专利名称：一种具有协同作用的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含红花及三七的药物组合物，具体地说是涉及增强红花有益效果的药物组合物。
背景技术：
红花为菊科红花属植物红花，入药用其干燥花。红花始载于《开宝本草》，原名红兰花，活血化瘀，通经止痛。《本草纲目》谓红花，活血润燥，止痛散肿，通经。
红花含黄酮类，如红花甙、红花醌甙、新红花及木脂类等。另含红花黄色素，它又可分成红花黄色素I、II、III、IV等各组分。红花甙水解产生红花素和葡萄糖。另含有木聚糖、多糖及一苦味甾体甙等成分。红花多糖是由葡萄糖、阿拉糖与半乳糖的β键连接而成。还有脂肪油、16种氨基酸等。红花中脂肪油称红花油，含棕榈酸、硬脂酸、花生酸、油酸、亚油酸、亚麻酸；并含罗汉松树脂酚甙的苦味成分和2-羟基牛蒡甙等。一般药理作用对冠状动脉有一定扩张作用，对心脏有轻度兴奋作用，但大剂量则抑制活血通经、去瘀止痛。用于治疗冠心病、心绞痛等心脑血管疾病。此外，红花还有降血压、降血脂、抗血栓作用。降胆固醇作用，免疫抗癌作用红花多糖有较弱的促进T细胞有丝分裂作用；红花多糖能对抗强类固醇的免疫抑制作用。体外实验显示，红花有抗癌作用，以70％酒精提取，对小白鼠子宫颈癌-14、小白鼠肉瘤-180、小白鼠淋巴肉瘤-1号腹水型有抑制作用。
红花的药用历史悠久，具有很好的开发前景。在现有技术中，红花一般单独使用，这在很大程度上限制了其在临床上的广泛应用，因此，本领域技术人员很容易理解、也迫切地希望开发出这样的复配型药物组合物；它能针对性地协同红花降血压、降血脂、抗血栓等主要功效，同时能够在冠心病患者心绞痛发作时，或处于昏厥休克时冠心病患者心绞痛发作时，或处于昏厥休克时能加强和改善冠脉微循环，增加营养性心肌血流量，从而增加心肌氧和营养物质，预防和治疗心脑组织缺血、缺氧症。且施用方便，无不良反应。
发明内容
我们对红花及其作用机理进行了深入的研究，特别是通过对具有作强心剂兴奋剂作用的特定活性成分的筛选和组方，有效地解决上述问题，在此基础上的进一步研究即完成了本发明。
经过大量实验筛选，本发明人发现，三七能显著增强红花的有益效果，同时包含红花和三七的药物组合比目前市售产品有显著的治疗优点。三七，为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk)F.H.Chen的干燥根。三七性苦味甘、微苦、温，具有活血祛淤、止血、消肿止痛之功能，三七中含三七总皂甙为主要化学成分，另外还含有三七素、三七多糖、三七黄酮、三七挥发油类等。主治心、脑组织缺血、缺氧病症，扩张心、脑组织血管、降低血压，改善心、脑组织的血液循环，降低血脂和胆固醇、抑制动脉硬化。同时还具滋补强壮、强身健体、补血、双向调节中枢神经、提高脑力、调节人体免疫功能、抗肿瘤、延缓衰老、调节血糖、保肝、抗炎镇痛、止血、活血化瘀等功能。至今尚未见有人阐述红花和三七联合应用在临床上的效应。
先导性试验表明，红花与三七的联用表现出协同作用，显著强于单独施用这两种单味药物所产生的效力。同时，本发明人还发现，二者不同配比(例如1∶10-10∶1)与效应之间的关系是非线性的。例如，在预期红花为主效应的范围内(例如抗凝，抗血栓形成作用)，药效并不总是随着红花含量的增加而表现出更强的态势；同样地，在预期三七为主效应的范围内(例如增加营养性心肌血流量作用)，药效也不总是随着三七含量的增加而增强。尤其值得注意的是，在所有先导性药理实验中均发现了上述现象，这明显不同于现有技术的教导。经过深入研究，进一步确定了本发明中红花与三七的重量比例为1∶10-10∶1，优选为1∶5-5∶1，更优选为1∶1。
因此，本发明的一个目的是提供红花与三七联用在预防或治疗冠心病、心绞痛、瘀血阻滞所致的中风、半身不遂，口眼歪斜，胸痹心痛，脑梗塞相关疾病中的应用。本发明首次创建性地提出联合给予红花与三七能有效地治疗和/或控制由于许多复杂原因造成的上述疾病，提供了一种新的治疗方案作为现有技术的替代，这种疗法将是医生高度认可并着力推荐的。所述疾病包括但不限于红花已知能治疗或预防的疾病种类，例如所述疾病包括所述疾病进一步包括减少胆固醇在血管壁的沉积，防治高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛及中风偏瘫后遗症。治疗脑动脉硬化症、脑萎缩、中风后遗症引起的神志不清、健忘、痴呆等。抗动脉血管壁坏死、脱落，防止血栓形成，预防动脉粥样硬化、脑血栓、心肌梗塞的发生。
