专利名称：具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说它是具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物。
背景技术：
芍药是毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物芍药的干燥根。所谓白芍和赤芍，根据现今应用情况及历代本草中的记载可认为白芍是栽培的芍药植物的根，赤芍则主要来自野生芍药的根。芍药分布于我国北方地区，另有同属的草芍药P.obovata.Maxim.分布于东北、华北、华中、西南等地区。川赤芍P.veitchiiLynch.分布甘肃、山西、四川、西藏等省区。以上两种植物的干燥根亦作“赤芍”入药。
芍药根中主要化学成分为单萜及单萜苷类化合物，芍药苷等单萜类化合物是这些生理活性的主要物质基础(吴菡子 熊南山 白芍的药理研究与临床应用《中国医院药学杂志》1998)(菅谷爱子 芍药的药理及药效《国外医学中医中药分册》1992，14(5)271)。芍药苷(paeoniflorin)是于1963年首次从芍药中分得的(Shibata S，Nakahara M.Paeonoflorin，a glucoside of Chinesepaeony root[J].Chem Pharm Bull，1963，11(3)372-378)。后来又分离得到羟基芍药苷(Oxypaeoniflorin)、芍药内酯苷(Albiflorin)、苯甲酰芍药苷(Benzoylpaeoniflorin)，乙酰芍药苷(acetylpaeoniflorin)和没食子酰芍药苷(galloylpaeoniflorin)等化合物。根据基本骨架这些化合物可分为具有笼状蒎烷结构的单萜及单萜苷类化合物和具有内酯结构的单萜及单萜苷类化合物。芍药根中还含有部分三萜化合物及鞣质。此外，芍药中还含有挥发油、脂肪油、树脂、糖、粘液质、蛋白质、金属元素及17种氨基酸。
近年，有许多关于芍药属植物芍药苷含量测定的研究，野生和栽培芍药中芍药苷含量在不同产地和部位间的有很大差异。为制定切实可行的质量控制标准，研究结果表明芍药根茎中芍药苷含量近于或略高于根，枯根中含量也不低，说明单一指标尚不足以控制其质量；野生品赤芍中芍药苷含量普遍高于栽培品，大致以3％为分界线(胡世林付桂兰不同产地和部位赤芍中芍药苷的含量测定《中国中药杂志》2000，25(12)714)(王朝虹闵知大芍药化学成分及药理研究时珍国医国药1999，10(7)544)。2000年版《中国药典》标准已规定赤芍中芍药苷的含量不低于1.8％，也规定白芍中芍药苷的含量不低于0.8％。
目前，对芍药提取物还没有统一的标准，市场上的白芍总苷胶囊是由中药白芍中提取的有效部位制成的制剂，具有抗炎和免疫调节等药理作用，临床上用于类风湿性关节炎的治疗。有文献报道采用HPLC以白芍中所含芍药苷作为定量化学指标测定白芍总苷的含量，芍药苷的含量均低于30％(陈勇川穆海川高效毛细管电泳法测定白芍总苷胶囊中芍药苷的含量《解放军药学学报》2002，18(2)107)。
我们在申请号为02133298.3的专利中已经详细阐述了芍药苷和芍药内酯苷组合物及其制备方法，从而为芍药单方制剂和复方制剂的规范化和现代化提供了可靠的物质基础。
芍药性微寒、味苦酸，有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗的功能(吴菡子 熊南山 白芍的药理研究与临床应用《中国医院药学杂志》1998)(菅谷爱子 芍药的药理及药效《国外医学中医中药分册》1992，14(5)271)。我国民间用于治疗胸腹腰肋疼痛、自汗盗汗、阴虚发热、月经不调、崩漏、带下。近期对芍药苷与芍药内酯苷组合物的药理研究表明该组合物具有显著的促白细胞升高效应，分别用X-射线照射和环磷酰胺处理小鼠及用盐酸阿糖胞苷处理家兔为模型，考察该组合物对动物外周血及骨髓血细胞的影响。X-射线照射、环磷酰胺处理及盐酸阿糖胞苷处理均可使动物骨髓造血功能受到抑制，与模型组比较，不同剂量的白芍组合物可以使小鼠的外周血白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数量和骨髓有核细胞总数得到提升，使家兔的外周血白细胞总数、血红蛋白含量和血小板数量得到提升，还可使模型动物的外周血及骨髓白细胞分类趋于正常，并提高脾脏指数。并且高剂量组的提升效果优于中剂量和低剂量组，应用同样剂量时，静脉给药途径优于口服给药途径。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有升白作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，可用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少血小板和血红球蛋白降低的药物。