专利名称：一种烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，涉及一种烟曲霉酸型甾体与抗生素组合在制造抗耐药菌药物中的新用途。
背景技术：
由于抗生素类药物的广泛应用以及微生物的迅速进化使得多种耐药机制在病源菌中广泛传播，导致多种抗生素临床疗效下降。(Christopher Walsh.Molecular mechanisms that conferantibacterial drug resistance.Nature，406775-781 2000)目前某些耐药病源菌，特别是革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌)的耐药问题越来越严重。它们不仅对单一抗生素有很强的耐受能力，并且往往同时对多种抗生素具有耐药性，临床治疗已十分困难。(Alexander Tomasz.Multiple-Antibiotic-Resistant Pathogenic Bacteria.The New England Journal of Medicine，3301247-1251 1994)微生物耐药性的主要生物化学机理是病源菌产生多种抗生素酶(如β-内酰胺酶)，这些酶能使抗生素在到达病源菌靶点前被改变结构(如抗生素被水解，被羟基化)，从而导致抗生素失去抗菌活性。针对这种耐药机制，学者们相继研制了一些能够抑制抗生素酶活性的β-内酰胺酶抑制剂，如克拉维酸、苏巴坦和他唑巴坦。现在多家公司也开发生产了这些β-内酰胺酶抑制剂同β-内酰胺类抗生素的复方制剂，用以对付β-内酰胺类抗生素耐药菌。
至今还没有更新的抑制剂用于临床，而且对β-内酰胺酶以外的多种抗生素酶引起的耐药问题更是有待解决。
并且有报道称病源菌已开始产生抗抑制剂型的β-内酰胺酶(Bret，L.，C.Chanel，D.Sirot，R.Labia，and J.Sirot.Characterization of an inhibitor-resistant enzyme IRT-2derived from TEM-2β-lactamase produced by Proteus mirabilis strains.J.Antimicrob.Chemother.38183-191 1996)。另一方面，对β-内酰胺酶以外的多种类型抗生素酶引起的耐药问题尚未解决。
本发明采用专利(公开号CN 1412319)所述方法，从微生物发酵样品筛选获得具有抗耐药菌活性的化合物，结构鉴定为一类烟曲霉酸型的甾体化合物。烟曲霉酸型甾体是已知的甾体类抗生素，本身具有抗菌活性，代表物有烟曲霉酸及梭链孢酸。其中烟曲霉酸由于抗菌活性较低，因而现今不被使用，并且还没有人对烟曲霉酸与多种抗生素的药物组合进行研究。里奥药物制品有限公司申请了梭链孢酸衍生物17，20-二氢梭链孢酸的制备方法、药物组合及用途的专利(公开号CN 1378554)，但未涉及梭链孢酸与多种抗生素的药物组合及用途。
发明内容
基于上述，为了克服已有技术的不足之处，本发明的目的在于公开一种烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途。
本发明涉及的烟曲霉酸型甾体结构式见右图， 其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12可以为下述之一种氢原子(H)、羟基(hydroxyl)、羰基氧原子(O)、烃基(alkyl)、烯烃双键(alkene)、芳基(aryl)、酰基(acyl)、酰氧基(acyloxy)、烷氧基(alkoxy)、醛基(aldehyde)、卤素(halogen)、氨基(amino)、烃氨基(alkylamino)、芳氨基(arylamino)、酰氨基(acylamino)和羧基(carboxyl)，且R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12不全为氢原子(H)。
特别地，当R1，R3＝双键；R5，R6＝R9，R10＝O；R7＝acetoxy；R2＝R4＝R8＝R11＝R12＝H时，为烟曲霉酸，该化合物如下图所示。
特别地，当R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝R7＝R8＝R9＝R10＝R11＝H；R6＝R12＝hydroxyl时，为梭链孢酸，该化合物如下图所示。
本发明中，烟曲霉酸型甾体(与相应抗生素组合)应用于制造抗菌药物，具有显著的抗耐药菌协同作用。
本发明中，烟曲霉酸型甾体可与单种抗生素组合，也可与多种抗生素组合应用于抗耐药菌药物的制造。可参与组合的抗生素为医学上应用的抗生素(β-内酰胺、非β-内酰胺)，包括青霉素、红霉素、链霉素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素等。
本发明涉及的药物组合物为烟曲霉酸型甾体与抗生素的药物组合物，包括烟曲霉酸、梭链孢酸及其在药学上可接收的盐、盐的水合物、酯或前体药物如与钠、钾和钙、氨和胺(如普鲁卡因、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、N，N-二苄基-1，2-乙二胺等)所形成的盐与多种抗生素的药物组合物。具体讲，本发明涉及药用的抗菌组合物，包括烟曲霉酸分别与青霉素、红霉素、链霉素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素等抗生素的组合物，以及梭链孢酸分别与青霉素、红霉素、链霉素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素等抗生素的组合物，这些组合物具有显著的抗耐药菌协同作用。
