专利名称：一种用于治疗肝脏疾病的中西药复方药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种主要由绞股蓝或其提取物和二异丙胺或其药学上可接受的盐制成的药物组合物，及其制备方法和用途。
2、背景技术肝病是常见病和多发病，尤其是由病毒性肝炎所引起的急、慢性肝病在我国占主导地位，发病率高，覆盖面大，仅乙肝我国就有1.2亿人呈病毒感染，每年约30万人因肝病死亡，其中一半是原发性癌症，由此可见，肝病对人民健康危害极大。
据有关资料统计，目前，我国成人脂肪肝的发病率约为10％，脂肪肝在临床已成为常见病、多发病。脂肪肝不是一个独立疾病，而是多种因素(或疾病)均可形成的肝的一种病理现象，营养过剩、营养不良、胃肠外高营养、药物中毒、大量饮酒、糖尿病、炎症、妊娠、应用皮质激素、Reye综合征、皮质醇增多症、甲状腺功能亢进、垂体前叶功能亢进、慢性溃疡性结肠炎、克隆病、溃疡病和慢性肝炎等因素(或疾病)均可引起脂肪肝。
肝炎、脂肪肝等肝脏疾病已经成为严重危害我国人民健康并需要优先解决的公共卫生与社会问题。
绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphylium(Thunb.)Mak.的干燥全草，又名七叶胆等。味苦、微甘，性寒；具有清热解毒，益气养阴，延缓衰老的功效。现代研究表明，绞股蓝的主要有效成分为总皂苷类。绞股蓝总苷主要药理作用为抗癌、增强免疫、抗衰老、降血脂，另外，绞股蓝总苷还具有良好的抗肝炎的作用，其作用机理是①抑制谷丙转氨酶(GPT)上升和肝过氧化脂质的增加，降低大鼠急性肝损伤，对肝细胞变性、炎性浸润、坏死等均有明显保护作用，促进肝细胞的再生。②对免疫低下动物有显著的增强免疫作用。绞股蓝总苷通过增加慢性乙肝患者的细胞免疫功能和降低脂质过氧化物水平而实现其治疗乙肝的作用。
二异丙胺目前上市的药用盐有二氯醋酸盐和抗坏血酸盐，两者均对急慢性肝炎有较好的治疗作用。二氯醋酸二异丙胺已收载入国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第14册64页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含C8H17O2NCl12不得少于98.5％。二氯醋酸二异丙胺具有良好的保肝作用，可以促进肝脂肪分解，减少肝内脂肪聚集，抑制肝脏甘油三酯的合成，抑制脂肪酸合成，从而治疗和预防脂肪肝。它还可改善肝脏机能，促进受损肝细胞的修复，缩小肝脏坏死的范围和抑制纤维化组织的形成，促进肝细胞增殖和分化作用，可增加肝重量及蛋白含量，增加肝细胞的氧摄取量，提高组织细胞呼吸及氧呼吸率的功能，促进膜磷脂的序贯甲基化、增强肝细胞膜的流动性，用于急、慢性肝炎的辅助治疗。二异丙胺抗坏血酸盐，又名维丙胺，已收载入国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第6册217页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含C12H23NO6不得少于98.5％。维丙胺主要用于慢性、迁延型肝炎和急性肝炎的辅助治疗。二氯醋酸二异丙胺和维丙胺的结构式如下 二氯醋酸二异丙胺 二异丙胺抗坏血酸盐(维丙胺)目前，利用绞股蓝和二氯醋酸二异丙胺或二异丙胺抗坏血酸盐(维丙胺)的相互作用，配伍组方，用于制备治疗急慢性肝炎、脂肪肝等肝脏疾病的药物还未见报道。
3、发明内容为了满足临床需要，本发明提供了一种新的用于治疗肝脏疾病的药物组合物，并提供了其制备方法。
本发明药物组合物主要由绞股蓝和二异丙胺或其药学上接受的盐制成，其重量份数为绞股蓝400～10000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐4～100份；优选为绞股蓝1000～4000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐10～40份；最佳为绞股蓝2000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐20份。
绞股蓝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到其提取物，提取物再和二异丙胺或其药学上可接受的盐、药用辅料混合加工制成各种制剂。绞股蓝提取物中所含的主要有效成分为绞股蓝总苷，其含量不低于30％。
绞股蓝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到绞股蓝总苷，提取溶剂优选乙醇或水，绞股蓝的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法，还可以根据文献方法制备。
本发明提供了一种绞股蓝的优选制备工艺(以绞股蓝总苷为主要有效成分)，具体如下取绞股蓝药材，加75％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，流液回收乙醇至无醇味，加水使成每1ml相当于2g生药量的溶液，搅匀，放冷，静置过夜，滤过，滤液通过已处理好的大孔树脂柱，先用2倍柱体积的水冲柱，弃去水液，再用3倍柱体积的60％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08～1.10的浓缩液，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制备的绞股蓝总苷，得率为2％～4％，绞股蓝总苷的含量不低于50％。
