专利名称：楤木总皂苷在制备镇痛的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药有效成份的医药用途领域。
背景技术：
痛经是指凡在妇女经期或行经前后，周期性地出现腹疼痛、坠胀、伴腰酸或其他不适，或痛引腰骶，程度严重以至影响生活和工作质量。这是一种临床常见症状，可分为原发性和继发性二种。原发性痛经常无盆腔器质性病变；继发性痛经多为生殖器官的器质性病变所致，如盆腔炎、子宫内膜移位等。前者也称功能性痛经，主要受内分泌、遗传、子宫自身条件及精神、神经等多种因素的影响。现代研究表明，子宫内膜前列腺素含量增高，可能是造成痛经的一个重要因素。排卵后在孕激素的作用下，分泌期子宫内膜能合成和释放较多的前列腺素，同时月经血中含量也增高，它作用于子宫肌层，通过降低钙与细胞膜蛋白结合能力，使细胞内游离钙增多，从而使其平滑肌收缩，甚至引起痉挛，子宫内压力增高，子宫不能放松以至子宫血流量减少导致子宫缺血、缺钙而痛经。西医对于痛经的治疗常采用口服止痛药或激素类药物，这些药物长期应用会形成成瘾性或抑制排卵等副作用，因此患者常倾向于使用中药来治疗。
中医早在汉代即对痛经有明确的认识，张仲景在《金匮要略》中认为“带下，经水不利，少腹满痛，经一月再见”。病因归结为气滞血瘀，寒凝胞中，湿热下注或气血虚弱等。根据不同的病因采取不同的药物来对症治疗。
楤木是我国传统药材，其中龙牙楤木(Aralia etata)、虎刺楤木(Araliaarmata)、长刺楤木(Aralia spinifolia)、黄毛楤木(Aralia delaisneana)、远东楤木(Aralia schmidtii)等系五加科楤木属植物。这些植物的叶、茎皮、根皮均含有楤木总皂苷，具有明显的生理活性，从楤木中提取总皂苷的方法，我们已在CN1355171A专利中公开。
发明内容
本发明的目的就是应用楤木总皂苷制备治疗镇痛的药物，克服目前西药治疗副作用大，中药复方治疗服药量大等缺点，提供一种副作用小，服用量小的单味中药提取的有效成分作为镇痛的理想药物。
当本发明用于制备镇痛的药物时，其口服或非口服给药均是安全的。在口服情况下，其可以是任何常规形式给药，如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、漂浮剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等；当该药物非口服给药时，可采用任何常规形式，例如栓剂、注射剂如静脉内注射、软膏剂、经皮给药、吸入剂等。
本发明制备镇痛的药物是由有效部位或多种有效成分单体与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。
有效物质的剂量可以根据服用方式，病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变，口服量为50-1000mg/次·人，每日三次服用栓剂用量为1g/次·人，每日一次。
其治疗作用效果是通过给动物灌胃楤木提取物，剂量为25-280mg/kg，连续五天。结果显示可拮抗小鼠二甲苯耳水肿，减少醋酸致扭体反应发生的次数，表现出明显的抗炎、镇痛抑菌及活血化瘀作用。
本发明可通过下面的实验例进一步说明。在药理实验过程中常通过整体的抗炎效果如抑制小鼠二甲苯耳水肿及体外抑菌效果来反映其对妇科盆腔炎，阴道炎等炎症的治疗作用，进而达到镇痛经作用。
实验例一、对醋酸致扭体反应的影响(1)试验材料动物昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄均可，所有动物均购于本院动物室。
药物楤木总皂苷，黄白色粉末，纯度达95％。阳性药地奥心血康由中科院成都地奥制药公司生产，用时以蒸馏水配成所需浓度混悬液，供灌胃给药。
(2)试验方法与结果取55只小鼠，随机分为五组空白对照组，地奥心血康120mg/kg剂量给药组，楤木总皂苷140、70、35mg/kg三个剂量给药组。每天一次，连续给药五天。末次给药后1小时，于小鼠腹腔注射0.7％醋酸10ml/kg，5分钟后观察10分钟内小鼠发生扭体反应的次数，结果见表1。
表1 楤木总皂苷对小鼠醋酸致扭体反应的影响(x±s)组别动物数(只) 扭体反应次数(次)空白对照组 1125.5±11.46地奥心血康120mg/kg 1114.1±8.29*楤木总皂苷140mg/kg 1116.3±7.86*楤木总皂苷70mg/kg 1119.5±7.67楤木总皂苷35mg/kg 1118.3±6.57表1中结果显示，楤木总皂苷140mg/kg剂量组可明显抑制醋酸致小鼠扭体反应的发生。