本发明涉及的药物组合物，其特征在于烟曲霉酸型甾体与抗生素组合的重量配比范围为1∶10000～64∶1。具体为烟曲霉酸与氯霉素的重量配比范围为1∶8～64∶1，优选的是1∶4～16∶1，更优选的是1∶2～8∶1；烟曲霉酸与红霉素的重量配比范围为1∶500～64∶1，优选的是1∶64～8∶1，更优选的是1∶8～2∶1；烟曲霉酸与链霉素的重量配比范围为1∶64～64∶1，优选的是1∶4～16∶1，更优选的是1∶2～8∶1；烟曲霉酸与庆大霉素的重量配比范围为1∶8～64∶1，优选的是1∶8～16∶1，更优选的是1∶4～8∶1；烟曲霉酸与卡那霉素的重量配比范围为1∶128～64∶1，优选的是1∶16～4∶1，更优选的是1∶16～1∶1；烟曲霉酸与四环素的重量配比范围为1∶64～64∶1，优选的是1∶8～8∶1，更优选的是1∶4～4∶1；烟曲霉酸与青霉素的重量配比范围为1∶64～64∶1，优选的是1∶64～4∶1，更优选的是1∶4～4∶1。
梭链孢酸与氯霉素的重量配比范围为1∶80～8∶5，优选的是1∶80～2∶5，更优选的是1∶40～1∶5；梭链孢酸与红霉素的重量配比范围为1∶10000～8∶5，优选的是1∶5000～1∶5，更优选的是1∶1280～1∶10；梭链孢酸与链霉素的重量配比范围为1∶640～8∶5，优选的是1∶80～2∶5，更优选的是1∶40～1∶5；梭链孢酸与庆大霉素的重量配比范围为1∶320～8∶5，优选的是1∶40～4∶5，更优选的是1∶40～1∶5；梭链孢酸与卡那霉素的重量配比范围为1∶1280～8∶5，优选的是1∶640～4∶5，更优选的是1∶640～1∶10；梭链孢酸与四环素的重量配比范围为1∶1280～8∶5，优选的是1∶160～1∶5，更优选的是1∶160～1∶10；梭链孢酸与青霉素的重量配比范围为1∶1280～8∶5，优选的是1∶80～2∶5，更优选的是1∶80～1∶10。
根据本发明，可与抗生素组合的烟曲霉酸型甾体还包括在药学上可接收的盐、盐的水合物、酯或前体药物，如钠、钾和钙、氨和胺(如普鲁卡因、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、N，N-二苄基-1，2-乙二胺等)所形成的盐。尤其是烟曲霉酸、梭链孢酸还包括在药学上可接收的盐、盐的水合物、酯或前体药物，如钠、钾和钙、氨和胺(如普鲁卡因、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、N，N-二苄基-1，2-乙二胺等)所形成的盐。
本发明各组合物的给药途径可为注射给药、口服给药、涂抹给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。
本发明的组合物可以制成普通制剂、缓释制剂、控释制剂、靶向制剂。例如，将本发明的组合物制成注射制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂。这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加本领域常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
本发明药物组合物的给药剂量取决于多种因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、个体反应、给药途径、给药次数等，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当调整，以达到其治疗有效的要求，完成本发明的预防与治疗耐药菌感染的目的。
在开始治疗前缺乏特异性诊断时，据估计，约每日0.1-200mg/Kg的剂量范围能够有效预防和治疗耐药菌引起的感染。
本发明另一方面涉及的是含有烟曲霉酸型甾体与多种抗生素的药物组合物在制备抗菌药物中的应用，尤其是在抗耐药菌药物中的应用，以及预防和治疗耐药菌引起的疾病的用途。
本发明还涉及一种药物组合，它包括分开的，或者称分别独立的烟曲霉酸、梭链孢酸及多种抗生素的制剂。在使用时，可以依次或同时将该单独的烟曲霉酸、梭链孢酸制剂与多种抗生素的制剂混合或分别用药，以最终达到使用本发明所述组合物的目的。
本发明具有以下优点1、本发明药物组合物能有效解决细菌对多种抗生素的耐药问题。
2、本发明药物组合物的成分之间具有显著的协同增效作用，对产多种抗生素酶的耐药菌具有明显的协同抗菌作用。
3、本发明药物组合可以减少抗生素的用量，从而相应降低抗生素产生的副作用和不良反应。
本发明为新型抗耐药菌药物的研制奠定了基础。
具体实施例方式
以下的实施例及药物活性实验用于进一步说明本发明，但不表示实施例中所述方式是实施本发明的唯一途径，也不意味着对本发明的任何限制。
实施例1烟曲霉酸/氯霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较1材料与方法1.1临床耐药菌株临床耐药菌株为四川大学华西第一附属医院检验科从临床患者中分离的耐多药金黄色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus)，菌号为13929、12334、11931、12352、12798、12760。对这些分离菌株进行了传代培养，然后用于本实施例中。
1.2药品与试剂红霉素、链霉素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素为Amresco公司产品，生化分析纯；青霉素钠为哈药集团制药总厂的注射用青霉素钠，批号为C 040710910。烟曲霉酸和梭链孢酸由本发明人从微生物发酵物分离制备，纯度高于98％。水解蛋白胨、牛肉膏为北京奥博星生物技术责任有限公司产品，酵母粉为日本大五荣养化学株式会社产品，葡萄糖为成都化学试剂厂产品。
