专利名称：一种灵芝孢子油及其超临界制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药灵芝孢子油，属中药领域。同时还涉及该灵芝孢子油的CO2超临界提取制备方法。
背景技术：
灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，在我国已有悠久的药用历史，始载于《神农本草经》，把灵芝归入上品；灵芝孢子是灵芝在成熟时期不断从菌盖喷射出的生殖细胞即灵芝的种子，近年来的研究表明，灵芝孢子在抗肿瘤、免疫调节、抗放射、调节神经、保护心血管系统、调节呼吸系统、促进消化功能等方面有显著的药理作用，灵芝孢子中主要含有三萜类、不饱和脂肪酸、多糖类、核苷、有机锗、甾醇类、生物碱等有效成分，Kutoba等1982年首次从灵芝中分离得到三萜类化合物柫橹ニ酇、B以来，迄今为止从灵芝中分离得到的三萜类化合物已达120余种，三萜类化合物是灵芝的一级代谢产物，有显著的药理活性；但灵芝孢子有坚韧的外壳，含有几丁质、不溶性纤维和木质素，具有很强的耐腐蚀性，其中的有效成分溶出速度过于缓慢，不易为人体消化和吸收。
现有的灵芝孢子油CO2超临界提取制备方法工艺专利多是先将灵芝孢子采用膨化、超微粉碎技术进行破壁粉碎，然后将破壁后的孢子粉湿法制粒，进行超临界提取，但大都存在不足之处。
1、未充分考虑灵芝孢子油极易氧化酸败。灵芝孢子油极易氧化酸败，变味变质而无法应用。一般灵芝破壁孢子粉室温暴露空气中4～7天就会氧化酸败而变味，在湿度大及药粉中水分含量高时，更易氧化酸败。专利申请CN1445346A中灵芝孢子采用膨化技术破壁，由于膨化温度较高(80～140℃)，破壁后孢子粉内的油脂类物质暴露在空气中，在有氧存在的情况下会被氧化、分解；采用气流粉碎，温度较高，对成分破坏严重；专利申请CN1586295A以乙醇溶液为黏合剂将灵芝孢子粉湿法制粒、专利申请CN1094766C以水、明胶、淀粉的混合物或其中一种为黏合剂将灵芝孢子粉湿法制粒，湿法制粒药物与水直接接触，还要经过高温干燥，会破坏成分；所得孢子油中含水，既影响孢子油的纯度，微量的水又易染菌而加速孢子油氧化酸败，其中专利申请CN1445346A、CN1094766C均为含水产品，专利申请CN1586295A采用离心脱水，但少量水已高度分散油中，且二者密度差异不大，故很难除尽。
2、未考虑萃取釜滤板漏粉。CO2超临界萃取是高压设备，管路堵塞就会导致压力异常升高而停机。因灵芝孢子本身粒径仅10μm，破壁后更细小，而超临界萃取釜滤板孔径约20～25um，即使破壁孢子粉制粒，较快的压力变化及较高的压力均可使大量细粉，穿过滤板进入管路，不但影响孢子油的纯度，油颜色变深，显微镜下检查有大量孢子碎片，还会堵塞管路。
3、未充分优化萃取条件。灵芝孢子油中不仅含大量不饱和脂肪酸等有效成分，而且还含有确切抗癌作用的灵芝酸等三萜类成分。超临界萃取时对不同性质的成分应采用不同萃取条件，主要通过调节压力来实现。由于这两类成分的分子都较大且有一定极性，所以萃取压力应较大，对三萜类成分则更应加大压力。若同时兼顾两者，就需像上述专利要求的条件，需要较高的萃取压力(35--40MPa)，提取时间长一般4--30小时，国内现有的超临界中试及大生产设备难以达到要求，很容易出现泄漏现象，也会缩短设备的使用寿命；由于同时兼顾两者，油的收率尚可，但三萜类成分含量不高。
由于上述的缺点，我们需要进一步选择更合理的生产工艺条件，既提高灵芝孢子油中有效成的含量及纯度，又能提高得油率，并减少耗能、缩短时间而提高效率。。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有生理活性的灵芝孢子油及其适合工业生产的制备方法。
这种灵芝孢子油具有以下特征显微镜10个视野观察，其中含灵芝孢子碎片数目不得多于10个；以比色法含量测定含有25～35％的总三萜，采用气相色谱法测定含不饱和脂肪酸60～80％，孢子油的相对密度为0.85～1.0，折光率在25℃时为1.45～1.50、酸价15～25。
得到如此高品质的灵芝油是通过如下技术步骤实现的A、将灵芝孢子放入超微粉碎机中，超微粉碎破壁，得到灵芝孢子粉；B、超微粉碎后的灵芝孢子粉干法制粒，制成颗粒；C、将颗粒放入CO2超临界萃取釜内，加入夹带剂，进行超临界萃取；D、从分离釜放出萃取物，除去水份及其他杂质，得到含三萜类成分的灵芝孢子油。