实验例二、对小鼠二甲苯耳水肿的影响(1)试验材料动物昆明种小鼠，体重18-21g，雄性，购自长春高新医学动物实验研究中心。
药物楤木总皂苷，黄白色粉末，纯度达95％。阳性药妇康宁片，河南同心堂药业有限公司生产。所有药物用时以蒸馏水配成所需浓度，供灌胃给药，对照组同时给同体积蒸馏水。
(2)试验方法与结果取55只小鼠，随机分为五组空白对照组，妇康宁片0.64g/kg剂量给药组，楤木提取物200、100、50mg/kg三个剂量给药组。每天一次，连续给药五天。末次给药后1小时于小鼠右耳滴二甲苯0.03ml/只，2小时后将动物脱臼处死后，以Φ9mm的打孔器打下左右两耳片，称重，计算两耳片重量差。结果见表2。
表2 楤木总皂苷对小鼠二甲苯耳水肿的影响(x±s)组别动物数(只) 扭体次数(次)空白对照组 11 15.8±5.62妇康宁片组0.64g/kg 11 13.1±6.44楤木总皂苷200mg/kg 11 10.5±5.50*楤木总皂苷100mg/kg 11 12.6±3.64楤木总皂苷50mg/kg 11 12.9±3.81由表2中结果可见，楤木总皂苷对小鼠二甲苯耳水肿具有明显抑制作用，表现出明显的抗炎作用。
实验例三、对血瘀大鼠血液流变性的影响(1)实验材料动物Wistar大鼠，体重200-250g，雌雄均可，所有动物均购于本院动物室。
药物楤木总皂苷，黄白色粉末，纯度达95％。阳性药银杏叶片，由三九企业集团宁波立华制药有限公司生产。所有药物用时均以蒸馏水配成所需浓度的混悬液，供灌胃给药。盐酸肾上腺素Adr注射液由北京永康制药厂生产。
仪器LIANG-100微机显示自动记录血液血浆粘度计由上海医科大学医疗仪器研究中心出品。
(2)试验方法与结果取58只大鼠，随机分为六组空白对照组，血瘀模型组，银杏叶片182mg/kg剂量给药组，楤木总皂苷100、50、25mg/kg剂量给药组。每天一次，连续给药五天。第二天给药后0.5小时于动物皮下注射0.1％Adr0.1ml/只，0.5小时后将动物置于1.5℃水中冰浴5分钟，24小时重复一次，隔24小时后再给一次Adr。末次注射Adr24小时后，灌胃楤木总皂苷。于给药后1小时，动物腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg，麻醉，然后腹主动脉采血，在血液血浆粘度计上测全血比粘度、血浆比粘度、红细胞压积及血沉。结果见表3。
表3 楤木总皂苷对血瘀大鼠血液流变学的影响 (x±s)组别动物数全血比粘度(s)血浆比粘度血沉 红细胞压积(只) 高切 低切 (s) (mm/h) (％)空白对照组8 5.0±0.72 6.3±1.291.5±0.07 6.0±0.82 39.3±1.17模型对照组105.9±1.17 8.0±2.271.7±0.11***6.7±1.25 41.4±1.43**银杏叶片组182mg/kg105.4±0.52 6.7±0.841.7±0.14 6.3±0.71 40.3±1.25楤木总皂苷100mg/kg104.5±0.43△△7.0±3.111.6±0.03△△6.0±1.16 39.8±1.40△楤木总皂苷50mg/kg 105.6±1.15 7.7±2.361.6±0.11 6.0±1.25 42.1±2.23楤木总皂苷25mg/kg 105.5±1.33 7.2±2.451.7±0.06 6.0±1.05 40.7±0.95由表3中结果可见，动物连续注射Adr，同时又受到寒冷刺激可行成血瘀症状，体内积压液流变性各项指标发生明显改变。而服用楤木总皂苷后，全血比粘度、血浆粘度和红细胞压积百分率均明显降低，与模型组有明显差异，表明其具有活血化瘀作用。
实施例四、体外抑菌作用菌种白色念珠菌[CMCC(B)98001]、生孢梭菌[CMCC(B)6491]、破伤风杆菌[CMCC(B)6406]、淋病奈瑟菌[CMCC(B)98001]、滴虫活体。
培养基普通肉汤、普通肉汤琼脂、甘露醇盐琼脂、血琼脂、巧克力琼脂、肝浸液、霉菌琼脂、生理盐水，以上培养基制备符合《中国药典2000年版》微生物限度检查法要求。
药物楤木总皂苷，黄白色粉末，纯度达95％。对照品青霉素钠由石家庄制药集团有限公司生产。
