专利名称：补骨脂注射液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种注射液的制备方法，特别涉及一种从补骨脂原料中提取补骨脂素与异补骨脂素的补骨脂注射液的制备方法。
背景技术：
随着现代生活节奏的加快，工作压力加大以及工业化生产对环境的破坏，使得人类免疫系统功能降低，各种疾病的发病率呈上升趋势，困扰，折磨人类数千年的皮肤顽症，如白癜风、牛皮癣等皮肤病也随之抬头。
牛皮癣又称银屑病，是一种常见的慢性炎症性皮肤病，具有顽固性和复发性的特点。它有明显的季节性，多数患者病情春季、冬季加重，夏季缓解。全国总患病率为1～2‰，男性多于女性，北方多于南方，城市高于农村，初发年龄男性大多为20-39岁，女性大多为15-39岁。牛皮癣好发于裸露部位，如头部、四肢、前胸、后背等部位。虽不危及生命，但经久治不愈，逐年迁延复发加重，脱屑瘀血，燥痒难忍，给患者身体和身心健康带来极大的痛苦，严重影响到生活质量！尤其是少男少女，肌表羞于外露，直接影响美观，给学习、工作、交朋友带来很大的负面影响！白癜风是后天性因皮肤色素脱失而发生的局限性白色斑片。皮肤黑色素存在于皮肤及毛囊内的黑色素细胞内。黑色素细胞产生的黑色素在酪氨酸酶的作用下，由酪氨酸酶转化为多巴(DoPa)，再经一系列复杂的生化过程而生成。当这个过程发生障碍时(例如黑色素细胞内酪氨酸酶中的铜(cu++)减少或硫氢基(---SH增多)导致酪氨酸酶活性减少，甚至消失，继而使黑色素生成减少、消失，医学上通常把这种病变叫色素脱失，脱失的结果使得局部皮肤呈白斑样。
现代研究表明，补骨脂香豆精衍生物有感旋光性，可以吸收紫外线，内服或肌注，经日光或紫外线照射，可使皮肤色素新生，用于治疗白癜风。补骨脂对酷氨酸酶有明显的激活作作，酷氨酸酶是人体内黑色素生物合成过程的关键酶，补骨脂素光化学疗法，已成为白癜风的最有效的疗法，其机理可能就是补骨脂素通过提高酷氨酸酶的活性，促进皮损处的黑色素细胞形成。同时补骨脂还有抑制超原的T细胞增殖；对人白血病细胞株的抑制作用；抗癌活性；对体外培养细胞和巨噬细胞的影响；抗菌止血作用。补骨脂素和异补骨脂素具用显著增强细胞免疫功能作用；补骨脂明显地促进二倍体细胞的生长增殖速度，并对细胞具有抗衰老作用，提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高机体非特异性免疫的能力。
目前，补骨脂药材的提取大多采用水提醇沉或醇提水沉的工艺，较为先进的有超临界CO2萃取，其提取效率高，有效成分变化较小，且具有较佳的提取、分离、浓缩的效果，从技术上讲是首选提取工艺，但该提取工艺所用设备一次投入太大，加上该法在没有现成超临界CO2提取线时很难做到，受到一定的局限；利用酶制剂提取，收率也很高，也易于操作，可酶制剂难买，且成本太高；渗漉法和索氏提取所得产物杂质较多，因此，研制一种新的补骨脂注射液的提取工艺是很有必要的。
发明内容
本发明的目的是克服现有补骨脂药材提取工艺的不足，提供一种工艺流程简单、溶剂消耗少、成本低、收率高、产品纯度高、安全无毒副作用、不需要大型及特殊设备的补骨脂注射液的提取工艺。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种补骨脂注射液的制备方法，采用超声提取法，其具体步骤为1)、精选补骨脂药材，除杂，粉碎成粗粉；2)、取补骨脂粗粉，用75％的乙醇作溶剂，加75％乙醇的量为每次4～9倍，超声提取2～4次、每次1～2小时；3)、合并上述所有提取液，过滤，减压回收乙醇，并浓缩至在20℃的温度条件下相对密度为1.05～1.10的稠膏；4)、将所得稠膏用0.85％的氯化钠溶液稀释至处方规定体积，搅拌均匀，静置12～14小时；5)、吸取上清液，加入0.2％聚山梨酯80及0.1％活性炭，室温搅拌30分钟；6)、冷却至室温，用稀盐酸调pH值至2.5～3.5后，在0～4℃冷藏20～30小时；7)、将冷藏后的溶液过滤；8)、将滤液用10％氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.5，加0.85％氯化钠溶液至规定体积；9)、过滤、灌封、灭菌，得所需要的补骨脂注射液。
