专利名称：从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医疗医药工业，特指一种从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的方法及其在治疗急性软组织扭伤及皮肤破损方面的用途。
背景技术：
木质素是一类以苯丙烷单体为骨架，具有网状结构的高分子聚合物，是植物细胞壁的主要组成部分之一。由于植物的种类不同，生长环境地区的不同，以及所使用提取方法不同，得到的木质素的分子量和分子结构也不同，导致了木质素的用途不同。目前国内外对木质素的应用及研究主要在于1、造纸废液中木质素直接浓缩可作为燃料利用。2、木质素产品主要用于泥浆减水剂，油田钻井泥浆降凝剂，橡胶增强剂，饲料添加剂，胶粘剂和合成树脂等方面的报道。
文献调查及资料检索表明，国外对木质素在医药方面的研究较为活跃，已见到有关用木质素进行抗爱滋病毒的研究，对癌症、非癌症、激素依赖疾病和心脏血管疾病进行预防方面的报道。但作为止血、活血、跌打损伤药物的研究未见报道，如US Patent Application 20040048804。US Patent Application 20020061854叙述了通过给予羟基乌台树脂酚(hydroxymatairesinol)对人的癌症、某些非癌症，激素依赖疾病和心血管疾病的预防方法，同时涉及一个增加人血清中的肠内脂(enterolactone)或另一种羟基乌台树脂酚(hydroxymatairesinol)的代谢物(metabolite)水平的方法。其中该发明中用的代谢物羟基乌台树脂酚(hydroxymatairesinol)可以是松羟基乌台树脂酚果类木材/结球果的木材的主要的木质素，其从大块的碎片(含树枝，虬枝和树节)的压缩木材中分离得到。
发明内容
本发明的目的是提供一种从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的方法及其在治疗急性软组织扭伤及皮肤破损方面的用途，其可起到消炎止痛，活血化瘀。
本发明的制备过程为1.以杨木、桦木等阔叶树为原料制备木质素类活性物质，在碱性环境中用水蒸汽进行萃取，由于木质素与半纤维素都是植物细胞的组成部分，半纤维素-即酸性多糖，在提取木质素过程中植物多糖伴随流出，随着植物多糖的减少PH也随之上升，流出液由PH5逐渐升高到PH14，一批料在12小时内连续萃取止PH14结束，根据不同时间内PH的变化相应切取不同馏份。
2.将上述制备的各馏份溶液在多糖酶存在下，常温下放置2-18个月进行自然降解木质素单元，降解液由PH14由降解止PH6之间。将降解液经过透析法，逆浸透法，超滤法等方法对降解液进行初步分离，内外透析液的分子量分别为＜300，＜4000，除去＜300的低分子量成份，剩余＜4000分子量的部分物质为性能稳定，基本没有毒性的活血化瘀物质。
3.取上述制备得到的分子量＜4000，PH值中性到微酸性之间的降解液加入反应器中在搅拌下滴加硝酸进行提取，分离出不溶于水的固体，即木质素类-聚糖复合体活性物质，溶解于钾盐、钠盐、铵盐等无机盐中，溶解度为1-8％。
4.将上述得到木质素类-聚糖复合体活性物质，与上述无机盐配制成0.01--0.05％，在100℃下沸腾反应2-4小时杀菌消毒或用孔径为0.22μm的除菌膜进行除菌，得到可用于进行治疗急性软组织扭伤及皮肤破损的药液。
5.取上述步骤3得到的分子量＜4000的部分活性物质，进一步用蒲聚糖凝胶G15进行分离，取分子量为300-1500木质素类药用活性物质用于治疗急性软组织扭伤及皮肤破损方面疾病。
由于木质素原料来源不同提取方法不同木质素的化学结构也不同，而本发明得到木质素类药用活性物质中含有厚朴酚、丁香甙、阿魏酸、水杨甙等结构，这些结构分别具有抗菌、抗溃疡、止血活血、消炎止痛等功能，又因木质素是以苯丙烷单体为骨架，具有网状结构无定形高聚物，木质素的这种结构客观上也形成了一个物理屏障，有效地阻止细菌的侵入，加快伤口的愈合。在急性软组织扭伤及皮肤破损时，立即使用本发明进行揉擦，3-20分钟之内止血、止痛。皮肤破损时只要涂在创面上，即可起收敛、消炎作用。并同时对已瘀积在血管外部的血液进行扩散，使之被皮肤吸收，本发明药品可实现治标治本。
具体实施例方式