1.3培养基成分水解蛋白胨6g牛肉膏1.5g无水葡萄糖1g酵母粉6g蒸馏水1000ml(煮沸10分钟，冷却后滤纸过滤)pH7.0～7.5 121℃ 30min灭菌1.4实验方法本实施例中采用本领域技术人员公知的实验方法(马绪荣，苏德模.《药品微生物学检验手册》科学出版社.P198～199.)，对本发明中氯霉素及烟曲霉酸/氯霉素组合物对耐药金黄色葡萄球菌进行了体外抗菌活性测定(MIC)，实验结果见表1。
表1烟曲霉酸/氯霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，烟曲霉酸/氯霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或氯霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例2烟曲霉酸/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定红霉素及烟曲霉酸/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表2。
表2烟曲霉酸/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，烟曲霉酸/红霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或红霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例3烟曲霉酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定链霉素及烟曲霉酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表3。
表3烟曲霉酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，烟曲霉酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或链霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例4烟曲霉酸/庆大霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定庆大霉素及烟曲霉酸/庆大霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表4。
表4烟曲霉酸/庆大霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
实验结果表明，烟曲霉酸/庆大霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或庆大霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例5烟曲霉酸/卡那霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定卡那霉素及烟曲霉酸/卡那霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表5。
表5烟曲霉酸/卡那霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
实验结果表明，烟曲霉酸/卡那霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或卡那霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例6烟曲霉酸/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定四环素及烟曲霉酸/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表6。
表6烟曲霉酸/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，烟曲霉酸/四环素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或四环素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例7烟曲霉酸/青霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定青霉素及烟曲霉酸/青霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表7。
表7烟曲霉酸/青霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
实验结果表明，烟曲霉酸/青霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸或青霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例8烟曲霉酸钠/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定红霉素及烟曲霉酸钠/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表8。