所述的超声提取时，所加75％乙醇的量为每次8倍，超声提取3次、每次2小时。
所述的减压回收乙醇是在60℃的温度条件下进行的。
用稀盐酸调pH值至3.0后，在4℃冷藏24小时；所述的0.2％聚山梨酯80的添加量为补骨脂药材使用量的0.004倍。
所述的0.1％活性炭的添加量为补骨脂药材使用量的0.006倍。
本发明的积极有益效果是1.用本发明的制备方法所得到的补骨脂注射液具有以下特性(1)、激活酪氨酸酶活性酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶，酪氨酸酶的活性与黑色素合成量相关，增加其活力即可增加黑色素的生成量。(2)、提高皮肤光敏作用组方补骨脂中含有吸收紫外线的光敏性物质——补骨脂素和异补骨脂素，能提高皮肤对紫外线的敏感性，抑制表皮中的巯基，增加酪氨酸酶活性而刺激黑素细胞使其恢复功能，促进皮肤黑色素再生。(3)、直接局部补充微量元素经检测补骨脂中富含人体多种微量元素，如铜、锌、铁、锰、钴、硒等，铜、锌和本病的关系最为密切，铜离子是酪氨酸酶的激活剂，黑色素颗粒中含有高浓度的锌。缺铜、锌、铁、锰等微量元素，酪氨酸酶活性降低，黑色素合成受阻，本产品可直接局部补充微量元素，从而可有效激活酪氨酸酶，促进黑色素合成。(4)、改善局部微掀循环障碍微循环与白癜风有着密切关联，实验证明白斑部位存在着微循环障碍，营养成分不能送到肌肤各部，黑色素细胞不能得到正常滋养，黑色素生成障碍，黑色素脱失，从而出现白斑，研究认为，补骨脂富含补骨脂乙素能扩张血管，改善局部组织营养，使皮肤黑色素增加。(5)、具有温肤散寒，祛风燥湿、舒经活络、活血化瘀及去除异常粘液状态，使血养得以供应，从而使黑色素生成增加质之功效，可改善微循环，纠正气滞血瘀、经络阻滞等。
2.用本发明的制备方法所得到的补骨脂注射液为肌内注射药物，它起效明显高于其它剂型，使用又较其它方便，能从根本上治疗白癫风、牛皮癣，产品利润空间大，市场前景广阔。
3.本发明的补骨脂注射液的制备方法，工艺流程简单、溶剂消耗少、成本低、收率高、不需要大型及特殊设备，所得到的补骨脂注射液，产品纯度高、质量高、起效快、安全无毒副作用，是用于治疗白癜风、银屑病的各药物中唯一一个中药注射剂型，能够满足市场及广大病患者的需求。
临床研究报告A检验依据按照98年卫生部发布的药品标准WS3-B-3226-98来检验。
a.药品来源用本发明的补骨脂注射液的制备方法所得到的药品。
b.性状卫生部所发布的药品标准本品应为棕色至红棕色的澄明液体；本发明的制备方法所生产的注射液为棕色的澄明液体。
c.pH值卫生部所发布的药品标准应为5.0～7.0；本发明的制备方法所生产的注射液为6.4。
d.每1ml含补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂索(C11H6O8)的总量卫生部所发布的药品标准应为80～130μg/ml；本发明的制备方法所生产的注射液为123.5μg/ml。
B临床统计
a.病例选择从93年以来共治疗过白癜风患者285例，在这些病例中，男119例，女166例，年龄最小1岁，最大60岁，病程1年以内的112例，1～5年的97例，5年以上的76例。
分型寻常型213例(其中泛发性22例，局限性79例，散发性71例，肢端性16例，混合性25例)，神经节段型72例。
b.治疗方法用本发明的制备方法所获得的补骨脂注射注，每次2ml，肌内注射，每日1-2次，10为一疗程，连用4个疗程统计效果。