在上下文中，所述红花包括红花的原粉或提取物，其中提取物包括水和/或醇提取的有效部位或其中单一或几种活性成分的组合包括红花黄色素(Safflor yellow)及红花甙(Carthamin)，所述三七是指三七及其提取物，包括水和/或醇提取的有效部位或单一或几种活性成分的组合包括三七总皂甙从工业化和经济方面考虑，可采用以下提取工艺(1)红花提取取红花，干燥后粉碎成红花粗粉，用3倍量的纯化水煎煮提取3次，每次三十分钟，合并提取液，趁热滤过，浓缩成稠膏，加入4倍量的95％乙醇，充分搅拌，趁热滤过，减压回收乙醇，真空干燥，粉碎后过80目筛备用。
(2)三七总皂甙提取取三七粉末用3倍量的95％乙醇浸泡提取3次，合并乙醇提取液，蒸出乙醇，加水溶解D101大孔吸附树脂水洗至流出液无色，用50％乙醇洗脱，洗脱液加1％活性炭，回流脱色30min，趁热过滤真空减压干燥回收乙醇，真空干燥，粉碎后过80目筛备用即得三七总皂甙。
可将本发明药物组合物制成口服、静脉给药的剂型，例如颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸、小丸剂或注射剂。
药效学试验例1材料1.1动物昆明种小鼠，18～22g，27～32g，雄性；大鼠，Wistar种，体重280～320g，均由湖北省医学动物中心提供，合格证号小鼠19-076；大鼠19-098，猫，体重2.0～3.0kg，雌雄兼用，市购.
1.2药品与试剂红花三七注射液(HS，海南国瑞堂制药有限公司提供，规格50mg5mg/5ml)；脉络宁注射液(MLN，南京金陵制药有限公司生产，批号0401011)；盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号040401)1.3器材BS634型血小板聚集仪(北京生化制药厂)；MVIS-2000型全自动血液流变分析仪(进口)；UV-VIS2半自动生化测定仪(法国莫里埃公司).
2方法与结果2.1对胶原蛋白-肾上腺素诱发的小鼠体内血栓形成的影响将体重27～32g的雄性小鼠分为5组，分别为空白对照组、HS高、中、低3个剂量组(300、150、75mg/kg)和MLN组(7.4mL/kg)，分别腹腔注射各种药物，每天给药1次，连续4d，末次给药后30min，尾静脉注射胶原蛋白(84.4μg/只)、肾上腺素(3.38μg/只)的混合诱导剂，注射后即刻观察15min内小鼠偏瘫未恢复数，进行χ2检验，计算药物对脑血栓的保护率，结果见表1.
Tab.1 The effects of HS on mice thrombosis induced by collage-adrenalinin vivo
***P＜0.01 compared with NS；▲▲▲P＜0.01 compared with MLN结果显示，HS(300mg/kg)对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓形成有明显的抑制作用，与对照组比差别有显著意义(P＜0.01)，与MLN组(7.4mL/kg)比差别也有显著意义(P＜0.01).
2.2对急性血淤模型大鼠血液流变学的影响将大鼠分为6组，分别腹腔注射HS高、中、低3个剂量组(72、36、18mg/kg)和MLN组(71.8mL/kg)，对照组和模型组给同体积生理盐水，分别腹腔注射各种药物，每天给药1次，连续7d.模型组与给药组于第7d皮下注射肾上腺素0.08mL/100g体重，共两次，间隔4h，两次中间将大鼠浸入冰水内5min，处置后停食，次晨戊巴比妥钠麻醉后颈动脉采血，以MVIS-2000型全自动血液流变分析仪测定各项指标，结果见表2.