表8烟曲霉酸钠/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，烟曲霉酸钠/红霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸钠或红霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例9烟曲霉酸N，N-二苄基-1，2-乙二胺盐/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定四环素及烟曲霉酸N，N-二苄基-1，2-乙二胺盐/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表9。
表9烟曲霉酸N，N-二苄基-1，2-乙二胺盐/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，烟曲霉酸N，N-二苄基-1，2-乙二胺盐/四环素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用烟曲霉酸N，N-二苄基-1，2-乙二胺盐或四环素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例10梭链孢酸/氯霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定氯霉素及梭链孢酸/氯霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表10。
表10梭链孢酸/氯霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸/氯霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或氯霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例11梭链孢酸/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定红霉素及梭链孢酸/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表11。
表11梭链孢酸/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸/红霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或红霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例12梭链孢酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定链霉素及梭链孢酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表12。
表12梭链孢酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸/链霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或链霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例13梭链孢酸/庆大霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定庆大霉素及梭链孢酸/庆大霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表13。
表13梭链孢酸/庆大霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸/庆大霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或庆大霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例14梭链孢酸/卡那霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定卡那霉素及梭链孢酸/卡那霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表14。
表14梭链孢酸/卡那霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸/卡那霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或卡那霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例15梭链孢酸/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定四环素及梭链孢酸/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表15。
表15梭链孢酸/四环素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸/四环素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或四环素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例16梭链孢酸/青霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定青霉素及梭链孢酸/青霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性，其结果见表16。
表16梭链孢酸/青霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
