治疗细胞增殖性疾病、视网膜病和关节炎的化合物和方法

专利名称：治疗细胞增殖性疾病、视网膜病和关节炎的化合物和方法
技术领域：
本发明涉及化合物和它们的用途，尤其在药物工业中。本发明公开了具有抗增殖和抗血管生成活性的化合物，以及通过施用所述化合物来治疗各种与异常细胞增殖有关的疾病包括癌症、或与失控血管生成的疾病包括实体瘤生长和转移有关、眼病尤其是视网膜病、或关节炎的方法。本发明还涉及包含所述化合物的药物组合物，其更具体地用于治疗癌症、眼病和关节炎。
在发达国家，癌症仍然是死亡的主因之一，因为癌症影响所有的年龄、性别、人种和种族的群体。根据美国癌症研究协会(AmericanAssociation for Cancer Research)，美国五分之一的死亡由癌症引起。在世界范围内，最主要的癌症部位是肺(14％)、前列腺(13％)、乳腺(1l％)和结肠直肠(11％)(数据获自the Cancer Statistic Branch，NC1)。
在发达国家，尽管几种癌症如男子的前列腺癌(归因于检测程序)或肺癌(归因于预防计划)的发病率下降，但患癌率在增加。在美国，其中患癌率增长最快的是非霍奇金淋巴瘤癌和黑素瘤(每年增长3％)(The Annual Report to the Nation on the Status of Cancer，1973-1997)。
与癌症发病率不同，发达国家中癌症死亡率已下降。这一定程度上归因于较好的治疗方案，还有预防计划和某些癌症在早期的更好检测。
但是，尽管在治疗和预防癌症中有较高的成就，仍期待若干改进-减少复发的早期癌症有效疗法，-治疗标准疗法难治疗肿瘤的替代疗法，
-治疗转移性癌症的替代疗法，-毒性小的药物，和-更好的递药系统。
细胞信号通道抑制剂通过单独使用或与标准化学毒性药物(chemotoxic drug)联合使用以解决前面的三个问题，从而可以代表这种新的替代疗法。但是，由于细胞信号通道是普遍存在的，因此这些抑制剂的毒性比得上标准化学毒性药物的毒性。为降低它们的毒性并增强它们的组织特异性，可将这些抑制剂结合到适当的递药系统。
美国专利4,590,201公开了化合物CAI，一种细胞信号抑制剂。这种化合物通过影响细胞中信号处理必需的生物化学通道来抑制增殖和发炎。它是效应酶的间接阻断剂，效应酶产生诱导生长必需的第二信使。
血管生成是一种基本过程，通过它形成新血管，并且这种过程是各种正常身体活动(如生殖、发育和伤口愈合)必不可少的。尽管该过程没有被完全认识，但据信它涉及到复杂的分子相互作用，其既刺激又抑制内皮细胞(毛细血管的初生细胞)的生长。在正常条件下，这些分子似乎长期以静止状态保持微血管供应，这可能持续长至数周，或在某些情况下，长至数十年。但是当需要时(如在伤口愈合期间)，这些相同的细胞可经历快速的增殖并在5天时间内更新。
尽管血管生成在正常条件下是高度调控的过程，但许多疾病受持久的失控血管生成驱动。另外说明，失控的血管生成可直接引起特定疾病或恶化已有的病理状况。例如，眼新血管形成已被表明是失明的最常见原因，并控制大约20种眼疾病。在某些已有病症如关节炎中，新形成的毛细血管侵入关节并破坏软骨。在糖尿病中，视网膜中形成的新毛细管侵入玻璃体、出血并导致失明。实体瘤的生长和转移也与血管生成有关。已表明，例如，增大至大于2mm的肿瘤必须得到它们自身的血液供应，并通过诱导新毛细血管的生长来这样做。一旦这些新血管包埋在肿瘤中，它们就为肿瘤细胞提供进入循环的方式，并转移到远点，如肝脏、肺或骨。尽管几种血管生成抑制剂正在被研究用于治疗血管生成疾病，但存在与这些化合物中的几种有关的缺陷。例如，苏拉明是一种有效的血管生成抑制剂，但在人中造成严重的系统毒性。其它化合物如类视色素、干扰素和抗雌激素药对人类使用是安全的，但只有弱的抗血管生成效果。还有其它化合物难于制造或制造昂贵。
本发明现在涉及能提供抗细胞增殖效果，尤其是对肿瘤细胞提供抗细胞增殖效果、和还提供抗血管生成效果的一类新化合物的鉴定和表征。有利地，这些化合物将抑制或逆转各种人组织中恶性细胞表型，对正常细胞生理学有很少或没有影响，且高度有效，从而对每个患者只需要有限次数的治疗，并具有优异的生物利用度和药代动力学特性。
因此，本发明的一个方面是提供具有通式(I)的化合物，它的互变异构体、旋光异构体和几何异构体、外消旋物、盐、水合物和它们的混合物 其中R1选自 和
R2表示氢原子、包含3至6个碳原子的烷基或烯基；B表示卤原子，优选氯或氟，羟基、-O-CH2-O-CH3(MOM)基团、-O-CH2-O-CH2-CH2-O-CH3(MEM)基团、-OSO2-烷基基团或-OSi(CH3)2tBu；D表示氧原子、NR3、CR’R”或硫原子；X表示氧原子、硫原子或基团-NR4-；Y表示氧原子、硫原子或基团-NR4-；R3表示氢、烷基、羧酸酯基、酰基、甲酰胺基或SO2-烷基；R’和R”可相同或不同，表示氢原子或烷基；R4可相同或不同，选自氢原子、具有1至10个碳原子的烷基、芳基和芳烷基；“连接基团”表示(CH2)n，其中n表示包括1至10的整数，任选地被杂原子(优选N、O、S和P)或羰基、或芳基二烷基(优选二甲苯基)断开；A表示选自以下的基团 和 任选地，A被取代。
本发明的化合物可具有一个或多个不对称中心，分离的立体异构体(旋光异构体)、纯的或部分纯化的立体异构体或它们的外消旋混合物都打算包括在本发明的范围内。
本发明还涉及在药物可接受载体中包含至少一种如上所定义的化合物的药物组合物，任选地，其与另一种活性药剂联合。
药物组合物更具体地用于治疗各种与异常细胞增殖有关的疾病如癌症、或与失控血管生成有关的疾病包括实体瘤生长和转移、眼病尤其是视网膜病(包括糖尿病性视网膜病、视网膜变性疾病、年龄相关性黄斑变性(ARMD))、或关节炎。
本发明还涉及如上所定义的化合物在制造药物方面的用途，其中该药物用于治疗各种与异常细胞增殖有关的疾病如癌症、或与失控血管生成有关的疾病包括实体瘤生长和转移、眼病尤其是视网膜病(包括糖尿病性视网膜病、视网膜变性疾病、年龄相关性黄斑变性(ARMD))、或关节炎。
本发明还包括治疗与失控血管生成有关的疾病包括实体瘤的生长和转移、眼病尤其是视网膜病、关节炎、和与异常细胞增殖有关的疾病如癌症的方法，包括给需要的患者施用有效量的如上所定义的化合物。
本发明的化合物具有强的细胞增殖抑制活性，能有效减少或阻止增殖性细胞如肿瘤细胞的生长，这将在本申请中进一步描述。
优选实施方案在本申请的范围内，术语“烷基”和“烷氧基”表示包含1至10个碳原子的直链或支链饱和基团。烷氧基表示-O-烷基。
烷基可为直链或支链。具有包括1至10个碳原子的烷基的例子为甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、2-乙基己基、2-甲基丁基、2-甲基戊基、1-甲基己基、3-甲基庚基和它们的其它异构形式。优选地，烷基具有1至6个碳原子。
烯基可为直链或支链。包含3至6个碳原子的烯基的例子有1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基和它们的异构形式。
术语“芳基”包括含优选5至14个碳原子、优选6至14个碳原子的任何芳族基团，所述碳原子任选地被一个或几个选自N、O、S或P中的杂原子断开。最优选的芳基为单环或双环，并包含6至14个碳原子，如苯基、α-萘基、β-萘基、蒽基或芴基。
术语“芳烷基”一般表示连接到如上所定义的烷基上的芳基，如苄基或苯乙基。
术语“羧酸酯基”一般表示提供-COO-R基的基团，其中R表示氢原子、芳基、或优选烷基。在这点上，R3优选表示叔丁基羧酸酯基。
术语“酰基”一般表示-COR基团，其中R表示芳基、或优选烷基。在这点上，R3优选表示乙酰基、新戊酰基或苯甲酰基。
术语“甲酰胺基”一般表示-CONR’R”基团，其中R’和R”可相同或不同，如上所定义。在这点上，R3优选表示N，N-二乙基-或N，N-二异丙基-甲酰胺基团，或N-叔丁基-或N-甲基甲酰胺基团。
根据具体实施方案，A被至少一个取代基取代，取代基可选自氢原子、卤原子(优选F、Cl或Br)、羟基、(C1-C10)烷基、烯基、(C1-C10)烷酰基、(C1-C10)烷氧基、(C1-C10)烷氧基羰基(或羧酸酯基)、芳基、芳烷基、芳基羰基、单环或多环烃基、-NHCO(C1-C6)烷基、-NO2、-CN、-NR5R6或三氟(C1-C6)烷基，R5和R6彼此独立地选自氢原子、具有1至10个碳原子的烷基、芳基和芳烷基。
烷酰基为-CO-烷基，烷基如上面所定义。
术语“芳基羰基”一般表示与羰基连接的芳基，芳基如上面所定义。
术语“烷氧基羰基”一般表示与羰基连接的烷氧基，烷氧基如上面所定义。
术语“单环烃基”或“多环烃基”被理解为指具有1至20个碳原子的烃环基，所述碳原子任选地被选自N、O、S和P中的一个或多个杂原子断开。在这些单环烃基或多环烃基中，可举出环戊基、环己基、环庚基、1-或2-金刚烷基、吡喃、哌啶、吡咯烷、吗啉、二恶烷、四氢噻吩和四氢呋喃。单环烃基或多环烃基可与它连接的苯基形成芳基，如α-萘基、β-萘基或蒽基。
当连接基团表示被杂原子断开的(CH2)n时，杂原子更优选为氧原子。在这种情况下，连接基团有利地为-CH2CH2OCH2CH2-基团。当连接基团表示被羰基断开的(CH2)n时，所述连接基团可表示-(C＝O)CH2CH2CH2CH2-(优选当X为-NR4-时)。
上述基团可任选地被取代。具体地，烷基、烯基、芳基、芳烷基和单环烃基或多环烃基可任选地被一个或多个选自以下的基团取代羟基、卤原子、氰基、硝基、酯(-COO(C1-C6)烷基)、-OCO(C1-C6)烷基、酰胺(-NHCO(C1-C6)烷基或-CONH(C1-C6)烷基)、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、单环烃基或多环烃基、C＝O基、-NR5R6基或三氟(C1-C6)烷基，R5和R6如上面所定义。
三氟(C1-C6)烷基优选为三氟甲基。
根据优选的实施方案，本发明的化合物对应于通式(I)，其中-X为硫、-NH-或优选氧；和/或-Y为氧；和/或-“连接基团”表示(CH2)n，其中n为2至9，优选4至7，或间、邻或对-二甲苯基、-CH2CH2OCH2CH2-和-(C＝O)CH2CH2CH2CH2-；和/或-R1为 -CH2N(Et2)和-CH2吡咯烷、 其中D为氧、硫、-CH2-或NR3，其中R3优选表示H或烷基(所述烷基更尤其为甲基)、和-CH2-B，其中B为-O-CH2-O-CH3基或-OSO2-烷基(其中烷基优选为甲基)或卤(优选氯或氟)；和/或-R2为氢原子；和/或-A为如上所定义的取代基。
在具体实施方案中，当A为如上所定义的取代基时，至少一个取代基为卤原子，更优选氯或氟。
本发明的尤其优选的一组化合物是式(I)化合物，其中A的至少一个取代基、更优选全部取代基表示氢原子、甲基、丙基、乙氧基、卤原子、优选氯或氟、或CF3基。
当本发明的化合物为盐形式时，它们优选为药物可接受的盐。这种盐包括药物可接受的酸加成盐、药物可接受的碱加成盐、药物可接受的金属盐、铵盐和烷基化铵盐。酸加成盐包括无机酸以及有机酸的盐。合适无机酸的代表性例子包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等。合适有机酸的代表性例子包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、羟基乙酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗坏血酸、扑酸(Pamoic acid)、双亚甲基水杨酸、乙二磺酸、葡糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、羟基乙酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、高氯酸盐、硼酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、羟基萘甲酸盐、甘油磷酸盐、酮戊二酸盐等。药物可接受的无机或有机酸加成盐的其他例子包括在J.Pharm.Sci.1977，66，2中列出的药物可接受盐，该文献引入本文作为参考。金属盐的例子包括锂盐、钠盐、钾盐、镁盐等。铵盐和烷基化铵盐包括铵盐、甲铵盐、二甲铵盐、三甲铵盐、乙铵盐、羟基乙铵盐、二乙铵盐、丁铵盐、四甲基铵盐等。有机碱的例子包括赖氨酸、精氨酸、胍、二乙醇胺、胆碱等。
通过使式I的化合物与1至4当量的碱在溶剂中反应而制备药物可接受盐，所述碱为例如氢氧化钠、甲醇钠、氢化钠、叔丁醇钾、氢氧化钙、氢氧化镁等，溶剂为例如醚、THF、甲醇、叔丁醇、二恶烷、异丙醇、乙醇等。可使用溶剂的混合物。也可使用有机碱，如赖氨酸、精氨酸、二乙醇胺、胆碱、胍和它们的衍生物等。或者，通过用酸在溶剂中处理来制备在任何情况下都可应用的酸加成盐，所述酸为例如盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、fonic酸、乙酸、柠檬酸、马来酸、水杨酸、羟基萘甲酸、抗坏血酸、棕榈酸、琥珀酸、苯甲酸、苯磺酸、酒石酸等，溶剂为例如乙酸乙酯、醚、醇、丙酮、THF、二恶烷等。也可使用溶剂的混合物。
落在本发明范围内的式(I)化合物的具体例子包括下面的化合物2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT3788)5-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1593)5-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1074)5-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5810)5-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6060)
2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT9376)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT4745)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT6271)2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮盐酸盐(EHT1302)2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT5909)2-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT2168)2-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT1494)2-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7365)2-吗啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7168)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8817)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9317)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代吗啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5430)2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT7370)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3726)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4063)
4-[5-(6-吗啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8935)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5317)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5847)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4687)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3411)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0079)5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1426)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8791)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT2725)5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT2218)5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9069)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3980)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT5743)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0785)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二异丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT0566)
5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8366)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔丁基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 3664)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT4495)5-(6-(吗啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT6037)5-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0371)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT1864)5-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT0434)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT9358)4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT2580)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT9241)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT8560)5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0872)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5575)5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1006)5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8883)
5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6892)尤其优选的化合物是EHT9241，它的游离碱EHT7365、EHT8560、EHT1864，它的游离碱EHT7168和EHT5743。
可通过本领域技术人员已知的各种方法来制备本发明的化合物。更优选地，进行了几种化学路线。
第一种(流程

图1)涉及结构C中包括的化合物，其可从化合物A开始以两个步骤得到(如Miyano，M.；Deason，J.R.；Nakao，A.；Stealey，M.A.；Villamil，C.I.；等人在J.Med.Chem.1988；31，1052-1061中所述)。
流程图1可在烷基化条件下处理化合物A，优选在溶剂如DMF或THF中使用碱如碳酸铯(Cs2CO3)或NaH、和二卤代烷烃或二卤代芳烷烃，在5℃和100℃之间的温度、典型地在约80℃下进行(步骤a)(表1)。
得到的式B的烷基化产物(1-5)可被取代以在反应(步骤b)中得到式C的化合物，反应(步骤b)涉及到碱如NaH或碳酸铯、和亲核试剂，亲核试剂如表2中所描述的4-喹啉醇、4-喹啉-硫醇、7-苯并[b]噻吩醇、7-丙基-喹啉-8-醇的非取代或取代衍生物。优选的溶剂为DMF、THF或DMSO，反应在25℃和100℃之间的温度下进行。
表1 表2
第二化学路线(流程图2)使用EHT9376化合物，其可在甲醇中用酸源(MeOH，HCl)如Dowex树脂50WX8-200在5℃和30℃之间的温度、典型地约25℃下被去保护至相应的醇EHT1302(盐酸盐)。
流程图2在第三化学路线(流程图3)中，可用碱如碳酸铯和1，5-二溴戊烷的二甲基甲酰胺溶液在50℃下由甲硅烷化醚6(6由Sefkow，M.；Kaatz，H.在Tetrahedron Lett，1999，40，6561-6562中描述)制备中间体7(流程图3)。
可使用氢化钠、7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇的二甲基甲酰胺溶液在室温下由中间体7制备衍生物8。随后使用正四丁基氟化铵(TBAF)的四氢呋喃溶液在室温下去保护甲硅烷化醚8，得到醇EHT5909(流程图3)。
可利用氢化钠和甲基氯甲基醚的四氢呋喃溶液在室温下由醇EHT5909得到MOM衍生物EHT2168。可分别使用甲磺酰氯和三乙胺的二氯甲烷溶液在室温下或二乙基氨基三氟化硫(DAST)的二氯甲烷溶液，由醇EHT5909制备氯代、甲磺酸酯和氟代衍生物(EHT1494、9和EHT8817)(流程图3)。
流程图3a)TBDMSCl、CH2Cl2、TEA、室温。
b)Cs2CO3、DMF、二溴戊烷、50℃。
c)7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇、NaH、DMF、室温。
d)TBAF、THF、室温。
e)MOMCl、NaH、THF、室温。
f)CH3SO2Cl、TEA、CH2Cl2、室温。
g)DAST、CH2Cl2。
对于上述系列，产率通常在55-90wt％之间，更尤其在55-75wt％之间。制备式(I)化合物的这些方法代表了本申请的更多目的。
在另外的化学路线中，使用碱如碳酸铯(Cs2CO3)在5℃和100℃之间的温度、一般在大约80℃下在DMF中由5-(5-溴代戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮10制备醇11-15。通过使用1，5-二溴戊烷的DMF溶液、和使用碱Cs2CO3在110℃下烷基化曲酸制备中间体10，产率为46％(表3)。
表3醇11-15和EHT5909分别与甲磺酰氯在碱如三乙胺存在的情况下、在二氯甲烷中、在包括0℃和室温之间的温度下反应1小时到18小时，产生甲磺酸盐衍生物16-20和9(表4)。
表4
甲磺酸盐衍生物9与亲核试剂、伯胺和仲胺，分别如哌啶、硫代吗啉、二乙胺、吗啉和N-甲基哌嗪在回流下、在二氯甲烷中反应1小时到4小时，产生EHT9317、EHT5430、EHT7370、EHT7168和EHT7365(表5)。
表5类似地，甲磺酸盐衍生物16-20被亲核试剂如伯胺和仲胺(吗啉、N-甲基哌嗪、硫代吗啉、二乙胺、哌啶)取代得到EHT1426、EHT0079、EHT3411、EHT8791、EHT8935、EHT5847、EHT4867、EHT5317、EHT3726和EHT4063(表6)。
表6得到本发明化合物的最后一个优选化学路线是汇集合成在卤代烷基喹啉(表8)和合适的取代曲酸(它们的制备见表7)之间的反应得到本发明的化合物，有更好的总产率，其过程也较短。
在表7中，第一个反应是使用体系H2SO4/HBr/H2O在70℃下溴化曲酸18小时，得到如专利FR2751331所述的相应溴代衍生物21。溴代衍生物21与不同的胺(吗啉、N-甲基哌嗪或N-叔丁氧羰基-哌嗪)反应，产生相应的取代曲酸22-24。
表7在表8中，使用不同的条件得到各种取代的喹啉中间体25-33。烷基化试剂与7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇在NaH存在下、在DMF中反应，得到27和29，产率很低(12％和15％)。使用碱K2CO3/KOH、Cs2CO3或完全没有碱，利用相转移条件(CHCl3/TBAB/H2O)优化7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇的烷基化，得到25、26、28和30，产率很高(61-72％)。可在相转移条件下由7-三氟甲基-4-喹啉醇和1，2-二氯乙烷制备中间体31，观察到很少的消去产物。通过用1，5-二溴戊烷在Li2CO3存在下、在NMP中烷基化7-氯-4-喹啉醇以得到衍生物33，观察到主要为N-烷基化产物。在三乙胺和5-溴戊酰氯存在下、在CHCl3中酰化4-氨基-7-三氟甲基喹啉，以高产率(90％)得到32。
表8使用表8的卤代烷基喹啉系列和表7的取代曲酸21-24实现汇集步骤(表9)，得到本发明的相应化合物。

表9按照烷基化条件，优选在DMF中、在90℃下使用碱Cs2CO3进行，得到大多数这些最终化合物(EHT6892、EHT1864、EHT0371、EHT6037、EHT9358、EHT2580和EHT9241)，产率一般在35％-75％之间。
带有芳族间隔基的一些产物反应至较低的温度(EHT9069、EHT2725和EHT2218)。使用相转移条件(CHCl3/TBAB/H2O/Cs2CO3)，由氯代衍生物30以低产率(5％)得到EHT5575，观察到主要为消去产物。
可使用HCl气体在乙醇中的溶液在50℃下对N-叔丁氧羰基-哌嗪衍生物(EHT9358和EHT2580)去保护(表10)，得到相应的哌嗪并化合物(EHT8560和EHT0872)。
表10通过在三乙胺存在下、在CHCl3中、在20℃下，由EHT8560的游离碱开始与各种酰基氯或氨基甲酰氯、甲磺酰氯和异氰酸酯的反应，制备(表11)本发明的一系列化合物(EHT3980、EHT5743、EHT0785、EHT0566、EHT8366、EHT3664和EHT4495)，产率高(71-98％)(表11)。
表11应认识到，技术人员可根据通用知识和本申请中包含的以下指导来设计产生这些化合物的其它方法。
如上所述，本发明的又一目的涉及包含至少一种如上所定义的式(I)化合物和药物可接受载体或载体的药物组合物。
化合物可被配制成各种形式，包括固体和液体形式，如胶囊、片剂、凝胶、溶液、糖浆、混悬液、粉剂、气雾剂、软膏等。
本发明的组合物可包含生理学上可接受的稀释剂、填料、润滑剂、赋形剂、溶剂、粘合剂、稳定剂等。可在组合物中使用的稀释剂包括但不限于磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、纤维素、高岭土、甘露醇、氯化钠、干淀粉、糖粉和用于延长稀释片剂的羟丙基甲基纤维素(HPMC)。可在组合物中使用的粘合剂包括但不限于淀粉、明胶和填料如蔗糖、葡萄糖、右旋糖和乳糖。
可在组合物中使用的天然和合成胶包括但不限于藻酸钠、茄替胶、羧甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和维格姆凝胶(veegum)。可在组合物中使用的赋形剂包括但不限于微晶纤维素、硫酸钙、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁、乳糖和蔗糖。可使用的稳定剂包括但不限于多糖如阿拉伯胶、琼脂、藻酸、瓜尔胶和黄蓍胶，两性物质如明胶、和合成和半合成聚合物如卡波姆树脂、纤维素醚和羧甲基壳多糖。
可使用的溶剂包括但不限于林格氏溶液、水、蒸馏水、50％二甲亚砜的水溶液、丙二醇(无水或有水)、磷酸盐缓冲的盐水、平衡盐溶液、乙二醇和其它常规流体。