c.疗效标准按照1993年全国中西医结合色素病学术会议白癜风临床治疗疗效。
d.治疗结果分型及285例中，寻常型213例，痊愈192例(90.1％)，显效16(7.5％)，有效3例(1.4％)，无效2例(0.9％)；神经节段型72例，痊愈39例(54.1％)，显效24例(33.3％)，有效5例(6.9％)，无效4例(5.6％)。两型之间疗效相比较寻常型明显优于节段型，P＜0.01。局限性发病者依次优于散发性，肢端性和泛发性，P＜0.05。
C.结论白癜风的发病是由肝肾阴虚，肌肤失养，复感外邪博于皮肤，伤及脉络黑色素所致，是抗体在参与受伤皮肤的免疫反应中，受体内免疫、内分泌紊乱失调的影响，逆变为黑色素抗体所致。本发明的补骨脂注射液的制备方法所得到的药品可通过滋补肝肾、活血化瘀，调整机体免疫和神经内分泌，改善血液微循环，促进黑色素细胞的生长。也就是说本发明的补骨脂注射液的制备方法所得到的药品对白癜风有极高的治疗效果。
D.典型病例1.雷xx、女，12岁，家住河南省武陟县德胜门外，患者于94年下半年患白癜风，白斑分布在左额部、前胸及腹部，服部白斑系离心性状、均约五分钱大小，经诊断为后天性白癜风，经人介绍于2003年2月来发明人所在医院进行治疗，该患者性情温和，能配合治疗，施以常规剂量，即每日注射补骨脂注射液，一日两次，每次1～2ml，同时，并配合人工紫外线照射1～10分钟，无不良反应，经两个疗程治疗后显效，继续注射常规量，白斑向正常肤色逐渐恢复，在好转中患者的三处白斑呈现不同现象额前部分五分钱大小的白斑是向正常肤色恢复，胸前部分五分钱大小的白斑是发红、毛囊清楚，出现黑色岛而逐渐恢复，腹部的白斑是逐渐缩小范围并向正常肤色恢复而愈。经10个疗程治疗痊愈，后继续注射2个疗程的补骨脂注射液巩固疗效，至今未复发。
2.冯xx、男、52岁，住河南省武陟县柳芳北里，01年2月患者头部大面积白斑，(几乎满头都是)，经诊断为“头部继发性白癜风”，患病2年，由于心情着急引发，并有扩散，于03年5月30日来发明人所在医院进行治疗，施以加强治疗，即注射“补骨脂注射液”2次/日，2ml/次，配合日晒5～20分钟，经四个疗程治疗后控制扩散并显效，患者也要求加大剂量，直到04年12月2日复诊，头部白斑已痊愈面积2/3，大部分白发变黑，继续注射一个疗程加强型。05年4月2日复诊后仅注射补骨脂注射液，病情继续好转，以后每月定期复诊，前额头部白斑及白发逐渐变黑，经一年多的治疗，病人白斑已全部恢复，至今未复发。
具体实施例方式一种补骨脂注射液的制备方法，采用超声提取法，其具体步骤为精选补骨脂药材，除杂，粉碎成粗粉，取补骨脂粗粉500g，用75％乙醇作溶剂，加75％乙醇的量为每次8倍，超声提取3次、每次2小时；然后合并上述所有提取液，过滤，在60℃减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.10(20℃)的稠膏，用0.85％氯化钠溶液稀释至1000ml，搅拌均匀，静置12小时，吸取上清液，加2g聚山梨酯80及3g活性炭，室温搅拌30分钟；放冷至室温，用稀盐酸调pH值至3.0，在4℃冷藏24小时，滤过，用10％氢氧化钠溶液调pH值至7.0，加0.85％氯化钠溶液至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得所需要的补骨脂注射液。
鉴别(1)、取所制得的补骨脂注射液2ml，加水20ml，振摇，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿蓝色荧光；(2)、取所制得的补骨脂注射液经酸化后的上清液1ml，加碘化铋钾试液2滴，生成红棕色沉淀。
