专利名称：用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗cd19的工程抗体及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种工程抗体，尤其是用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体及其用途。
背景技术：
急性淋巴细胞白血病(ALL)是白血病的一种亚型，以B细胞ALL(B-ALL)为主，占ALL的70-80％，每年新发病率为0.98/10万人。目前成人ALL的治疗以化疗为主，但疗效较差，虽然可以取得暂时的缓解，然而生存期短。我国成人ALL疗效更差，以至无法计算其长期生存率。因此，降低白血病的病死率，开展和改善白血病的治疗方法是世界医学正在攻克的一个重点。
随着现代分子生物学和免疫学的发展，基因工程抗体的诞生为肿瘤的诊断和治疗带来了希望，尤其是单链抗体的应用成为肿瘤免疫基因治疗的热点，它以分子质量小、穿透力强、较好保持抗原亲和性及特异性、免疫原性低、体内半衰期短，易与效应分子相连构成多种新功能的抗体分子等为特点，单链抗体成为肿瘤免疫治疗的重要手段。
20世纪90年代，人源性单克隆抗体(单抗)的出现，开创了单抗治疗血液病的新纪元。ALL细胞表面表达多种抗原，如CD19、CD20、CD22及CD52等，这些表面抗原均可成为单抗的作用靶点。目前已上市的抗CD20单抗可使93％的前B-ALL及成熟B-ALL患者获完全缓解(CR)，1年生存率达86％。Thomas等应用抗CD20单抗加CVAD治疗Burkitt淋巴瘤，89％的病人获CR，1年无病生存(DFS)率达86％，无治疗相关死亡。另外，抗CD19单抗和抗CD52单抗也已用于人体。Seibel等对比了单纯化疗与化疗加抗CD19单抗对初发ALL的疗效。结果显示，单纯化疗组2周CR率仅为43％，而联合化疗组达93％。抗CD22单抗在体外对MDR-1(多药耐药基因)阳性的Burkitt淋巴瘤细胞株及BCP-ALL细胞株EU-1有明显杀伤作用。
综上所述，抗体药物给肿瘤尤其是血液系统恶性肿瘤的治疗带来深远影响。抗体作为单独治疗药物业已证明是有效的，而且与其它化疗药物联合应用具有协同作用。利用抗体的细胞特异性，将抗体作为递送细胞毒药物或结合其它蛋白的载体，可以有效杀灭靶向细胞，而对正常细胞没有杀伤作用。因此，如果利用CD19表面抗原作为ALL白血病细胞的表面标记，构建CD19单链抗体，以此为载体，结合其它有生物学作用的蛋白分子，构成融合蛋白，通过融合蛋白中的CD19单链抗体将融合蛋白结合到ALL白血病细胞，刺激CTL细胞激活，可起到特异性杀伤白血病细胞的作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体(ScFv)，获得一种新的、能与B-ALL白血病细胞结合的活性表达产物。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体，含有SEQ ID NO.1所述的抗CD19单克隆抗体HI19a重链可变区VH基因核苷酸序列和SEQ ID NO.2所述的抗CD19单克隆抗体HI19a轻链可变区VL基因核苷酸序列。
所述抗CD19单克隆抗体HI19a重链可变区VH基因所表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，包括含有部分或全部该序列CDRs的片段。
所述抗CD19单克隆抗体HI19a轻链可变区VL基因所表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，包括含有部分或全部该序列CDRs的片段。
包括上述cDNA的pMD-18T载体。
包括上述cDNA的所构建的pET28a(+)表达载体。
所述的cDNA所构建的pET28a(+)表达载体，所表达的cDNA氨基酸序列，包括含有部分或全部该序列CDRs的片段。
所述的cDNA所构建的pET28a(+)表达载体，所述的表达载体在大肠杆菌中表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所述。
所述用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体，在制备治疗白血病的药物中的应用。
本发明从鼠抗人CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞株扩增单克隆抗体的轻、重链可变区基因，并连接成单链抗体(ScFv)基因，在大肠杆菌中进行表达，以获得一种新的、能与B-ALL白血病细胞结合的活性表达产物。
图1为PCR扩增VH，VL基因片段电泳图(MMarker，HVH，LVL)。
图2为PCR扩增单链抗体(ScFv)基因片段电泳图(MMarker)。
图3为抗CD19 ScFv表达载体pET28a(+)ScFv结构示意图。
图4为ScFv表达产物的SDS-PAGE(10％)电泳图(MMarker；O未诱导菌体蛋白；1-4诱导后菌体蛋白)。
图5为纯化后抗CD19-ScFv蛋白的SDS-PAGE电泳图。
图6为抗CD19 ScFv的Western blot分析。
图7a为竞争性免疫荧光抑制实验阴性对照组(AB血清+鼠源IgG)。