1、制备木质素类药用活性物质取杨木为原料制备木质素类活性物质，在碱性环境中用水蒸汽进行萃取，一批料在12小时内连续萃取止PH14结束，根据不同时间内PH的变化相应切取不同馏份。将上述制备的各馏份溶液在多糖酶存在下，常温下放置2-18个月进行自然降解木质素单元，降解液由PH14由降解止PH6之间。将降解液经过透析法，逆浸透法，超滤法等方法对降解液进行初步分离，提取内外透析液中分子量＜4000的部分物质加入反应器中在搅拌下滴加硝酸进行提取，分离出不溶于水的固体，即木质素类-聚糖复合体活性物质，溶解于钾盐、钠盐、铵盐等无机盐中，溶解度为1-8％，配制成0.01％的药液在100℃下沸腾反应2-4小时杀菌消毒或用孔径为0.22μm的除菌膜进行除菌，得到用于进行治疗的药液，进行动物试验。
2.动物试验1)动物皮肤急性毒性试验取白色豚鼠50只，随机分5组，每组10只，脱毛剂在豚鼠脊柱两侧脱毛40cm2，24小时后用于实验，破损皮肤组以针头划破皮肤(以渗血为度)。完整皮肤及破损皮肤，高剂量组涂药水2ml/只，低剂量组1ml/只，空白对照组涂水2ml/只水(分多次涂完为止)，涂药水组24小时后，用温水洗去药水，观察去药后1、24、48、72小时及7日内皮肤有无异常变化以及皮毛、呼吸、四肤等状况。
实验结果洗去药水1小时至7日内观察各组豚鼠皮肤均无出现红斑，水肿等现象，与此同时，动物饮食正常，皮毛光泽，呼吸、活动自如，未见流泪流涕等异常变化。表明该药对皮肤无急性毒性反应。
2)动物的皮肤的刺激试验取36只豚鼠，随机分6组，每组6只用脱毛剂在豚鼠脊柱两侧脱毛20Cm2，24小时后用于实验，破损皮肤以针头划破皮肤(以渗血为度)。高剂量2ml/只，低剂量1ml/只，对照组2ml/只水。
表一 药液对动物的皮肤的刺激试验
经皮肤刺激反应评分标准判定，平均分值为0.16，可判定基本无刺激性。
3)动物的皮肤过敏试验取30只豚鼠，随机分3组，每组雌雄各5只第一组为受试药组，第二组为阳性药对照组，第三组为空白对照组。脊柱两侧脱毛40Cm2，24小时后用于实验，首先致敏接触。受试药物组以0.2ml/只涂于左侧脱毛区，持续6小时，于第7天和第14天，同样方法涂药物。空白对照组和阳性药对照组以上述同样方法致敏。(阳性药对照组以1％2。4二硝基氯代苯致敏)各组均于末次致敏后14天，涂药6小时后去掉药物，立刻及12、24、48、72小时观察皮肤过敏情况。
表二 药液对动物的皮肤过敏试验
在激发24、48、72小时皮肤未见1例出现红斑，故可判定FA1基本无过敏反应。
4)对二甲苯所致小鼠耳廓炎症的影响取雄性昆明种小鼠50只，体重22±2g，随机分5组，每组10只，分别灌胃给予，给药剂量取小\中大(分别0.2、0.4、0.5ml/10g/次)，阿斯匹林0.1g/Kg/次及0.5ml/10g生理盐水，每天给药2次，连续3天，末次给药后1小时，用二甲苯0.02ml/只均匀涂抹于小鼠左耳前后两面，右耳作为对照，1小时后将小鼠脱颈椎处死，用9mm直经的打孔器在两耳同一部位打下班耳片并称重，以二耳片重量之差为耳廓肿胀度，结果见表表三 药液对二甲苯所致小鼠耳廓炎症的影响(X±SD，n＝10)
与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01药液的中、大剂量组均可显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓炎症，抑制率最大可为21.7％，说明具有一定的抗炎作用。
5)对醋酸所致小鼠扭体反应的影响取雄性昆明种小鼠50只，体重22±2g，随机分5组，每组10只，分别灌胃给予，给药剂量取小\中大(分别0.2、0.4、0.5ml/10g/次)，阿斯匹林0.1g/Kg/次及0.5ml/10g生理盐水，每天给药2次，连续3天，末次给药后1小时腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g，观察15分钟内各组动物由醋酸诱发的扭体次数，结果见表。
表四 药液对醋酸所致小鼠扭体反应的影响X±SD，n＝10
与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01与生理盐水对照组比较，药液各剂量对醋酸所致的小鼠扭体反应有明显抑制作用，抑制率分别为22.9％、28.4％、31.4％、说明其具有一定的镇痛作用。
6)对急性血瘀大鼠血流流变学的影响取SD大鼠48只，体重300-350g雌雄各半，按体重随机分6组，每组8只，分别灌胃给于药用药量为(0.4、0.8、1.0ml/100g)及1ml/Kg丹参注射液，空白对照组及模型对照组给于1ml/100g的生理盐水。各组每天给药一次，共给药7天。于第6天给药后1小时，除空白对照组外，其余5组动物均皮下注射0.1％肾上腺素0.2ml，2小时后再注射同样量的肾上腺素1次，再次注射后2小时将大鼠放入冰水中浸泡5分钟，禁食不禁水，制备急性血瘀模型。第7天给药后1小时，戊巴比妥钠40mg/Kg腹腔射麻醉，颈动脉插管放血，EDTA抗凝，检测全血低切变率(10mPa.s)、中切变率(50mPa.s)、高切变率粘度(120mPa.s)、血沉及红细胞压积和聚集指数。试验结果见表表五 对急性血瘀大鼠血流流变学的影响X±SD，n＝8