含量测定依照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水(50∶60)为流动相；检测波长为295nm，理论板数按补骨脂素峰计算应不低于1500，补骨脂素和异补骨脂素的分离度应符合要求。
对照品溶液的制备精密称取补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml中各含50μg的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密量取对照品溶液与所制得的补骨脂注射液各5μl，注入液根色谱仪，测定，即得。
经测定所制得的补骨脂注射液中每1ml含补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂索(C11H6O8)的总量为123.5μg。
用法与用量肌内注射，一次2ml，一日1～2次，10天为一疗程，或遵医嘱。
注意事项在治疗白癜风时，注射后1小时左右，患部配合照射人工紫外线1～10分钟或日晒5～20分钟；局部如出现红肿、水疤，应暂停用药；用药后偶见头晕、血压升高；高血压者慎用；孕妇忌用。
权利要求
1.一种补骨脂注射液的制备方法，采用超声提取法，其具体步骤为1)、精选补骨脂药材，除杂，粉碎成粗粉；2)、取补骨脂粗粉，用75％的乙醇作溶剂，加75％乙醇的量为每次4～9倍，超声提取2～4次、每次1～2小时；3)、合并上述所有提取液，过滤，减压回收乙醇，并浓缩至在20℃的温度条件下相对密度为1.05～1.10的稠膏；4)、将所得稠膏用0.85％的氯化钠溶液稀释至处方规定体积，搅拌均匀，静置12～14小时；5)、吸取上清液，加入0.2％聚山梨酯80及0.1％活性炭，室温搅拌30分钟；6)、冷却至室温，用稀盐酸调pH值至2.5～3.5后，在0～4℃冷藏20～30小时；7)、将冷藏后的溶液过滤；8)、将滤液用10％氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.5，加0.85％氯化钠溶液至规定体积；9)、过滤、灌封、灭菌，得所需要的补骨脂注射液。
2.根据权利要求1所述的补骨脂注射液的制备方法，其特征在于所述的超声提取时，所加75％乙醇的量为每次8倍，超声提取3次、每次2小时。
3.根据权利要求1所述的补骨脂注射液的制备方法，其特征在于所述的减压回收乙醇是在60℃的温度条件下进行的。
4.根据权利要求1所述的补骨脂注射液的制备方法，其特征在于用稀盐酸调pH值至3.0后，在4℃温度条件下冷藏24小时；
5.根据权利要求1所述的补骨脂注射液的制备方法，其特征在于所述的0.2％聚山梨酯80的添加量为补骨脂药材使用量的0.004倍。
6.根据权利要求1所述的补骨脂注射液的制备方法，其特征在于所述的0.1％活性炭的添加量为补骨脂药材使用量的0.006倍。
全文摘要
本发明涉及一种补骨脂注射液的制备方法，包括精选补骨脂药材，除杂，粉碎成粗粉，取补骨脂粗粉，用75％的乙醇作溶剂，超声提取2～4次，每次1～2小时，合并提取液，减压回收乙醇，并浓缩成稠膏，用0.85％的氯化钠溶液稀释至处方量，搅拌静置，吸取上清液，用稀盐酸调pH值为3.0，冷藏后再氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.5，滤过，灌封，灭菌，包装，即得所需要的补骨脂注射液，该注射液为肌内注射药物，主要用于治疗白癫风、牛皮癣，它起效明显高于其它剂型，能从根本上治疗白癫风、牛皮癣，深受医生和患者的好评，该品种是全国独家产品，有较长的市场保护期，附加值较高，利润空间大，市场前景广阔，值得推广。
文档编号A61P17/00GK1772040SQ20051004847
公开日2006年5月17日 申请日期2005年11月1日 优先权日2005年11月1日
发明者陈水库, 朱成功, 白宗峰 申请人:河南辅仁怀庆堂制药有限公司