该组合物主要含有芍药苷(paeoniflorin)，与芍药内酯苷(albiflorin)，所述的组合物中芍药苷和芍药内酯苷两者之和的含量在50％～95％之间，所述组合物中芍药苷与芍药内酯苷的比例为1∶10～10∶1。上述组合物适合制成各种单方和复方药物制剂；所述的药物制剂可制成缓释或控释药物制剂；所述的药物制剂可制成腔肠给药、喷雾给药、透皮吸收或口服的药物制剂，注射剂或输液制剂；所述的组合物可用于替代芍药提取物或芍药总苷与其它药物(含中药提取物或有效成分)组成复方药物制剂。该组合物可用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低的病症的药物制剂。
该组合物的制备工艺如下1本组合物的制备(1)干燥芍药根(毛茛科芍药属植物)切成饮片经水提取后得水提液。
(2)水提液浓缩，通过反向吸附树脂用乙醇-水洗脱，得洗脱液，除去水溶性杂质。
(3)洗脱液经浓缩，浓缩物用硅胶柱层析得富含芍药苷和芍药内酯苷组分的组合物。
2组合物的组成成分纯化与定量分析2.1所述组合物通过制备HPLC分离纯化，分别得到二种化合物的纯品。检测结果如下所述组合物各组分通过HPLC检测(色谱柱DiamonsilTMC18 5μm 4.6×200mm；波长230nm；流动相甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4))(结果如图1所示)I芍药内酯苷II芍药苷2.2用纯化的化合物I和II为对照品分别绘制液相工作标准曲线(以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标)如下表1两种组分标准曲线
芍药内酯苷(I)与芍药苷(II)是白芍提取物主要有效成分，可以通过特定的工艺过程，标化只含有芍药苷与芍药内酯苷的组合物，该组合物中I和II的含量不低于50％。
3本组合物升白作用3.1本组合物对X-射线照射动物模型外周血及骨髓血细胞的影响3.1.1动物模型X-射线照射的小鼠3.1.2检测指标血液学检测、股骨骨髓有核细胞计数、骨髓细胞分类计数和脾脏指数的测定。
3.1.3检测部分结果如图2、3所示注与正常对照组比较##p＜0.01；与模型对照组比较**p＜0.01，*p＜0.05试验结果表明本组合物以60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg，iv.给药7天对X-线照射小鼠外周血白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数量和骨髓有核细胞总数下降有显著改善作用；提高脾脏脏器指数并使外周血和骨髓白细胞分类趋于正常。同时，高剂量组的提升效果优于中剂量和低剂量组，应用同样剂量时，静脉给药途径优于口服给药途径。
3.2本组合物对环磷酰胺处理小鼠外周血及骨髓血细胞的影响3.2.1动物模型环磷酰胺处理小鼠3.2.2检测指标血液学检测、股骨骨髓有核细胞计数、骨髓细胞分类计数和脾脏指数的测定。
3.2.3检测部分结果如图4、5、6、7、8所示注与正常对照组比较##p＜0.01；与模型对照组比较**p＜0.01，*p＜0.05试验结果表明本组合物以60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg，iv.给药7天，对环磷酰胺致小鼠外周血白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数量及骨髓有核细胞总数下降有显著改善作用；提高脾脏脏器指数并使外周血和骨髓白细胞分类趋于正常。同时，高剂量组的提升效果优于中剂量和低剂量组，应用同样剂量时，静脉给药途径优于口服给药途径。
3.3本组合物对盐酸阿糖胞苷处理家兔的外周血及骨髓血细胞的影响3.3.1动物模型盐酸阿糖胞苷处理家兔3.3.2检测指标血液学检测、股骨骨髓有核细胞计数、骨髓细胞分类计数和脾脏指数的测定。
3.3.3检测部分结果如图9、10、11、12、13所示注与正常对照组比较##p＜0.01；与模型对照组比较**p＜0.01，*p＜0.05试验结果表明，本组合物以24mg/kg、12mg/kg、6mg/kg静脉注射给药7天对盐酸阿糖胞苷致家兔骨髓造血功能抑制有明显改善作用，表现为家兔外周血白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数量及骨髓有核细胞总数下降有显著改善作用；提高脾脏脏器指数并使外周血和骨髓白细胞分类趋于正常。同时，高剂量组的提升效果优于中剂量和低剂量组，应用同样剂量时，静脉给药途径优于口服给药途径。