施用式(I)化合物的剂量和给药方案将随剂型、给药方式、正治疗的症状和被治疗患者的详细资料变化。因此，最好通过常规试验实时实地确定最佳治疗浓度。
本发明的化合物还可在肠内使用。口服时，本发明的化合物适合以10μg-300mg/天/kg体重的比率给药。可按一份或多份来施用所需的剂量。对于口服给药，合适的形式为例如胶囊、片剂、凝胶、气雾剂、药丸、糖衣丸、糖浆、混悬液、乳剂、溶液、粉剂和颗粒剂；优选的给药方法在于使用包含1mg至约500mg活性物质的合适形式。
本发明的化合物还可以以静脉内、皮下或肌内灌注或注射用的溶液或混悬液的形式在肠胃外给药。在这种情况下，本发明的化合物通常以约10μg-10mg/天/kg体重的比率给药；优选的给药方法在于使用每ml包含约0.01mg-1mg活性物质的溶液或混悬液。
本发明的化合物还可以以玻璃体内或眼眶后注射用的溶液或混悬液的形式在眼中给药。在这种情况下，本发明的化合物通常以约10μg-10mg/天/kg体重的比率给药；优选的给药方法在于使用每ml包含约0.01mg-1mg活性物质的溶液、混悬液或凝胶。
可按照与治疗(化学预防和治疗)各种肿瘤的其它已知抗肿瘤药或治疗眼疾病的其它已知药剂尤其是抗视网膜病药或抗关节炎药基本类似的方式使用式(I)的化合物。对于本发明的化合物，给药剂量，不管是单剂量、多剂量还是日剂量，都当然随使用的具体化合物(因为化学物效力不同)、选择的给药途径、受体大小、疾病类型(癌症，在这种情况下为肿瘤类型，关节炎，眼疾病尤其是视网膜病，在这种情况下为视网膜病类型，尤其是糖尿病性视网膜病，视网膜推行性疾病、年龄相关性黄斑变性(ARMD))和患者症状的性质而变化。对给药的剂量没有限制界限，但通常为有效量，或以活性药物的新陈代谢释放以获得其药理学和生理学效果时剂型产生的药理学活性游离形式的摩尔当量。熟悉癌症治疗领域的肿瘤学家或熟悉眼疾病、糖尿病或关节炎治疗领域的医生将不用过度试验就能确定有效施用本发明化合物的合适方案，如通过参考早期出版的关于发现具有抗肿瘤、抗血管生成和尤其是抗视网膜病或抗关节炎性质的化合物的论文。
根据另一方面，本发明涉及治疗与异常细胞增殖有关的疾病的方法，包括为需要这种治疗的患者施用有效量的至少一种如上所述具有通式(I)的化合物。
根据本发明使用的优选化合物包括如上所定义的任何小组，作为具体的例子，有下面的化合物2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT3788)5-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1593)5-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1074)5-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5810)5-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6060)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT9376)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT4745)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT6271)2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮盐酸盐(EHT1302)2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT5909)2-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT2168)2-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT1494)2-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7365)2-吗啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7168)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8817)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9317)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代吗啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5430)2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT7370)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3276)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4063)4-[5-(6-吗啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8935)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5317)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5847)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4687)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3411)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0079)5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1426)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8791)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT2725)5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT2218)5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9069)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3980)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT5743)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0785)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二异丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT0566)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8366)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔丁基哌嗪-1-甲酰胺(EHT3664)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT4495)5-(6-(吗啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT6037)5-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0371)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT1864)5-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT0434)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT9358)4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT2580)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT9241)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT8560)5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0872)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5575)5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1006)5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8883)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6892)本发明的又一个目的是使用有效量的至少一种如上所定义的式(I)化合物来制备用于治疗与异常细胞增殖有关的疾病和与失控血管生成有关的疾病的药物组合物。
由于它们的细胞增殖抑制活性，本发明的化合物适于治疗各种症状中的各种疾病。在这点上，“治疗”既包括治疗性治疗又包括预防性治疗。因此，可在疾病的非常早阶段、或早期发作前、或显著发展包括转移后使用化合物。术语“治疗”尤其指患者负担的减轻，如细胞增殖速度降低、患病增殖性细胞的破坏、血管或血管样结构形成的抑制、肿瘤质量或肿瘤大小的减少、肿瘤发展的延迟以及完全的肿瘤抑制。
与异常细胞增殖和/或与失控血管生成有关的疾病的典型例子包括癌症、再狭窄、关节炎、糖尿病、眼疾病，例如尤其是视网膜病。本发明的化合物尤其适合于治疗癌症，如实体瘤或淋巴肿瘤。具体例子包括前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、头颈癌、结肠癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤癌、白血病(急性成淋巴细胞白血病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病)和黑素瘤。
可按照各种途径施用化合物，典型地通过口服途径或通过注射，如局部或全身注射。对于治疗现有的癌症，优选肿瘤内注射。但是，也可使用其它给药途径，如肌内、静脉内、皮内、皮下等。另外，如果需要，可进行重复注射，尽管考虑化合物的效力，据信将需要有限次数的注射。
本发明的又一目的是通过在患有癌症的患者中施用有效量的如上所定义的式(I)化合物来减少癌症细胞增殖的组合物。
本发明的又一目的是通过在需要这种治疗的患者中施用有效量的如上所定义的式(I)化合物来治疗转移性癌症的组合物。
本发明的又一目的是通过在需要这种治疗的患者中施用有效量的如上所定义的式(I)化合物来治疗眼疾病的组合物。
本发明的又一目的是通过在需要这种治疗的患者中施用有效量的如上所定义的式(I)化合物来治疗关节炎的组合物。
本发明的又一目的是使用如上所定义的化合物来制备用于治疗转移性癌症或减少癌症细胞增殖的药物组合物。
本发明的又一目的是使用如上所定义的化合物来制备用于治疗眼疾病尤其是视网膜病(包括糖尿病性视网膜病，视网膜变性疾病和年龄相关性黄斑变性(ARMD))的药物组合物。
本发明的又一目的是使用如上所定义的化合物来制备用于治疗关节炎的药物组合物。
本发明的更多方面和优点将在下面的实施例中公开，这些实施例应被认为是说明性的，不限制本申请的范围。
表和图的说明表12在10％胎牛血清和1％DMSO存在下，在HMEC1、HCT116、MDA-MB-231、MCF7和NIH3T3细胞系中的6天细胞存活率分析(MTT)。将3×103至15×103个细胞接种在48孔板中的含10％FBS的生长培养基中，有或没有各种浓度的试验化合物。每3天用合适的培养基供养细胞培养物。在第6天测定细胞存活率。分析数据，并使用GraphPad Prism由剂量-响应曲线计算IC50。汇总在表中的结果为1至8个独立实验的平均值±SEM。
表13在0.5％胎牛血清和1％DMSO存在下，在HCT116和MDA-MB-231细胞系中的6天细胞存活率分析(MTT)。将7.5×104至15×104个细胞接种在48孔板中的含10％FBS的生长培养基中，有或没有各种浓度的试验化合物。每3天用合适的培养基供养细胞培养物。在第6天测定细胞存活率。分析数据，并使用GraphPad Prism由剂量-响应曲线计算IC50。汇总在表中的结果为1至2个独立实验的平均值±SEM。
表14在10％胎牛血清和1％DMSO存在下，在DLD1、HCT116、MDA-MB-231、MCF7和HeLa细胞中的3天细胞存活率分析(MTT)。将7.5×103至1.5×104个细胞接种在48孔板中的含10％FBS的生长培养基中，有或没有各种浓度的试验化合物。分析数据，并使用GraphPadPrism由剂量-响应曲线计算IC50。汇总在表中的结果为1至7个独立实验的平均值±SEM。
表15在10％胎牛血清和1％DMSO存在下，在HCT116、MDA-MB-231、NIH3T3、HepG2和初生肝细胞中的16小时细胞存活率分析(MTT)。将5×104至10×104个细胞接种在48孔板中的含10％FBS的生长培养基中，有或没有各种浓度的试验化合物。分析数据，并使用GraphPad Prism由剂量-响应曲线计算IC50。汇总在表中的结果为1至2个独立试验的平均值±SEM。
图1化合物对肌动蛋白细胞骨架影响的研究。用各种浓度的化合物处理静止Swiss 3T3细胞30分钟，然后通过在含50％H2O的培养基中培育10分钟进行渗透休克。随后固定细胞，渗透并用PhalloidinTRITC标记。在显微镜下计数100-200个细胞，评估表现出片状伪足和皱褶的细胞百分率。
图2最佳化合物在6-(A)和3-(B)天处理后的MTT分析。将细胞接种在48孔板中的含10％FBS的生长培养基中，有或没有各种浓度的试验化合物。每3天用合适的培养基供养细胞培养物。在第3或6天测定细胞存活率。分析数据，并使用GraphPad Prism由剂量-响应曲线计算IC50。数据为1至8个独立试验的平均值±SEM。
图3在软琼脂中的不锚定依赖生长分析。将5×103个细胞接种在24孔板中的含0.3％琼脂的培养基中，培养基补充有指定量的化合物。在37℃下培育7天后，拍摄每个孔的照片，并使用ImageJ图象分析软件分析。尤其是计算克隆大小和数量。使用GraphPad Prism分析数据，并计算IC50。图上显示的结果为1至3个实验的平均值±SEM。(A)对于克隆大小和数量得到的典型剂量-响应曲线。(B)显示计算的每种化合物的IC50的柱状图。
图4迁移分析。(A)REF细胞中的伤口愈合分析。在实验前48小时将7.6×104个细胞接种在盖玻片上。用化合物预处理细胞30分钟，然后使用吸管端部进行刮擦。将在处理培养基中的刮擦过的盖玻片放在与摄像机连接的恒温显微镜下。按材料和方法中所述分析影片，评估速度和细胞覆盖的总距离。柱状图代表2至4次试验的平均值±SEM。(B)在HMEC1、NIH3T3和MDA-MB-231细胞中的Boyden室迁移分析。将5×104至7.5×104个重悬浮在培养基中的细胞接种在8μm孔尺寸过滤器上面的上部Boyden盲孔(blind well)中，培养基有或没有FBS，并具有不同的化合物浓度。在下面的Boyden室中分析有或没有FBS时细胞迁移通过过滤器的能力。在16小时培育后，移去培养基并用含钙黄绿素-AM的培养基代替。标记后，用HBSS洗涤细胞，并在荧光板读出器中读取荧光。将荧光值以1％DMSO对照物得到的荧光进行归一化。作图的数据为2至4个独立实验的平均值±SEM。
图5小管生成分析(接点数)。按材料和方法中所述将2×104个细胞接种在涂有Matrigel的孔上。在7小时培育后取每个孔的照片。使用AngioSys软件定量“接点数”参数，使用GraphPad Prism分析数据用于IT50计算。值代表2至30个独立试验的平均值±SEM。
图6体内斑马鱼血管生成分析。受精20小时后(hpf)，用化合物和1％DMSO培育胚胎28小时。用NBT/BCIP给血管染色，使用Adobe Photoshop软件进行形态测量分析。对于每种条件，分析10个胚胎，结果表示为平均值±SEM。(A)剂量-响应曲线。(B)表示节间血管形成的50％抑制和最大抑制连同死亡胚胎百分率的表(见材料和方法)。
实施例实施例1至50公开了本发明化合物的合成和物理化学性质。
实施例51公开了化合物的生物活性。
总则用Avance 300(Bruker)分光计在环境温度下记录1HNMR光谱。使用装备有Waters 2525泵、Waters 2696光电二极管阵列检测器和XTerra柱(零件编号186000482，5μm，C18，4.5×50mm)的Waters自动纯化系统，通过反相高效液相色谱法(HPLC)分析化合物。使用的HPLC方法为7分钟内5％溶剂B到100％的梯度。溶剂A为具有0.05％TFA的H2O，溶剂B为具有0.05％TFA的CH3CN(方法A)。用BüchiB-545熔点测定仪测量熔点，未校正。为了分离反应产物，使用真空旋转蒸发器通过蒸发除去溶剂，水浴温度不超过40℃。
EHT3788、1593、EHT1074、EHT5810、EHT0470、EHT6060和EHT9376的制备一般过程方法A(在THF中)在装备有磁力搅拌器的25ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下连续装入1当量的NaH(在矿物油中，60％)、无水THF(10mL)、和要被去质子化的单体(250mg)。搁置反应混合物，直至看不见气体逸出(在3-5小时之间)。加入1M5-(5-溴-戊氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮1的THF(1当量)溶液，反应混合物在室温下搅拌12小时。反应混合物在真空中蒸发，用2N NaOH水溶液洗涤和/或通过二氧化硅上的闪蒸色谱法纯化粗产物。
方法B(在DMSO中)在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下连续装入1当量的NaH(在矿物油中，60％)、DMSO(5mL)和要被去质子化的单体(250mg)。在60℃下加热反应混合物3小时。在冷却至室温后，加入(一次性)5-(5-溴-戊氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮1(1当量)，并在60℃下加热反应混合物12小时。冷却后，加入50mL二氯甲烷，用H2O(4×10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤和真空蒸发。通过用2N NaOH水溶液洗涤和/或通过二氧化硅上的闪蒸色谱法纯化粗产物。
5-(5-溴-戊氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氢甲基)-4H-吡喃-4-酮 1使用在20mL DMF中的5-羟基-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(3.5g，15.5mmol)、Cs2CO3(5.04g，15.5mmol)和1，5-二溴戊烷(8.8g，36.7mmol)按照实施例11制备化合物。在90-95℃下加热密封管1小时40分钟。得到白色固体1(5.30g，91％产率)。
化合物1的结构列在下面
MW375.25；产率91％；黄色固体；Mp140.3℃。
Rf0.36(CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2).
1H-NMR(CDCl3，δ)1.53-1.84(m，12H，6xCH2)，3.52-3.57(m，1H，OCH2)，3.77-3.84(m，1H，O-CH2)，4.30(d，JBA＝14.5Hz，1H，OCH2)，4.48(s，2H，OCH2)，4.50(d，JAB＝14.5Hz，1H，OCH2)，4.70(t，J＝3.1Hz，1H，OCHO)，5.07(s，2H，BrCH2)，6.51(s，1H，-C＝CH-)，7.36-7.42(m，4H，Ar-H)，7.53(s，1H，-C＝CH-).
MS-ESI m/z(rel.Int.)374.9-376.9([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，RT＝5.73min。
实施例12-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT3788)用7-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.25g，0.12mmol)按照方法A制备化合物。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通过色谱法纯化后，得到米色(beige)固体EHT3788(0.11g，18％产率)。
化合物实施例1的结构如下 MW507.50；产率18％；米色固体。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.50-2.12(m，12H，6xCH2)，3.50-3.58(m，1H，CH2CH2O)，3.75-3.85(m，1H，CH2CH2O)，3.96(t，J＝7.0Hz，2H，OCH2)，4.27(t，J＝7.0Hz，2H，OCH2)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.52(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.73(m，1H，OCHO)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-C＝CH-)，6.83(d，J＝5.7Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，7.68(d，J＝9.6Hz，1H，Ar-H)，8.34(m，1H，Ar-H)，8.83(dd，J＝6.3Hz，J＝5.6Hz，1H，Ar-H).
实施例25-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1593)用6-氟-2-甲基-喹啉-4-醇(0.25g，1.41mmol)按照实施例11制备化合物。使用洗脱液庚烷∶EtOAc＝9∶1在硅石上通过色谱法纯化后，得到棕色油EHT1593(0.13g，19.5％产率)。
化合物实施例2的结构如下 MW471.52；产率19.5％；棕色油。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.50-2.02(m，12H，6xCH2)，2.69(s，3H，CH3)，3.50-3.58(m，1H，CH2CH2O)，3.75-3.85(m，1H，CH2CH2O)，3.68(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2)，4.21(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.53(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，5.32(m，1H，OCHO)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，6.63(s，1H，Ar-H)，7.38-7.46(m，1H，Ar-H)，7.60(s，1H，-C＝CH-)，7.74(dd，J＝6.3Hz，J＝2.7Hz，1H，Ar-H)，7.93(dd，J＝6.3Hz，J＝5.1Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)472.1([MH]+，90)，388.0(15)，295.1(100)，227.0(15)，211.1(10)，178.0(45).
HPLC方法A，检测UV 254nm，EHT1593RT＝4.62min，峰面积95.7％。
实施例35-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1074)用6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.25g，1.08mmol)按照方法B制备化合物。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通过色谱法纯化后，得到灰色固体EHT1074(0.07g，12％产率)。
化合物实施例3的结构如下 MW525.49；产率12％；灰色固体。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.50-1.92(m，8H，4xCH2)，1.92-2.12(m，4H，2xCH2)，3.52-3.59(m，1H，CH2O)，3.83-3.90(m，1H，CH2O)，3.97(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2O)，4.32(t，J＝5.7Hz，2H，OCH2O)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.53(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，OCH2O)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-CH＝)，7.06(s，1H，Ar-H)，7.56(m，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，-CH＝)，7.85(dd，J＝9.3Hz，J＝3.0Hz，1H，Ar-H)，8.16(dd，J＝9.3Hz，J＝5.1Hz，1H，Ar-H).
实施例45-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5810)用7-丙基-喹啉-8-醇(0.25g，1.33mmol)按照方法B制备化合物。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通过色谱法纯化后，得到绿色油EHT5810(0.16g，25％产率)。
化合物实施例4的结构如下 MW481.58；产率25％；绿色油。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.00(t，J＝7.2Hz，3H，Me)，1.50-1.92(m，10H，5xCH2)，1.92-2.10(m，4H，2xCH2)，2.84(t，J ＝7.2Hz，2H，＝C-CH2CH2CH3)，3.52-3.59(m，1H，CH2O)，3.83-3.90(m，1H，CH2O)，3.94(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2O)，4.32(m，J＝6.6Hz，2H，OCH2O)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.52(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，＝CCH2O)，4.73(t，J＝3.0Hz，1H，OCH2O)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-C＝CH-)，7.33(dd，J＝8.1Hz，J＝4.2Hz，1H，Ar-H)，7.33(d，JBA＝8.4Hz，1H，Ar-H)，7.50(d，JBA＝8.4Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，8.09(d，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.16(dd，J＝4.2Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H).
