专利名称：贝母生物碱提取物在制备肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物提取物及其应用，尤其是贝母生物碱提取物在制备治疗基底细胞癌(BCC)及其他肿瘤药物中的应用。
背景技术：
贝母为百合科(Liliaceae)贝母属(Fritillaria)多种植物的干燥鳞茎，全世界约有60多种，中国有20种，除两广、福建、台湾等省外，其他省区均有分布，其中以新疆、四川、湖北、安徽等地种类丰富。贝母作为一种常用中药，常用于止咳化痰、清热散结。近年来研究表明，贝母的生物活性是多方面的，如抗菌作用、镇静镇痛作用、抗溃疡作用、抗血小板聚集作用、抗肿瘤作用。贝母属植物中含有许多类化学物质，如生物碱类、皂苷类等，通常认为贝母生物碱是其主要有效成分，并以贝母生物碱的含量作为评价贝母质量的主要依据。贝母主要用于制备治疗咳嗽，祛痰，润肺等药物或保健食品，如川贝枇杷膏等。
基底细胞癌(BCC)是一种常见的上皮细胞肿瘤，其发病率随年龄增长而上升。现阶段对于此病的治疗主要是采用外科手术摘除肿瘤以及正常组织的部分边缘。在患者手术不可行时，则通过放疗等方法破坏肿瘤细胞。放疗主要是通过不可修复的大量破坏DNA，从而杀死肿瘤细胞，但与此同时也杀死了许多正常的细胞，因此，这些治疗方法的实用性和有效性是十分有限的。近年来，国内外学者在应用天然药物有效成分治疗基底细胞癌方面做了大量的基础研究和临床应用研究，希望从中开发出治疗该病的新药，其中研究较多的有cyclopamine等。目前尚未见用贝母及其提取物治疗基底细胞癌的研究报道。
发明内容
本发明所要要解决的技术问题在于研究设计贝母及其提取物的应用。
本发明提供了贝母生物碱提取物在制备治疗基底细胞癌及其它肿瘤药物中的应用。本发明的机理主要是通过区分出肿瘤细胞，并使其死亡，从而达到治疗效果。同时能保留正常的组织细胞(包括正常表皮基层和毛囊的未被区分的其它细胞)。由于贝母生物碱提取物引起肿瘤细胞死亡的原因是通过非基因毒性机制，因此不同于放射治疗和化学疗法那样，它们是通过破坏DNA来发挥作用，对正常细胞也带来了杀伤。依据该机理，贝母生物碱提取物特别适用于癌症治疗，能治疗基底细胞癌、以及其他如髓质母细胞瘤、横纹肌瘤、纤维肉瘤、消化道肿瘤和小细胞胞肺癌等通过hedgehog/圆滑信号传导途径来繁殖细胞和防止细胞凋亡的肿瘤。
本发明提供了贝母生物碱提取物的应用，所述的贝母生物碱提取物通过下列方法提取将贝母原料粉碎，用原料3倍量的工业酒精回流提取3次，每次一个半小时，过滤，浓缩得浸膏。浸膏用少量1％的盐酸溶液捏溶，过滤，滤液用其1/2量的乙醚萃取3次，再用氨水碱化至pH为8，用与碱液相同量的氯仿萃取6次，回收溶剂，得贝母生物碱提取物。
贝母生物碱提取物可以制成药物制剂。将贝母生物碱提取物，与药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成口服型药物制剂或注射型药物制剂。与口服制剂中的药用辅料崩解剂、赋型剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等，按常规方法即可制成为片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂和丸剂等口服固体药物制剂；与常用的增溶剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、较味剂、增稠剂等混合，按相应的常规方法，即可制成为水剂、糖浆剂等口服液体药物制剂；与注射剂中常用的适当溶剂和附加剂配合和操作，还可以制备成相应的冻干粉针、水针等肌肉注射药物制剂。
本发明提供了贝母生物碱提取物在制备治疗各种基底细胞癌及其他肿瘤药物中的应用。
本发明方法提取的贝母生物碱提取物进行了下列动物试验试验目的贝母生物碱防止了B波段紫外线(UV)诱导的基底细胞癌的生成试验动物昆明小鼠(一级)180只，体重30-35克，雌雄各半，随机分为6组。
造模方法UVB距小鼠30cm处照射。
供试药物贝母生物碱提取物阳性对照药环耙明(cyclopamine)仪器UV放射装置(Daavlin Co.，Bryan，OH)试验方法用B波段UV照射小鼠240mJ/cm2一周三次，直至有明显可见的皮肤肿瘤出现，停止照射。口服给药20周，记录每周的肿瘤情况。然后取小鼠背部皮肤，以从组织学上研究肿瘤情况。于4℃将组织浸于0.2％戊二醛/2％甲醛-1*PBS20分钟，然后用1*PBS洗两次。将组织在37℃置于含5％5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷的95％铁缓冲液中，放置24小时，以患基底细胞癌(BCC)表示部位的面积作为观察指标。