图1为本组合物中化合物I和II的高效液相定位图。
图2为本组合物对X-射线照射处理小鼠外周血小板数的影响图3为本组合物对X-射线照射小鼠免疫器官的影响图4为本组合物对环磷酰胺处理小鼠外周白细胞总数的影响图5为本组合物对环磷酰胺处理小鼠外周血血小板计数的影响图6为本组合物对环磷酰胺处理小鼠外周白细胞分类计数的影响图7为本组合物对环磷酰胺处理小鼠股骨骨髓有核细胞总数的影响图8为本组合物对环磷酰胺处理小鼠免疫器官的影响图9为本组合物对盐酸阿糖胞苷处理家兔外周白细胞总数的影响图10为本组合物对盐酸阿糖胞苷处理家兔外周血血小板计数的影响图11为本组合物对盐酸阿糖胞苷处理家兔外周血白细胞分类计数的影响图12为本组合物对盐酸阿糖胞苷所致家兔骨髓白细胞系分类计数的影响图13为本组合物对阿糖胞苷处理家兔免疫器官的影响具体实施方式
实施例1.干燥白芍药材切片10Kg，用水煮沸提取2次，每次2小时，提取液过滤后通过反向吸附树脂柱，再用醇水洗脱，洗脱液浓缩后用硅胶柱层析，得富含芍药苷和芍药内酯苷组分的提取物，最后经活性炭脱色，过滤，滤液减压浓缩真空干燥，得到本专利所述的组合物(以下简称本组合物)150g。
2.本组合物50g，与微晶纤维素45g及硬脂酸镁5g混合，混合物用于打片，每片重0.2g，每片含本组合物0.1g。结合症状，每次服1-2片，每日2-3次。
3.本组合物50g，与玉米淀粉50g，加水制成软材，过12目筛造粒，干燥，制得颗粒，装入胶囊，每粒胶囊内容物重0.2g，含本组合物0.1g。结合症状，每次服1-2片，每日2-3次。
4.本组合物5g，与葡萄糖或氯化钠及磷酸缓冲液适量混合，用于注射用水溶解，通过注射剂的通用操作过程，制成注射剂每支5ml，含本组合物0.05g。结合症状，每次用1-4支，与注射氯化钠等输液混合使用，每日1次。
5.本组合物5g，与右旋糖苷-40或山犁醇20g及磷酸缓冲液适量混合，用于注射用水溶解，通过注射剂的通用操作过程，灌装，冻干，制成冻干注射剂每支含本组合物0.05g。结合症状，每次用1-4支，与注射氯化钠等输液混合使用，每日1次。
权利要求
1.具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，它包括芍药苷、芍药内酯苷，其特征在于该组合物中芍药苷和芍药内酯苷两者之和的含量在50％～95％之间，芍药苷与芍药内酯苷的比例为1∶10～10∶1。
2.根据权利要求1所述的具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，其特征在于上述组合物可制备成各种单方和复方药物制剂。
3.根据权利要求2所述的具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，其特征在于所述的药物制剂可制成缓释或控释药物制剂。
4.根据权利要求3所述的具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，其特征在于所述的药物制剂可制成腔肠给药、喷雾给药、透皮吸收或口服的药物制剂，注射剂或输液制剂。
5.、根据权利要求1所述的具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，其特征在于所述的组合物可用于替代芍药提取物或芍药总苷与其它药物组成复方药物制剂。
6.根据权利要求1所述的具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，其特征在于该组合物可用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低的病症的药物。
全文摘要
本发明涉及从白芍(毛茛科芍药属植物芍药Paeonia lactifora Pall)中提取分离得到的含有活性化合物芍药苷(paeoniflorin)和芍药内酯苷(albiflorin)的组合物，两组分含量之和在50％－95％之间，并且芍药苷与芍药内酯苷在该组合物中的比例为1∶10～10∶1。上述组合物适用于制成各种单方药物制剂，可制成缓释或控释药物制剂；可制成腔肠给药、喷雾给药、透皮吸收或口服的药物制剂；可制成注射制剂或输液制剂；也可用于替代芍药提取物或芍药总苷与其它药物(含中药提取物或有效成分)组成复方药物制剂。该组合物适合用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低的病症的药物。
文档编号A61K31/7048GK1706397SQ200510045840
公开日2005年12月14日 申请日期2005年2月4日 优先权日2005年2月4日
发明者游松, 郭丽清, 孙燕, 王慧敏, 曹颖林, 曹雅明 申请人:沈阳药科大学