徽中医学院微生物教研室从临床患者的宫颈分泌液中分离得到。需O2菌选用MH培养基；厌O2菌用厌O2培养基、真菌选用沙保氏培养基。其中加特纳氏菌在MHA培养基加5％O型人血。
菌液的配制将个供试菌株分别接种于上述相应的培养基中，37℃培养，白色念珠菌、脆弱类杆菌、消化链球菌培养48h，其他细菌培养24h，选标准菌落移种于液体培养基中，白色念珠菌、脆弱类杆菌、消化链球菌培养24h，其他细菌培养6h后，调整细菌浓度约为108CFU/ml，备用。
含药培养基的制备在供试培养基中分别加入受试药物，使培养基的药物浓度分别为200mg、100mg、50mg、25mg、12.5mg、6.25mg、3.125mg、1.56mg和0.78mg/ml，另设一个不含药物的培养基，阳性对照含培养基的制备方法同上。
供试菌接种用接种环分别取供试菌液一环(含菌量约为104CFU/ml)接种于不同药物浓度的培养基上，37℃温箱(厌O2菌置厌O2袋)白色念珠菌、脆弱类杆菌、消化链球菌培养48h，其他细菌培养24h后，观察结果。
结果判定在前后两个不同梯度药物浓度的两个平板上，细菌生长数量有80-90％的突然减少为MIC.计算MICR、MIC90、MIC50。结果，见表17表17 宫糜消气雾剂对60株细菌MIC(mg/ml)测定结果

由表17可见，上述10种细菌均为阴道常见感染均，其中脆弱类杆菌、消化链球菌为厌O2菌，常和O2菌混合感染，白色念珠菌为真菌，在引起霉菌性阴道炎后，致宫颈炎。实验结果表明，该药对受试10种细菌都有不同程度的抑制作用。其中作用最强的是金黄色葡萄球菌和加特纳氏菌，其MIC50为1.56mg/ml。
实验例17对2，4-二硝基酚所致大鼠的体温升高的解热试验取经过筛选体温(肛温)在37.5～39.0℃(室温25℃)体重180～200g雌性大鼠60只，按体重随机均分成6组，测量正常体温后，在背部皮下注射2％2、4-二硝基酚30mg/kg，待体温上升超过1℃以上后，按剂量给药，正常组(0.10ml/100g体重赋形剂)宫颈炎康栓阳性药物组(0.04g/100g体重)，宫糜消气雾剂小(0.27g生药/kg，108％，0.025ml/100g体重，)、中(0.54g生药/kg，108％，0.05ml/100g体重，)、大剂量(1.08g生药/kg，108％，0.10ml/100g体重，)组，分别于药后0.5、1、1.5、2、3h分别测体温，结果见表18。
表18 宫糜消对2，4-二硝基酚致热的解热作用(n＝10 x±s)

与赋形剂组比*P＜0.05 **P＜0.01与模型组比#P＜0.05 ##＜P0.01由表18可见2，4-二硝基酚明显升高大鼠体温，用宫糜消后大鼠体温逐渐下降，1.5h时，大剂量组作用明显，之后尽管体温有所下降，但与模型组比没有显著性差异。说明宫糜消能降低由2，4-二硝基酚所致的大鼠体温升高，但作用时间短暂。
实验例18热板法镇痛试验取经过筛选(二次痛阈均不超过30s，大于5s)体重18～22g雌性小鼠50只，均分成5组，将恒温水浴锅水温调到55℃±0.5℃，玻璃烧杯底接触水面，加热后作为热刺激板。用秒表记录小鼠自投入烧杯内至出现舔后足时间(s)作为该鼠的痛阈指标。先测正常痛阈值，然后按剂量分别阴道给药，正常组(0.025ml/10体重赋形剂)宫颈炎康栓阳性药物组(0.60g/kg，0.006g/10g体重，按体公斤体重计算，相当临床人每天用量1.2g的30倍量)，宫糜消气雾剂小(0.025ml/10g体重，0.405g生药/kg)、中(0.025ml/10g体重，0.810g生药/kg)、大剂量(0.025ml/10g体重，1.620g生药/kg)组(用棉球适当堵塞)，于药后30、60、90、120、180、240min测痛阈一次，超过60s即停止测试，按60s计，结果见表19、20。
表19 宫糜消气雾剂对热板致痛的抑制作用(n＝10 x±s)

与赋形剂组比*P＜0.05 **P＜0.01表20 宫糜消气雾剂对热板法镇痛百分率(n＝10)

由表19、20可见宫糜消气雾剂对热板刺激引起的疼痛有良好的抑制作用。从30min就有明显作用，可维持到180min，与赋形剂组比痛阈明显提高，有非常显著差异。
实验例19扭体法镇痛试验取体重18～22g小鼠50只，雌雄兼用，随机均分成5组，分别按表11中剂量分别从阴道给药，给药方法同上，连续给药5d。末次药后40min腹腔注射0.7％醋酸溶液0.1ml/10g体重，分别记录注射醋酸后，各组各小鼠10min，20min内扭体次数，结果见表21。
表21 宫糜消气雾剂对扭体法致痛的抑制作用(n＝10 x±s)