绞股蓝总苷还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法方法一取绞股蓝药材，加80％乙醇回流提取三次，每次2小时，加醇量为每次10倍量，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水适量，搅匀，放冷，静置过夜，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.09～1.10的浓缩液，喷雾干燥，即得。通过本工艺制得的绞股蓝总苷，得率为5～7％，绞股蓝总苷的含量不低于40％。
方法二取绞股蓝药材，加80％乙醇回流提取二次，每次3小时，第一次加醇10倍量，第二次8倍量，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制得的绞股蓝总苷，得率为6～10％，绞股蓝总苷的含量不低于30％。
上述药物组合物，还可以用绞股蓝总苷代替绞股蓝投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，其重量份数为绞股蓝总苷12～300份、二异丙胺或其药学上可接受的盐4～100份；优选为绞股蓝总苷30～120份、二异丙胺或其药学上可接受的盐10～40份；最佳为绞股蓝总苷60份、二异丙胺或其药学上可接受的盐20份。
本发明药物组合物中，二异丙胺药学上可接受的盐优选为二氯醋酸盐和抗坏血酸盐。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。
本发明药物组合物具有抗炎、抗病毒、改善肝细胞功能、抑制肝纤维化、抗氧化、降血脂及促进肝脂肪分解等多种药理活性，可以用于急慢性肝炎、脂肪肝等。
本发明的药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的剂型是注射剂或口服制剂。
本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明的药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本发明的组合物具有以下优点(1)本发明提供了一种新的用于治疗急慢性肝炎、脂肪肝的药物组合物，满足了临床需要。
(2)本发明药物组合物中，绞股蓝具有良好的抗肝炎、增强免疫的作用，二氯醋酸二异丙胺具有良好的保肝作用，可以促进肝脂肪分解，改善肝脏机能，促进受损肝细胞的修复，缩小肝脏坏死的范围和抑制纤维化组织的形成，具有良好的抗肝炎及治疗脂肪肝的作用。
(3)首次通过药效学实验研究证明本发明的药物组合物对醋氨酚、四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤有显著的保护作用，可以显著抑制鸭乙肝病毒的繁殖，可显著对抗四氯化碳所致的大鼠肝纤维化，对实验性脂肪肝大鼠有显著的保肝、降血脂及促进肝脂肪分解的作用。二药具有协同增效作用，疗效显著，产生了意想不到的效果。
(4)对本发明的药物组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明药物组合物的最优配比。
(5)本发明药物组合物制剂制备工艺简单，不同批次药品间质量差异小，药品质量均匀稳定。
(6)通过稳定性实验证实，本发明的药物组合物注射剂安全稳定。
以下通过试验例来进一步阐述本发明药物的有益效果。绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺的组合物以下简称JE组合物。实施例中所用的绞股蓝总苷均取自实施例1；所用的二氯醋酸二异丙胺为市购，含C8H17O2NCl299.3％。
实验例1 JE组合物合并用药药效研究供试品绞股蓝总苷注射液，2ml，含绞股蓝总苷60mg(相当于绞股蓝2g)，自制；二氯醋酸二异丙胺注射液，1ml20mg，自制；JE组合物注射液，(绞股蓝总苷+二氯醋酸二异丙胺)的不同配比，自制，制备方法参照实施例2。
实验动物ICR小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
实验方法取小鼠90只，随机分成9组，每组10只，组别见下表。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射生理盐水。模型组和给药组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg鼠重，各组在腹腔注射生理盐水及醋氨酚16h后断头，取血液、肝脏，进行生化指标血清ALT(谷丙转氨酶)和肝组织LPO(过氧化脂质)的测试，结果见表1。
结论与空白对照组相比，模型组ALT和LPO的活性显著升高，差异极显著(P＜0.01)，说明造模可靠。与空白对照组相比，绞股蓝总苷组、二氯醋酸二异丙胺组和JE组合物各配比组ALT和LPO的活性明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，说明各药均对醋氨酚所致小鼠肝损伤有保护作用。其中JE组合物各配比组疗效更好(P＜0.01)，均优于单用绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺，说明绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺二药合用，有协同增效作用。JE组合物各配比组中，以绞股蓝总苷+二氯醋酸二异丙胺(60mg+20mg)组疗效最为显著。
表1 JE组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响
