专利名称：一种番荔枝种子提取物和提取方法及在制备抗癌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药物提取物及提取方法，具体地说是涉及一种番茄枝种子提取物和提取方法及其在制备治疗抗癌药物中的应用。
背景技术：
本发明人研究了6种番荔枝植物抗癌化学成分及其抗肿瘤作用，发现番荔枝乙醇提取物抗肿瘤活性最好，其在体内对移植性肿瘤S180的抑瘤率可达64％-68％，在体内对肝癌H22的抑瘤率可达59％-63％(国家教育部科技成果登记号360-03-2c370029-01)，该项研究成果2003年获江苏省科技进步奖三等奖。在此基础上，本发明人进一步研究了番荔枝乙醇提取物的抗癌有效部位，从中提取出抗癌有效部位二氯甲烷提取物。
发明内容
1.发明目的本发明的目的在于寻找番茄枝乙醇提取物抗肿瘤活性的有效部位，研究发现了番茄枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物；及其提取方法和在制备抗癌药物中的应用。
2.技术方案本发明人进一步研究，发现其抗癌的活性部位主要是本发明的番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物。
一种番荔枝提取物，其特征在于它是番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物浸膏。
一种提取番荔枝种子提取物的方法，其提取步骤如下(1)取番荔枝种子，经烘干粉碎，用95％的乙醇冷浸三次，每次浸泡24小时后，经旋转蒸发器回收乙醇，浓缩，得浸膏；(2)取其浸膏经二氯甲烷连续萃取4次，用旋转蒸发器回收二氯甲烷，得到二氯甲烷提取物浸膏。
3.有益效果根据本发明人的研究，番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物，对HepS移植性肝癌有显著的抑制作用，3个剂量组的抑瘤率分别达67.42％、65.15％、63.63％，其抗癌活性显著比番荔枝种子乙醇提取物为高。番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物不同剂量组的瘤重抑制率与5-Fu阳性化疗组的瘤重抑制率相当接近，说明番荔枝种子乙醇提取物二氯甲烷提取物的抗肿瘤效价较高，在制备抗癌药物中具有广泛的应用前景。
四
HepS肝癌组织电镜观察结果图1.5Fu×5800图2.模型阴性组×5800
图3.番甲高剂量组×5800图4.番甲中剂量组×5800图5.番甲低剂量组×5800五具体实施例方式实施例1番茄枝种子提取物的提取方法取番荔枝种子10kg，经烘干粉碎，用8倍95％工业乙醇80L冷浸三次，每次浸泡24小时后，经旋转蒸发器回收乙醇，浓缩得浸膏2004.2g；取其中1800g加入1500ml分析纯二氯甲烷，摇匀、静置、待分层后，倒去上层液，将下层部分经二氯甲烷连续萃取4次后，用旋转蒸发器回收二氯甲烷，得到二氯甲烷提取物617.1g。
实施例2番茄枝种子提取物的抗癌作用1.实验方法1.1移殖性肝癌模型的建立参考徐叔云第三版的药理实验方法学。选取肿瘤生长旺盛的肝癌HepS腹水小鼠，颈椎脱臼处死，置净化台中，消毒腹部皮肤，抽取腹水，苔盼蓝染色后光镜下观察活瘤细胞数＞95％，以1∶3注射用水稀释，制成瘤细胞悬液，含HepS肝癌细胞1×108个/ml。取肝癌细胞0.2ml，即每只小鼠注射HepS肝癌细胞约5×107个于小鼠前肢右腋皮下，制造移植性肝癌的实体瘤模型。
1.2动物分组取昆明种(KM)小鼠80只，随机分成模型阴性对照组10只及实验组70只。实验组分为5-Fu阳性化疗组，番荔枝种子乙醇提取物二氯甲烷提取物(番甲)剂量低、中、高治疗组，番荔枝种子乙醇提取物(番乙)剂量低、中、高治疗组，每组小鼠10只。处死前称每只小鼠重量。
1.3动物给药在造模后第二天，各组给药模型阴性对照组每天灌服0.2ml的1％CMC-Na生理盐水生理盐水；5-Fu阳性化疗组小鼠按40mg·kg-1d-15-Fu腹腔注射，即每只小鼠约给药0.2ml配制好浓度的5-Fu溶液；各治疗组小鼠分别以不同浓度实验药物灌胃，即按制药所配好的药物浓度，即低、中、高三剂量组，分别每天每只小鼠给药0.2ml，连用7天。
1.4取材及处理于停药24小时后处死所有小鼠，称体重。完整剥取实验组小鼠的皮下肿瘤，称瘤重，计算抑制率。
抑制率(IR)＝(模型阴性对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/模型阴性对照组平均瘤重×100％。