试验结果
动物实验结果表明，贝母生物碱提取物可明显抑制小鼠所患的基底细胞癌。
本发明人将贝母生物碱提取物应用于患者也获得了良好的效果。
例如将贝母生物碱提取物乳膏治疗鼻部基底细胞癌患者，结果表明大量肿瘤细胞死亡。
本发明提供的贝母生物碱提取物在治疗肿瘤方面的应用，将为治疗肿瘤辟了新的方案，对医药临床和人类健康有较大的应用价值。
具体实施例方式实例1、本发明的贝母生物碱提取物制剂的应用实例一68岁老年男性患者，鼻部上端患大面积溃烂性基底细胞癌。用贝母生物碱提取物乳膏治疗基底细胞癌患处的下半部。每隔三个小时，直接涂抹约20mu.l贝母生物碱提取物乳膏于基底细胞癌患处的下半部，而上半部不涂抹。治疗54小时后，将肿瘤切除，以便观察。可明显观察到用贝母生物碱提取物乳膏治疗的上半部分，肿瘤被快速抑制，而下半部分无明显变化。另外，用H&E标记切除的肿瘤，可以看到，治疗部分大量肿瘤细胞死亡，并由此形成了大小不一的囊肿。与此相对的，未治疗部分是一坚固的肿瘤组织，而且没有观察到细胞死亡。在免疫组织化学方面，用单核抗体Ki-S5为标记拮抗抗原Ki-67。抗原Ki-67，是细胞繁殖的标记，它在用贝母生物碱提取物乳膏部位不再表达，而在未治疗部位，可明显的看到肿瘤细胞繁殖。
实例2、一82岁老年男性患者，面颊患毛发上皮瘤。用25mu.l贝母生物碱提取物乳膏每隔三个小时，直接涂抹于患处。24小时后，中断治疗，将患肿瘤处皮肤切除，以作观察。在残留肿瘤细胞中可以观察到，细胞开始死亡。另外，患处附近的胎块在用药24小时后变小，色素沉着变少。
实例3一59岁男性患者，下眼睑患有痣样基底细胞癌。除被标记处，其余所有节结都用20mu.l贝母生物碱提取物乳膏每隔四小时治疗一次。被标记的节结只能靠乳膏的扩散来接受治疗。接受治疗后的第三天，患处肿瘤大幅度减少，只残留少量可见部分。停止治疗，再做后续观察，没有观察到明显的肿瘤抑制现象。用H&E标记的接受治疗的肿瘤部位显示出许多无肿瘤细胞的包囊空间。6天后，原肿瘤患处的皮肤被切除以作观察。残留的肿瘤细胞，特别是在包囊边缘附近的细胞，显示出不同寻常的高频率细胞分化特征。而在被切除的活组织切片检查无此现象。通过观察在免疫组织化学上用Ber-Ep4标记的结节证实了，贝母生物碱提取物诱导的肿瘤细胞分化作用是呈显著的剂量依赖关系的。另外，在六天不接受治疗的后续观察中，已经分化的肿瘤细胞并未恢复原状。
权利要求
1.一种贝母生物碱提取物在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于该贝母生物碱提取物是通过下列方法提取的将贝母原料粉碎，用原料3倍量的工业酒精回流提取3次，每次一个半小时，合并提取液过滤，浓缩得浸膏，浸膏用少量1％的盐酸溶液捏溶，过滤，滤液用其1/2量的乙醚萃取3次，收集乙醚萃取液再用氨水碱化至pH为8，用与碱液相同量的氯仿萃取6次，回收溶剂后，得贝母生物碱提取物。
2.根据权利要求1所述的一种贝母生物碱提取物在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于其中所述的肿瘤包括基底细胞癌，髓质细胞瘤、横纹肌瘤、纤维肉瘤、消化道肿瘤和小细胞肺癌。
3.根据权利要求1所述的一种贝母生物碱提取物在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于其中的所述的治疗肿瘤的药物包括贝母生物碱提取物与药用辅料组成的口服制剂或注射剂。
全文摘要
本发明提供了贝母生物碱提取物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明通过动物试验和临床应用实例表明可明显抑制基底细胞癌。本发明将为治疗肿瘤开辟新的方案，对医药临床的人类健康有较大的应用价值。
文档编号A61P35/00GK1853700SQ20051002558
公开日2006年11月1日 申请日期2005年4月29日 优先权日2005年4月29日
发明者康露, 周剑侠, 范小兵, 沈征武 申请人:上海诺德生物实业有限公司