图7b为竞争性免疫荧光抑制实验阳性对照组(HI19a+PBS)。
图7c为竞争性免疫荧光抑制实验组(抗CD19-ScFv+HI19a)图7d为阳性对照组与实验组FACS重叠图。
图8为抗CD19ScFv结合曲线及Scatchard分析具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式
对本发明的用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体作进一步的详细说明HI19a为中国医学科学院血液学研究所自行研制、具有自主知识产权的鼠抗人CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞株，此细胞株分泌的抗CD19单克隆抗体，识别一个95KDI型穿膜糖蛋白。B-ALL白血病细胞几乎均表达CD19表面抗原。
应用RT-PCR方法从分泌抗CD19单克隆抗体杂交瘤细胞HI19a中克隆了抗体的重链、轻链可变区(VH、VL)基因，所克隆基因分别长366bp(SEQID NO.1)和324bp(SEQ ID NO.2)，基因内无终止密码子，为开放读码框，分别编码122个(SEQ ID NO.3)和108个(SEQ ID NO.4)氨基酸。与GeneBank数据库进行比较，发现我们所克隆的基因片段与鼠源性抗体有较高的同源性。
用(Gly4Ser)3连接肽基因将VH，VL拼接成单链抗体(ScFv)基因，克隆入pET28a表达质粒，用构建的PET28a(+)-CD19ScFv质粒转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导蛋白表达，表达的蛋白位于包涵体。包涵体蛋白经变性、纯化、复性，进行SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝R250染色，证实纯化后得到分子量为约30Kd的单一蛋白条带。进一步用anti-His-tag抗体进行Western blot检测，证实纯化蛋白条带为CD19ScFv蛋白。
用免疫竞争实验检测CD19ScFv的结合活性，经单链抗体封闭靶细胞——CD19表达阳性的人前B细胞白血病细胞系Nalm6细胞后，再加亲本抗体(HI19a杂交瘤分泌的抗CD19单克隆抗体)，流式细胞仪测定显示荧光标记阳性率从92.64％降为55.17％，表明抗CD19ScFv可竞争性抑制HI19a与Nalm6细胞结合，即抗CD19ScFv能够与Nalm6细胞表面CD19抗原特异性结合。另外，还用解离常数(Kd)计算方法测定了CD19ScFv的结合活性，Kd值为1.7×10-8mol/L(R2＝0.99)。
本发明采用RT-PCR方法从分泌抗人CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞株HI19a中克隆了单链抗体基因，并在蛋白表达载体pET28a中进行了表达，获得了与B淋巴细胞白血病细胞结合活性的ScFv蛋白，为其将来在治疗上的应用作了前期的基础性工作。
下面详细说明本发明的具体实施过程1.抗CD19抗体的轻、重链可变区基因克隆应用RT-PCR方法从分泌抗CD19单克隆抗体杂交瘤细胞HI19a扩增抗CD19抗体的轻、重链可变区基因(1)RNA提取采用Trizol一步法，1)取杂交瘤细胞约106，加入1mlTrizol，吹打混匀，室温静置5分钟。2)加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温静置2-3分钟。3)12000rpm，4℃，离心15分钟。4)取上清，加入0.5ml异丙醇室温静置15分钟。5)12000rpm，4℃，离心15分钟。6)弃上清，加入1ml 75％的乙醇洗，7500rpm，4℃，离心5分钟。7)弃上清，沉淀晾干，加入30μl DEPC处理的水溶解RNA。
(2)逆转录为cDNA(40μl)取2.5mM dNTP 4μl，5×first strandbuffer 8μl，DTT 4μl，oligodT 2μl，水16.6μl，混匀后加入RNA约2g，65℃水浴5分钟，快速冰浴2-3分钟。加入50u/μl RNasin 0.4μl，Superscript II(200u/μl)1μl混匀后37℃水浴＞1小时。取出后70℃水浴10分钟。-20℃保存。
(3)PCR扩增抗CD19抗体的轻重链可变区基因轻链可变区基因PCR扩增反应体系(50μl)设计引用通用简并引物，上游引物5’-GAC ATT CAG CTG ACC CAG WCT SMH-3’；下游引物5’-CCGTTA GAT CTC CAR BTT KGT SCS-3’。以cDNA为模板，高保真pyrobest聚合酶扩增。PCR循环程序为94℃5min；94℃50s，55℃1min，72℃1min；最后72℃延伸10min，共33个循环。反应结束后加入1u普通Taq酶(购自大连宝生物公司)72℃延伸10min后立即进行酚氯仿抽提。