将各组实体瘤，分别置入10％甲醛中固定、漂洗、后固定、脱水、常规石蜡包埋、切片、HE染色。OLYMPUS X-60显微镜观察，数码相机摄片，并用Cmias-98A图像处理仪处理，分析各组实体瘤的病理变化。
电镜肿瘤组织取材于5分钟内浸入2.5％的戊二醛固定液中固定，4℃下一周，后用磷酸缓冲液(pH7.4)浸洗，15分钟×3次，1％锇酸后固定1小时，再用磷酸缓冲液(pH7.4)浸洗，15分钟×3次。常规浸透、包埋、聚合、超薄切片，片厚50nm。常规双重电子染色。PHILIPS TECNAI 12型电镜观察、摄片。
1.5观测指标比较各组下列指标的差异瘤重抑制率；实体瘤的病理变化及病理切片的肿瘤坏死面积；各组肿瘤组织形态学电镜变化。
1.6统计方法数据采用SPASS11.5for Windows统计分析软件及Microsoft Excel 2000。所有数据均以均数(X)及标准差(SD)，即(X±SD)表示，进行t检验、方差分析或两两比较的Q检验。百分数用U检验。
2.实验结果2.1番荔枝种子乙醇提取物二氯甲烷提取物对移植性肝癌HepS的抑制作用番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物(番甲)，对HepS移植性肝癌有显著的抑制作用，3个剂量组的抑瘤率分别达67.42％、65.15％、63.63％，其抗癌活性显著比番荔枝种子乙醇提取物(番乙)为高。番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物不同剂量组的瘤重抑制率与5-Fu阳性化疗组的瘤重抑制率相当接近，说明番荔枝种子乙醇提取物二氯甲烷提取物的抗肿瘤效价较高，在制备抗癌药物中具有广泛的应用前景。
表1 番荔枝种子乙醇提取物二氯甲烷提取物(番甲)对移植性肝癌HepS的抑制作用
★与模型组相比P＜0.01；※与化疗组相比P＞0.05；*与番乙组相比P＜0.012.2HepS肝癌组织电镜观察结果模型组癌细胞具有典型的肿瘤超微结构特征，细胞异形性，核畸形，核染色质分布及形态结构异常(见图2，×5800)。
5Fu化疗组可见坏死，核染色质凝集，凋亡小体样物形成。肿瘤细胞结构不清，部分呈碎屑状及坏死，并见致密坏死和不整形致密小体，未见核膜结构(图1，×5800)。
番荔枝种子乙醇提取物二氯甲烷提取物(番甲)不同剂量组可见细胞坏死及严重变性，亦见凋亡样小体及染色质凝集。可见肿瘤细胞的核不清晰，染色质分布不规范，胞浆中细胞器也欠清晰，可见凋亡小体(图3，×5800；图4，×5800；图5，×5800)。
权利要求
1.一种番荔枝提取物，其特征在于它是番荔枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物浸膏。
2.一种提取权利要求1所述番荔枝种子提取物的方法，其特征是包括下列步骤(1)取番荔枝种子，经烘干粉碎，用乙醇冷浸，回收乙醇，浓缩，得浸膏；(2)取其浸膏经二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到二氯甲烷提取物浸膏。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于在步骤(1)中的乙醇是95％的乙醇，冷浸3次，每次浸泡24小时后用旋转蒸发器回收乙醇。
4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于在步骤(2)中经二氯甲烷连续进行萃取4次，然后用旋转蒸发器回收二氯甲烷。
5.权利要求1所述的番荔枝种子提取物在制备抗癌药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种番茄枝种子提取物和提取方法及其在制备抗癌药物中的应用，该提取物是番茄枝种子乙醇提取物的二氯甲烷提取物；其提取方法是首先取番茄枝种子烘干粉碎→乙醇浸泡→回收乙醇→浓缩得浸膏；其次是取浸膏经二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得二氯甲烷提取物浸膏。该提取物对HepS移植性肝癌有显著的抑制作用，抗肿瘤效价高，在制备抗癌药物中具有广泛的应用前景。
文档编号A61P35/00GK1739586SQ20051004154
公开日2006年3月1日 申请日期2005年8月19日 优先权日2005年8月19日
发明者章永红 申请人:南京中医药大学