实验结果表明，梭链孢酸/青霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸或青霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例17梭链孢酸N-苄基-β-苯乙基胺盐/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定和抗菌活性比较按实施例1的实验方法测定红霉素及梭链孢酸N-苄基-β-苯乙基胺盐/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性。其结果见表17。
表17梭链孢酸N-苄基-β-苯乙基胺盐/红霉素组合物对临床耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定
以上实验结果表明，梭链孢酸N-苄基-β-苯乙基胺盐/红霉素组合物对临床耐多药金黄色葡萄球菌具有较单独使用梭链孢酸N-苄基-β-苯乙基胺盐或红霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例18烟曲霉酸同青霉素联合使用对产β-内酰胺酶耐药菌的协同抗菌活性1材料与方法1.1青霉素耐药菌株青霉素耐药菌株为诱导型β-内酰胺酶产生菌蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus NCPF 63509)1.2药品与试剂青霉素钠为哈药集团制药总厂的注射用青霉素钠，批号为C 040710910。烟曲霉酸和梭链孢酸由本发明人从微生物发酵物分离制备，纯度大于98％。水解蛋白胨、牛肉膏为北京奥博星生物技术责任有限公司产品，NaCl为成都科龙化工试剂厂产品，生化分析纯。琼脂粉为Amresco公司产品。
1.3培养基成分水解蛋白胨0.5g 蒸馏水1600mlNaCl 0.5g 牛肉膏0.3g琼脂粉1.0％pH7.0-7.2 121℃ 30min灭菌1.4实验方法本实施例参照官家发等人申请的专利(公开号CN 1412319)和欧洲专利(GB 1489235)的方法，对本发明中烟曲霉酸、青霉素及烟曲霉酸/青霉素组合物对产β-内酰胺酶的耐药菌进行了体外抗菌活性测定，实施程序见下。
1.4.1测定平板的制作将琼脂培养基沸水融化后，50℃水浴，待培养基温度下降到50℃时，向培养基(100ml)加入指示菌3ml(蜡状芽孢杆菌NCPF 63509，600nm光程1cm透光率T＝12)，青霉素2.1ml(20mg/ml)，混匀后向每个测定培养皿加入15ml培养基。琼脂培养基完全凝固后，每个测定平板放入6个纸片(直径为6mm)，其中相间3个加入测定样品，另3个加入作为阳性对照和活力矫正的标准物(克拉维酸)。空白对照为溶解用试剂，空白对照平板为不加入青霉素的测定平板。
1.4.2阳性对照物(克拉维酸)的抗耐药菌活性定量测定标准曲线分别以118、168、240、343、490、700、1000μg/ml的克拉维酸作为测定浓度，每个纸片加样20μl(即2.36、3.36、4.8、6.86、9.8、14、20μg/片)，并以343μg/ml克拉维酸作为中心矫正浓度。30℃培养约16小时后，平板培养基上出现清晰的抑菌圈，用游标卡尺测量抑菌圈直径(cm)。
测得在118～1000μg/ml范围内，克拉维酸浓度(X)的对数与抑菌圈直径(Y)呈线形关系。其关系可表示为Y＝0.606Ln(X)-1.5163 r＝0.9991.4.3烟曲霉酸活性的定量测定以DMSO将烟曲霉酸配制成1mg/ml的溶液，按20μl/片加入纸片(即20μg/片)。将加样纸片放入测定平板(以及空白对照平板)中相间3个位置，另3个位置加入作为阳性对照和活力矫正物的标准物(6.86μg/片克拉维酸)。空白对照为溶解用试剂，空白对照平板为不加入青霉素的测定平板。
结果如下，测定平板中青霉素(420μg/ml)单独作用不能抑制耐药菌的生长，而含烟曲霉酸的纸片(20μg/片)单独作用也不能抑制耐药菌在空白对照平板(不加入青霉素的测定平板)中的生长。但是将烟曲霉酸的纸片(20μg/片)放入测定平板培养后，就能产生明显的抑菌圈。并根据标准曲线测得1000μg/ml烟曲霉酸的活性相当于1035.71μg/ml的克拉维酸活性，或1mol烟曲霉酸活性相当于2.96mol克拉维酸活性。
以上实验结果表明，烟曲霉酸与青霉素的联合使用对产β-内酰胺酶的耐药菌具有较单独使用烟曲霉酸或青霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
实施例19梭链孢酸同青霉素联合使用对产β-内酰胺酶耐药菌的协同抗菌活性按实施例18的操作程序进行抗菌活性实验。
结果如下，测定平板中的青霉素(420μg/ml)单独作用不能抑制耐药菌的生长，而含梭链孢酸的纸片(0.75μg/片)单独作用也不能抑制耐药菌在空白对照平板(不加入青霉素的测定平板)中的生长。但是将梭链孢酸的纸片(0.75μg/片)放入含青霉素(420μg/ml)平板培养后，能产生明显的抑菌圈。并根据标准曲线测得1000μg/ml梭链孢酸的活性相当于13067μg/ml的克拉维酸活性，或1mol梭链孢酸活性相当于33.7mol克拉维酸活性.
以上实验结果表明，梭链孢酸与青霉素的联合使用对产β-内酰胺酶的耐药菌具有较单独使用梭链孢酸或青霉素更强的抗菌活性，表现出显著的协同增效作用。
本发明不限于实施例中药物组合物的特定比例。
权利要求