实施例55-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6060)用苯并[b]噻吩-7-醇(0.25g，1.66mmol)按照方法A制备化合物。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通过色谱法纯化后，得到黄色油EHT6060(0.02g，3％产率)。
化合物实施例5的结构如下
MW444.54；产率3％；黄色油。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.50-2.00(m，12H，5xCH2)，3.52-3.60(m，1H，CH2CH2O)，3.82-3.90(m，1H，CH2CH2O)，3.94(t，2H，J＝6.6Hz，OCH2)，4.27(t，J＝6.3Hz，2H，OCH2)，4.34(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.64(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.72-4.77(m，1H，OCHO)，6.52(d，J＝0.6Hz，1H，-C＝CH-)，6.70(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H)，7.53(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，7.68(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H)，8.57(d，J＝5.4Hz，1H，Ar-H).
实施例62-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT9376)用7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇(0.25g，1.09mmol)按照方法A制备化合物。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝99∶1在硅石上通过色谱法纯化后，得到黄色固体EHT9376(0.27g，47％产率)。
化合物实施例6的结构如下 MW523.57；产率47％；黄色固体；熔点＝86.4℃。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.49-1.90(m，12H，6xCH2)，3.16(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.50-3.58(m，1H，CH2O)，3.83-3.91(m，1H，CH2O)，3.91(t，J＝6.3Hz，2H，CH2O)，4.33(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.52(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.6Hz，1H，CH2O)，4.73(m，1H，OCHO)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.28(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.58(s，1H，-C＝CH-)，7.72(dd，J＝8.7Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.25(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.37(s，1H，Ar-H)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
EHT4745、EHT6271、EHT1302的合成5-(4-溴-丁氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮 2使用5-羟基-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.00g，4.42mmol)、Cs2CO3(1.58g，4.86mmol)和1，4-二溴丁烷(2.00mL，16.7mmol)按照实施例11制备化合物。在80℃下加热密封管2小时30分钟。得到白色固体2(1.14g，71％产率)。
化合物2的结构列在下面 MW361.23；产率71％；白色固体；熔点＝71.5℃。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.49-1.91(m，6H，3xCH2)，1.91-2.10(m，4H，2xCH2)，3.48(t，J＝6.5Hz，2H，BrCH2)，3.50-3.59(m，1H，OCH2)，3.76-3.88(m，1H，OCH2)，3.92(t，J＝6.1Hz，2H，OCH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.51(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.70-4.75(m，1H，OCHO)，6.50(s，1H，-C＝CH-)，7.58(s，1H，-C＝CH-).
实施例72-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT4745)在装备有磁力搅拌器的25mL圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(0.19g，0.87mmol)。连续加入无水DMF(10mL)和60％NaH在油中的分散液(35mg，0.87mmol)。30分钟后在室温下加入5-(4-溴-丁氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮2(0.30g，0.83mmol)的溶液。在室温下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物倒入200mL H2O中，用EtOAc(3×75mL)萃取。用盐水(4×250mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。在二乙醚中重结晶粗化合物，过滤后得到黄色固体EHT4745(271mg，64％产率)。
化合物实施例7的结构如下 MW508.55；产率64％；浅黄色固体；熔点＝97.3℃(分解)。
Rf0.12(AcOEt).
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.45-1.92(m，6H，3xCH2)，1.98-2.12(m，4H，2xCH2)，3.19-3.28(t，J＝6.8Hz，2H，CH2S)，3.52-3.59(m，1H，CH2O)，3.92-4.01(m，1H，CH2O)，4.32(dd，JBA＝14.4Hz，J＝0.5Hz，1H，＝CCH2O)，4.52(dd，JAB＝14.4Hz，J＝0.5Hz，1H，＝CCH2O)，4.72(t，J＝3.1Hz，2H，OCH2O)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.32(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，-C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)510([MH]+，30)，426(100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT4745RT＝5.33min，峰面积99.9％。
5-(5-溴-己氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮 3在装备有磁力搅拌器的30mL密封管中，在惰性气氛下装入5-羟基-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.50g，6.60mmol)。连续加入无水DMF(10mL)、Cs2CO3(2.30g，7.00mmol)和1，6-二溴己烷(3.20g，13.30mmol)。在60℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发DMF后，通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2)纯化粗化合物，蒸发后得到5-(6-溴-己氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮3，为油(190mg，52％产率)。
化合物3的结构如下 MW389.28；产率52％；油。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.40-1.95(m，14H，7xCH2)，3.45(t，J＝6.7Hz，2H，BrCH2)，3.52-3.64(m，1H，OCH2)，3.82-3.92(m，1H，OCH2)，3.90(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，4.36(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.56(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.74-4.79(m，1H，OCHO)，6.54(s，1H，-C＝CH-).
MS-ESI m/z(rel.Int.)389-391([MH]+，97-100).
实施例82-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT6271)在装备有磁力搅拌器的50mL圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(0.62g，2.70mmol)。连续加入无水DMF(20mL)和60％NaH在油中的分散液(110mg，2.70mmol)。30分钟后，在室温下加入5-(6-溴-己氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮3(1.00g，2.57mmol)的溶液。在室温下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物倒入200mL H2O中，用EtOAc(3×80mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝98∶2至9∶1)纯化粗化合物，在二乙醚中重结晶后得到白色固体EHT6271(370mg，33％产率)。
化合物实施例8的结构如下 MW537.59；产率33％；白色固体；熔点＝67.8℃。
Rf0.20(EtOAc).
1H-NMR(CDCl3，δ)1.56-1.90(m，14H，7xCH2)，3.13(t，J＝7.3Hz，2H，CH2S)，3.53-3.57(m，1H，O-CH2)，3.79-3，94(m，1H，O-CH2)，3.88(t，J＝6.4Hz，2H，CH2O)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.37(s，2H，CH2O)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)；8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)538.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT6271，RT＝5.80min，峰面积99.8％。
实施例92-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮盐酸盐(EHT1302)将EHT9376(40.6mg，0.0077mmol)装入装备有磁力搅拌器的5mL小瓶中。加入2mL MeOH和活性DOWEX(50W×8)(50mg)。在室温下搅拌反应混合物2小时。过滤悬浮液，用MeOH∶HCl 1M＝9∶1的溶液洗涤沉淀物。蒸发后得到粘稠浅黄色油2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮盐酸盐EHT1302(7mg，19％产率)。
化合物实施例9的结构如下 MW475.91(HCl盐)；产率19％；浅黄色油。
1H-NMR(CD3OD，δ)δ1.60-2.00(m，6H，3xCH2)，3.42(t，J＝7.1Hz，2H，CH2S)，3.83(t，J＝5.8Hz，2H，CH2O)，4.31(s，2H，CH2OH)，6.38(s，1H，-C＝CH-)，7.92(s，2H，-C＝CH-和Ar-H)，8.05(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.33(s，1H，Ar-H)，8.57(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.88(d，J＝6.0Hz，1H，Ar-H).
13C-NMR(CD3OD)176.79，170.72，166.95，148.95，144.63，144.54，136.75，136.68，136.30，128.86，127.64，126.15，122.52，120.24，120.18，118.24，111.70，70.40，61.06，32.84，29.44，28.34，26.42.
MS-ESI m/z(rel.Int.)439.95[(MH)+，100]，306.08(10).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT1302，RT＝4.63min，峰面积99.0％。
EHT5909、EHT2168、EHT1494、EHT7365和EHT7168的制备5-(5-溴-戊氧基)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮7在装备有磁力搅拌器的100mL圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-羟基-4H-吡喃-4-酮6(1.50g，5.85mmol)。连续加入无水DMF(25mL)和Cs2CO3(2.10g，6.44mmol)。5分钟后，在室温下通过注射器加入1，5-二溴戊烷(2.39mL，17.55mmol)。在50℃下加热反应混合物3小时。冷却和过滤后，在真空中除去DMF。使用洗脱液EtOAC∶环己烷＝20∶80然后30∶70，在硅石上通过色谱法纯化粗油。蒸发后，得到白色固体5-(5-溴-戊氧基)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮7(1.25g，53％产率)。
化合物7的结构如下 MW405.40；产率53％；白色固体；熔点＝65.3℃。
Rf0.65(AcOEt∶环己烷＝50∶50)。
1H-NMR(CD3Cl，δ)0.11(s，6H，2xCH3)，0.93(s，9H，3xCH3)，1.52-1.68(m，2H，CH2)，1.79-1.97(m，4H，2xCH2)，3.43(t，J＝6.7Hz，2H，CH2Br)，3.88(t，J＝6.4Hz，2H，CH2O)，4.46(s，2H，CH2OSi)，6.50(d，J＝0.5Hz，1H，-C＝CH-)，7.54(s，1H，-C＝CH).
13C-NMR(CD3Cl)174.58，166.84，147.81，139.00，111.71，69.38，62.21，33.53，32.36，28.21，25.73，24.58，18.26，-5.48.
2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮8在装备有磁力搅拌器的100mL圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(0.77g，3.37mmol)。连续加入无水DMF(20mL)和60％NaH在油中的分散液(135mg，3.37mmol)。40分钟后，在室温下通过注射器加入5-(5-溴-戊氧基)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮7(1.24g，3.06mmol)在10mL DMF中的溶液。在室温下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物倒入500mL H2O中，用EtOAc(3×150mL)萃取。用盐水(4×250mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。使用洗脱液EtOAC∶环己烷＝50∶50然后60∶40，在硅石上通过色谱法纯化粗黄色固体。蒸发后，得到黄色固体2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮8(1.27g，75％产率)。
化合物8的结构如下 MW553.71；产率75％；黄色固体。
Rf0.31(AcOEt∶环己烷＝60∶40)。
1H-NMR(CD3Cl，δ)0.11(s，6H，2xCH3)，0.93(s，9H，3xCH3)，1.60-1.78(m，2H，CH2)，1.80-1.95(m，4H，2xCH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，4.46(s，2H，CH2OSi)，6.51(d，J＝0.8Hz，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.53(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.4Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)554.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，RT＝6.57min。
实施例102-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT5909)在50mL圆底烧瓶中，在25mL THF中溶解2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮8(1.20g，2.17mmol)。通过注射器加入正四丁基氟化铵在THF中的溶液(2.38mL，2.38mmol)。在室温下搅拌反应混合物1小时。在真空中蒸发反应混合物，使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通过色谱法纯化粗产物。蒸发后得到淡黄色固体EHT5909(0.73g，77％产率)。
化合物实施例10的结构如下
MW439.11；产率77％；浅黄色固体；熔点＝133.2℃(分解，EtOAc)。
Rf0.23(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.65-1.76(m，2H，CH2)，1.77-1.95(m，4H，2xCH2)，3.14(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.86＝8.2Hz，2H，CH2O)，4.12(sbroad，1H，OH)，4.49(s，2H，CH2OH)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.54(s，1H，-C＝CH-)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.33(s，1H，Ar-H)，8.74(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
13C-NMR(CD3Cl)174.70，167.23，150.42，148.56，147.79，146.39，139.29，128.14，127.50，125.00，121.89，117.26，111.98，69.29，60.81，30.99，28.55，27.76，25.40.
MS-ESI m/z(rel.Int.)439.9(([MH]+，100)，298.08(5)，211(10)，142.9(5).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT5909 RT＝4.60min，峰面积99.9％。
实施例112-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT2168)在装备有磁力搅拌器的25mL三颈圆底烧瓶中，在氮气气氛下装入2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮EHT5909(0.10g，0.227mmol)。在室温下加入THF(6mL)和NaH(60％在油中的分散液，10mg，0.25mmol)。搅拌反应混合物5分钟后，通过注射器加入甲基氯甲基醚(18.1μl，0.24mmol，1.05当量)，并在室温下搅拌反应混合物2小时30分钟。将反应混合物倒入H2O(60mL)中，用EtOAc(3×20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，过滤并在真空中蒸发。使用洗脱液MeOH∶CH2Cl2＝2∶98在硅石上通过色谱法纯化粗产物。用真空泵蒸发并干燥后，得到白浅黄色固体EHT2168(74mg，67％产率)。
化合物实施例11的结构如下 MW483.50；产率67％；浅黄色固体；熔点＝88.1℃。
Rf0.42(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.73-1.80(m，2H，CH2-CH2-CH2)，1.82-1.98(m，4H，CH2-CH2-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.40(s，3H，MeO)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，4.37(s，2H，CH2O)，4.70(s，2H，CH2O)，6.48(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)484.1([MH]+，100)，255(5).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT2168 RT＝5.19min，峰面积99.9％。
甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9在5℃下，向2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮EHT5909(0.10g，0.23mmol)在4mL二氯甲烷的悬浮液中加入三乙胺(35μl，0.25mmol)和甲磺酰氯(19.4μl，0.25mmol)。在室温下搅拌反应混合物18小时。加入二氯甲烷(20mL)，并用10％NaHCO3水溶液(2×30mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并在真空中蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通过色谱法纯化粗产物。蒸发后得到白色固体甲磺酸4-氧代-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(83mg，69％产率)。
化合物9的结构如下 MW517.54；产率69％；白色固体；熔点＝122.1℃(分解)。
Rf0.44(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.63-1.78(m，2H，CH2)，1.80-1.95(m，4H，2xCH2)，3.11(s，3H，MeS)；3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，4.98(s，2H，CH2OH)，6.52(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.60(s，1H，C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)517.81([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝5.04min，峰面积97.0％。
实施例122-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT1494)按照EHT5909的上述过程制备化合物，除了在反应后，蒸发混合物至干并在室温下保持18小时(发生甲磺酸盐和盐酸三乙胺之间的自发反应)-通过制备性HPLC(CH3CH∶H2OTFA 1/1000梯度)纯化得到黄色固体EHT1494(43％)。
化合物实施例12的结构如下 MW457.89；产率43％；黄色固体；熔点38.2℃。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.70-2.00(m，6H，CH2)，3.26(t，J＝6.9Hz，2H，CH2S)，3.92(t，J＝5.8Hz，2H，CH2O)，4.33(s，2H，Cl-CH2)，6.50(s，1H，-C＝CH)，7.50(m，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，-C＝CH)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.33(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.59(s，1H，Ar-H)，8.92(m，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)457.9-459.8([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT1494 RT＝5.39min，纯度94.7％。
实施例132-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7365)在装备有磁力搅拌器的10mL圆底烧瓶中，在N2气氛下装入在1.5mL二氯甲烷中的甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(82mg，0.16mmol)。通过注射器加入1-甲基哌嗪(35.1μl，0.32mmol)，并在45℃下加热反应混合物2小时40分钟。蒸发反应混合物至干，在EtOAc中重结晶，用Et2O洗涤。加入40mL二氯甲烷，并依次用5％的NaHCO3(40mL)和盐水(40mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥溶液，过滤并蒸发，得到浅黄色固体EHT7365(59mg，72％产率)。
化合物实施例13的结构如下
MW521.59；产率72％；浅黄色固体；熔点112.6℃(分解)。
Rf0.26(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CD3Cl，δ)1.61-1.79(m，2H，CH2-CH2-CH2)，1.82-1.98(m，4H，CH2-CH2)，2.31(s，3H，CH3N)，2.20-2.75(m，8H，CH2-N-CH2和CH2-N(CH3)-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，CH2S)，3.37(s，2H，＝CCH2N)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，CH2O)，6.45(s，1H，-C＝CH-)，7.26(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-C＝CH-)，7.71(dd，J＝8.8Hz J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)521.9([MH]+，100)；297.9(20)，282.1(20)，229.9(30).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT7365RT＝4.12min，峰面积98.1％，杂质RT＝5.24，1.6％。
实施例142-吗啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT7168)在装备有磁力搅拌器的10mL圆底烧瓶中，在N2气氛下装入在1.8mL二氯甲烷中的甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(96mg，0.184mmol)。通过注射器加入吗啉(41μl，0.46mmol)，并在45℃下加热反应混合物3小时30分钟。蒸发反应混合物至干，在EtOAc中重结晶，用Et2O洗涤。加入40mL二氯甲烷，并依次用5％的NaHCO3(40mL)和盐水(40mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥溶液，过滤并蒸发，得到浅黄色固体EHT7168(60mg，64％产率)。
化合物实施例14的结构如下
MW508.55；产率64％；淡黄色固体；熔点＝93.3℃。
Rf0.33(EtOAc)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.72-1.74(m，2H，CH2)，1.88-1.92(m，4H，2xCH2)，2.51-2.52(m，4H，CH2-N-CH2)，3.13-3.18(t，J＝7.0Hz，2H，-SCH2)，3.36(s，2H，-NCH2)，3.72-3.73(m，4H，4H，CH2-O-CH2)，3.87-3.91(t，J＝6.0Hz，2H，O-CH2)，6.47(s，1H，-CH＝C)，7.26(m，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，-CH＝C)，7.69-7.72(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.23-8.25(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78-8.80(d，J＝4.7Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)509.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，EHT 7168RT＝4.37min，峰面积99.9％。
EHT8883和EHT1006的制备5-(7-溴-庚氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮 4使用5-羟基-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.00g，4.42mmol)、Cs2CO3(1.58g，4.86mmol)和1，7-二溴庚烷(2.5mL，14.6mmol)按照实施例11制备化合物。在80℃下加热密封管2小时30公钟。得到白色固体5-(7-溴-庚氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮4(1.40g，78％产率)。
化合物4的结构列在下面
MW403.31；产率78％；白色固体。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.25-1.92(m，16H，8xCH2)，3.40(t，J＝6.8Hz，2H，BrCH2)，3.50-3.59(m，1H，OCH2)，3.78-3.88(m，1H，OCH2)，3.85(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.51(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.70-4.75(m，1H，OCHO)，6.50(s，1H，-C＝CH-)，7.55(s，1H，-C＝CH-).
实施例155-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8883)在装备有磁力搅拌器的50mL圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(320mg，1.4mmol)。在4℃下连续加入无水DMF(10mL)和60％NaH在油中的分散液(55mg，1.4mmol)。30分钟后，在室温下加入5-(7-溴-庚氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮4(520mg，1.3mmol)在DMF(6mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物倒入150mL H2O中，用EtOAc(3×80mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝95∶5至98∶2)纯化粗化合物，得到5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT8883(310mg，43％产率)，为油。
化合物实施例15的结构如下
MW551.62；产率43％；油。
Rf0.23(CH2Cl2∶MeOH＝97∶3)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.40-1.88(m，16H，CH2)，3.12(t，J＝7.3Hz，2H，S-CH2)，3.53-3.57(m，1H，O-CH2)，3.79-3.88(m，1H，O-CH2)，3.86(t，J＝6.5Hz，2H，O-CH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.27(d，J＝5.8Hz，1H，Ar-H)，7.55(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)；8，36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，AHr-).
MS-ESI m/z(rel.int.)552.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，EHT8883 RT＝5.90min，峰面积99.2％。
5-(8-溴-辛氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮 5使用5-羟基-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(1.00g，4.42mmol)、Cs2CO3(1.58g，4.86mmol)和1，8-二溴辛烷(4.12mL，22.1mmol)按照实施例11制备化合物。在80℃下加热密封管2小时30分钟。得到白色固体5(1.40g，78％产率)。
化合物5的结构列在下面 MW417.33；产率62％；黄色油。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.25-1.92(m，18H，9xCH2)，3.40(t，J＝6.8Hz，2H，BrCH2)，3.50-3.59(m，1H，OCH2)，3.78-3.88(m，1H，OCH2)，3.85(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.51(d，JAB＝14.4Hz，1H，＝CCH2O)，4.70-4.75(m，1H，OCHO)，6.50(s，1H，-C＝CH-)，7.55(s，1H，-C＝CH-).