Tab.2 The effects of HS on hemorrhedogy in rats(x±s)
***P＜0.01；**P＜0.05 compared with NS；▲▲▲P＜0.01；▲▲P＜0.05 compared withMLN结果表明，模型组与正常对照组比，各项指标均明显增加，血淤模型成立；HS对血液流变学各项指标均有明显的降低作用，与对照组比差别有显著意义(P＜0.01).
2.3对大鼠体外血小板聚集功能的影响取禁食12～18h的雄性大鼠，麻醉后颈动脉采血，放入预先加好抗凝剂的试管中，混匀，离心5min(1000r/min)，取上清液为富血小板血浆(PRP)。 然后离心10min(2000r/min)，取上清液为贫小板血浆(PPP)。取PRP和PPP各200μL，以0.1mol/L磷酸盐缓冲液作对照，每次加入不同浓度的药液20μL，以ADP作诱导剂，在BS634型血小板聚集仪上测定5min的聚集曲线，以最大聚集率进行t检验，并求出各浓度聚集抑制百分率，结果见表3.
聚集抑制率＝〔(缓冲液最大聚集率-药物最大聚集率)/缓冲液最大聚集率〕×100％.
Tab.3 The effects of HS on rat platelet aggregation by ADP in vitro(x±s)
***P＜0.01 compared with NS；▲▲▲P＜0.01；▲▲P＜0.05 compared with MLN结果表明XST对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用，与对照组比差别有非常显著意义(P＜0.01)，高中剂量的作用明显优于MLN注射液(P＜0.05，P＜0.01).
2.4对猫脑血管阻力的影响取健康猫4只，麻醉后背位固定，分离一侧颈总动脉，将颈内动脉以外的分支全部结扎，将恒流泵输入端连于颈总动脉离心端，血液经恒流泵流入脑内，在恒流泵输入及输出端上分别连一三通管，侧管分别连两个检压计，前者记录血压，后者记录脑血管阻力，调节恒流泵速度，使血压和脑血管阻力稳定后，按不完全拉丁方设计动脉给药，0.2mL/kg，记录给药5min内脑血管阻力下降的最低值，以降低百分率进行t检验，结果见表4.
Tab.4 The effects of HS on cerebrovascular resistance in cats/(x±s)
乙醇与水提取效率的比较
2、成本降低因水作为溶剂所提取的水溶性成分更完全，脂溶性成分减少，减少了以后精制的难度，减少生产成本。
3、杂质含量少、成品质量高①溶液中的鞣质含量减少采用絮凝沉淀法除鞣质，本工艺中使用了0.1％的蛋清溶液，让它和鞣质形成不溶性鞣酸蛋白，然后絮凝沉淀，达到将其除去的目的。用此方法可至少减少一次醇沉，降低了成本，且此方法除杂质针对性强，不影响本品的有效成分；②多糖、淀粉和蛋白质等杂质含量减少采用煮沸和醇沉的双重方法除蛋白质，利用蛋白质加热凝固，不溶于乙醇的性质，在加入0.1％蛋清溶液除鞣质后，通过加热煮沸，蛋清凝固，并加乙醇使溶液的含醇量达85％，然后过滤除去，此时还可除去溶液中的蛋白质、多糖、淀粉等，使杂质去除得更完全；③树脂含量减少本发明采用调pH值为酸性的工艺来去除树脂，利用了树脂不溶于稀酸的性质，调pH值为2.5～3.0，从而除去树脂，用此方法除树脂完全，效果好，而且不带入其它杂质。
4、简化了浸出步骤将原来的四步的提取步骤简化为两步，极大地减少了工序，提高了生产效率。
5、有利于提升产品品质采用本工艺后，产品可很方便地制备成针剂、冻干粉等其它品质较高的产品。
具体实施例方式实施例1依次包括下述步骤，A、水提取以上两味药材，丹参粉碎成粗粉与红花混合，加12倍水65℃温浸两次，每次一小时，合并滤液，滤过，滤<p>
***P＜0.01；**P＜0.05 compared with NS；▲▲▲P＜0.01；▲▲P＜0.05compared with MLN结果显示，模型组与对照组比，差别有显著意义，高脂模型成立.与模型组比较，HS 3个剂量均能明显降低甘油三脂的含量(P＜0.05＝，高中剂量的作用明显优于MLN(P＜0.01＝；高中剂量还能明显降低胆固醇含量，作用明显优于MLN(P＜0.01＝；中剂量可使高密度脂蛋白含量明显增加(P＜0.05.