具体地讲，步骤A中灵芝孢子粉是采用振动磨式超微粉碎机进行超微粉碎，至300目左右，得到破壁的灵芝孢子粉；步骤B中破壁的灵芝孢子粉采用干法制粒机，加5-10％预胶化淀粉干压制粒，制得10～20目的颗粒；步骤C中进行CO2超临界萃取时，以滤纸加纸浆板或滤纸加脱脂棉放入萃取釜中的滤板处加强过滤，先以萃取压力25～30MPa，温度35～40℃，萃取1～2小时，再加入药材量的5～20％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一种为夹带剂，继续萃取0.5～1小时；分离釜1中分离压力8～8.5MPa，温度45～50℃；分离釜2中分离压力5.5～6MPa，温度30～35℃；步骤D的具体过程是从分离釜放出萃取物，减压回收夹带剂后，经8000～15000rpm离心除杂后，通过无水硫酸钠除去水分，得到灵芝孢子油。
经过以上方法制得的灵芝孢子油，可以与其他油性药物或脂溶性药物配伍使用，制备成各种剂型，提高治疗效果。
本发明具有如下优点1.采用振动磨式超微粉碎机进行超微粉碎30min，夹层通冷却水冷却，可达到低温粉碎，避免粉碎过程中，破壁的灵芝孢子中的有效成分被氧化、分解。
2.超微粉碎后的灵芝孢子粉加入5-10％的预胶化淀粉混匀，采用LGJ-110干法制粒机干压制粒机干压制粒，制得10～20目的颗粒。可避免湿法制粒水分和高温干燥对有效成分造成的破坏。
3.CO2超临界萃取，工艺简单、温度低、CO2不与化学成分反应并且抑制孢子油的氧化酸败。CO2超临界萃取时，以滤纸加纸浆板或滤纸加脱脂棉放入萃取釜中的滤板处加强过滤，可阻挡孢子细粉穿过滤板。先以萃取压力25～30MPa，温度35～40℃，萃取1～2小时，主要提取孢子脂肪油，再加入药材量的5～20％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一种为夹带剂，继续萃取0.5～1小时，主要提取三萜类成分，及提高收率，缩短时间。分离釜1，分离压力8～8.5MPa，温度45～50℃，主要收集清油；分离釜2，分离压力5.5～6MPa，温度30～35℃，收集油、水及夹带剂等。。
4.灵芝孢子油中的三萜类大分子物质，需要较高的萃取条件才能提取出来，国内现有的超临界设备难以达到要求，很容易出现泄漏现象，也会缩短设备的使用寿命；加入夹带剂能从溶剂的密度、溶质与夹带剂分子间的相互作用两个方面影响溶质在超临界流体中的溶解度和选择性，可增加溶解度对温度、压力的敏感程度。经试验以60～90％乙醇、甲醇、乙酸乙脂为夹带剂，用量为孢子粉量的5～20％效果较好，可降低萃取压力、缩短萃取时间、提高三萜类成分萃取效率。而萃取物中的夹带剂容易减压回收，且不损失孢子油。
5.从分离釜底部放出的萃取物，减压回收夹带剂后，经8000～15000rpm离心，可除去大量的水分和其他除杂，通过无水硫酸钠进一步脱水，可避免少量水分的存在而影响孢子油的稳定性，得到纯度高、稳定性好的灵芝孢子油。经萃取后的灵芝孢子粉，可采用水煎煮提取其中的多糖成分，不浪费药材。
从中试结果也可以看出，按本发明工艺制备灵芝孢子油，其收率稳定在25％～35％之间，其中以熊果酸计总三贴含量也在30％以上，且粉末杂质含量较低。由此可见，本发明制备工艺及制成的灵芝孢子油，均远远优于同类产品。
具体实施例方式
实施例1取灵芝孢子5kg，放入超微粉碎机中，通冷却水，超微粉碎成300目左右，取超微粉碎后的灵芝孢子粉加入5％的预胶化淀粉，混匀，放入干压制粒机，制成18目的颗粒，放入超临界CO2萃取釜内，将滤纸加浆板放入萃取釜中的滤板处，萃取压力25MPa，温度35℃，萃取60分钟；再以95％乙醇为夹带剂，加入250g，萃取60分钟；分离釜1，分离压力8MPa，温度45℃；分离釜2，分离压力5.5MPa，温度30℃，从分离釜底部放出萃取物，得到淡黄色具有特殊气味的油状液体，减压回收夹带剂，经15000rpm离心除杂后，通过铺有无水硫酸钠滤层的漏斗除去水分，得油状物1.356kg，其中含有以齐墩果酸计达33％的总三萜，孢子油的相对密度为0.88，折光率在25℃为1.46、酸价18。