实施例165-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1006)在装备有磁力搅拌器的50mL圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(300mg，1.3mmol)。在4℃下连续加入无水DMF(10mL)和60％NaH在油中的分散液(53mg，1.3mmol)。30分钟后，在室温下加入5-(8-溴-辛氧基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4酮5(500mg，1.2mmol)在DMF(5mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物倒入150mL H2O中，用EtOAc(3×80mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝95∶5至98∶2)纯化粗化合物，得到白色固体5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT1006(320mg，47％产率)。
化合物实施例16的结构如下 MW565.64；产率47％；白色固体；熔点66.1℃。
Rf0.25(CH2Cl2∶MeOH＝97∶3)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.39-1.85(m，18H，CH2)，3.12(t，J＝7.3Hz，2H，S-CH2)，3.53-3.57(m，1H，O-CH2)，3.79-3.87(m，1H，O-CH2)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H，O-CH2)，4.32(d，JBA＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.4Hz，1H，O-CH2)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.27(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，7.55(s，1H，-C＝CH)，7.71(dd，J＝8.7Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)；8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.int.)566.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT1006 RT＝6.10min，峰面积99.5％。
中间体化合物10-15的制备5-(5-溴戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4酮 10在装备有磁力搅拌器的100ml圆底烧瓶中装入曲酸(2g，14.1mmol)、Cs2CO3(4.6g，14.1mmol)和DMF(12mL)。加入1，5-二溴戊烷(8.1g，35.2mmol)，并在110℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发DMF后，将反应混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(2×100mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至95∶5)纯化粗化合物，蒸发后得到棕色油5-(5-溴戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4酮10(1.9g，46％产率)。
化合物10的结构如下 MW291.14；产率46％；棕色油。
Rf0.60(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.57-1.63(m，2H，CH2)，1.81-1.94(m，4H，CH2)，3.43(t，J＝6.7Hz，2H，Br-CH2)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H，O-CH2)，4.48(s，2H，O-CH2)，6.52(s，1H，-C＝CH)，7.61(s，1H，-C＝CH).
13C-NMR(CDCl3，δ)22.28，24.50，28.10，32.29，33.61，60.56，69.27，111.44，139.24，147.58，168.28，175.03.
MS-ESI m/z(rel.Int.)291.0/293.0([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝4.5min，峰面积98.0％。
5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮 11将6-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.23g，1.08mmol)溶解在DMF(3mL)中。在室温下加入Cs2CO3(0.35g，1.08mmol)，并搅拌混合物10分钟。通过注射器加入5-(5-溴戊氧基)-2-羟基甲基-吡喃-4酮10(0.30g，1.03mmol)在DMF(2mL)中的溶液。在50℃下搅拌混合物1小时。加入水(10mL)，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(3×50mL)、盐水(3×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液(CH2Cl2∶MeOH)＝90∶10在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到黄色油5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮11(93mg，21％产率)。
化合物11的结构如下 MW423.38；产率21％；黄色油。
Rf0.2(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.70-1.81(m，2H，CH2)，1.88-2.10(m，4H，2xCH2)，3.90(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2-O)，4.20(t，2H，J＝6.4Hz，-O-CH2)，4.52(s，2H，-CH2-O)，6.52(s，1H，-CH＝C)，6.81(d，1H，J＝5.4Hz，ArH)，7.58(s，1H，-CH＝C)，7.87(dd，1H，＝8.8Hz，J＝2.0Hz，ArH)，8.14(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.51(s，1H，ArH)，)，8.80(d，1H，J＝5.3Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)423.83([MH]+，30)，210.97(100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，RT＝4.30min，峰面积88.0％。
5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮 12在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中，在70℃下搅拌7-三氟甲基-4-喹啉醇(320mg，1.5mmol)、Cs2CO3(500mg，1.5mmol)和无水DMF(3mL)。20分钟后，加入在DMF(2mL)中的5-(5-溴戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4酮10(420mg，1.4mmol)，并在75℃下搅拌反应混合物15小时。在60℃下蒸发DMF，将反应混合物倒入20mLH2O中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水(10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝98∶2至90∶10)纯化粗化合物，蒸发后得到白色固体5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮12(300mg，47％产率)。
化合物12的结构如下 MW423.38；产率47％；白色固体；熔点116.1℃。
Rf0.25(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.68-1.73(m，2H，C-CH2)，1.86-2.01(m，4H，C-CH2)，3.88(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，4.21(t，J＝6.3Hz，2H，O-CH2)，4.50(s，2H，O-CH2)，6.57(s，1H，C＝CH)，6.81(d，J＝5.3Hz，ArH)，7.57(s，1H，C＝CH)，7.65(dd，1H J＝8.7Hz，J＝1.5Hz，ArH)，8.27-8.32(m，2H，ArH)，8.76(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
13C-NMR(CDCl3，δ)22.61，28.44，28.67，60.69，68.56，69.36，102.20，111.82，119.55，121.23，122.11，123.18，123.46，126.27，131.82，139.17，147.76，152.70，161.55，167.69，174.84.
MS-ESI m/z(rei.Int.)424.0([MH]+).
HPLC方法A，检测UV 254nm，RT＝4.30min，峰面积99.5％。
4-[5-(6-羟基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯13
将4-羟基-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(0.86g，3.02mmol)溶解在DMF(10mL)中。在室温下加入Cs2CO3(0.98g，3.02mmol)，并搅拌混合物10分钟。通过注射器加入5-(5-溴戊氧基)-2-羟基甲基-吡喃-4酮10(0.86g，3.02mmol)在DMF(5mL)中的溶液。在50℃下搅拌混合物22小时。加入水(10mL)，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(3×50mL)、盐水(3×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到浅黄色泡沫4-[5-(6-羟基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯13(0.43g，31％产率)。
化合物13的结构如下 MW495.45；产率31％；浅黄色泡沫。
Rf0.5(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
MS-ESI m/z(rel.Int.)495.86([MH]+，100)。
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝4.91min，峰面积98.1％。
5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮 14将8-三氟甲基-喹啉-4-醇(0.84g，2.88mmol)溶解在DMF(5mL)中。在室温下加入Cs2CO3(0.98g，3.02mmol)，并搅拌混合物10分钟。通过注射器加入5-(5-溴-戊氧基)-2-羟基甲基-吡喃-4酮10(0.86g，3.02mmol)在DMF(5mL)中的溶液。在50℃下搅拌该混合物18小时。加入水(10mL)，并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(3×50mL)、盐水(3×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到浅黄色泡沫5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮14(0.53g，35％产率)。
化合物14的结构如下 MW423.38；产率35％；浅黄色泡沫。
Rf0.2(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
MS-ESI m/z(rel.Int.)423.89([MH]+，55)，211(100)。
HPLC方法A，检测UV254mm，RT＝4.60min，峰面积87.9％。
5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮 15将喹唑啉-4-醇(1.0g，6.84mmol)溶解在DMF(7mL)中。在室温下加入Cs2CO3(2.23g，6.84mmol)，并搅拌混合物10分钟。通过注射器加入5-(5-溴-戊氧基)-2-羟基甲基-吡喃-4酮10(1.90g，6.52mmol)在DMF(7mL)中的溶液。在50℃下搅拌该混合物2小时。加入水(150mL)，并用EtOAc(2×100mL)萃取混合物，用水(3×100mL)、盐水(3×100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到浅黄色固体5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮15(0.61g，26％产率)。
化合物15的结构如下
MW356.37；产率26％；浅黄色固体；熔点117.7℃。
Rf0.45(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.50-1.65(m，2H，CH2)，1.80-1.95(m，4H，2xCH2)，3.78(s，1H，OH)，3.86(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.03(t，2H，J＝7.3Hz，-OCH2)，4.49(d，J＝6.2Hz，2H，CH2-OH)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.57(s，1H，-CH＝C)，7.70-7.80(m，2H，ArH)，8.07(s，1H，N＝CH＝N)，8.30(dd，1H，J＝8.0Hz，J＝1.0Hz，ArH).
中间体化合物16-20的制备(5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯16在0℃下，向5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮11(93mg，0.22mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入三乙胺(37μL，0.26mmol)、甲磺酰氯(20.5μL，0.26mmol)。在室温下搅拌溶液1.5小时。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗涤溶液，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。得到浅黄色油(5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯16(100mg，90.5％产率)。
化合物16的结构如下 MW501.47；产率90.5％(粗)；浅黄色油。
Rf0.6(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.70-1.81(m，2H，CH2)，1.88-2.10(m，4H，2xCH2)，3.12(s，3H，CH3)，3.95(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2-O)，4.25(t，2H，J＝6.4Hz，-O-CH2)，4.99(s，2H，-CH2-O)，6.52(s，1H，-CH＝C)，6.84(d，1H，J＝5.4Hz，ArH)，7.62(s，1H，-CH＝C)，7.87(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，ArH)，8.14(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.51(s，1H，ArH)，8.85(d，1H，J＝5.3Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)501.83([MH]+，80)，288.94(100).
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝4.65min，峰面积81.2％。
(5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯 17在0℃下，向5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮12(240mg，0.57mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入三乙胺(96μL，0.68mmol)、甲磺酰氯(53μL，0.68mmol)。在室温下搅拌溶液1.5小时。加入二氯甲烷(50mL)，用水(3×100mL)洗涤溶液，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。得到粗黄色油(5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯17(260mg，91％产率)。
化合物17的结构如下 MW501.47；产率91％；黄色油(粗产物)。
Rf0.6(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
MS-ESI m/z(rel.Int.)501.70([MH]+，100)，288.84(80)。
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝4.57min，峰面积94.0％。
4-[5-(6-甲磺酰基氧甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯 18在0℃下，向4-[5-(6-羟基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯13(330mg，0.67mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入三乙胺(37μL，0.26mmol)、甲磺酰氯(62μL，0.80mmol)。在室温下搅拌溶液1小时。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗涤溶液，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶15在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到浅黄色油(5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯18(246mg，65％产率)。
化合物18的结构如下 MW573.54；产率65％；浅黄色泡沫。
Rf0.5(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
MS-ESI m/z(rel.Int.)573.79([MH]+，100)，527.70(30)。
HPLC方法A，检测UV 254nm，RT＝5.38min，峰面积60.1％。
(5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯 19在0℃下，向5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮14(430mg，1.02mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入三乙胺(173μL，1.21mmol)、甲磺酰氯(95μL，1.21mmol)。在室温下搅拌溶液1小时。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗涤溶液，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液(CH2Cl2∶MeOH)＝95∶5在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到浅黄色油(5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯19(188mg，37％产率)。
化合物19的结构如下 MW501.47；产率37％；浅黄色油。
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
MS-ESI m/z(rel.Int.)501.77([MH]+，95)，288.91(100)。
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝5.06min，峰面积63.1％。
(5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯20在0℃下，向5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮15(0.53g，1.49mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入三乙胺(252μL，1.78mmol)、甲磺酰氯(138μL，1.78mmol)。在室温下搅拌溶液1小时。加入二氯甲烷(50mL)，用水(2×100mL)洗涤溶液，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。得到浅黄色油(5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基甲磺酸酯20(0.64g，99％产率)。
化合物20的结构如下 MW434.46；产率99％(粗)；黄色油。
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝95∶05)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.70(m，2H，CH2)，1.80-1.88(m，4H，2xCH2)，3.11(s，3H，CH3)，3.88(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2-O)，4.04(t，2H，J＝7.3Hz，-O-CH2)，4.99(s，2H，-CH2-O)，6.52(s，1H，-CH＝C)，7.51(t，1H，J＝8.0Hz，ArH)，7.61(s，1H，-CH＝C)，7.70-7.83(m，2H，ArH)，8.09(s，1H，ArH)，8.31(d，1H，J＝8.0Hz，ArH).
EHT9317、EHT5430和EHT7370的制备实施例175-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9317)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(100mg，0.193mmol)。通过注射器加入哌啶(48μL，0.483mmol)。在45℃下搅拌混合物1.25小时。蒸发溶液至干，并加入CH2Cl2(50ml)。用5％NaHCO3水溶液(3×50mL)和盐水(2×20mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶02在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到米色固体5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT9317(86mg，88％产率)。
化合物实施例17的结构如下 MW506.59；产率88％；米色固体；熔点108.9℃。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝98∶02)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.21-1.46(m，2H，CH2)，1.57-1.62(m，4H，3xCH2)，1.69-1.76(m，2H，CH2)，1.86-1.92(m，4H，2xCH2)，2.43(t，4H，J＝4.6Hz，-CH2N)，3.15(t，2H，J＝7.2Hz，-SCH2)，3.32(s，2H，-CH2N)，3.89(t，2H，J＝6.2Hz，O-CH2)，6.44(s，1H，-C＝CH)，7.58(s，1H，-CH＝C)，7.71(dd，1H，J＝1.6Hz，J＝8.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，1H，J＝4.8Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)507.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT9317 RT＝4.36min，峰面积93.7％。
实施例185-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代吗啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5430)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(100.0mg，0.193mmol)。通过注射器加入硫代吗啉(46μL，0.483mmol)。在45℃下搅拌混合物2.5小时。蒸发溶液至干，并加入CH2Cl2(50ml)。用5％NaHCO3水溶液(3×50mL)和盐水(2×20mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶02在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到米色固体5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代吗啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT 5430(65mg，64％产率)。
化合物实施例18的结构如下 MW524.63；产率64％；米色固体；熔点105.7℃。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝98∶02)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.63-1.74(m，2H，CH2)，1.88-1.92(m，4H，CH2)，2.69-2.78(m，8H，CH2-N & CH2-S)，3.15(t，2H，J＝7.2Hz，-SCH2)，3.38(s，2H，-CH2N)，3.89(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.45(s，1H，-CH＝C)，7.56(s，1H，-CH＝C)，7.71(dd，1H，J＝1.4Hz，J＝8.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，1H，J＝4.5Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)525([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT5430RT＝4.39min，峰面积92.5％。
实施例192-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT7370)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯9(100mg，0.193mmol)。通过注射器加入二乙胺(50μL，0.483mmol)。在45℃下搅拌混合物3.5小时。蒸发溶液至干，并加入CH2Cl2(50ml)。用5％NaHCO3水溶液(3×50mL)和盐水(2×20mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶02在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮EHT7370(46mg，48％产率)。
化合物实施例19的结构如下 MW494.58；产率48％；白色固体；熔点71.2℃。
Rf0.5(CH2Cl2∶MeOH＝98∶02)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.05(t，6H，J＝7.2Hz，2xCH3)，1.65-1.75(m，2H，2xCH2)，1.88-1.93(m，4H，2xCH2)，2.58(q，J＝7.2Hz，2xCH2)，3.16(t，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，3.43(s，2H，-CH2N)，3.89(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，7.57(s，1H，-C＝CH)，7.71(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH 8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，1H，J＝4.5Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)495([MH]+，100)HPLC方法A，检测UV254nm，EHT7370 RT＝4.29min，峰面积89.0％。
EHT1426、EHT0079、EHT3411、EHT8791、EHT8935、EHT5847、EHT4867、EHT5317、EHT3726和EHT4063的制备实施例205-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT1426)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯16(100mg，0.20mmol)。通过注射器加入吗啉(44μL，0.50mmol)。在45℃下搅拌混合物18小时。冷却至室温后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤混合物。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到橙色油5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT1426(37mg，35％产率)。
化合物实施例20的结构如下 MW492.50；产率35％；橙色油。
Rf0.8(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.65-1.83(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.40-2.60(m，4H，2xCH2N-)，3.36(s，2H，-NCH2)，3.55-3.80(m，4H，2xCH2O-)，3.94(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.3Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.60(s，1H，-C＝CH)，7.86(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，ArH)，8.12(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.50(s，1H，ArH)，8.84(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
MS-ES m/z(rel.Int.)492.83([MH]+，35)，279.97(65)，213.88(100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT1426RT＝3.94min，峰面积86.0％。
实施例215-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0079)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯17(130mg，0.26mmol)。通过注射器加入1-甲基-哌嗪(75μL，0.67mmol)。在45℃下搅拌混合物3小时。冷却至室温后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤混合物。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到黄色油5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT 0079(30mg，23％产率)。
化合物实施例21的结构如下 MW505.53；产率23％；黄色油。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.68-1.83(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.31(s，3H，Me)，2.30-2.75(m，8H，4x-NCH2)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.93(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.3Hz，-CH2O)，6.46(s，1H，-C＝CH)，6，82(d，1H，J＝5.3Hz，ArH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.67(d，1H，J＝88Hz，ArH)，8.32(s，1H，ArH)，8.33(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.82(d，1H，J＝5.3Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)505.85([MH]+，55)，293(25)，213.86(100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT0079RT＝3.94min，峰面积95.0％。
实施例225-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3411)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯17(130mg，0.259mmol)。通过注射器加入吗啉(58μL，0.66mmol)。在45℃下搅拌混合物5小时。冷却至室温后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤混合物。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到无色油5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT3411(24mg，19％产率)。
化合物实施例22的结构如下 MW492.4；产率19％；无色油。
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.68-1.83(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.52(t，4H，J＝4.7Hz，2x-NCH2)，3.37(s，2H，-NCH2)，3.73(t，2H，J＝4.7Hz，2x-NCH2)，3.93(t，2H，J＝6.3，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，6.47(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.66(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.5Hz，ArH)，8.32(s，1H，ArH)，8.34(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.89(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)492.83([MH]+，70)，280(85)，213.87(100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT3411 RT＝3.93min，峰面积99.9％。
实施例234-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8791)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯18(123mg，0.215mmol)。通过注射器加入1-甲基-哌嗪(60μL，0.54mmol)。在45℃下搅拌混合物2小时。冷却至室温后，加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤混合物。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到黄色油4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯EHT8791(38mg，31％产率)。
化合物实施例23的结构如下 MW577.61；产率31％；黄色油。
Rf0.30(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.43(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)，1.57-1.71(m，2H，CH2)，1.84-2.08(m，4H，2xCH2)，2.32(s，3H，-NCH3)，2.40-2.68(m，8H，4xCH2N-)，3.39(s，2H，-NCH2)，3.89(t，2H，J＝5.9Hz，-OCH2)，4.27(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，4.42(q，2H，J＝7.1Hz，-OCH2)，6.46(s，1H，-C＝CH)，7.58(s，1H，-C＝CH)，7.66(d，1H，J＝8.3Hz，ArH)，7.70(m，1H，ArH)，8.55(s，1H，ArH)，8.67(d，1H，J＝8.3Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)577.88([MH]+，100)，287.07(25)，266.55(35).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT8791RT＝4.46min，峰面积97.6％。
实施例244-[5-(6-吗啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT8935)在二氯甲烷(3mL)中溶解4-[5-(6-甲磺酰基氧甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯18(123mg，0.214mmol)。通过注射器加入吗啉(47.3μL，0.537mmol)。在45℃下搅拌混合物3小时。加入CH2Cl2(50ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶05在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到无色油4-[5-(6-吗啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯EHT 8935(66mg，55％产率)。
化合物实施例24的结构如下 MW564.56；产率55％；无色油。
Rf0.25(CH2Cl2∶MeOH＝95∶05)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.43(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)1.57-1.71(m，2H，CH2)1.84-2.08(m，4H，2xCH2)，2.52(t，4H，J＝4.5Hz，CH2-N-CH2)，3.37(s，2H，-NCH2)3.73(t，4H，J＝4.7Hz，CH2-O-CH2)，3.89(t，2H，J＝5.9Hz，-OCH2)，4.27(t，2H，J＝7.6Hz，-CH2O)，4.42(q，2H，J＝7.1Hz，-OCH2)，6.47(s，1H，-C＝CH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.63-7.72(m，2H，ArH)，8.55(s，1H，ArH)，8.67(d，1H，J＝8.3Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)565([MH]+，100)，260(30).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT8935 RT＝4.46min，峰面积98.0％。
实施例255-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5847)在二氯甲烷(5mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(8-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯19(94mg，0.187mmol)。通过注射器加入1-甲基-哌嗪(52μL，0.47mmol)。在45℃下搅拌混合物1小时。加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝9∶1在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色泡沫5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT5847(13.6mg，15％产率)。
化合物实施例25的结构如下 MW505.44；产率15％；白色泡沫。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.58-1.81(m，2H，CH2)，1.90-2.05(m，4H，2xCH2)，2.31(s，3H，-NCH3)，2.30-2.75(m，8H，4xCH2N-)，3.37(s，2H，-NCH2)，3.92(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.24(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.45(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.50-7.60(m，2H，ArH和-C＝CH)，8.06(d，1H，J＝7.3Hz，ArH)，8.44(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，8.89(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)505.86([MH]+，95)，293(70)，213.86(100)，193.85(80).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT5847RT＝4.05min，峰面积94.7％。
实施例265-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4687)在二氯甲烷(4mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(8-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯19(94mg，0.187mmol)。通过注射器加入吗啉(41μL，0.47mmol)。在45℃下搅拌混合物3小时。加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝95∶5在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色泡沫5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT4687(46mg，50％产率)。
化合物实施例26的结构如下 MW495.20；产率50％；白色泡沫。
Rf0.3(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.68-1.82(m，2H，CH2)，1.90-2.10(m，4H，2xCH2)，2.50(m，4H，2xCH2N-)，3.36(s，2H，-NCH2)，3.73(m，4H，-CH2O)，3.93(t，2H，J＝6.2Hz，-OCH2)，4.25(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，6.82(d，1H，J＝5.2Hz，ArH)，7.50-7.60(m，2H，ArH和-C＝CH)，8.06(d，1H，J＝7.3Hz，ArH)，8.44(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，8.89(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)492.83([MH]+，50)，279.97(100)，213.86(35)，193.88(50)HPLC方法A，检测UV254nm，EHT4687 RT＝4.13min，峰面积94.4％。
实施例275-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5317)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(喹唑啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯20(100mg，0.23mmol)。通过注射器加入吡咯烷(48μL，0.575mmol)。在45℃下搅拌混合物1.5小时。加入CH2Cl2(75ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝90∶10在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到无色油5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT5317(30mg，35％产率)。
化合物实施例27的结构如下 MW409.44；产率32％；无色油。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝90∶10)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.63(m，2H，CH2)，1.82-1.93(m，4H，2xCH2)，2.54(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.74(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2N-)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.03(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，6.47(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.57(s，1H，-C＝CH)，7.69-7.80(m，2H，ArH)，8.07(s，1H，-N＝CH＝N-)，8.31(d，1H，J＝8.0Hz，ArH)..