与空白对照组比较，◇◇P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与绞股蓝总苷组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与二氯醋酸二异丙胺组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
实验例2 JE组合物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用供试品化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；绞股蓝总苷注射液，2ml，含绞股蓝总苷60mg(相当于绞股蓝2g)，自制；二氯醋酸二异丙胺注射液，1ml20mg，自制；JE组合物注射液(5ml含绞股蓝总苷+二氯醋酸二异丙胺60mg+20mg)，源自实施例2。
实验动物ICR小鼠，体重22～27g，雌雄各半。
实验方法取小鼠70只，随机分为7组，分别为空白对照组、模型组、绞股蓝总苷组、二氯醋酸二异丙胺组、JE组合物低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg鼠重，每日1次，连续7d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂量见下表，连续7d。空白对照组在最后一次尾静脉注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg。16h后断头处死动物，取血清测试ALT、AST的值。断头取血后，立即剖腹取出肝脏、脾脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重肝脏、脾脏的重量，计算肝指数和脾指数。结果见表2。
表2 JE组合物对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝、脾指数和血清ALT、AST含量的影响
与空白对照组比较◇P＜0.05，◇◇p＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与绞股蓝总苷组比较，#P＜0.05；与二氯醋酸二异丙胺组比较，△P＜0.05。
结论CCl4模型组小鼠肝指数、脾指数较正常对照组小鼠数值显著增高(P＜0.05)，CCl4模型组小鼠血清ALT、AST值较正常对照组小鼠数值极显著增高(P＜0.01)，说明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝脏损伤，造模成功。与模型组相比，各给药组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值降低，说明各药对CCl4所致急性肝损伤均有保护作用；其中，JE组合物中、高剂量组小鼠肝指数、脾指数显著降低(P＜0.05)，肝、脾肿大减轻，JE组合物各剂量组血清ALT、AST值极显著降低(P＜0.01)，说明本发明组合物对CCl4所致急性肝损伤有明显保护作用。JE组合物各剂量组疗效均优于单用绞股蓝总苷和二氯醋酸二异丙胺，说明绞股蓝和二氯醋酸二异丙胺二药合用，有协同增效作用。其中中、高剂量组疗效更好(P＜0.05)。
实验例3 JE组合物抗鸭乙肝病毒作用供试品阿昔洛韦，新乡制药股份有限公司；绞股蓝总苷，自制；二氯醋酸二异丙胺，市购；JE组合物片(每片含绞股蓝总苷+二氯醋酸二异丙胺60mg+20mg)，源自实施例6。
DHBV(鸭乙型肝炎病毒)阳性血清，复旦大学医学院微生物学教研室。
实验动物市售1日龄北京鸭；实验方法动物模型 北京鸭经足静脉注射0.2mlDHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存待检。
药物治疗 筛选出感染成功的阳性鸭42只，随机分为7组，每组6只，分别为空白对照组、阳性对照组、绞股蓝总苷组、二氯醋酸二异丙胺组、JE组合物低、中、高剂量组，每组6只。空白对照组每日灌胃生理盐水20ml/kg，每日2次，连续14d；给药组灌胃给药，每日2次，剂量见下表，连续14d。阳性药物作为治疗对照组，以阿昔洛韦(ACV)按100mg/kg灌胃，2次/d，给药2周。分别用于药前(1d)、用药第7天(T7)，用药第14天(T14)和停药后第7天(P7)。自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-20℃保存待检。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本DHBV-DNA水平值。结果见表3。
表3 JE组合物对DHBV-DNA的抑制作用
注与空白对照组比较◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与给药前相比@P＜0.05，@@P＜0.01。
结论阳性对照(阿昔洛韦)组在给药后第7天和第14天，与给药前及与空白对照组比较，差异有极显著性(P＜0.01)，但停药后又显著升高，与给药前比较差异无显著性(P＞0.05)。不同剂量JE组合物均对DHBV有抑制作用，且停药后无反跳，其中中、高剂量组抑制作用更为明显。JE组合物各给药组疗效均优于单用绞股蓝总苷和二氯醋酸二异丙胺，说明绞股蓝总苷和二氯醋酸二异丙胺二药合用，有协同增效作用。
实验例4 JE组合物抗大鼠肝纤维化作用供试品化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；绞股蓝总苷注射液，2ml，含绞股蓝总苷60mg(相当于绞股蓝2g)，自制；二氯醋酸二异丙胺注射液，1ml20mg，自制；JE组合物注射液(5ml含绞股蓝总苷+二氯醋酸二异丙胺60mg+20mg)，源自实施例2。