重链可变区基因PCR扩增反应体系(50μl)上游引物5’-CAG GTSMAR CTG CAG SAG TCW GG-3’；下游引物5’-TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGTCCC TTG GCC CC-3’。以cDNA为模板，高保真pyrobest聚合酶扩增。PCR循环程序为94℃5min；94℃，30s，55℃，1min，72℃，1min；最后72℃延伸10min，共33个循环。反应结束后加入1u普通Taq酶(购自大连宝生物公司)72℃延伸10min后立即进行酚氯仿抽提。PCR结果见图1。
(4)测序载体的构建pMD-18T载体购自大连宝生物公司。将轻重链可变区基因PCR产物回收，与pMD-18T载体连接，连接反应按试剂盒要求进行。取连接产物5μl，转化以氯化钙方法制备的大肠杆菌(DH5a)感受态，以蓝/白斑方法挑选阳性克隆，轻重链各挑取10个克隆送测序，测序证实轻、重链各个克隆的基因序列完全一致，分别为324bp及366bp，且该基因序列完全符合蛋白数据库中抗体所具有的若干保守的框架氨基酸的特点，该序列为抗体基因序列。分别命名为pMD-18T19-VH及pMD-18T19-VL。
2.单链抗体基因表达载体pET28a ScFv的构建根据轻、重链可变区的基因序列设计并合成了用于VH，VL基因扩增和拼接的引物。
引物1CCG GAA TTC GAC ATT GTG CTC ACC CAG TCT CCA引物2GGA GCC GCC GCC GCC AGA ACC ACC ACC ACC CCG TTT TAT TTC CAGCTT GGT CCC引物3GGC GGC GGC GGC TCC GGT GGT GGT GGT TCT CAG CCG GCC ATG CGCCAG GTC CAG CTG CAG CAG引物4CCC AAG CTT GTG AGG AGA CTG TGA GAG TGG TGC C在引物1的5’端加上EcoRI酶切位点，引物4的3’端加上HindIII酶切位点。从所构建的pMD-18T19-VH及pMD-18T19-VL载体，应用PCR扩增VH，VL片段，回收后，经重叠延伸拼接法通过PCR扩增抗CD19ScFv基因片段，见图2。纯化后的PCR产物经EcoRI+HindIII处理后再与经EcoRI+HindIII处理后的携带有(His)6标签的pET28a(+)载体连接(16℃连接过夜)。组成pET28a的抗CD19-ScFv的表达载体，见图3。测序表明，抗CD19ScFv基因片段为750bp，按氨基酸序列推测ScFv约为27KD的蛋白。测序正确的克隆用于蛋白表达。
3.抗CD19ScFv抗体片段的表达、纯化及复性(1)用构建的PET28a(+)-CD19ScFv质粒转化大肠杆菌BL21，并在含有50μg/ml卡那霉素的LB平板(1％agar)上筛选转化子。挑取经鉴定正确的单克隆活化后，37℃震荡培养至OD600＝0.7-0.9，加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L，37℃诱导表达5小时，取100μl菌液，离心后用100μl 1×SDS上样buffer重悬，100℃煮沸5min。取20μl上样，10％SDS-PAGE电泳检测表达蛋白，考马斯亮蓝染色。实验证明重组质粒pET28a(+)ScFv在大肠杆菌中经IPTG诱导有重组蛋白表达，750bp片段表达出约29Kd的带(His)6的重组蛋白，见图4。
(2)抗CD19单链抗体(ScFv)纯化将表达的菌体沉淀重悬于1/30培养体积的预冷50mmol/L Tris-HCl、100mmol/L NaCL、1mmol/L EDTA、pH7.0溶解。反复冻融3次后超声破碎细菌，4℃，30000g离心30分钟。沉淀中加入1/30培养体积的3M尿素和50mmol/L Tris-HCl(pH7.0)溶解后30000g离心30分钟。4℃收集包涵体。用1/40培养体积的6M盐酸胍和0.1MTris-HCl，pH7.0，于4℃摇动过夜溶解包涵体。4℃，30000g离心30分钟去处沉淀，上清用于纯化。镍柱购于Novagen公司，用3倍柱床体积的Startbuffer(6M盐酸胍，0.1M Tris-HCl，pH7.0)平衡镍柱后上样，20倍柱床体积、pH为7.0的6M尿素、50mmol/L Tris-HCl和50mmol/L咪唑洗柱，分别用4倍柱床体积的含有250mmol/L咪唑、6M尿素和50mmol/L Tris-HCl洗脱结合在镍柱上的ScFv。
(3)SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定纯化产物经10％SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝R250染色，证实纯化后得到分子量为约30Kd的单一条带。进一步用Western blot验证，具体方法参考分子克隆，其中以抗His-tag抗体(IgG)为一抗与抗CD19-ScFv融合蛋白上的(His)6标签结合，进行Western blot反应。结果证实纯化条带为目的蛋白表达产物，见图5、图6。
(4)CD19ScFv的复性将洗脱的样品在TEA缓冲液(0.4M精氨酸-HCL，0.1MTris-HCl，2mmol/L EDTA，pH7.0)缓慢透析复性，4℃过夜。
4.BCA法测定蛋白质的浓度(1)配制蛋白测定反应液，取A液(BCA二钠，1％；Na2CO3·H2O，2％；酒石酸钠，0.16％；NaOH，0.4％；NaHCO3，0.95％；pH11.25)1ml加入B液(CuSO4·5H2O，4％)20μl混匀。