MS-ESI m/z(rel.Int.)409.97([MH]+，100)，147(55).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT5317RT＝3.86min，峰面积90.0％。
实施例285-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3726)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(喹唑啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯20(100mg，0.23mmol)。通过注射器加入吗啉(51μL，0.575mmol)。在45℃下搅拌混合物1小时。加入CH2Cl2(50ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤溶液。用CH2Cl2(5×50mL)萃取产物。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝99∶01在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT3726(8.2mg，8.5％产率)。
化合物实施例28的结构如下 MW425.48；产率8.5％；白色固体。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝99∶01)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.63(m，2H，CH2)，1.82-1.93(m，4H，2xCH2)，2.52(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2N-)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.73(t，4H，J＝4.6Hz，2xCH2O-)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.04(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，6.46(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.57(s，1H，-C＝CH)，7.69-7.80(m，2H，ArH)，8.06(s，1H，-N＝CH＝N-)，8.31(dd，1H，J＝7.8Hz J＝0.8Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)425.9([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT3726RT＝3.86min，峰面积97.6％。
实施例295-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT4063)在二氯甲烷(3mL)中溶解甲磺酸4-氧代-5-[5-(喹唑啉-4-基氧)-戊氧基]-4H-吡喃-2-基甲酯20(100mg，0.23mmol)。通过注射器加入1-甲基-哌嗪(64μL，0.575mmol)。在45℃下搅拌混合物1小时。加入CH2Cl2(50ml)，用10％NaHCO3(3×50mL)和盐水(3×50mL)洗涤溶液。用CH2Cl2(5×50mL)萃取产物。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝99∶01在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT 4063(35mg，35％产率)。
化合物实施例29的结构如下 MW438.53；产率35％；白色固体；熔点78.2℃。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝99∶01)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.55-1.62(m，2H，CH2)，1.82-1.91(m，4H，2xCH2)，2.32(s，3H，-CH3)，2.30-2.80(m，8H，4xCH2N-)，3.38(s，2H，-NCH2)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz，-OCH2)，4.03(t，2H，J＝7.3Hz，-CH2O)，6.45(s，1H，-C＝CH)，7.48-7.55(m，1H，ArH)，7.56(s，1H，-C＝CH)，7.69-7.80(m，2H，ArH)，8.06(s，1H，-N＝CH＝N-)，8.31(dd，1H，J＝7.8Hz，J＝0.8Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)439([MH]+，100)，147(45).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT4063RT＝3.86min，峰面积93.1％。
EHT8817的制备实施例305-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8817)在二氯甲烷(5mL)中溶解2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-吡喃-4-酮EHT5909(100mg，0.23mmol)。在0℃下搅拌混合物15分钟。通过注射器加入二乙基氨基三氟化硫(DAST，33μL，0.25mmol)。在室温下搅拌混合物10分钟。蒸发溶液。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝99∶01在硅石上通过闪蒸色谱法纯化粗产物。得到白色固体5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT8817(48mg，35％产率)。
化合物实施例30的结构如下 MW441.45；产率35％；白色固体；熔点107.0℃。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝97∶03)。
1H-NMR(CDCl3，d)1.65-1.80(m，2H，CH2)，1.70-1.95(m，4H，2xCH2)，3.16(t，2H，J＝7.2Hz，-SCH2)，3.91(t，2H，J＝6.2Hz，-CH2O)，5.12(d，2H，J＝46.5Hz，-CH2F)，6.51(s，1H，-C＝CH)，7.59(s，1H，-C＝CH)，7.72(dd，1H，J＝8.8Hz J＝1.7Hz，ArH)，8.24(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.36(S，1H，ArH)，8.80(d，1H，J＝4.8Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)442([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT8817RT＝5.08min，峰面积99.9％。
中间体21-24的制备2-(溴甲基)-5-羟基-4H-吡喃-4-酮21在250mL圆底烧瓶中，向浓H2SO4(30mL)中加入5-羟基-2-(羟基甲基)-4H-吡喃-4-酮(10.0g，70.36mmol)。冷却溶液至4℃，并滴加氢溴酸(40mL)1.5小时。使用0.5N NaOH溶液捕集HBr蒸汽。在70℃下搅拌反应物18.5小时。冷却后，在连续搅拌1.5小时下加入冰(220g)，得到白色沉淀物。滤去固体，并溶解到乙酸乙酯中，用MgSO4干燥溶液，过滤并蒸发。得到浅黄色固体2-(溴甲基)-5-羟基-4H-吡喃-4-酮21(9.1g，63％产率)。
化合物21的结构如下 MW205.00；产率63％；浅黄色固体；熔点182.5℃。
Rf0.70(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
1H-NMR(CDCl3，δ)4.51(s，2H，S-CH2)，4.-8(s，2H，Br-CH2)，7.32-7.45(m，5H，ArH)，7.72(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，ArH)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.39(s，1H，ArH)，8.82(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22在装备有磁力搅拌器的250mL圆底烧瓶中装入2-(溴甲基)-5-羟基-4H-吡喃-4-酮21(5.0g，24.4mmol)、吗啉(4.3mL，48.8mmol)和乙腈(120mL)。在80C下搅拌反应混合物3小时。蒸发乙腈，用EtOAc(400mL)萃取残余物。有机层用水(20ml)、盐水(2×20ml)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。加入二乙醚(25mL)，沉淀出产物并过滤，干燥后得到白色固体5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(4.8g，72％产率)。
化合物实施例22的结构如下 MW211.21；产率72％；白色固体；熔点144.2℃。
Rf0.37(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)2.53(t，J＝4.5Hz，4H，N-CH2)，3.41(s，2H，N-CH2)，3.74(t，4H，J＝4.5Hz，O-CH2)，6.54(s，1H，-C＝CH)，6.65(s，1H，OH)，7.86(s，1H，-C＝CH).
13C-NMR(CDCl3，δ)53.4，59.7，66.6，112.2，138.6，145.8，165.2，174.3.
HPLC方法A，检测UV254nm，22RT＝1.0min，峰面积99.5％。
5-羟基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮氢溴酸盐23在装备有磁力搅拌器的250mL圆底烧瓶中装入2-(溴甲基)-5-羟基-4H-吡喃-4-酮21(0.5g，2.4mmol)、1-甲基哌嗪(0.3mL，2.4mmol)和四氢呋喃(12mL)。在75℃下搅拌反应混合物2小时。冷却反应混合物，并过滤沉淀物，干燥后得到米色固体5-羟基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮氢溴酸盐23(0.6g，83％产率)。通过在水(20mL)中加入Cs2CO3(7.3g，22.4mmol)制备铯盐。用CH2Cl2(200mL)洗涤水相，然后在40℃下蒸发水，并在真空下干燥铯盐得到白色粉末。
化合物23的结构如下
MW305.17；产率83％；米色固体；熔点208-210℃。
Rf0.15(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
铯盐的1H-NMR(D2O，δ)2.21(s，3H，N-CH3)，2.50(大信号，8H，N-CH2)，3.44(s，2H，N-CH2)，6.39(s，1H，-C＝CH)，7.72(s，1H，-C＝CH)。
HCl盐的13C-NMR(D2O，δ)42.7，49.2，53.0，57.5，114.2，142.4，144.9，164.2，176.4。
MS-ESI m/z(rel.Int.)225.0([MH]+)。
HPLC方法A，检测UV254nm，23RT＝0.7min，峰面积98％。
4-((5-羟基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯24在装备有磁力搅拌器的500mL圆底烧瓶中装入2-(溴甲基)-5-羟基-4H-吡喃4-酮(8.9g，43.4mmol)、叔丁氧基羰基哌嗪(8.5g，45.6mmol)、三乙胺(7mL，49.9mmol)和乙腈(200mL)。在90℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发乙腈，加入EtOAc(50mL)。滤出(C2H5)3N，HCl的沉淀物，并在40℃下蒸发乙酸乙酯至干。通过柱色谱法(去活化SiO2∶CH2Cl2∶三乙胺98∶2至CH2Cl2∶MeOH 95∶5，纯化∶CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至96∶4)纯化粗化合物，蒸发后得到白色粉末4-((5-羟基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯24(10.5g，78％产率)。
化合物24的结构如下 MW310.35；产率78％；白色固体；熔点146.7℃。
Rf0.55(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.46(s，9H，CH3)，2.48(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，3.43(s，2H，N-CH2)，3.46(t，4H，J＝5.1Hz，N-CH2)，6.53(s，1h，-C＝CH)，7.85(s，1H，-C＝CH).
13C-NMR(CDCl3，δ)28.4，43.6，52.9，59.5，79.9，112.0，138.2，145.8，154.6，165.5，174.2.
HPLC方法A，检测UV254nm，24RT＝3.8min，峰面积97.0％。
中间体25-33的制备4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(5g，21.8mmol)、1，5-二溴戊烷(23.7g，98.1mmol)和CHCl3(60mL)。加入TBABr(0.7g，2.2mmol)和水(40mL)，并在20℃下搅拌反应混合物48小时。将反应混合物倒入有K2CO3(3.0g，21.8mmol)的100mL H2O中，用CH2Cl2(400mL)萃取。用水(30mL)、盐水(2×30mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至98∶2)纯化粗化合物，蒸发后得到白色固体4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(5.9g，72％产率)。
化合物25的结构如下 MW378.25；产率72％；白色固体；熔点60.3℃。
Rf0.75(CH2Cl2∶EtOAc＝9∶1)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.67-1.75(m，2H，CH2)，1.81-199(m，4H，CH2)，3.14(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.44(t，J＝6.6Hz，N-CH2)，7.25(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)378.0/379.8([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，25，RT＝6.0min，峰面积99.5％。
4-[2-(2-氯-乙氧基)-乙基硫烷基]-7-三氟甲基-喹啉26在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(2g，8.7mmol)和2-氯乙醚(6.2g，43.7mmol)。然后加入Cs2CO3(2.8g，8.7mmol)、NaI(1.3g，8.7mmol)、TBABr(1.1g，3.5mmol)和水(15mL)，并在90℃下搅拌反应混合物1小时。将反应混合物倒入100mL H2O中，用CH2Cl2(2×100mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至98∶2)纯化粗化合物，蒸发后得到无色油4-[2-(2-氯-乙氧基)-乙基硫烷基]-7-三氟甲基-喹啉26(1.9g，65％产率)。
化合物26的结构如下 MW335.04；产率65％；无色油。
Rf0.85(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)3.37(t，J＝6.4Hz，2H，S-CH2)，3.64(t，J＝5.7Hz，2H，Cl-CH2)，3.79(t，J＝5.9Hz，2H，O-CH2)，3.88(t，J＝6.4Hz，2H，O-CH2)，7.36(d，J＝4.8Hz，1H，ArH)，7.72(dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz，1H，ArH)，8.26(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.37(s，1H，ArH)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)335.9/338.0([MH]+).
HPLC方法A，检测UV 254nm，26，RT＝5.3min，峰面积98.5％。
4-(2-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉27在25mL圆底烧瓶中，在10mL无水DMF中溶解7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇(1.0g，4.37mmol)，并缓慢加入NaH(60％在油中的分散液，184mg)。在室温下搅拌反应物10分钟。在50mL圆底烧瓶中，在无水DMF(10mL)中溶解1，4-双溴甲基-苯(1.27g，4.80mmol)，并在0℃下搅拌溶液10分钟。通过注射器向该溶液中加入第一溶液，并在0℃下搅拌反应物15分钟。溶液橙色变成浅黄色，在室温下搅拌混合物1.25小时。加入水(50mL)，用二乙醚((5×100mL))萃取产物。用水(3×50mL)、盐水(3×50mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液环己烷∶二乙醚＝7∶3在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体4-(2-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉27(205mg，12％产率)。
化合物27的结构如下 MW412.26；产率12％；白色固体；熔点177.4℃。
Rf0.40(环己烷∶二乙醚＝70∶30)。
1H-NMR(CDCl3，δ)4.51(s，2H，S-CH2)，4.68(s，2H，Br-CH2)，7.32-7.45(m，5H，ArH)，7.72(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，ArH)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.39(s，1H，ArH)，8.82(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)411.8/413.8([MH]+).
HPLC方法A，检测UV 254nm，27，RT＝6.32min，峰面积96.8％。
4-(3-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉28在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(3.0g，13.1mmol)、1，3-双溴甲基-苯(10.4g，39.3mmol)和CHCl3(150mL)。加入TBABr(0.5g，1.5mmol)和水(12mL)，并在20℃下搅拌反应混合物15小时。将反应混合物倒入有K2CO3(1.8g，13.1mmol)的10mL H2O中，用CH2Cl2(400mL)萃取。用水(30mL)、盐水(2×30mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。加入二乙醚(150mL)，沉淀双烷基化产物并滤出。蒸发滤液，通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至96∶4)纯化粗化合物，蒸发后得到白色固体4-(3-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉28(3.3g，61％产率)。
化合物28的结构如下 MW412.27；产率61％；白色固体；熔点211.1℃。
Rf0.45(CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)4.32(s，2H，S-CH2)，4.47(s，2H，Br-CH2)，7.27(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.32-7.39(m，1H，Ar-H)，7.47(s，1H，Ar-H)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，H，Ar-H)，8.75(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI(rel.Int.)411.8/412.9([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，28，RT＝6.2min，峰面积99.7％。
4-(4-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉29在25mL圆底烧瓶中，在8mL无水DMF中溶解7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇(1.0g，4.37mmol)，并缓慢加入NaH(60％在油中的分散液，184mg)。在室温下搅拌反应物10分钟。在50mL圆底烧瓶中，在无水DMF(10mL)中溶解1，4-双溴甲基-苯(1.27g，4.80mmol)，并在0℃下搅拌溶液10分钟。通过注射器向该溶液中加入第一溶液，并在0℃下搅拌反应物15分钟。溶液橙色变成浅黄色，在室温下搅拌混合物2小时。加入水(50mL)，用二乙醚(5×100mL)萃取产物。用水(3×50mL)、盐水(3×50mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。使用洗脱液环己烷∶二乙醚＝7∶3在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体4-(4-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉29(265mg，15％产率)。
化合物29的结构如下
MW412.26；产率15％；白色固体；熔点196.7℃。
Rf0.40(环己烷∶二乙醚＝70∶30)。
1H-NMR(CDCl3，δ)4.34(s，2H，S-CH2)，4.48(s，2H，Br-CH2)，7.28(d，J＝4.8Hz，1H，ArH)，7.32-7.45(m，4H，ArH)，7.71(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，ArH)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.37(s，1H，ArH)，8.76(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)411.8/413.8([MH]+).
HPLC方法A，检测UV 254nm，29，RT＝6.22min，峰面积95.0％。
4-(2-氯乙硫基)-7-(三氟甲基)喹啉30在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中装入7-三氟甲基-4-喹啉-硫醇(800mg，3.5mmol)和1，2-二氯乙烷(10.4g，10.5mmol)。然后加入TBABr(600mg，1.7mmol)、K2CO3(500mg，3.5mmol)、KOH(500mg，0.7mmol)和水(2mL)，并在20℃下搅拌反应混合物5小时。将反应混合物倒入100mL H2O中，用CH2Cl2(150mL)萃取。用水(30mL)、盐水(2×10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2至55)纯化粗化合物，蒸发后得到米色固体4-(2-氯乙硫基)-7-(三氟甲基)喹啉30(680mg，67％产率)。
化合物30的结构如下 MW291.72；产率67％；米色固体；熔点96.2℃。
Rf0.60(CH2Cl2∶EtOAc＝8∶2)。
1H-NMR(CDCl3，δ)3.49-3.54(m，2H，S-CH2)，3.76-3.91(m，2H，Cl-CH2)，7.33(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.75(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.25(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.39(s，1H，Ar-H)，8.85(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)291.9/293.9([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，30，RT＝5.6min，峰面积99.5％。
4-(2-氯乙氧基)-7-(三氟甲基)喹啉31在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中装入7-三氟甲基-4-喹啉醇(500mg，2.3mmol)和1，2-二氯乙烷(11.6g，11.7mmol)。加入TBABr(370mg，1.2mmol)、K2CO3(950mg，6.9mmol)、KOH(760mg，11.5mmol)和水(6mL)，并在70-80℃下搅拌反应混合物5小时。将反应混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(150mL)萃取。用水(30mL)、盐水(2×10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶EtOAc＝5∶5)纯化粗化合物，蒸发后得到米色固体4-(2-氯乙氧基)-7-(三氟甲基)喹啉31(150mg，25％产率)。
化合物31的结构如下 MW275.65；产率25％；米色固体；熔点56.2℃。
Rf0.25(CH2Cl2∶EtOAc＝5∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)4.00(t，J＝5.6Hz，2H，Cl-CH2)，4.49(t，J＝5.6Hz，2H，O-CH2)，6.82(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.35-8.39(m，2H，Ar-H)，8.85(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)275.9/277.8([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，31，RT＝4.5min，峰面积99.0％。
5-溴-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺32在装备有磁力搅拌器的10ml圆底烧瓶中装入4-氨基-7-三氟甲基喹啉(120mg，0.56mmol)、三乙胺(170mg，1.7mmol)和CHCl3(4mL)。加入5-溴戊酰氯(140mg，0.7mmol，在CHCl3(2mL)中)，并在20℃下搅拌反应混合物15小时。将反应混合物倒入10mL H2O中，用CH2Cl2(100mL)萃取。用盐水(2×10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至98∶2)纯化粗化合物，蒸发后得到米色固体5-溴-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺32(190mg，90％产率)。
化合物32的结构如下 MW375.18；产率90％；米色固体；熔点135.3℃。
Rf0.65(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.83-1.99(m，4H，CH2)，2.48-2.64(m，2H，COCH2)，3.40-3.58(m，2H，Br-CH2)，7.53(dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz，1H，Ar-H)，7.98(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.13(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.22(s，1H，Ar-H)，8.76(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，8.93(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
13C-NMR(CDCl3，δ)23.8，31.8，33.0，36.4，113.7，121.7，121.8，122.2，125.3，127.4，131.2，140.9，147.5，152.0，172.1.
HPLC方法A，检测UV254nm，32，RT＝5.1min，峰面积95％。
4-(5-溴戊氧基)-7-氯喹啉33在装备有磁力搅拌器的100ml圆底烧瓶中装入7-氯-4-喹啉醇(2g，11.1mmol)、Li2CO3(1.7g，22.3mmol)和NMP(16mL)。加入1，5-二溴戊烷(13.5g，55.7mmol)，并在90℃下搅拌反应混合物1小时。将反应混合物倒入100mL H2O中，用EtOAc(300mL)萃取。用水(30mL)、盐水(2×30mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。加入1M HCl的二乙醚溶液(15mL，15mmol)，沉淀双烷基化产物并滤出。将沉淀物溶解在有K2CO3(1.5g，11.1mmol)的H2O中，用EtOAc(300mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并在30℃下蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至95∶5)纯化粗化合物，蒸发后得到白色固体4-(5-溴戊氧基)-7-氯喹啉33(0.45g，12％产率)。
化合物33的结构如下 MW328.63；产率12％；白色固体；熔点63.3℃。
Rf0.80(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)；1.63-1.71(m，2H，CH2)，1.85-1.99(m，4H，CH2)，3.44(t，J＝6.7Hz，2H，Br-CH2)，4.08(t，J＝6.3Hz，2H，O-CH2)，6.59(d，J＝5.3Hz，1H，Ar-H)，7.37(dd，J＝8.9Hz，J＝2.0Hz，1H，Ar-H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H，Ar-H)，8.04(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，8.65(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H).
13C-NMR(CDCl3，δ)24.7，27.9，32，3，33.5，68.2，100.8，119.7，123.4，126.2，127.7，135.4，149.5，152.4，161.3.