与空白组比较，*p＜0.05，**p＜0.01该药液对急性血瘀模型血液流变学有一定的改善作用，可降低全血低切、中切、高切变率粘度，减少血沉，减小红细胞聚集指数，说明该药液具有一定的活血化瘀作用。
3.临床实验将上述用于动物实验的药液，进一步用蒲聚糖凝胶G15进行分离，取分子量为300-1500木质素类药用活性物质用于临床实验。
使用该药物对治疗40例软组织挫伤患者进行疗效观察的实施例如下(1)在治疗的40人，男30例，女10例，年龄最小6岁，最大70岁，急性期接受治疗的35例非急性期5例。
(2)临床表现受损软组织肿胀，瘀血，局部疼痛，有各别皮肤表面破损，合并感染，发生于关节，腕关节周围、指关节周围、足关节周围之挫伤，活动受限。用本药揉搽2-10分钟，血肿明显消退。
(3)35例急性挫伤患者，单用该药液于局部揉搽2-10分钟，每日2-5次，没有用其他任何药物，5例曾用其他药物治疗后，因皮肤破损感染不愈者改用该药液，一日4次于疮面涂抹，每次反复涂抹2-3分钟。受伤创面因感染久治不愈，可用此药液涂抹，其炎症逐渐消退，创面渗出减少，并能迅速长出肉芽组织以修复创面，修复后的创面平整，治愈后伤口基本不留疤。治疗结果见表40 例软组织挫伤治疗观察表
权利要求
1.从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的方法，其特征在于(1)以阔叶树杨木、桦木为原料制备木质素类活性物质，在碱性环境中用水蒸汽进行萃取，由于木质素与半纤维素都是植物细胞的组成部分，半纤维素-即酸性多糖，在提取木质素过程中植物多糖伴随流出，随着植物多糖的减少PH也随之上升，流出液由PH5逐渐升高到PH14，一批料在12小时内连续萃取止PH14结束，根据不同时间内PH的变化相应切取不同馏份；(2)将上述制备的各馏份溶液在多糖酶存在下，常温下放置2-18个月进行自然降解木质素单元，降解液由PH14由降解止PH6之间；将降解液经过透析法，逆浸透法，超滤法等方法对降解液进行初步分离，内外透析液的分子量分别为＜300，＜4000，除去＜300的低分子量成份，剩余＜4000分子量的部分物质；(3)取上述制备得到的分子量＜4000，PH值中性到微酸性之间的降解液加入反应器中在搅拌下滴加硝酸进行提取，分离出不溶于水的固体，即木质素类-聚糖复合体活性物质，溶解于钾盐、钠盐、铵盐等无机盐中，溶解度为1-8％；(4)将上述得到木质素类-聚糖复合体活性物质，与上述无机盐配制成0.01-0.05％，在100℃下沸腾反应2-4小时杀菌消毒或用孔径为0.22μm的除菌膜进行除菌，得到可用于进行治疗急性软组织扭伤及皮肤破损的药液。
2.根据权利要求1所述的从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的方法，其特征在于取上述步骤3得到的分子量＜4000的部分活性物质，进一步用蒲聚糖凝胶G15进行分离，得分子量为300-1500木质素类药用活性物质。
3.从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的用途，其特征在于取上述制备得到的分子量为300-1500木质素类药用活性物质治疗急性软组织扭伤及皮肤破损方面疾病。
全文摘要
本发明涉及医疗医药工业，特指一种从阔叶树中制备木质素类药用活性物质的方法及其在治疗急性软组织扭伤及皮肤破损方面的用途。其以杨木、桦木等阔叶树为原料制备木质素类活性物质，在碱性环境中用水蒸汽进行萃取，将上述制备的各馏份溶液在多糖酶存在下，常温下放置2－18个月进行自然降解木质素单元，降解液由PH14由降解止PH6之间。将降解液经过透析法，逆浸透法，超滤法等方法对降解液进行初步分离，内外透析液的分子量分别为＜300和＜4000，除去＜300的低分子量成分，得到的分子量＜4000的部分活性物质，进行除菌，得到可用于进行治疗急性软组织扭伤及皮肤破损的药液。皮肤破损时只要涂在创面上，即可起收敛、消炎作用。
文档编号A61P17/00GK1739665SQ20051009426
公开日2006年3月1日 申请日期2005年9月7日 优先权日2005年9月7日
发明者张静 申请人:江苏工业学院