(2)应液中加入50μl样品蛋白溶液，及蛋白标准液(不同浓度的牛血清白蛋白)混匀，于37℃水浴中反应30分钟。
(3)取各管的反应液于562nm波长进行光吸收分析，并绘制标准蛋白浓度于光吸收值(OD)的线性图，根据标准蛋白的OD-蛋白浓度关系，计算蛋白样品的浓度。复性后抗CD19ScFv蛋白浓度为85.71μg/ml.
5.抗CD19 ScFv抗体活性测定——竞争试验取CD19表达阳性的Nalm6细胞系，制成1×106细胞悬液，加样于40孔细胞培养板，5×105细胞/孔。阴性对照组加100μl人AB血清，4℃孵育1h，3000rpm，4℃离心8min，弃上清液，PBS洗细胞2次，加鼠源性IgG 20μl(1mg/ml)；阳性对照组于人AB血清封闭1小时后加入抗CD19单克隆抗体HI19a工作液20μl；试验组加人AB血清封闭后先加100μl抗CD19ScFv，4℃孵育1h，3000rpm，4℃离心8min，弃上清液，PBS洗细胞2次，再加抗CD19单克隆抗体HI19a 20μl(1mg/ml)，4℃孵育1h，3000rpm，4℃离心8min，弃上清液，PBS洗细胞2次。三组细胞分别重悬于PBS中，加入20μl羊抗鼠IgG-FITC二抗，4℃孵育45min，PBS洗去未结合的荧光抗体，流式细胞仪检测单克隆抗体HI19a与Nalm6细胞系结合的阳性率。
阳性对照组中Nalm6细胞与单抗HI19a结合阳性率为92.64％，实验组中的Nalm6细胞经抗CD19 ScFv竞争结合后，与HI19a结合的阳性率为55.17％，表明抗CD19 ScFv可竞争性抑制HI19a与Nalm6细胞系结合，即抗CD19 ScFv能够与Nalm6细胞系表面CD19抗原特异性结合，见图7a、7b、7c、7d。
6.抗CD19ScFv抗体活性测定——解离常数测定(1)在96孔酶标板中加入100μl Nalm6细胞裂解液，37℃包被2小时；(2)甩去包被液，以PBS(含0.05％Tween-20)洗3次，加入封闭液(PBS含3％牛血清白蛋白，10％羊血清)封闭2h后甩去封闭液，PBS洗涤3次。
(3)一式二孔加入100μl 1∶4倍比稀释的CD19ScFv，以3％的牛血清白蛋白溶液作对照，37℃孵育2h。
(4)除去反应液后以PBS洗涤三次，加入抗His-tag单抗(1∶2000稀释，0.1μg/ml)，37℃孵育2h。
(5)甩去第一抗体溶液，PBS洗三次后加入辣根过氧化物酶偶联羊抗鼠IgG(1∶1000稀释)，37℃孵育2h。
(6)甩去反应液，PBS洗三次后，加显色液(OPD，H2O2)反应约10分钟以2N H2SO4终止反应，用酶标仪(Vamed Engineering，Austria)测定各孔OD492nm吸光值。每个ScFv浓度的光吸收值取均值。
(7)解离常数计算将数据代入ΔA＝ΔAMAX×L/(Kd+L)即ΔA＝-Kd×ΔA/L-ΔAMAX(ΔA为实验组与对照组的OD值的差，L为加入的重组的CD19ScFv的浓度。回归分析，计算解离常数Kd值，Kd＝1.7×10-8mol/L(R2＝0.99)，见图8。
SEQUENCE LISTING(序列表)<110>中国医学科学院血液学研究所<120>用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体及其用途<160>4<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>366<212>DNA<213>Mus musculus(小鼠)
<220>
<221>V_region<222>(1)..(366)<400>1caggtccagc tgcagcagtc tggggctgag ctggtgaggc ctgggtcctc agtgaagatt 60tcctgcaagg cttctggcta tgcattcagt agctactgga tgaactgggt gaagcagagg120cctggacagg gtcttgagtg gattggacag atttatcctg gagatggtga tactaactac180aatggaaagt tcaagggtca agccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240atgcagctca gcggcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaaagacc300attagttcgg tagtagattt ctactttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc360tcctca 366<210>2<211>324<212>DNA<213>Mus musculus(小鼠)<220>