MS-ESI m/z(rel.Int.)328.0/329.9([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，33，RT＝5.0min，峰面积99.5％。
EHT5575、EHT6892、EHT1864、EHT0371、EHT6037、EHT9069、EHT2725、EHT0434、EHT2218、EHT9358、EHT2580和EHT9241的制备实施例315-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT5575)在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中装入5-羟基-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-吡喃-4-酮(360mg，1.6mmol)、Cs2CO3(520mg，1.6mmol)、TBABr(90mg，0.3mmol)、水(2mL)和CHCl3(5mL)。加入4-(2-氯乙硫基)-7-(三氟甲基)喹啉30(230mg，0.8mmol)，在20℃下搅拌反应混合物15小时。将反应混合物倒入20mL H2O中，用CH2Cl2(2×25mL)萃取。用盐水(10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；EtOAc)纯化粗化合物，蒸发后得到糊状产物EHT5575(20mg，5％产率)。
化合物实施例31的结构如下 MW481.48；产率5％；糊状产物。
Rf0.25(EtOAc)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.74-1.83(m，6H，CH2)，3.52-3.60(m，2H，S-CH2和1H，O-CH2)3.78-3.86(m，1H，O-CH2)，4.28-4.35(m，2H，O-CH2和1H，O-CH2)，4.52(d，JAB＝14.5Hz，1H，O-CH2)，4.72(t，J＝3.0Hz，1H，CH)，6.54(s，1H，C＝CH)，7.44(d，J＝4.8Hz，ArH)，7.68(s，1H，C＝CH)，7.73(dd，1H J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，ArH)，7.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.38(d，1H，ArH)，8.83(d，.1H，J＝4.8Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)481.9([MH]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT5575，RT＝5.20min，峰面积98.5％。
实施例325-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT6892)在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中，在40℃下搅拌5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(130mg，0.6mmol)、Cs2CO3(200mg，0.6mmol)和无水DMF(5mL)。30分钟后，加入4-(2-氯乙氧基)-7-(三氟甲基)喹啉31(140mg，0.5mmol)和NaI(80mg，0.5mmol)，在90℃下搅拌反应混合物3小时。蒸发DMF，将反应混合物倒入20mLH2O中，用EtOAc(3×40mL)萃取。用盐水(10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至95∶5)纯化粗化合物，蒸发后得到白色固体EHT6892(100mg，35％产率)。
化合物实施例32的结构如下 MW450.41；产率35％；白色固体；熔点125.6℃。
Rf0.27(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)2.52(t，J＝4.6Hz，2H，N-CH2)，3.38(s，2H，N-CH2)，3.73(t，J＝4.5Hz，2H，O-CH2)，4.53-4.58(m，4H，S-CH2，O-CH2)，6.51(s，1H，C＝CH)，6.87(d，J＝5.2Hz，ArH)，7.65(dd，1H J＝8.8Hz，J＝1.5Hz，ArH)，7.79(s，1H，C＝CH)，8.29-8.32(m，2H，ArH)，8.83(d，1H，J＝5.2Hz，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)451.0([MH]+)HPLC方法A，检测UV254nm，EHT6892，RT＝3.70min，峰面积98.5％。
实施例335-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT1864)在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(2.5g，12.0mmol)、Cs2CO3(3.9g，12.0mmol)和无水DMF(40mL)。加入4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(3.8g，10.0mmol)和NaI(0.2g，1.3mmol)，在90℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发DMF后，将反应混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(2×200mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至94∶6)纯化粗化合物，蒸发后得到纯固体(4.4g，88％产率)。将化合物溶解在EtOH(150mL)中，然后加入1M HCl的EtOH溶液(22mL，21.6mmol)，并在20℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发EtOH后，在真空中干燥盐酸盐化合物并在乙醇(50mL)中结晶得到白色粉末EHT1864(3.35g，58％产率)。
化合物实施例33的结构如下 MW581.47；产率58％；白色粉末；熔点217.7℃。
Rf0.40(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.62-1.64(m，2H，CH2)，1.76-1.87(m，4H，CH2)，3.10-3.38(m，4H，N-CH2)，3.42(t，J＝6.6Hz，2H，S-CH2)，3.85-3.91(m，6H，O-CH2)，4.34(s，2H，N-CH2)，6.77(s，1H，C＝CH)，7.88(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，8.08(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，8.21(s，1H，C＝CH)，8.45(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.67(s，1H，ArH)，9.06(d，J＝5.5Hz，1H，Ar-H)，11.15(s，1H，NH+)，12.25(s，1H，NH+).
MS-ESI m/z(rel.Int.)509.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT1864，RT＝4.40min，峰面积99.9％。
分析(C25H27F3N2O4S.2HCl)；C、H、N、S计算值，51.64、5.03、4.82、5.51，试验值，51.18、5.06、4.83、5.31。
实施例345-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0371)在装备有磁力搅拌器的30ml密封管中，在惰性气氛下装入5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(350mg，1.7mmol)、Cs2CO3(550mg，1.7mmol)和无水DMF(5mL)。加入4-[2-(2-氯-乙氧基)-乙基硫烷基]-7-三氟甲基-喹啉26(480mg，1.4mmol)和NaI(210mg，1.4mmol)，在90℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发DMF后，将反应混合物倒入50mL H2O中，用CH2Cl2(3×50mL)萃取。用盐水(2×10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.4∶0.6至97∶3)纯化粗化合物，蒸发后得到浅黄色油EHT0371(400mg，56％产率)。
化合物实施例34的结构如下 MW510.53；产率60％；浅黄色油。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH∶95∶5)。
1H-NMR(DMSO d6，δ)2.51(t，J＝4.6Hz，2H，N-CH2)，3.33(s，2H，N-CH2)，3.38(t，J＝6.3Hz，2H，S-CH2)，3.72(t，J＝4.6Hz，2H，O-CH2)，3.86-3.94(m，4H，O-CH2)，4.11(m，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.37(d，J＝4.8Hz，1H，ArH)，7.69(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，ArH)，8.25(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.36(s，1H，ArH)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
13C-NMR(DMSO d6，δ)31.1，53.5，59.6，66.7，69.0，69.6，69.7，114.9，117.7，121.9，125.0，125.6，127.7，128.1，131.6，141.3，146.6，147.6，147.7，150.6，164.2，174.4.
MS-ESI m/z(rel.Int.)511([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT0371，RT＝5.0min，峰面积100.0％。
实施例355-(6-(吗啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT6037)在装备有磁力搅拌器的30ml密封管中，在惰性气氛下装入5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(85mg，0.4mmol)、Cs2CO3(130mg，0.4mmol)和无水DMF(5mL)。然后加入5-溴-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺32(100mg，0.3mmol)，在90℃下搅拌反应混合物3小时。蒸发DMF后，将反应混合物倒入50mL H2O中，用EtOAc(3×30mL)萃取。用盐水(2×10mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.9∶0.1至95∶5)纯化粗化合物，蒸发后得到白色粉末EHT6037(45mg，55％产率)。
化合物实施例35的结构如下 MW505.49；产率55％；白色固体熔点126.8℃。
Rf0.45(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.90-1.96(m，2H，CH2)，2.03-2.11(m，2H，CH2)，2.54(t，J＝4.6Hz，4H，N-CH2)，2.83(t，J＝6.4Hz，2H，CO-CH2)，3.41(s，2H，N-CH2)，3.74(t，J＝4.6Hz，4H，N-CH2)，4.02(t，J＝5.0Hz，2H，O-CH2)，6.51(s，1H，C＝CH)，7.62(dd，J＝8.9Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，7.66(s，1H，C＝CH)，8.27(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.41(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.92(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，10.19(s，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)506.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，EHT 6037，RT＝3.80min，峰面积95.8％。
实施例365-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT9069)在50mL圆底烧瓶中，将5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(95mg，0.45mmol)溶解在无水DMF(5mL)中，并在室温下加入Cs2CO3(161mg，0.50mmol)。将浅黄色反应混合物搅拌10分钟，并冷却至0℃保持15分钟。在25mL圆底烧瓶中，将4-(2-(溴甲基)苄基硫烷基)-7-(三氟甲基)喹啉27(185mg，0.45mmol)溶解在无水DMF(10mL)中，溶液冷却至0℃保持10分钟。将该溶液通过注射器加入到在0℃下保持15分钟的第一反应混合物中。在室温下搅拌反应混合物1.75小时(橙色)。加入水(100mL)，用EtOAc(3×100mL)萃取溶液。用水(5×75mL)、盐水(3×100mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT9069(155mg，64％产率)。
化合物实施例36的结构如下 MW542.58；产率64％；白色固体；熔点71.6℃。
1H-NMR(CDCl3，δ)2.50(t，J＝4.6Hz，4H，2xCH2-N)，3.31(s，2H，CH2-N)，3.71(t，J＝4.6Hz，4H，2xCH2-O)，4.59(s，2H，-SCH2)，5.21(s，2H，O-CH2)，6.45(s，1H，-C-CH)，7.30-7.50(m，4H，ArH)，7.67(s，1H，-C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，2H，ArH)，8.20(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.37(s，1H，ArH)，8.80(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)543.0(100％，[MH]+)，314.1(80)，230(40).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT9069，RT＝4.65min，峰面积98.6％。
实施例375-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT0434)和它的游离碱(ETH2725)在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(3.1g，14.7mmol)、Cs2CO3(4.8g，14.7mmol)和无水DMF(40mL)。在4℃下加入在DMF(60mL)中的4-(3-(溴甲基)苄硫基)-7-(三氟甲基)喹啉28(5.8g，14.1mmol)，在20℃下搅拌反应混合物4小时。将反应混合物倒入300mL冰水中，用EtOAc(2×500mL)萃取。用盐水(2×50mL)洗涤有机层，用带木炭(2g)的MgSO4(50g)干燥，并倒在Celite 545(200mL)覆盖的SiO2(300mL)上，蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.8∶0.2至96∶4)纯化粗化合物，蒸发后得到游离碱EHT2725(5.8g，76％产率)。将EHT2725溶解在EtOH(150mL)中，加入1M HCl的EtOH溶液(26mL，26.3mmol)，并在20℃下搅拌反应混合物0.5小时。蒸发EtOH后，在真空中干燥二盐酸盐并在异丙醇(500mL)中结晶，得到米色粉末EHT0434(4.4g，48％产率)。
化合物实施例37的结构如下
MW615.49；产率48％；米色粉末；熔点120.3℃。
Rf0.40(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(DMSO d6，δ)3.28(m，4H，N-CH2)，3.91(m，4H，O-CH2)，4.36(s，2H，N-CH2)，4.74(s，2H，S-CH2)，4.95(s，2H，O-CH2)，7.40-7.62(m，4H，Ar-H)，7.93(d，J＝5.6Hz，1H，Ar-H)，8.03(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.30(s，1H，C＝CH)，8.43(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.55(s，1H，Ar-H)，9.04(d，J＝5.5Hz，1H，Ar-H)，10.00(s，1H，NH+)，12.20(s，1H，NH+).
MS-ESI m/z(rel.int.)543.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT0434，RT＝4.60min，峰面积99.4％。
实施例385-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT2218)在50mL圆底烧瓶中，将5-羟基-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮22(128mg，0.61mmol)溶解在无水DMF(10mL)中，并在室温下加入Cs2CO3(217mg，0.67mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，并冷却至0℃保持15分钟。在25mL圆底烧瓶中，将4-(4-(溴甲基)苄基硫烷基)-7-(三氟甲基)喹啉29(250mg，0.61mmol)溶解在无水DMF(10mL)中，溶液冷却至0℃保持10分钟。将该溶液通过注射器加入到在0℃保持15分钟的第一反应混合物中。在室温下搅拌反应混合物1.75小时(橙色)。加入水(50mL)，用EtOAc(3×100mL)萃取溶液。用水(3×100mL)、盐水(3×100mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。使用洗脱液CH2Cl2∶MeOH＝98∶2在硅石上通过柱色谱法纯化粗产物。得到白色固体5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮EHT2218(150mg，46％产率)。
化合物实施例38的结构如下 MW542.58；产率46％；白色固体；熔点52.1℃。
Rf0.25(CH2CL2∶MeOH＝98∶2)。
1H-NMR(CDCl3，δ)2.55(m，4H，2xCH2-N)，3.38(s，2H，-CH2N)，3.74(t，J＝4.6Hz，4H，2XCH2-O)，4.37(s，2H，-SCH2)，5.05(s，2H，-OCH2)，6.49(s，2H，C＝CH)，7.30(d，J＝4.8Hz，2H，ArH)，7.44(q，4H，J＝8.2Hz，ArH)，7.58(s，1H，ArH)，7.73(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，ArH)，8.25(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，8.38(s，1H，ArH)，8.78(d，1H，J＝4.8Hz，ArH)MS-ESI m/z(rel.Int.)542.9([MH]+，90)，332.0(30)，228.9(100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT2218，RT＝4.60min，峰面积95.4％。
实施例394-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT9358)在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入4-((5-羟基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯23(5.0g，16.1mmol)、Cs2CO3(5.3g，16.1mmol)和无水DMF(20mL)。加入4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(5.8g，15.3mmol)和DMF(10mL)，在90℃下搅拌反应混合物3小时。蒸发DMF后，在真空中干燥化合物并在EtOAc(70mL)中沉淀。用水(3×20mL)洗涤沉淀物并过滤，干燥后得到白色粉末4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT9358(7.0g，75％产率)。
化合物实施例39的结构如下 MW607.68；产率77％；白色固体；熔点182.5℃。
1H-NMR (CDCl3，δ)1.46(s，9H，tBu)，1.67-1.95(m，6H，CH2-CH2-CH2)，2.46(t，J＝4.8Hz，4H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，4H，S-CH2)，3.38(s，2H，O-CH2)，3.46(t，J＝4.8Hz，4H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(s，1H，ArH)，7.57(s，1H，ArH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，ArH)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.36(s，1H，C＝CH)，8.79(d，J＝4.8Hz，1H，ArH).
MS-ESI m/z(rel.Int.)508(100％，[MH-COOtBu]+).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT2218，RT＝4.80min，峰面积99.5％。
实施例404-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT 2580)在装备有磁力搅拌器的50ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入4-((5-羟基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯23b(0.95g，3.0mmol)、Cs2CO3(1.1g，3.2mmol)和无水DMF(7mL)。加入4-(5-溴戊氧基)-7-氯喹啉33(1.00g，3.0mmol)，在90℃下搅拌反应混合物3小时。蒸发DMF后，将反应混合物倒入50mL H2O中，用EtOAc(2×100mL)萃取。用盐水(2×20mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(去活化SiO2∶CH2Cl2∶三乙胺＝98∶2至CH2Cl2∶MeOH 95∶5，纯化∶CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至97.5∶2.5)纯化粗化合物，蒸发后得到白色粉末4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT2580(1.2g，72％产率)。
化合物实施例40的结构如下 MW558.07；产率72％；米色固体；熔点130.2℃。
Rf0.4(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.46(s，9H，CCH3)，1.72-1.80(m，2H，C-CH2)，1.91-2.04(m，4H，C-CH2)，2.47(t，J＝4.2Hz，4H，N-CH2)，3.38(s，2H，N-CH2)，3.46(t，J＝4.2Hz，4H，N-CH2)，3.93(t，J＝5.9Hz，4H，O-CH2)，4.21(t，J＝5.9Hz，4H，O-CH2)，6.45(s，1H，C＝CH)，6.71(dd，J＝5.2Hz，J＝1.3Hz，1H，ArH)，7.29(d，J＝1.9Hz，1H，ArH)，7.44(ddd，J＝8.9Hz，J＝1.9Hz，J＝1.9Hz，1H，ArH)，7.58(d，J＝1.7Hz，1H，ArH)，8.01(s，lH，C＝CH)，8.14(dd，J＝8.9Hz，J＝1.3Hz，1H，ArH)，8.72(dd，J＝1.6Hz，J＝5.2Hz，1H，ArH).
13C-NMR(CDCl3，δ)22.6，28.4，28.5，28.8，43.4，52.9，59.3，68.3，69.4，79.9，100.9，114.6，119.9，123.5，126.4，127.8，135.6，139.5，147.9，149.7，152.5，154.6，161.6，164.1，174.3.
MS/ESI m/z(rel.Int.)558/560([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT2580，RT＝4.4min，峰面积95.7％。
实施例415-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT9241)将5-羟基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮氢溴酸盐24(5.2g，17.0mmol)溶解在水(40mL)中，并加入在水(20mL)中的Cs2CO3(7.3g，22.4mmol)。用CH2Cl2(200mL)洗涤水相，然后在40℃下蒸发水，在真空下干燥铯盐得到白色粉末。在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下装入这种衍生物、Cs2CO3(2.5g，7.6mmol)和无水DMF(100mL)。加入4-(5-溴戊硫基)-7-(三氟甲基)喹啉25(5.8g，15.3mmol)，在90℃下搅拌反应混合物2小时。蒸发DMF后，将反应混合物倒入200mL H2O中，用CH2Cl2(2×300mL)萃取。用盐水(2×30mL)洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99.5∶0.5至95∶5)纯化粗化合物，蒸发后得到纯固体(4.3g，55％产率)。将化合物溶解在EtOH(150mL)中，加入1M HCl的EtOH溶液(33mL，33.0mmol)，并在20℃下搅拌反应混合物0.5小时。蒸发EtOH后，在真空中干燥三盐酸盐，并在乙醇(50mL)中沉淀，过滤后得到白色粉末5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐EHT9241(3.6g，38％产率)。
化合物实施例41的结构如下 MW630.98；产率38％；白色粉末；熔点206.4℃。
Rf0.30(CH2Cl2∶MeOH＝8∶2)。
1H-NMR(DMSO d6，δ)1.59-1.66(m，2H，CH2)，1.73-1.90(m，4H，CH2)，2.77(s，3H，N-CH3)，3.17-3.20(m，2H，S-CH2)，3.37-3.54(m，8H，N-CH2)，3.85(t，J＝6.0Hz，2H，O-CH2)，4.06(s，2H，N-CH2)，6.62(s，1H，C＝CH)，7.91(d，J＝5.8Hz，1H，Ar-H)，8.09(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，8.18(s，1H，C＝CH)，8.47(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.71(s，1H，Ar-H)，9.07(d，J＝5.7HZ，1H，Ar-H)，11.83(s，3H，NH+).
MS-ESI m/z(rel.Int.)522.2([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，EHT9241，RT＝4.30min，峰面积99.6％。
ETH0872和EHT8560的制备实施例425-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT0872)在装备有磁力搅拌器的100ml圆底烧瓶中装入4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT2580(0.8g，1.4mmol)和EtOH(10ml)。在50℃下滴加2M无水HCl的EtOH溶液(7.2ml，14mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时。在真空中蒸发反应混合物。加入EtOH(10ml)，然后蒸发。进行这种操作三次。在蒸发EtOH后，在真空中干燥三盐酸盐并在EtOH(20mL)中结晶，5天后过滤得到白色粉末5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐EHT0872(400mg，50％产率)。
化合物实施例42的结构如下 MW567.33；产率50％；白色固体；熔点164.7℃。
Rf0.15(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
1H-NMR(DMSO d6，δ)1.64-1-66(m，2H，CH2)，1.79-1-81(m，2H，CH2)，1.96-1.98(m，2H，CH2)，3.20-3.40(m，8H，N-CH2)，3.87(t，J＝5.6Hz，2H，O-CH2)，4.17(s，2H，N-CH2)，4.58(t，J＝5.6Hz，2H，O-CH2)，6.67(s，1H，C＝CH)，7.59(d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，7.91(d，J＝9.0Hz，1H，ArH)，8.21(s，1H，ArH)，8.36(d，J＝9.0Hz，1H，ArH)，8.45(s，1H，C＝CH)，9.22(d，J＝6.5Hz，1H，ArH)，9.91(s，2H，NH2+).
MS-ESI m/z(rel.int.)458.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT0872，RT＝3.80min，峰面积99.6％。
实施例435-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT8560)在装备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中装入4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯EHT9358(7.0g，11.5mmol)和EtOH(60ml)。在50℃下滴加1M无水HCl的EtOH溶液(60ml，60mmol)。在室温下搅拌反应混合物3小时。在真空中蒸发反应混合物。加入EtOH(30ml)，然后蒸发。进行这种操作三次。在蒸发EtOH后，在真空中干燥三盐酸盐，并在EtOH(200mL)中结晶，过滤后得到白色粉末5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐EHT8560(4.5g，63％产率)。
化合物实施例43的结构如下 MW616.95；产率63％；白色固体；熔点204℃。
Rf0.15(CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)。
1H-NMR(DMSO d6，δ)1.61-1.66(m，2H，CH2)，1.75-1.87(m，4H，CH2)，3.35-3.45(m，10H，N-CH2，S-CH2)，3.86(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，4.19(s，2H，N-CH2)，6.68(s，1H，C＝CH)，7.88(d，J＝5.6Hz，1H，ArH)，8.07(dd，J＝8.9Hz，J＝1.7Hz，1H，ArH)，8.19(s，1H，C＝CH)，8.46(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，8.65(s，1H，ArH)，9.06(d，J＝5.5Hz，1H，ArH)，9.87(s，2H，NH2+)，11.52(s，2H，NH+).