实验动物Wistar大鼠，体重180～230g，雄性。
实验方法取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作为对照组。肝纤维化模型组应用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，诱导肝纤维化模型。取肝纤维化模型大鼠60只，随机分为6组，分别为模型组、绞股蓝总苷组、二氯醋酸二异丙胺组、JE组合物注射液低、中、高剂量组，每组10只。除正常对照组外，其余各组继续以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。绞股蓝总苷组、二氯醋酸二异丙胺组、硫普罗宁组、JE组合物注射液低、中、高剂量组同时腹腔注射给药相应药物，剂量见下表。继续给药2周。10周后宰杀大鼠，无菌操作取血2ml，分离血清，-20℃保存，用放射免疫法检测肝纤维化指标透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)；用生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，采用全自动生化分析仪进行检测。结果见表4。
表4 JE组合物对CCl4所致肝纤维化大鼠的血清学指标的影响
与正常对照组比较◇◇◇P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与绞股蓝总苷组比较，#P＜0.05；与二氯醋酸二异丙胺组比较，△P＜0.05。
结论与正常对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有极显著性差异(P＜0.001)，说明模型可靠。绞股蓝、二氯醋酸二异丙胺和JE组合物治疗后肝纤维化大鼠血清ALT和AST均低于模型组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示绞股蓝、二氯醋酸二异丙胺和JE组合物有降酶和保护肝功能的作用；绞股蓝、二氯醋酸二异丙胺和JE组合物治疗后血清HA和LN水平均显著低于模型组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示绞股蓝、JE组合物均可改善肝纤维化血清学指标，具有抗肝纤维化的作用。JE组合物组疗效优于单用绞股蓝、二氯醋酸二异丙胺，提示绞股蓝总苷和二氯醋酸二异丙胺二药合用，有协同增效作用。其中，JE组合物高剂量组疗效更好(P＜0.05)。
试验例5 JE组合物对大鼠实验性脂肪肝的作用试验动物；Wistar大鼠，雌雄各半，体重208～230g。
供试品绞股蓝总苷，自制；二氯醋酸二异丙胺，市购；JE组合物片(每片含绞股蓝总苷+二氯醋酸二异丙胺60mg+20mg)，源自实施例6。
试验方法大鼠，测药前肝功能各项指标、胆固醇及甘油三酯水平后，建高脂模型。除空白对照组给予普通饲料外，其余各组均给予高脂饲料(含猪油20％、胆固醇10％、胆盐0.5％，硫氧嘧啶0.2％)，连续喂饲7周后，测肝功能各项指标、血清胆固醇及甘油三酯水平，确定高脂模型建成。取模型大鼠60只，随机分为6组，分别为模型组、绞股蓝总苷组、二氯醋酸二异丙胺组和JE组合物低、中、高剂量组，每组10只。继续饲高脂饲料，除模型组外，其它各组分别灌胃给药绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺和JE组合物，每日灌胃给药1次，灌胃给药10天后腹腔注射硫代乙酰胺450mg/kg(造成肝功能损害)，然后继续给予实验样品，于给硫代乙酰胺后第4天用动物用马拉坦麻醉，腹主动脉采血。离心分离血清，检测肝功能AST(谷草转氨酶)，ALT(谷丙转氨酶)，ALP(碱性磷酸酶)，HDL(高密度脂蛋白)，LDL(低密度脂蛋白)；另取肝脏400mg，加脂质提取液(正庚烷∶异丙醇4∶7 v/v)4ml匀浆，震荡提取脂质，离心沉淀后取上清液测定肝脏TG和CHO。血清生化学和肝脏脂质测定均采用自动生化分析仪测定。结果见表5和表6。
表5 JE组合物对实验性脂肪肝大鼠肝功能指标的影响
与正常对照组比较◇◇◇P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与绞股蓝总苷组比较，#P＜0.05，##P＜0.05；与二氯醋酸二异丙胺组比较，△P＜0.05。
表6 JE组合物对实验性脂肪肝血脂和肝脏脂肪指标的影响
与正常对照组比较◇◇P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与绞股蓝总苷组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与二氯醋酸二异丙胺组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
结论给高脂饮食加腹腔注射硫代乙酰胺后，可见模型组AST、ALT、ALP较正常组极显著升高(P＜0.001)，血清HDL、LDL极显著升高(P＜0.01)，肝脏TG和CHO显著升高(P＜0.01)，说明模型可靠。JE组合物给药后，AST、ALT、ALP较之模型组显著降低(P＜0.01)，表明JE组合物有降酶保肝的作用，疗效优于单用绞股蓝总苷和单用二氯醋酸二异丙胺，表明绞股蓝和二氯醋酸二异丙胺合用，有协同增效作用，其中中、高剂量组疗效更好(P＜0.01和P＜0.05)；JE组合物给药后，血清HDL、LDL较之模型组显著降低(P＜0.01和P＜0.05)，肝脏TG和CHO较模型组显著降低(P＜0.01)，提示JE组合物具有降血脂和促进肝脂肪分解的作用，疗效优于单用绞股蓝总苷和单用二氯醋酸二异丙胺，表明绞股蓝总苷和二氯醋酸二异丙胺合用，有协同增效作用，其中中、高剂量组疗效更好(P＜0.01和P＜0.05)实验例6 JE组合物注射液稳定性实验供试品JE组合物注射液，剂型水针，规格5ml，来源于实施例2。