<221>V_region<222>(1)..(324)<400>1gacattgtgc tcacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60tcacctgcaa ggccagtcag aatgtgggta ctaatgtagc ctggtatcaa cagaaaccag120gacaatctcc taaaccactg atttactcgg caacctaccg gaacagtgga gtccctgatc180gcttcacagg cagtggatct gggacagatt tcactctcac catcactaac gtgcagtcta240aagacttggc agactatttc tgtcaacaat ataacaggta tccgtacacg tccggagggg300ggaccaagct ggaaataaaa cggg 324
<210>3<211>122<212>PRT<213>Mus musculus(小鼠)<220>
<221>PEPTIDE<222>(1)..(122<400>3Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser1 5 10 15Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr20 25 30Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe50 55 60Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys85 90 95Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp100 105 110Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser115 120<210>4<211>108<212>PRT<213>Mus musculus(小鼠)<220>
<221>PEPTIDE<222>(1)..(108)<400>4Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn20 25 30Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile35 40 45Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser65 70 75 80Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr85 90 95Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg100 10权利要求
1.一种用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体，其特征是含有SEQ ID NO.1所述的抗CD19单克隆抗体HI19a重链可变区VH基因核苷酸序列和SEQ ID NO.2所述的抗CD19单克隆抗体HI19a轻链可变区VL基因核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体，其特征是所述抗CD19单克隆抗体HI19a重链可变区VH基因所表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，包括含有部分或全部该序列CDRs的片段。
3.根据权利要求1所述的用于靶向结合淋巴细胞的抗CD19的工程抗体，其特征是所述抗CD19单克隆抗体HI19a轻链可变区VL基因所表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，包括含有部分或全部该序列CDRs的片段。
4.包括权利要求1的cDNA的pMD-18T载体。
5.包括权利要求1的cDNA的所构建的pET28a(+)表达载体。
6.根据权利要求5所述cDNA的所构建的pET28a(+)表达载体，其特征在于所表达的cDNA氨基酸序列，包括含有部分或全部该序列CDRs的片段。
7.根据权利要求5所述cDNA的所构建的pET28a(+)表达载体，其特征在于所述的表达载体在大肠杆菌中表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所述。
8.权利要求1、2、3、4、5、6或7所述用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体，在制备治疗白血病的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗CD19的工程抗体及其应用，为下一步研制靶向治疗白血病的基因工程药物奠定了基础。本发明涉及抗CD19单克隆抗体HI19a重链和轻链可变区基因，由所述基因编码的多肽，含有所述基因的载体及所述的基因和多肽在制备用于白血病治疗药物中的应用。重链和轻链可变区基因来自抗CD19单克隆抗体HI19a。本发明采用基因工程技术成功制备抗CD19基因工程抗体，为白血病的靶向治疗奠定了基础。
文档编号A61P35/00GK1775808SQ20041007271
公开日2006年5月24日 申请日期2004年11月15日 优先权日2004年11月15日
发明者王敏, 王建祥, 陈森, 廖小龙, 饶青, 邢海燕, 田征, 唐克晶, 林冬 申请人:中国医学科学院血液学研究所