MS-ESI m/z(rel.Int.)508([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT8560，RT＝4.20min，峰面积99.6％。
EHT3980、EHT5743、EHT0785、EHT0566、EHT8366、RHT3664和EHT4495的制备一般过程方法C(在CHCl3中)在装备有磁力搅拌器的10ml圆底烧瓶中装入5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8560的游离碱)(0.15g，0.3mmol)。连续加入无水CHCl3(3mL)和三乙胺(125μL，0.9mmol)。在0℃下30分钟后，缓慢滴加在CHCl3(200μL)中的试剂(0.35mmol)。在室温下搅拌反应混合物15小时。将反应混合物倒入10mL盐水中，用CH2Cl2(50mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发至干。通过柱色谱法(SiO2；CH2Cl2∶MeOH＝99∶1至95∶5)纯化粗化合物，蒸发溶剂后得到所需的化合物。
实施例445-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3980)使用乙酰氯(28mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥标题化合物得到白色固体EHT3980(150mg，90％产率)。
化合物实施例44的结构如下 MW549.61；产率90％；白色固体；熔点99.5℃。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.85-1.95(m，4H，CH2)，2.09(s，3H，CH3)，2.48-2.54(m，4H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.40(s，2H，N-CH2)，3.50(t，J＝4.9Hz，2H，N-CH2)，3.65(t，J＝4.9Hz，2H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.47(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.int.)550.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT3980，RT＝4.30min，峰面积96.1％。
实施例454-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT5743)使用二乙基氨甲酰氯(48mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥标题化合物得到白色固体EHT5743(180mg，98％产率)。
化合物实施例45的结构如下 MW606.70；产率98％；白色固体；熔点393.1℃。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.12(t，J＝7.1Hz，6H，CH3)，1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.93(m，4H，CH2)，2.53(t，J＝4.7Hz，4H，N-CH2)，3.12-3.24(m，6H，S-CH2，C-CH2)，3.27(t，J＝4.7Hz，4H，N-CH2)，3.40(s，2H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)607.2([MH]+，100).
HPLC万法A，检测UV254nm，RT＝4.55min，EHT5743，峰面积98.7％。
实施例465-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT0785)使用三甲基乙酰氯(42mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥标题化合物，得到白色固体EHT0785(100mg，56％产率)。
化合物实施例46的结构如下 MW591.68；产率56％；白色固体；熔点116.6℃。
Rf0.40(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.27(s，9H，CH3)，1.69-1.76(m，2H，CH2)，1.84-1.93(m，4H，CH2)，2.52(t，J＝4.9Hz，2H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.39(s，2H，N-CH2)，3.69(t，J＝4.7Hz，4H，N-CH2)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.47(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.60(s，lH，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.lnt.)592.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，RT＝4.61min，EHT0785，峰面积98.3％。
实施例47.4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二异丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT0566)使用二异丙基氨甲酰氯(58mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥标题化合物，得到浅色油EHT0566(120mg，63％产率)。
化合物实施例47的结构如下 MW634.75；产率63％；浅色油。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.27(d，J＝6.7Hz，12H，CH3)，1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.89(m，4H，CH2)，2.54(t，J＝4.6Hz，4H，N-CH2)，3.12-3.18(m，6H，N-CH2，S-CH2)，3.40(s，2H，N-CH2)，3.61(h，J＝6.7Hz2H，CH)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.61(s，1H，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)635.2([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT0566，RT＝4.78min，峰面积98.1％。
实施例485-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT8366)使用甲磺酰氯(42mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥化合物，得到白色固体EHT8366(80mg，45％产率)。
化合物实施例48的结构如下
MW585.66；产率45％；白色固体；熔点663℃。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.94(m，4H，CH2)，2.65(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，2.80(s，3H，CH3)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.27(t，J＝4.7Hz，2H，N-CH2)，3.43(s，2H，N-CH2)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H)，7.58(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，8.8Hz，J＝1.7Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)586.0([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV 254nm，EHT 8366，RT＝4.60min，峰面积98.5％。
实施例494-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔T基哌嗪-1-甲酰胺(EHT3664)使用异氰酸叔丁酯(36mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥标题化合物，得到白色固体EHT3664(130mg，71％产率)。
化合物实施例49的结构如下 MW606.70；产率71％；白色固体；熔点154.4℃。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，8)1.35(s，9H，1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.85-1.95(m，4H，CH2)，2.50(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，3.14(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.35-3.38(m，6H，N-CH2)，3.89(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，4.45(s，1H，NH)，6.45(s，1H，C＝CH)，7.26(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，C＝CH)，7.70(dd，J＝8.8Hz，J＝1.6Hz，1H，Ar-H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.36(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)508.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT3664，RT＝4.60min，峰面积99.6％。
实施例504-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT4495)使用甲基氨甲酰氯(35mg，0.35mmol)按照方法C制备化合物。纯化后在真空中干燥标题化合物，得到浅色油EHT4495(100mg，59％产率)。
化合物实施例50的结构如下 MW564.62；产率59％；浅色油。
Rf0.35(CH2Cl2∶MeOH＝95∶5)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.69-1.77(m，2H，CH2)，1.84-1.94(m，4H，CH2)，2.48(t，J＝4.9Hz，4H，N-CH2)，3.15(t，J＝7.2Hz，2H，S-CH2)，3.38(s，2H，N-CH2)，3.51(t，J＝4.4Hz，4H，N-CH2)，3.70(s，3H，CH3)，3.90(t，J＝6.2Hz，2H，O-CH2)，6.46(s，1H，C＝CH)，7.27(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.58(s，1H，C＝CH)，7.71(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，8.24(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H)，8.35(s，1H，Ar-H)，8.78(d，J＝4.8Hz，1H，Ar-H).
MS-ESI m/z(rel.Int.)566.1([MH]+，100).
HPLC方法A，检测UV254nm，EHT4495，RT＝4.40min，峰面积99.1％。
实施例51药理学这个实施例公开了用于说明化合物生物活性的各种分析条件。
材料和方法1.参比化合物设计一系列体外试验以筛选各种化合物，并评价它们的抗增殖、抗肿瘤和抗血管生成的效能。包括CAI(甲酰胺三唑；L651582，MerckInstitute for Therapeutic Research)、紫杉醇(Paclitaxel)(紫杉醇；BristolMyers Squibb)、2-甲氧基雌二醇(2Me，PanzemTM；EntreMed)和SU-6668(Sugen)作为阳性对照。
参比CAI为最初作为抗球虫药开发的化合物(美国专利4590201)。CAI后来已被NCI证实为非电压和电压门控的钙通道两者的合成抑制剂。它证实在浓度从1到10αM时能抑制在大量的人肿瘤细胞系中肿瘤细胞的活动性、粘连、转移可能性和体外生长。CAI还被证实能抑制几种人内皮细胞的增殖、迁移和粘连。此外，还表现出对人工基膜(matrigel)上HUVEC血管形成的抑制和对大鼠大动脉环中微血管生长的延缓。最后，还证实了在小鸡尿囊绒膜分析中在浓度10到20μM时能体内抑制血管生成。
参比2ME为已被证实能抑制体内肿瘤生长和血管生成的雌二醇内源代谢物。但是，除了其抗血管生成活性外，2ME还诱导活跃增殖细胞中的凋亡并表现出对各种人癌细胞培养物的一般非特异性抗增殖效果。它在小鼠中还具有有限的口服生物利用度并在给药后被快速清除。在I期和II期肿瘤学试验中，口服给药的2ME已证实在患有乳腺癌、前列腺癌和多发性骨髓瘤的患者中有抗癌活性，并有很好的耐受性。目前，2ME在I期临床试验中用于乳腺癌，在II期试验中用于血癌多发性骨髓瘤。具有2ME眼移植物的临床前模型中的结果证实，它可抑制年龄相关性黄斑变性(ARMD)的新血管形成。
参比SU6668为开发用于治疗各种癌症(卵巢癌、前列腺癌和脑癌)的受体酪氨酸激酶(RTKs)的选择性抑制剂。SU6668通过结合到新血管形成中涉及的血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)的受体来抑制肿瘤生长和转移需要的血管生成。在临床前肿瘤模型中，SU6668完全抑制靶受体磷酸化，并通过血管生成抑制诱导肿瘤退化。口服制剂在2000年处于II/III期临床试验中。其后没有进展被报道。
2.体外分析a.化合物对肌动蛋白细胞骨架影响的研究Swiss 3T3细胞的休眠期在5％FCS培养基(专用稀FCS)中，在盖玻片上高密度接种细胞。当细胞变休眠(培养6-10天后)时，移去培养基(孔中残留几微升)并用没有血清的培养基代替。将细胞放在培育器中过夜。理想地，细胞将具有很少(如果有的话)肌动蛋白应力纤维和环绕周围的皮层肌动蛋白薄带。
用试验化合物处理细胞用各种浓度的化合物处理休眠细胞30分钟。随后用试验化合物+诱导剂(见下面的段落)的鸡尾酒处理细胞。处理后，进行免疫荧光分析。
用小G蛋白的各种诱导剂处理细胞小G蛋白途径可被特异性激活，影响细胞骨架(Takai等人，Physiol.Rev.，2001)。可通过PDGF、胰岛素、铃蟾肽(Ridley等人，Cell，1992，Nobes等人，J.Cell Sci，1995)和渗透应激(Di Ciano等人，Am J Physiol Cell Physiol，2002)激活控制膜皱褶形成的Rac途径。可通过LPA显著激活Rho信号途径(Ridley and Hall，Cell，1992)。
免疫荧光分析-固定和渗透从培养孔中吸出培养基，并用固定缓冲液(BRB8080mM KPipes pH6.8，2mM MgCl2，5mM EGTA，3％多聚甲醛)替换。在室温下培育细胞2×10分钟。移去固定缓冲液，并用渗透缓冲液(PBS，2％BSA，0.1×皂草甙)替换。在室温下培育板1小时或在4℃下培育16小时。
-标记用稀释在渗透缓冲液中的抗微管蛋白初生抗体(Yol 1/34；Abcys)培育固定和渗透的细胞1小时。然后用渗透缓冲液洗涤5次。用山羊抗大鼠FITC再生抗体(Jackson Immunoresearch)和结合丝状肌动蛋白的鬼笔环肽-TRITC(Sigma)培育盖玻片30分钟到1小时。然后用渗透溶液洗涤5次。然后用Immuno-Fluore(ICN)封片液将盖玻片固定到显微镜载玻片上。使封片在37℃下干燥1小时。
-化合物效果的量化在显微镜下(至少三个不同区域，例如在100和200个细胞之间)计算细胞总数。评估具有相关的形态特征的细胞数。然后计算具有相关的形态特征的细胞百分比。
b.细胞培养和细胞生存力分析为了确定化合物对细胞生存力的影响，按Carmichael等人(1996)所述并作改进，进行微量培养四氮唑分析(MTT)。四种人肿瘤细胞系，即HCT116结肠腺癌、H460肺癌、MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞系，DLD1结肠直肠腺癌、HeLa腺癌、HepG2肝细胞癌。3种无限增殖但不致瘤的细胞系，即NIH3T3小鼠成纤维细胞(AmericanType Culture Collection)和初生肝细胞(Biopredic international)，根据他们的建议与人微血管系统的内皮细胞系HMEC1(National Centerfor Infection Diseases)一起培养。简单地说，在药物加入前24小时，将细胞接种在48孔板中。用溶解在DMSO中的0-200μM的化合物(11种浓度)处理细胞，调整孔中DMSO的最终浓度为1％。处理后16小时、和3或6天，向培养基中加入0.5mg/ml的MTT(Sigma)，在甲臜(formazan)晶体溶解在100％DMSO中之前，在37℃下培育细胞1-5小时。使用分光光度计在550nm波长下测定吸收率。使用GraphPadPrism软件(GraphPad Software，Inc.)分析数据，从剂量-响应曲线计算IC50(导致50％细胞死亡的剂量)。
c.软琼脂中不依赖锚定细胞的生长分析为了评价一种化合物对肿瘤细胞没有锚定时生长能力的影响，将HCT116细胞接种在软琼脂中。与将药物效应平均在整个细胞群体上的微板分析相反，克隆形成分析提供区分细胞毒素剂(即减少集落数)和细胞抑制剂(即减小集落大小而不减少集落数；Murphy M.J.等人，1996)的可能性。简单地说，将5×103个HCT116细胞重悬浮在300μl包含0.3％软琼脂(Difco)和不同浓度化合物(从0-30μM 8种浓度)的完全培养基中。然后将细胞倒在包含0.5％软琼脂加相同浓度化合物作为顶层的固化培养基层上。在使用相差显微镜(Nikon)和数字相机(Nikon Coolpix 990)获取每孔的照片前，在37℃下培育细胞7天。随后使用能确定克隆大小和数量的NIH(ImageJ)的免费图象分析软件分析照片。
使用GraphPad Prism软件分析数据，并从剂量-响应曲线计算IC50(导致克隆大小或数量降低50％的剂量)。
d.迁移分析伤口愈合分析Nobes & Hall(J.Cell Biol.，1999)描述了这种分析。
-REF细胞的制备从15-18E14胚胎中制备REF细胞。简单地说，从胚胎中除去头、尾和内脏。只保留躯干，切成小方块，洗涤，用胰蛋白酶-EDTA在37℃下处理20分钟，重悬浮在培养基中，计数并培养。24小时后，细胞在冷冻管中被胰蛋白酶化和冷冻。在伤口愈合分析前48小时，将细胞覆盖在盖玻片上。试验那天，用试验化合物或单独的DMSO处理细胞。30分钟后，使用小吸液管端部在盖玻片中心进行刮擦。洗涤细胞，并加入包含化合物或DMSO的新鲜培养基。
-缩时显微镜法将包含刮擦的盖玻片和处理培养基并用石蜡膜密封的皿放在与摄像机和计算机连接的恒温显微镜(37℃)下。每5分钟采集显微镜图象，并使用OpenLab软件记录。当分析结束时(4-24小时后)，用Metamorphe软件分析照片和影片。校准照片(像素转化成μm)，在跟踪影片上的7至10个单细胞后，计算速度和经过的总距离。为此，在一个细胞上选择一个点，并在每个影片照片中追随这个点。记录每个点的位置。将数据转移到Excel中，计算平均距离和平均速度。
-免疫荧光分析或者，在30分钟的处理并刮擦后，再在培育器中进行4小时的培育，通过免疫荧光分析研究细胞形态。
-固定和渗透从培养孔中吸出培养基，洗涤并固定。在室温下培育细胞2×10分钟。移去固定缓冲液，并用渗透缓冲液替换。在室温下培育板1小时或在4℃下培育16小时。
-标记用稀释在渗透缓冲液中的抗微管蛋白初生抗体培育固定和渗透的细胞1小时。然后用渗透缓冲液洗涤5次。用山羊抗大鼠FITC再生抗体和结合丝状肌动蛋白的鬼笔环肽-TRITC培育盖玻片30分钟到1小时。然后在渗透溶液中洗涤5次。然后用Immuno-Fluore封片液将盖玻片固定到显微镜载玻片上。使封片在37℃下干燥1小时。
在Boyden室中的迁移恶性细胞的基本特征是它们迁移、侵入宿主组织并产生转移的能力。为了评价一种化合物对肿瘤细胞迁移能力影响的能力，使用高侵入肿瘤细胞MDA-MB-231、内皮细胞HMEC1或成纤维细胞NIH3T3进行迁移分析。使用Falcon HTS Fluoroblock插入物进行这种分析。向板孔中加入包含胎牛血清(FBS；使用其作为化学引诱物)的培养基，将重悬浮在没有FBS而有0.1％BSA的培养基中的2×104-7.5×104个细胞加入到每个插入孔中。向上室和下室中的培养基中都加入相关的化合物。在37℃下培育板16小时。培育后，从上室中移去培养基，并将整个插入板转移到在包含0.1％BSA的培养基中包含4μg/mlCalcein-AMTM的第二个24孔板中。在37℃下培育板1小时，用Hanks缓冲盐水(HBSS)漂洗。使用Fluoroskan Ascent FL荧光板读数器在485nm的激发波长(Ex)和517nm的发射波长(Em)下收集荧光数据。只有通过人工基膜层和膜的那些被标记细胞可被检测。使用GraphPadPrism软件分析数据，并计算IM50(观察到50％细胞迁移抑制时的剂量)。
e.小管形成分析内皮细胞管形成分析或小管生成分析为被广泛接受的精确反映血管生成过程如附着、迁移和分化成管状结构的结束期数目的体外分析。在这种模型中，在重建基底膜组分(人工基膜)的单层上培养内皮细胞，并在几个小时内形成毛细管状结构。因此，这种系统是通过监测细胞外基质上内皮细胞的形态发生的抑制来快速筛选抗血管生成药的有效和强力工具。
在补充有15％FBS、10ng/ml重组人表皮生长因子(Invitrogen)和1μg/ml氢化可的松的MCDB-131培养基(Sigma)中培养HMEC-1细胞系。培养细胞至70-80％融合。用Matrigel_基底膜基质(BectonDickinson)涂覆96孔板。将2×104个HMEC-1细胞接种到每个孔中。将试验化合物或对照化合物稀释在DMSO中，并加入到被涂覆的板上。随后在37℃下、5％CO2气氛中培育板6-8小时以允许小管形成。然后用1.25μg/ml Calcein AM在37℃、5％CO2下培育15分钟。使用荧光显微镜和数字相机(Nikon Coolpix 990)拍摄每个孔的照片。使用AngioSys软件(TCS Cellworks)分析图象，该软件允许量化总的小管长度和结数，这是两个代表小管形成/破裂的参数。使用GraphPad Prism软件分析数据，并计算IT50(导致50％小管生成抑制的剂量)。
3.体内分析体内斑马鱼血管生成模型这种分析为用于筛选影响血管形成的小分子的可行和有效整体动物模型(Serbedzija等人，Angiogenesis，1999)。该研究被转包给Phylonix Pharmaceutical，Cambridge，MA，USA。
-药物处理斑马鱼中的节间血管(ISV)可很好地视为血管生成血管，可使用显微镜方便地观察它们。到受精后20个小时(hpf)阶段，研究了主血管生成血管(背主动脉和尾静脉)。到受精后48个小时，通过从背主动脉和尾静脉发芽形成ISV。因此，20hpf用作药物处理起点，48hpf用作终点。在6孔板中用化合物溶液在28℃下培育在20hpf期的斑马鱼胚胎28小时，每个孔20个胚胎。用1％DMSO和5μMFlavopiridol处理的胚胎分别用作阴性和阳性对照。
-显微镜检查使用装备有数字点片照相机(Diagnostic InstrumentsInc.)的ZEISS Stemi 2000-C立体显微镜(Zeiss)进行所有光学显微镜检查研究。使用Adobe Photoshop 7.0(Adobe)进一步处理和分析图象。
-整体包埋(whole mount)EAP染色胚胎在室温下、在4％PFA中固定2小时，按照标准程序在100％乙醇中脱水。然后再水合胚胎，封闭，并用NBT/BCIP染色。洗涤后，用显微镜检查胚胎。
-抗血管生成效果的量化为了量化抗血管生成效果，选择位于肛孔周围的5个发育良好的大血管ISV，并使用Adobe Photoshop进行形态测量分析[面积(像素)×信号强度]。对于每种条件，评估10个胚胎，并使用EXCEL软件程序(微软公司)计算10个图象的平均值。为了计算抑制效果，用药物处理胚胎中5个ISV中信号(S)的平均值除以DMSO对照胚胎中S的平均值，并使用下面的公式计算为％抑制 4.毒性分析*筛选艾姆斯氏试验该研究的目的是评价试验项目诱导鼠伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphimurium)(TA98和TA100株)中回复突变的效能。细菌回复突变试验能识别通过替换、增加或缺失一个或几个DND碱基对引起点突变的物质。诱变物质可诱导组氨酸缺陷菌株中的返祖，然后该菌株能在组氨酸有限的培养基中生长并形成菌落，而未返祖的则不行。在有和没有大鼠肝脏代谢系统(S9混合物)的情况下进行该试验。使用三种已知的诱变剂检查试验系统的敏感性叠氮化钠、2-硝基芴和2-蒽胺。
每板的剂量水平为10-5000μg。按本来的诱变性试验进行初步毒性试验。
*按下面的计划根据每种化合物3只大鼠，在大鼠体内进行筛选上升和重复剂量的毒性研究a.第1天至第3天10mg/kg口服每天，b.第4天至第6天50mg/kg口服每天，c.第7天至第9天300mg/kg口服每天。
记下临床征象、体重、食物消耗和血液参数。
结果
1.体外分析a.化合物对肌动蛋白细胞骨架影响的研究在使用休眠Swiss 3T3细胞的两组实验中，在用化合物EHT1864和EHT9241预处理后，用胰岛素、铃蟾肽或通过渗透休克诱导Rac。渗透休克后得到的结果提供在图1中。用亚毒性剂量的EHT1864和EHT9241预处理休眠Swiss 3T3细胞，可剂量依赖性地阻止由渗透休克后Rac诱导的皱褶形成。首先，我们可以观察到每个孔表现出较少的皱褶，并且这些皱褶没有肌动蛋白中丰富(荧光标记减少)。其次，处理后显现出皱褶的细胞总数减少(见左下部图)。这些结果被皱褶形成用胰岛素和铃蟾肽诱导的类似试验(数据未示出)证实。在另一系统(REF细胞)中，在用两种化合物处理后，观察到受伤后对片状伪足/皱褶形成的剂量依赖性抑制。