(2)试验方法与结果菌液制备将淋病奈瑟菌、生孢梭菌、破伤风杆菌、白色念珠菌分别接种于普通肉汤培养基，置37℃培养18-24小时；淋病奈瑟菌置5％CO2孵箱培养，生孢梭菌、破伤风杆菌封蜡盖置厌氧罐中培养。白色念珠菌置35℃±2℃培养18-24小时，以无菌生理盐水稀释成最终浓度为1∶10000菌液，备用。将滴虫活体加入含灭活血清及半胱氨酸还原剂青霉素250-1000U/ml、链霉素0.5mg/ml、氯霉素0.5mg/ml，pH值为5.8-6.0肝浸液培养基中，经35±2℃培养备用。
供试品制备用试管法将楤木总皂苷分别稀释到最终浓度为50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625mg/ml，将稀释各浓度的供试液分别加入备用的5种菌液中各0.1ml；另取2只盛有普通肉汤试管作空白对照和阳性对照，同时将青霉素钠按上述浓度稀释，同作空白和阳性对照。各种含药细菌按前述条件培养24小时后，记录最小抑菌浓度MIC。另外将供试品和对照药用肝浸液培养基稀释成上述各浓度，分别加入滴虫培养物0.1ml，摇匀，同时做阴性和阳性对照，同上方法培养，48小时后取出，10×40低倍镜观察结果，阳性对照管可见许多运动活泼滴虫，供试品如有最小抑菌作用，则镜下看不到滴虫活体。结果见表5。
表4 楤木总皂苷体外抑菌试验细菌名称阴阳楤木总皂苷药物浓度及MIC(mg/ml)性性502512.56.253.125 1.5625白色念珠菌 - + - - - + + +生孢梭菌- + - - - - + +破伤风杆菌 - + - - - - + +淋病奈瑟菌 - + - - + + + +滴 虫 - + - - - + + +细菌名称阴阳青霉素药物浓度及MIC(mg/ml)性性502512.56.253.125 1.5625白色念珠菌 - + - - - - - +生孢梭菌- + - - - - - +破伤风杆菌 - + - - - - - +淋病奈瑟菌 - + - - - - - +滴 虫 - + - - - - - +由表4中结果可见，楤木总皂苷对白色念珠、生孢梭菌、破伤风杆菌及滴虫均有较强的抑制作用，其MIC分别为12.5mg/ml和6.25mg/kg；对淋病奈瑟菌轻度敏感。
实验例五、毒性实验(1)急性毒性通过对小鼠和大鼠灌胃及静脉注射的LD50测定结果表明，小鼠灌胃楤木总皂苷LD50为2.34g/kg，95％可信限为1.919-2.849g/kg；大鼠灌胃楤木总皂苷LD50为2.25g/kg，95％可信限为1.979-2.555g/kg；小鼠静脉注射楤木总皂苷LD50为184.27g/kg，95％可信限为1.979-2.555g/kg；大鼠静脉注射木总皂苷LD50为184.27g/kg，95％可信限为152.082-218.827g/kg。
(2)长期毒性楤木总皂苷以800、470、235mg/kg剂量给大鼠灌胃60天，高剂量出现毒性反应，并可能有胃肠刺激性。中、低剂量对动物生长状态、血液学及血液生化学无明显影响，主要脏器亦未见药物引起的明显的病理改变，其中高剂量为临床用量的93.3倍。以161、96.8、48.8mg/kg剂量给犬口服60天，高剂量组有个别动物体重下降，开始有呕吐、拒食药物现象，而对所有动物生长状态、脏器指数及血液学、血液生物学、尿常规无明显影响，主要脏器亦无药物引起的明显病理改变。
上述结果证明楤木总皂苷具有明显的抗炎、镇痛、抑菌、活血化瘀等作用，这为临床治疗妇科炎症、镇痛提供了理论依据。
具体实施例方式
实施例一胶囊剂楤木总皂苷350g，淀粉150g，混匀，装入零号胶囊，制成1000粒，规格0.5g/粒。成人口服，1粒/次，一日三次，一个月为一疗程。
实施例二口服液楤木总皂苷1.75g，加水700ml，加热溶解，放冷，滤过，滤液加蔗糖200g，再加水至1000ml，分装，规格10ml/支。成人口服，20ml/次。一日三次，一个月为一个疗程。
实施例三栓剂楤木总皂苷1000g，甘油明胶2000g，制成1000颗，规格3g/颗。阴道给药，每晚一次，每次一颗，七天为一疗程。
权利要求
1.楤木总皂苷在制备镇痛的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及楤木总皂苷在制备镇痛的药物中的应用。属于中药有效成分的医药用途领域。本发明应用楤木总皂苷来制备镇痛的药物，克服目前西药治疗副作用大，中药复方治疗服药量大等缺点，提供一种副作用小，服用量小的单味中药提取的有效成分作为镇痛的理想药物。
文档编号A61P15/00GK1636569SQ20041008547
公开日2005年7月13日 申请日期2003年7月4日 优先权日2003年7月4日
发明者孙晓波, 徐惠波, 崔东滨, 温富春, 丁涛, 王淑琴, 张伟, 纪凤兰, 张殿文 申请人:孙晓波, 徐惠波