实施例2取灵芝孢子5kg，放入贝利超微粉碎机中，通冷却水，超微粉碎成300目，取超微粉碎后的灵芝孢子粉加入8％的预胶化淀粉，混匀，放入干压制粒机，制成12目的颗粒，放入超临界CO2萃取釜内，以滤纸加浆板放入萃取釜中萃取压力30MPa，温度40℃，萃取90分钟；再以甲醇为夹带剂，加入300g。萃取30分钟；分离釜1，分离压力8.5MPa，温度50℃；分离釜2，分离压力6MPa，温度30℃，从分离釜底部放出萃取物，得到淡黄色具有特殊气味的油状液体，减压回收夹带剂，经15000rpm离心除杂后，通过无水硫酸钠除去水分，得油状物1.433kg，其中含有以齐墩果酸计达32％的总三萜，孢子油的相对密度为0.92，折光率在25℃为1.44、酸价22。
实施例3取灵芝孢子5kg，放入超微粉碎机中，通冷却水，超微粉碎成300目左右，取超微粉碎后的灵芝孢子粉加入10％的预胶化淀粉，混匀，放入干压制粒机，制成16目的颗粒，放入超临界CO2萃取釜内，以脱脂棉加滤纸放入萃取釜中的滤板处，萃取压力28MPa，温度40℃，萃取120分钟；再以乙酸乙酯为夹带剂，加入1000g萃取45分钟；分离釜1，分离压力8MPa，温度45℃；分离釜2，分离压力6MPa，温度35℃，含有灵芝孢子油的超临界流体进入分离釜，分离釜1，分离压力8MPa，温度50℃；分离釜2，分离压力6MPa，温度30℃，从分离釜底部放出萃取物，得到淡黄色具有特殊气味的油状液体，减压回收夹带剂，经10000rpm离心除杂后，通过无水硫酸钠除去水分，得油状物1.583kg，其中含33％的总三萜，孢子油的相对密度为0.88，折光率在25℃为1.45、酸价24。
权利要求
1.一种灵芝孢子油，其特征在于显微镜10个视野观察，其中含灵芝孢子碎片数目不得多于10个；以比色法含量测定含有25～35％的总三萜，采用气相色谱法测定含不饱和脂肪酸60～80％，孢子油的相对密度为0.85～1.0，折光率在25℃时为1.45～1.50、酸价15～25。
2.一种制备如权利要求1所述的灵芝孢子油的CO2超临界制备方法，其特征在于该方法分为以下几个步骤A、将灵芝孢子放入超微粉碎机中，超微粉碎破壁，得到灵芝孢子粉；B、超微粉碎后的灵芝孢子粉干法制粒，制成颗粒；C、将颗粒放入CO2超临界萃取釜内，加入夹带剂，进行超临界萃取；D、从分离釜放出萃取物，除去水份及其他杂质，得到含三萜类成分的灵芝孢子油。
3.根据权利要求2所说的灵芝孢子油的制备方法，其特征在于步骤A中灵芝孢子粉是采用振动磨式超微粉碎机进行超微粉碎，至300目左右，得到破壁的灵芝孢子粉。
4.根据权利要求3所说的灵芝孢子油的制备方法，其特征在于步骤B中破壁的灵芝孢子粉采用干法制粒机，加5-10％预胶化淀粉干压制粒，制得10～20目的颗粒。
5.根据权利要求4所说的灵芝孢子油的制备方法，其特征在于步骤C中进行CO2超临界萃取时，以滤纸加纸浆板或滤纸加脱脂棉放入萃取釜中的滤板处加强过滤，先以萃取压力25～30MPa，温度35～40℃，萃取1～2小时，再加入药材量的5～20％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一种为夹带剂，继续萃取0.5～1小时；分离釜1中分离压力8～8.5MPa，温度45～50℃；分离釜2中分离压力5.5～6MPa，温度30～35℃。
6.根据权利要求5所说的灵芝孢子油的制备方法，其特征在于步骤D的具体过程是从分离釜放出萃取物，减压回收夹带剂后，经8000～15000rpm离心除杂后，通过无水硫酸钠除去水分，得到灵芝孢子油。
全文摘要
本发明公开了一种灵芝孢子油，属中药领域。该灵芝孢子在油显微镜10个视野观察，其中含灵芝孢子碎片数目不得多于10个；以比色法含量测定含有25～35％的总三萜，采用气相色谱法测定含不饱和脂肪酸60～80％，相对密度为0.85～1.0，折光率在25℃时为1.45～1.50、酸价15～25。同时本发明还公开了该灵芝孢子油的超临界制备方法，该方法提取率更高、更有利于孢子油的稳定，且适合工业生产。
文档编号A61K36/074GK1931195SQ200510200529
公开日2007年3月21日 申请日期2005年9月12日 优先权日2005年9月12日
发明者吴逸芳 申请人:吴逸芳