1.一种烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征是具有如下结构式特征的烟曲霉酸型甾体，可与单种或多种抗生素组合，应用于抗耐药菌药物的制造； 其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12可以为下述之一种氢原子(H)、羟基(hydroxyl)、羰基氧原子(O)、烃基(alkyl)、烯烃双键(alkene)、芳基(aryl)、酰基(acyl)、酰氧基(acyloxy)、烷氧基(alkoxy)、醛基(aldehyde)、卤素(halogen)、氨基(amino)、烃氨基(alkylamino)、芳氨基(arylamino)、酰氨基(acylamino)和羧基(carboxyl)，且R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12不全为氢原子(H)。
2.根据权利要求1所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征在于当R1，R3＝双键；R5，R6＝R9，R10＝O；R7＝acetoxy；R2＝R4＝R8＝R11＝R12＝H时，为如下结构式的烟曲霉酸。
3.根据权利要求1所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其中当R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝R7＝R8＝R9＝R10＝R11＝H；R6＝R12＝hydroxyl时，为梭链孢酸。
4.根据权利要求1或2或3所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征是所述的烟曲霉酸型甾体包括其在药学上可接收的盐、盐的水合物、酯或前体药物，如与钠、钾和钙、氨和胺(如普鲁卡因、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、N，N-二苄基-1，2-乙二胺等)所形成的盐。
5.根据权利要求1或2或3所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征是参与组合的抗生素为医学上应用的β-内酰胺类或非β-内酰胺类抗生素，包括青霉素、红霉素、链霉素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素等。
6.根据权利要求1或2或3所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征在于烟曲霉酸型甾体与抗生素组合的重量配比范围为1∶10000～64∶1。
7.根据权利要求1或2所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征在于烟曲霉酸与氯霉素的重量配比范围为1∶8～64∶1，优选的是1∶4～16∶1，更优选的是1∶2～8∶1；烟曲霉酸与红霉素的重量配比范围为1∶500～64∶1，优选的是1∶64～8∶1，更优选的是1∶8～2∶1；烟曲霉酸与链霉素的重量配比范围为1∶64～64∶1，优选的是1∶4～16∶1，更优选的是1∶2～8∶1；烟曲霉酸与庆大霉素的重量配比范围为1∶8～64∶1，优选的是1∶8～16∶1，更优选的是1∶4～8∶1；烟曲霉酸与卡那霉素的重量配比范围为1∶128～64∶1，优选的是1∶16～4∶1，更优选的是1∶16～1∶1；烟曲霉酸与四环素的重量配比范围为1∶64～64∶1，优选的是1∶8～8∶1，更优选的是1∶4～4∶1；烟曲霉酸与青霉素的重量配比范围为1∶64～64∶1，优选的是1∶64～4∶1，更优选的是1∶4～4∶1。
8.根据权利要求1或3所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征在于梭链孢酸与氯霉素的重量配比范围为1∶80～8∶5，优选的是1∶80～2∶5，更优选的是1∶40～1∶5；梭链孢酸与红霉素的重量配比范围为1∶10000～8∶5，优选的是1∶5000～1∶5，更优选的是1∶1280～1∶10；梭链孢酸与链霉素的重量配比范围为1∶640～8∶5，优选的是1∶80～2∶5，更优选的是1∶40～1∶5；梭链孢酸与庆大霉素的重量配比范围为1∶320～8∶5，优选的是1∶40～4∶5，更优选的是1∶40～1∶5；梭链孢酸与卡那霉素的重量配比范围为1∶1280～8∶5，优选的是1∶640～4∶5，更优选的是1∶640～1∶10；梭链孢酸与四环素的重量配比范围为1∶1280～8∶5，优选的是1∶160～1∶5，更优选的是1∶160～1∶10；梭链孢酸与青霉素的重量配比范围为1∶1280～8∶5，优选的是1∶80～2∶5，更优选的是1∶80～1∶10。
9.根据权利要求1或2或3所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征是所述的药物给药剂型是液体剂型或固体剂型；给药途径为注射给药或口服给药或涂抹给药。
10.根据权利要求1或2或3所述的烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，其特征是在使用时，可以依次或同时将该单独的烟曲霉酸、梭链孢酸制剂与多种抗生素的制剂混合或分别用药。
全文摘要
本发明公开了一种烟曲霉酸型甾体在制造抗耐药菌药物中的新用途，包括烟曲霉酸、梭链孢酸及其在药学上可接收的盐、盐的水合物、酯或前体药物与单种或多种抗生素组合，应用于抗耐药菌药物的制造。本发明药物组合物能有效解决细菌对多种抗生素的耐药问题，组合物成分之间具有显著的协同增效作用，对产多种抗生素酶的耐药菌具有明显的协同抗菌作用，可减少抗生素的用量，从而相应降低抗生素产生的副作用和不良反应。
文档编号A61P31/04GK1943580SQ20051002182
公开日2007年4月11日 申请日期2005年10月8日 优先权日2005年10月8日
发明者秦岭, 官家发, 李伯刚, 范成英, 廖连华, 何开泽, 张国林 申请人:中国科学院成都生物研究所