药效学试验例2材料1.1动物雄性SD大鼠，Wistar种，体重280～320g，由湖北省医学动物中心提供，合格证号大鼠19-098。
1.2药品与试剂红花三七注射液(HS，海南国瑞堂制药有限公司提供，规格50mg5mg/5ml)；盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号040401).
1.3方法1.3.1大鼠心肌缺血性损伤时的心电图观察大鼠随机分为4组溶剂对照组、红花三七注射液10、20和40mg/kg组。乌拉坦腹腔注射后用RM 6200型四道生理记录仪描记标准肢体II导联正常心电图(ECG异常者剔除)。分别从尾静脉注射溶剂和各剂量的HS，20min后静脉给予异丙肾上腺素(Iso)1mg/kg，记录给Iso后的1、3、5、10、20、30、60min各点的ECG，观察J点下移及恢复的情况。以60min内各观察点心电图J点下移总mv数(∑J)及J点恢复正常的时间为指标，比较各组大鼠心肌损伤的程度。
1.3.2大鼠心肌缺血后血清游离脂肪酸及血清酶学指标的测定大鼠随机分为5组正常组、模型组、HS10、20和40mg/kg组。除正常组外，其他各组分别给予(腹腔注射)溶剂及各剂量的HS，30min后皮下注射Iso 3mg/kg，24小时后重复上述给药。在给予第二次Iso后1小时，将大鼠用乙醚麻醉，心脏取血，分离血清。用文献报道的一次提取比色法测定游离脂肪酸的含量，用日立7150型自动生化分析仪测定血清GOT、CPK和LDH的活性。
1.3.4血清脑及心肌组织MDA含量和SOD活性测定大鼠分组及给药同上。第二次给予Iso后1小时，取血同上。同时取心室肌，用pH6.4的磷酸缓冲液制成1∶10匀浆，12000×g离心，取上清液备测。血清及心肌匀浆中的MDA含量用硫代巴比妥酸比色法测定，SOD活性采用化学发光法测定。
1.3.5实验数据的统计学处理实验所得数据用均数±标准差([AKx-]±s)表示，用方差分析判断统计学意义。
2实验结果2.1HS对心肌缺血大鼠ECG的影响在用Iso造成心肌缺血模型后，各组大鼠在缺血后60min内7个时间点的J点下降总毫伏数(∑J)及恢复时间见表1。
表1 HS对心肌缺血大鼠ECG的J点上移的影响
*P＜0.05，**P＜0.01(与溶剂对照组比较)从表中可以看出，与溶剂对照组比较，给予HS的各组∑J均减少，ECG恢复时间也缩短。HS20和40mg/kg组与溶剂对照组比较有统计学意义，而两给药组之间比较无显著差异。实验中观察到HS给药前后大鼠的心率无明显改变，HS组与对照组大鼠给Iso后的心率亦无明显差异。
2.2HS对大鼠心肌缺血后血清中游离脂肪酸(FFA)含量的影响各组大鼠血清FFA的测定结果见表2。
表2 HS对心肌缺血大鼠血清游离脂肪酸含量的影响
#P＜0.05，##P＜0.01(与正常组比较)**P＜0.01(与模型对照组比较)结果显示，各心肌缺血组大鼠血清FAA含量均较正常对照组为高，模型组为正常组的2.3倍(P＜0.001)，而给予HS后FFA升高幅度显著降低，呈一定剂量依赖关系。
2.3 HS对大鼠心肌缺血后血清中CPK、LDH、GOT活性的影响各组大鼠血清肌酸磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)的活性见表3。
表3 HS对心肌缺血大鼠血清CPK、LDH、GOT活性变化的影响
#P＜0.05，##P＜0.01(与正常组比较)*P＜0.05，**P＜0.01(与模型对照组比较)
结果显示，模型对照组血清中3种酶的活性均显著高于正常组，统计学意义明显。给予HS后3种酶活性的升高均受到抑制，呈现一定的剂量依赖关系，除小剂量组的CPK和LDH活性较正常组显著升高外，其余各组的活性已接近正常组水平。
2.4 HS对大鼠心肌缺血后血清和心肌组织SOD活性和MDA含量的影响各组大鼠心肌组织的SOD和MDA含量测定结果见表4。
表4 HS对心肌缺血大鼠心肌组织SOD活性和MDA含量的影响
##P＜0.01(与正常组比较)*P＜0.05，**P＜0.01(与模型对照组比较)从表4可以看出，各组大鼠心肌SOD的变化不明显，不具统计学意义；模型组心肌组织的MDA含量较正常组显著提高，而给予HS后，大鼠心肌MDA含量的升高被抑制，与正常组无差异。
制剂实施例实施例1片剂
示例工艺取活性成分和乳糖置于V型混合器中混匀，过筛后加适量60％乙醇制粒，60℃干燥，加入硬脂酸镁，充分混匀，压片。所得片剂包衣。