考察项目性状、pH值、澄明度。
长期稳定性实验方法及结果将JE组合物注射液置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明JE组合物注射液长期放置基本稳定。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例2～8中所用的绞股蓝总苷均取自实施例1。
实施例1 绞股蓝总苷的制备取绞股蓝药材，加75％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，流液回收乙醇至无醇味，加水使成每1ml相当于2g生药量的溶液，搅匀，放冷，静置过夜，滤过，滤液通过已处理好的大孔树脂柱，先用2倍柱体积的水冲柱，弃去水液，再用3倍柱体积的60％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08～1.10的浓缩液，喷雾干燥，即得。
分别制得三批绞股蓝提取物，提取物得率和含量见表7。
鉴别取绞股蓝总苷0.5g，加甲醇溶解，制成每1ml含10mg的溶液，作为供试品溶溶液。另取绞股蓝皂甙-A对照品，加甲醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。薄层色谱法实验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，展距12cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点及荧光斑点。
含量测定对照品溶液的制备 精密称取在60℃减压干燥3小时的绞股蓝皂苷-A对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
供试品溶液的制备 精密称取本品50mg，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
测定法 精密吸取对照品溶液及供试品溶液各100μl，分别置15ml具塞试管中，精密加入新配制的含5％香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2ml，摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸10ml，摇匀，以试剂作空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录)试验，在555±5nm波长处测定吸收度，计算，即得。
本品按干燥品计算，含绞股蓝总苷以绞股蓝皂苷-A(C53H90O21)计，不得少于50.0％。
表7 绞股蓝总苷的得率及含量
实施例2 JE组合物水针剂的制备处方绞股蓝总苷 60g二氯醋酸二异丙胺20g葡萄糖酸钠 19g聚山梨酯80 50g注射用水加至5000ml共制备 1000支制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将绞股蓝总苷加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例3 JE组合物粉针剂的制备处方绞股蓝总苷60g二氯醋酸二异丙胺 20g葡萄糖酸钠19g聚山梨酯8020g甘露醇400g无菌注射用水 加至3000ml共制备1000支制备工艺1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将绞股蓝总苷加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例4 JE组合物氯化钠输液的制备处方绞股蓝总苷60g二氯醋酸二异丙胺 20g葡萄糖酸钠19g聚山梨酯8020g氯化钠900g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶制备工艺1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将绞股蓝总苷加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45um的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
7)灌装于100ml的输液瓶中。
8)115℃热压灭菌30分钟。