与赋形剂组比**P＜0.01由表21可见，宫糜消气雾剂对醋酸刺激所致的疼痛有明显抑制作用，与赋形剂组比，各剂量组均有显著性差异。
实施例1气雾剂的制备黄柏60kg莪术40kg枯矾8kg以上三味，莪术加10倍量水，浸泡1小时，加热提取挥发油5小时，收集挥发油，挥发油加0.7kg吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加12倍量水，煎煮3次，每次1小时，滤过，滤液与提油后药液合并，85℃，真空度为-0.08Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.10的清膏，加乙醇，使含醇量达70％，搅匀，静置24h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水30kg加热煮沸0.5小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液药液，加入与混合药液的体积比3∶7的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液7kg，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水85kg，搅匀，静置48小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为3∶5的丙丁烷气体，即得。
实施例2气雾剂的制备黄柏60kg莪术40kg枯矾8kg以上三味，莪术加8倍量水，浸泡1小时，加热提取挥发油4小时，收集挥发油，挥发油加0.75kg吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加8倍量水，煎煮1次，每次1小时，滤过，滤液与提油后药液合并，80℃，真空度为-0.08Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.10的清膏，加乙醇，使含醇量达50％，搅匀，静置12h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水30kg加热煮沸0.5小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液药液，加入与混合药液的体积比3∶9的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液5kg，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水80kg，搅匀，静置40小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为2∶5的丙丁烷气体，即得。
实施例3气雾剂的制备黄柏65kg莪术45kg枯矾9kg以上三味，莪术加10倍量水，浸泡1.5小时，加热提取挥发油5小时，收集挥发油，挥发油加0.8kg吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加10倍量水，煎煮2次，每次2小时，滤过，滤液与提油后药液合并，85℃，真空度为-0.09Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.15的清膏，加乙醇，使含醇量达60％，搅匀，静置24h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水35kg加热煮沸1小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液药液，加入与混合药液的体积比3∶10的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液6kg，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水85kg，搅匀，静置45小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为4∶5的丙丁烷气体，即得。
实施例4气雾剂的制备黄柏70kg莪术50kg枯矾10kg以上三味，莪术加12倍量水，浸泡1.5小时，加热提取挥发油6小时，收集挥发油，挥发油加0.8kg吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加12倍量水，煎煮3次，每次3小时，滤过，滤液与提油后药液合并，80～90℃，真空度为-0.08～-0.09Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.20的清膏，加乙醇，使含醇量达70％，搅匀，静置36h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水40kg加热煮沸1小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液药液，加入与混合药液的体积比1∶4的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液7kg，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水90kg，搅匀，静置50小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为3∶5的丙丁烷气体，即得。
实施例5气雾剂的质量控制方法A取本药物组合物制备的药液3ml，加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取3ml缺黄柏的阴性样品加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理40分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。
B取本药物组合物制备的药液25ml，置分液漏斗中，40℃加石油醚45ml，振摇，如乳化再加无水乙醇55ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；取25ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚45ml，振摇，如乳化再加无水乙醇55ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至约1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材3g，40℃加石油醚35ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，70℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰。
C色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共950ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠2.0g；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000。
对照品溶液的制备 称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 吸取正交浓缩液1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本药物组合物的气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.60mg。
实施例6气雾剂的质量控制方法A取本药物组合物制备的药液2.5ml，加甲醇8ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取2.5ml缺黄柏的阴性样品加甲醇8ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理50分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。
B取本药物组合物制备的药液30ml，置分液漏斗中，50℃加石油醚50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；取30ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，50℃加石油醚50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至约1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材2.5g，50℃加石油醚40ml，超声处理50分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，80℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰。
C色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共1000ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠1.8g；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000。
对照品溶液的制备 称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 吸取正交浓缩液1.3ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本药物组合物的气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.40mg。
实施例7气雾剂的制备取黄柏60kg、莪术50kg和枯矾8kg，按上述方法制成气雾剂，阴道炎患者使用，每日1次。
实施例8气雾剂的制备取黄柏70kg、莪术40kg、枯矾10kg按上述方法制成气雾剂，宫颈炎患者使用，每日1次。
权利要求
1.一种治疗阴道及宫颈炎的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份组成黄柏55-65重量份莪术35-45重量份枯矾6-9重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份组成黄柏60重量份莪术40重量份枯矾8重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物气雾剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤按照原料药重量比例取莪术加8-12倍量水，浸泡1-1.5小时，加热提取挥发油4-6小时，收集挥发油，挥发油加0.7-0.8重量份吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加8-12倍量水，煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，滤液与提油后药液合并，80～90℃，真空度为-0.08～-0.09Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.10-1.20的清膏，加乙醇，使含醇量达50-70％，搅匀，静置12-36h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水30-40重量份加热煮沸0.5-1小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液，加入与混合药液的体积比1∶4-3∶7的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液5-7重量份，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水80～90重量份，搅匀，静置40-50小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为2-4∶5的丙丁烷气体，即得。