实施例2胶囊剂处方红花提取物 100.0g三七总皂甙 10.0g淀粉100.0g示例工艺取活性成分和淀粉置于V型混合器中混匀，过筛后加适量75％酒精制粒，60℃干燥，整粒，灌装2号胶囊1000粒，即得。
实施例3注射剂
示例工艺取三七提取物加到注射用水中，调节PH约为6.8-8.0，搅拌完全溶解。用注射用水溶解红花提取物，然后加至三七提取物溶液中。加入适量活性炭，加热微沸30分钟，除炭、精滤、灌封、灭菌，即得。
实施例4 注射用粉针处方红花提取物10.0g三七总皂甙10.0g示例工艺取红花提取物10.0g，加注射用水适量用碳酸钠调节PH至8.0使溶解，取三七提取物1.0g加注射用水溶解制成溶液，将紫珠草提取物水溶液加入三七提取物溶液中加注射用水至1000ml，加入0.5％针用活性炭，加热微沸30min，冷却，除菌过滤，分装1000支，即得。
实施例5滴丸剂处方红花提取物50mg三七总皂甙50mg聚乙二醇6000 200mg泊洛沙姆 30mg硬脂酸70mg工艺示例取PEG6000加热熔融，加入红花提取物、泊洛沙姆和硬脂酸，待完全熔融后，搅拌下加入三七提取物。将混合物滴入液体石蜡冷凝液中成丸。
权利要求
1.一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，包括活性组分和适量的药用赋形剂，所述活性组分由红花和三七组成。
2.根据权利要求1所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，所述红花包括红花的原粉、水和/或醇提取提取的有效部位或其中单一或几种活性成分的组合；所述三七包括三七水和/或醇提取提取的有效部位或单一或几种活性成分的组合。
3.根据权利要求2所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中活性组分的含量为1-85％重量。
4 根据权利要求2所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中活性组分的含量为20-65％重量。
5.根据权利要求1-4之一所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中红花和与三七总皂甙重量比例为1∶10-10∶1。
6.根据权利要求5所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中红花和与三七总皂甙重量比例为1∶5-5∶1。
7.根据权利要求6所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中红花和与三七总皂甙重量比例为1∶1。
8.根据权利要求1或2所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，是经口服、静脉给药、经皮或粘膜给药的剂型，具体剂型包括红花三七片、红花三七缓释片、红花三七胶囊、红花三七缓释胶囊、红花三七注射液、红花三七注射用粉针及冻干粉针、红花三七滴丸等。
9.一种具有协同作用的药物组合物，在制备用于预防或治疗心脑血管相关疾病的药物中的应用，其特征在于，所说的药物组合物包括活性组分和适量的药用赋形剂，所述活性组分由红花和三七总皂甙组成。
10.根据权利要求9所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，应用于下列疾病瘀血阻滞所致的中风、中经络，半身不遂，口眼歪斜，胸痹心痛。脑梗塞，冠心病，心绞痛及高脂血症。
11.根据权利要求9或10所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，所述疾病进一步包括心、脑组织缺血、缺氧病症，高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛及中风偏瘫后遗症。治疗脑动脉硬化症、脑萎缩、中风后遗症引起的神志不清、健忘、痴呆等，抗动脉血管壁坏死、脱落，防止血栓形成，预防动脉粥样硬化、脑血栓、心肌梗塞的发生。
全文摘要
本发明涉及增强红花有益效果的药物组合物，其中包含治疗有效量的红花和三七。
文档编号A61P9/10GK1651027SQ200510001988
公开日2005年8月10日 申请日期2005年1月17日 优先权日2005年1月17日
发明者闫彬 申请人:闫彬