总之，EHT1864和EHT9241影响Rac控制的细胞骨架结构的形成。
b.细胞生存力分析(MTT)为研究它们对细胞生存力的影响，在大量细胞系中通过MTT试验了超过47种试验化合物和5种参比化合物。在各种处理持续期后，在不同条件下评价细胞生存力16小时(表15)、3天(表14)和6天(表12)，在10％(表12、14和15)胎牛血清(FBS)中、或在0.5％(表13，6天处理)胎牛血清(FBS)中。化合物表现出非常类似于参比化合物CAI和2ME的活性。最好的化合物表现出低于紫杉醇大约100倍的活性。SU-6668在所有细胞中表现出弱毒性。
MTT，在10％FBS中6天(表12；图2-A)在3种肿瘤细胞系(HCT116、MDA-MB-231和MCF7)和2种非肿瘤细胞系(内皮HMEC1和成纤维细胞NIH3T3)中测试化合物。
在HCT116细胞(大约24小时的倍增时间；0.3＜IC50＜200μM)中，24种化合物具有低于4μM的IC50(在每一类中，所有化合物按照它们的活性从最高到最低排序)-9种化合物表现出OTHP保护EHT8883、EHT5881、EHT9376、EHT1006、EHT6271、EHT9140、EHT6060、EHT3788和EHT1593，-9种化合物在曲酸部分的位R1处表现为哌嗪基EHT5743、EHT9538、EHT0566、EHT0785、EHT3980、EHT4495、EHT8560和EHT9241，-5种化合物在曲酸部分的位R1处表现为吗啉代基EHT5430、EHT2725、EHT1864、EHT2272和EHT2218，-1种化合物在曲酸部分的位R1处表现为哌啶基EHT9317，-1种化合物在曲酸部分的位R1处表现为氯原子EHT1494。
在MDA-MB-231细胞(36-48小时的倍增时间；从2.3μM起的IC50)中，9种化合物具有低于9μM的IC50-哌嗪衍生物EHT9358、EHT8560、EHT7365、EHT9241、EHT3664、EHT0785和EHT5743，-吗啉衍生物EHT2218和EHT1864。
在HMEC1细胞(48-72小时的倍增时间；1.8＜IC50＜200μM)中，14种化合物具有低于10μM的IC50-6种化合物在曲酸部分的位R1处表现为OTHP保护EHT3788、EHT8883、EHT9376、EHT6271、EHT1006和EHT4745，-7种化合物在曲酸部分的位R1处表现为哌嗪基EHT0566、EHT8560、EHT5743、EHT9241、EHT7365、EHT0785和EHT3664。只有化合物EHT5743和EHT0785的活性在HMEC1和HCT116细胞中显著不同(分别有20和5倍差异)。
-1种化合物在曲酸部分的位R1处表现为氯原子EHT1494。
吗啉化合物EHT1864、EHT2218、EHT2272、EHT2725和EHT5430在HMEC1细胞中表现出与HCT116细胞相比显著不同的活性(5至13倍)。化合物在HCT116细胞中最有活性。相反，哌嗪衍生物EHT8560和EHT 9241在测试的各种细胞系中表现出更异质的活性。
这种MTT筛选还允许确定其它最佳部分-5-碳不限定的直链连接基团-7-三氟甲基-喹啉-4-硫醇环保留两类化合物用于进一步分析“非选择性”哌嗪衍生物EHT8560&EHT9241和“选择性”吗啉衍生物EHT1864& EHT2725。
MTT，在0.5％FBS中6天(表13)为了消除分析的增殖组分，并只检查化合物对细胞生存力的影响，进行这些实验。在这些条件下通过MTT只测试了7种化合物。在10％和0.5％FBS培养条件之间没有观察到IC50的较大差异。只观察到1至2倍的差异，这表明化合物可能对细胞存活而不是细胞增殖起作用。MTT，在10％FBS中3天(表14；图2-B)在肿瘤结肠细胞系(DLD1 & HCT116)、乳腺肿瘤细胞系(MDA-MB-231 & MCF7)中，通过3天的MTT测试4种化合物。它们显示具有非常接近参比化合物5-氟尿嘧啶的活性。对于6天MMT的观察，哌嗪衍生物在测试的各种细胞系上表现出比吗啉衍生物更均匀的活性。
MTT，在10％FBS中16小时(表15)在结肠肿瘤(HCT116)、乳腺肿瘤(MDA-MB-231)、成纤维细胞(NIH3T3)和肝细胞(肿瘤HepG2和初生肝细胞)中，通过16小时的MTT测试4种化合物。令人感兴趣的是，在从肿瘤和初生肝细胞得到的响应之间没有观察到大的差异。
c.不依赖锚定的生长分析为了研究化合物对HCT116细胞没有锚定时独立生长能力的影响，将细胞培养在具有各种浓度化合物的软琼脂中。这些实验允许1)根据化合物影响克隆大小的能力对它们分级，和2)评价它们的作用模式(细胞毒性对细胞抑制)。
EHT9376、EHT9014、EHT3788和EHT1593在微摩尔范围内都影响HCT116不依赖锚定生长的能力。表现出最高效果的化合物是EHT9376。表现出最低效果的化合物是EHT1593。EHT 9376的IC50非常类似于对参比化合物CAI计算的IC50(分别是5.4±1.2μM对5.8±1.0μM)(图3-B)。
在我们的实验中，相对于克隆数目，显示CAI优先影响克隆大小(图3-A)。这与将CAI描述为细胞抑制化合物的文献(Wasilenko等人，1996)一致。同样，被试验的本发明的最佳化合物优先影响克隆大小。
总之，本发明描述的化合物具有细胞抑制作用模式。
d.迁移分析为了直接评估化合物影响细胞迁移的能力，使用了两种技术伤口愈合和Boyden室迁移分析。通过Boyden迁移分析来测试化合物，同时测试参比化合物CAI，其在文献中被描述为抗迁移化合物(KohnEC等人，1990；Rust WL等人，2000)，和其它参比化合物2ME和SU-6668。结果提供在图5中。
伤口愈合分析在亚毒性剂量下测试所有的实验。进行缩时显微镜检查8小时(每5分钟1张照片)。分析产生的影片，逐张照片地追踪细胞以便估计它们的速度和它们经过的总距离。量化提供在图4-A的图表中。这个实验表明，10μMEHT 9241降低了REF细胞的迁移36％，30μMEHT 1864降低了约48％的迁移(速度和经过的总距离)。
Boyden室中的迁移分析使用各种细胞系用于该分析肿瘤(MDA-MB-231)、内皮(HMEC1)和成纤维细胞(NIH3T3)细胞系。图4-B中汇总了在11种试验化合物和2种参比化合物上使用FBS作为化学引诱物进行实验得到的结果。这些实验表明，被测试的大多数化合物在低微摩尔范围内影响各种细胞系迁移。
在HMEC1细胞中，表现出最高活性的化合物是OTHP化合物EHT3788和EHT9376。然后是吗啉衍生物EHT1864(IC50＝7.8±1.7μM)和哌嗪衍生物EHT9241(IC50＝9.1±1.4μM)和EHT8560(IC50＝9.5±0.3μM)。
在NIH3T3细胞中，最佳化合物是哌嗪衍生物EHT9241(IC50＝4.7±0.6μM)、EHT7365(IC50＝6.1±1.1μM)和EHT8560(IC50＝10±0.6μM)，然后是吗啉衍生物EHT7168(IC50＝16.4±3.4μM)和EHT1864(IC50＝20.4±3.5μM)。
在MDA-MB-231细胞中，最佳化合物是EHT9241(IC50＝2.7±1.0μM)、EHT7365(IC50＝3.9±0.8μM)和EHT8560(IC50＝4.5±2.4μM)，然后是吗啉衍生物EHT1864(IC50＝5.1±1.9μM)。
观察到的影响不能单单归因于化合物的毒性，因为16小时的MTT数据(表15)显示了高3至25倍的IC50，这依赖于试验的细胞系。
总之，哌嗪衍生物似乎比吗啉衍生物在抑制细胞迁移方面更有效。另外，最佳化合物在比CAI低的浓度下影响迁移，CAI在文献中被描述为有效的抗转移化合物(Wu等人，Clin.Cancer Res.，1997；Wasilenko等人，Int.J.Cancer，1996；Kohn & Liotta，J.Natl.Cancer Instit.，1990；Rust等人，Anal.Biochem.，2000)。
本发明的化合物因此为有效的抗迁移化合物，这可由它们抑制Rac控制的片状伪足和皱褶形成的能力来说明。
e.小管形成分析如上所述，本发明的化合物和CAI具有非常接近的抗癌特性(细胞增殖、迁移、锚定依赖性细胞生长)。有趣的是，CAI在文献中既被描述为抗癌化合物，又被描述为抗血管生成化合物(Bauer KS等人，2000；Krüger EA & Figg WD，2001)。为了了解我们的化合物是否也与CAI一样具有抗血管生成特性，使用33种试验化合物在HMEC1细胞上进行小管生成分析。
当涂在人工基膜上时，HMEC1细胞在培养基加单独的溶剂DMSO存在时形成血管样结构。相反，在培养基中加入化合物导致人工基膜诱导的网络形成的剂量依赖性抑制。使用GraphPad Prism计算所有试验化合物的总小管长度和结数两者(代表小管生成过程的两个参数)的IT50。提供结数所得IT50的图示于图5。总小管长度得到的IT50是非常类似的(数据未示出)。
5种最有活性的化合物示于下面(从最有活性到活性最少)；EHT8560(IC50＝17.0±3.6μM)、EHT9140、EHT6060、EHT3788、EHT5881、EHT9241(IC50＝26.0±8.7μM)。这些化合物比参比化合物CAI具有5至8倍多的活性。活性最高的化合物为哌嗪衍生物EHT8560。最有活性的吗啉衍生物为EHT2218(IC50＝30.8μM)，然后是EHT1864(IC50＝34.9±3.5μM)，其比CAI活性高4倍。
最佳化合物在与2ME相同的范围内有活性，尽管它们似乎以不同的方式影响小管生成过程。2ME似乎在处理过程中影响细胞完整性，而试验化合物只影响小管形成。在我们的分析中，SU-6668被显示不太有效，这可通过在无VEGF和FGF条件下进行分析的事实来解释。
小管形成的抑制不能归因于化合物毒性，因为内皮细胞只被处理几个小时，通过MTT可表明化合物对HMEC1细胞生存力只有中等的影响(见表12-15)。
f.体外药理学结论THP化合物没有被保留用于完整表征，因为这些化合物被认为生物利用度较差并在体内高度不稳定。表现出最令人感兴趣的药理学和生物利用度曲线的化合物是哌嗪衍生物(EHT8560&EHT9241；“非选择性”化合物)、哌嗪衍生物EHT5743(高“选择性”，在HCT116细胞中最有活性的化合物)和吗啉化合物EHT1864。
由此，这些结果说明了本发明化合物，尤其是哌嗪衍生物EHT5743、EHT8560和EHT9241，和吗啉衍生物EHT1864，影响肿瘤细胞生存力、迁移和抑制小管(血管样结构)形成的能力。
2.体内斑马鱼分析试验的化合物为EHT1864、EHT9241、2ME和CAI。使用5μMFlavopiridol作为阳性内对照。使用图象分析软件对处理和未处理的斑马鱼胚胎的形态测量分析允许量化各种化合物对节间血管形成的抑制(见图6)。EHT1864在斑马鱼胚胎中具有剂量依赖性抗血管生成活性，并且这种活性比得上已知抗血管生成化合物2ME和Flavopiridol的活性。令人感兴趣的是，EHT1864似乎比参比化合物Flavopiridol和SU-5416(未示出)具有小得多的毒性。尽管EHT9241确实显示出抗血管生成活性(40％最大抑制)，但它比EHT1864(77％最大抑制)的有效性低得多。CAI得到的数据不是确定性的，因为化合物在营养培养基中沉淀。
3.毒性分析a.筛选艾姆斯氏试验通过筛选艾姆斯氏试验来测试四种化合物，即EHT1864、EHT2725、EHT8560和EHT9241。在这些实验条件下，有和没有S9混合物，在鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100株中，试验项目没有表现出任何致突变活性。
b.筛选毒性试验测试三种化合物，即EHT1864、EHT8560和EHT9241。总体上，直到300mg/kg/天，三种化合物的耐受性都相当好。研究过程中没有死亡发生。观察三种化合物的最小临床征象。在300mg/kg/天时，在所有组中都注意到平均体重减轻。注意到一些有限的生物学变化(血液学和血液生物化学)。
表表126天处理后的细胞生存力分析(MTT；10％FBS)
表136天处理后的细胞生存力分析(MTT；0.5％FBS)
表143天处理后的细胞生存力分析(MTT；10％FBS)
表1516小时处理后的细胞生存力分析(MTT；10％FBS)
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权利要求
1.具有通式(I)的化合物，它的互变异构体、旋光异构体和几何异构体、外消旋物、盐、水合物和它们的混合物 其中R1选自 和 R2表示氢原子、包含3至6个碳原子的烷基或烯基；B表示卤原子，优选氯，羟基、-O-CH2-O-CH3(MOM)基团、-O-CH2-O-CH2-CH2-O-CH3(MEM)基团、-OSO2-烷基基团或-OSi(CH3)2tBu；D表示氧原子、NR3、CR’R”或硫原子；X表示氧原子、硫原子或基团-NR4-；Y表示氧原子、硫原子或基团-NR4-；R3表示氢、烷基、羧酸酯基、酰基、甲酰胺基或SO2-烷基；R’和R”可相同或不同，表示氢原子或烷基；R4可相同或不同，选自氢原子、具有1至10个碳原子的烷基、芳基和芳烷基；“连接基团”表示(CH2)n，其中n表示1至10的整数，任选地被杂原子(优选N、O、S和P)或羰基、或芳基二烷基(优选二甲苯基)断开；A表示选自以下的基团 和 任选地，A被取代。
2.如权利要求1所述的化合物，其中-X为硫、-NH-或优选氧；和/或-Y为氧；和/或-“连接基团”表示(CH2)n，其中n为2至9，优选4至7，或间-、邻-或对-二甲苯基、-CH2CH2OCH2CH2-和-(C＝O)CH2CH2CH2CH2-；和/或-R1为 、-CH2N(Et2)和-CH2吡咯烷、 其中D为氧、硫、-CH2-或NR3，其中R3优选表示H或烷基(所述烷基更尤其为甲基)，和-CH2-B，其中B为-O-CH2-O-CH3基或-OSO2-烷基(其中烷基优选为甲基)或卤(优选氯或氟)；和/或-R2为氢原子；和/或-A为如上所定义的取代基。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中A被至少一个取代基取代，取代基可选自氢原子、卤原子(优选F、Cl或Br)、羟基、(C1-C10)烷基、烯基、(C1-C10)烷酰基、(C1-C10)烷氧基、(C1-C10)烷氧基羰基、芳基、芳烷基、芳基羰基、单环烃基或多环烃基、-NHCO(C1-C6)烷基、-NO2、-CN、-NR5R6或三氟(C1-C6)烷基，R5和R6彼此独立地选自氢原子、具有1至10个碳原子的烷基、芳基和芳烷基。
4.如权利要求3所述的化合物，其中A为取代基团，至少一个取代基为卤原子，更优选氯或氟。
5.如前述权利要求中任一项所述的化合物，其中A的至少一个取代基、更优选全部取代基代表氢原子、甲基、丙基、乙氧基、卤原子，优选氯或氟，或CF3基团。
6.如权利要求1所述的化合物，其选自2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-吡喃-4-酮(EHT 3788)5-[5-(6-氟-2-甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1593)5-[5-(6-氟-2-三氟甲基-喹啉-4-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1074)5-[5-(7-丙基-喹啉-8-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5810)5-[5-(苯并[b]噻吩-7-基氧)-戊氧基]-2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 6060)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃4-酮(EHT 9376)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[4-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-丁氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 4745)2-(四氢-吡喃-2-基氧甲基)-5-[6-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-己氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 6271)2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮盐酸盐(EHT 1302)2-羟基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 5909)2-甲氧基甲氧基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 2168)2-氯甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 1494)2-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 7365)2-吗啉-4-基甲基-5-[5-(7-三氟甲基-喹啉-4-基硫烷基)-戊氧基]-4H-吡喃-4-酮(EHT 7168)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(氟甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 8817)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌啶-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 9317)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(硫代吗啉代-甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5430)2-((二乙基氨基)甲基)-5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 7370)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT3726)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 4063)4-[5-(6-吗啉-4-基甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT 8935)5-(5-(喹唑啉-4-基氧)戊氧基)-2-((吡咯烷-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5317)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5847)5-(5-(8-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 4687)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 3411)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0079)5-(5-(6-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1426)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT 8791)4-[5-(6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-戊氧基]-7-三氟甲基-喹啉-3-羧酸乙酯(EHT 725)5-((4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 2218)5-((2-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 9069)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-乙酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 3980)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 5743)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-(新戊酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0785)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N，N-二异丙基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 0566)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 8366)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-叔丁基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 3664)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺(EHT 4495)5-(6-(吗啉代甲基)-4-氧代-4H-吡喃-3-基氧)-N-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)戊酰胺(EHT 6037)5-(2-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0371)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT 1864)5-((3-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)甲基)苯基)甲氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮二盐酸盐(EHT 0434)4-((5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT 9358)4-((5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(EHT 2580)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT 9241)5-(5-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮三盐酸盐(EHT 8560)5-(5-(7-氯代喹啉-4-基氧)戊氧基)-2-((哌嗪-1-基)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 0872)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)乙氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 5575)5-(8-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)辛氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 1006)5-(7-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基硫代)庚氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基氧)甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 8883)5-(2-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基氧)乙氧基)-2-(吗啉代甲基)-4H-吡喃-4-酮(EHT 6892)。
7.如权利要求6所述的化合物，其为EHT 9241，它的游离碱EHT7365、EHT 8560、EHT 1864，它的游离碱EHT 7168或EHT 5743。
8.一种药物组合物，包括如前述权利要求中任一项的至少一种化合物和药物可接受的赋形剂或载体。
9.如前述权利要求所述的组合物，用于治疗与异常细胞增殖有关的疾病或与失控血管生成有关的疾病。
10.如前述权利要求所述的组合物，用于治疗癌症、再狭窄、关节炎、糖尿病、眼疾病或尤其是视网膜病。
11.如前述权利要求中任一项所述的组合物，用于治疗实体瘤或淋巴肿瘤。
12.如权利要求10所述的组合物，其中癌症选自前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、头颈癌、结肠癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤癌、白血病和黑素瘤。
13.如权利要求8所述的组合物，用于减少癌细胞增殖。
14.如权利要求8所述的组合物，用于治疗患者中的转移性癌症。
15.如权利要求8所述的组合物，用于治疗糖尿病性视网膜病、视网膜变性疾病、或年龄相关性黄斑变性(ARMD)。
16.如权利要求8所述的组合物，用于治疗关节炎。
17.如权利要求8所述的组合物，用于治疗白血病，尤其是急性成淋巴细胞白血病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病。
全文摘要
本发明涉及通式(I)的化合物和它们的用途，尤其是在药物工业中。本发明公开了具有抗增殖和抗血管生成活性的化合物，以及通过施用所述化合物来治疗各种疾病的方法，所述疾病为与异常细胞增殖有关的疾病包括癌症，或与失控血管生成有关的疾病包括实体瘤生长和转移，眼疾病和尤其是视网膜病，或关节炎。本发明还涉及包括所述化合物的药物组合物，更具体地用于治疗癌症(如白血病)、眼疾病和关节炎。
文档编号A61K31/4709GK1747952SQ200480003820
公开日2006年3月15日 申请日期2004年2月27日 优先权日2003年2月28日
发明者贝特朗·勒布隆, 西尔韦尔·佩蒂, 维尔日妮·皮卡德, 蒂埃里·塔韦纳, 法比安·施魏格霍费尔 申请人:埃克森希特医疗股份有限公司