4.如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤按照原料药重量比例取莪术加10倍量水，浸泡1小时，加热提取挥发油5小时，收集挥发油，挥发油加0.75重量份吐温-80乳化备用；提油后的药液另器存放，药渣与黄柏合并，加12倍量水，煎煮3次，每次1小时，滤过，滤液与提油后药液合并，80～90℃，真空度为-0.08～-0.09Mpa减压浓缩至60℃时相对密度为1.10的清膏，加乙醇，使含醇量达70％，搅匀，静置24h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，备用；枯矾加水30重量份加热煮沸0.5小时，趁热滤过，滤液中加入黄柏莪术提油后的药液，加入与混合药液的体积比1∶4的乙二醇，再加入50％聚维酮K30水溶液7重量份，加热搅拌均匀，放冷，加入莪术挥发油溶液，加水85重量份，搅匀，静置48小时，滤过，灌装，充入与灌封体积比为3∶5的丙丁烷气体，即得。
5.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种A取本药物组合物制备的药液2-3ml，加甲醇4-8ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取2-3ml缺黄柏的阴性样品加甲醇4-8ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％～28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；B取本药物组合物制备的药液20-30ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50-60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；取20-30ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50-60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至约1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材2-3g，30～60℃加石油醚30-40ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，60～90℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰。
6.如权利要求5所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种A取本药物组合物药液2ml，加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取2ml缺黄柏的阴性样品加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上面三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％～28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；B取本药物组合物制备的药液20ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；取20ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材2g，30～60℃加石油醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，60～90℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰。
7.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共950-1000ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠1.7-2.0g；检测波长为265nm；板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000；对照品溶液的制备 称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.025-0.03mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备 吸取正交浓缩液1.0-1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物的气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.0mg-1.63mg。
8.如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共1000ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠1.7g；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000；对照品溶液的制备 称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备 吸取正交浓缩液1.0ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物的气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.0mg。
9.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下方法中一种A取本药物组合物制备的药液2-3ml，加甲醇4-8ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取2-3ml缺黄柏的阴性样品加甲醇4-8ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％～28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；B取本药物组合物制备的药液20-30ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50-60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；取20-30ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40-50ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50-60ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至约1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材2-3g，30～60℃加石油醚30-40ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，60～90℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰；C色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共950-1000ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠1.7-2.0g；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000；对照品溶液的制备称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.025-0.03mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备吸取正交浓缩液1.0-1.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物的气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.0mg-1.63mg。
10.如权利要求9所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下方法中一种A取本药物组合物药液2ml，加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；取2ml缺黄柏的阴性样品加甲醇6ml，摇匀，滤过，滤液作为缺黄柏阴性对照品溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得盐酸小檗碱对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液补充甲醇至5ml，即得黄柏对照药材溶液；吸取上面三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-25％～28％氨水试液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；B取本药物组合物制备的药液20ml，置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为供试品溶液；取20ml缺莪术的阴性样品置分液漏斗中，30～60℃加石油醚40ml，振摇，如乳化再加无水乙醇50ml，振摇；静置，分取石油醚层，浓缩至1ml，作为缺莪术阴性对照品溶液；取莪术对照药材2g，30～60℃加石油醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，60～90℃以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，用自来水冲淋至斑点显色清晰；C色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按1∶1的比例共1000ml，其中含作为流动相十二烷基硫酸钠1.7g；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000；对照品溶液的制备 称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备 吸取正交浓缩液1.0ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，密塞，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物的气雾剂为每1ml含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计不得少于1.0mg。
11.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗阴道炎或宫颈炎的药物中的应用。
12.如权利要求11所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗阴道炎或宫颈炎是指抑制疼痛、抑制充血水肿、减少炎细胞浸润、抑制脓肿、炎性肉芽组织或纤维增生。
13.如权利要求11所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗阴道炎或宫颈炎是指抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、肺炎克氏菌、绿脓杆菌、加特纳氏菌、脆弱类杆菌、消化链球菌、白色念珠菌或阴道棒状杆菌。
全文摘要
本发明公开一种用于治疗阴道及宫颈炎的中药组合物，同时公开该组合物气雾剂的制备方法和质量标准。该中药组合物主要由黄柏、莪术、枯矾组成。气雾剂的制备方法为莪术浸泡，加热提取挥发油，乳化备用；药渣与黄柏合并，煎煮滤过，滤液与提油后药液合并，减压浓缩加乙醇，搅匀，静置滤过；枯矾加热滤过，滤液中加黄柏莪术提油后的药液，加入乙二醇、聚维酮K30水溶液，加热搅拌放冷，加入莪术挥发油溶液，加水搅匀静置滤过，灌装，充入丙丁烷气体，即得。本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和含量测定，鉴别方法包括黄柏及莪术的薄层色谱法试验；含量测定方法包括盐酸小檗碱含量测定。本药物组合物具有明显的清热燥湿、化腐生肌的功效，对阴道及宫颈炎有良好的治疗作用。
文档编号A61P31/00GK1718237SQ20041006882
公开日2006年1月11日 申请日期2004年7月8日 优先权日2004年7月8日
发明者韩冰, 朱成举 申请人:黄文峰