9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例5 JE组合物葡萄糖输液的制备处方绞股蓝总苷60g二氯醋酸二异丙胺 20g葡萄糖酸钠19g聚山梨酯8020g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将绞股蓝总苷加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠加入少量注射用水，加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解。合并上述溶液，补加注射用水至全量。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6 JE组合物片剂的制备处方绞股蓝总苷60g二氯醋酸二异丙胺 20g葡萄糖酸钙19.5g淀粉 50.0g微晶纤维素50.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 5.0g羧甲淀粉钠10.0g共制备1000片制备工艺1)将绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钙分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺、葡萄糖酸钙、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例7 JE组合物胶囊剂的制备处方绞股蓝总苷60g二氯醋酸二异丙胺 20g葡萄糖酸钙19.5g淀粉 20.0g微晶纤维素60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 5.0g共制备1000粒制备工艺1)将绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钙分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺、葡萄糖酸钙、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例8 JE组合物颗粒剂的制备处方绞股蓝总苷60g二氯醋酸二异丙胺 20g葡萄糖酸钙19.5g糖粉 600.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备1000包制备工艺1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钙分别粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将绞股蓝总苷、二氯醋酸二异丙胺、葡萄糖酸钙与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物主要由下列重量份的原料药制成绞股蓝400～10000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐4～100份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物主要由下列重量份的原料药制成绞股蓝1000～4000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐10～40份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物主要由下列重量份的原料药制成绞股蓝2000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐20份。
4.如权利要求1～3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于所述的绞股蓝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到其提取物，提取物再和二异丙胺或其药学上可接受的盐、药用辅料混合加工制成各种制剂。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于绞股蓝提取物中所含的主要有效成分为绞股蓝总苷，其含量不低于30％。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该组合物还可主要由下列原料药制成绞股蓝总苷和二异丙胺或其药学上可接受的盐；其重量配比为绞股蓝总苷12～300份、二异丙胺或其药学上可接受的盐4～100份。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于其重量配比为绞股蓝总苷30～120份、二异丙胺或其药学上可接受的盐10～40份。
8.如权利要求6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的绞股蓝总苷的含量不低于30％。
9.如权利要求1、2、3、6、7所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的二异丙胺药学上可接受的盐为二氯醋酸盐或抗坏血酸盐。
10.如权利要求1、2、3、6、7所述的任一药物组合物，其特征在于该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种新的药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由绞股蓝和二异丙胺或其药学上可接受的盐制成，其重量配比为绞股蓝400～10000份、二异丙胺或其药学上可接受的盐4～100份。或者由绞股蓝总苷和二异丙胺或其药学上可接受的盐制成，其重量配比为绞股蓝总苷12～300份、二异丙胺或其药学上可接受的盐4～100份。其中二异丙胺药学上可接收的盐优选二氯醋酸盐和抗坏血酸盐。该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型，优选为注射剂和口服制剂。该药物组合物主要用于肝病。
文档编号A61K31/375GK1989992SQ200510131120
公开日2007年7月4日 申请日期2005年12月26日 优先权日2005年12月26日
发明者黄振华 申请人:黄振华