专利名称：治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：
人类发现肿瘤已有3000年以上的历史。上皮性的恶性肿瘤称为癌，约占所有恶性肿瘤的90％以上。癌症是严重威胁人类健康的一大类疾病，并且患者在不断上升。由本申请人研制的一种治疗肿瘤的药物，它主要由斑蝥、人参、黄芪、刺五加制备而成，该产品具有清热解毒，消瘀散结的作用，在治疗原发性肝癌，肺癌，直肠癌，恶性淋巴瘤，妇科恶性肿瘤等疾病方面取得良好的效果。但是如何有效控制该产品的质量，确保该产品的临床疗效，是本申请人长期以来一直研究的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，该注射制剂包括注射液、冻干粉和大输液，本发明对制剂中主要有效成分人参皂苷Re和斑蝥素的含量测定以及人参和黄芪的薄层鉴别进行了研究和筛选，所制定的质量控制方法能全面有效地控制产品的质量，从而确保了该制剂的临床疗效。
本发明所述治疗肿瘤的注射制剂是这样构成的按照重量组份计算它主要由斑蝥0.5-5、人参20-80、黄芪50-150、刺五加100-200制备而成。
本发明所述注射制剂这样制备人参切片，用20-85％乙醇加热回流提取1-5次，合并提取液，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣与其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，滤过，滤液与人参提取液合并，以石硫法沉淀处理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量达50-99％，静置过夜，取上清液减压回收乙醇至无醇味，再按照常规方法分别制成注射液、大输液或冻干粉制剂。
所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括与α-萘酚的显色反应、以人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品为对照的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中人参皂苷Re和斑蝥素的含量测定。
本制剂中人参和黄芪的鉴别方法是以人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品为对照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10、10℃以下放置的下层溶液为展开剂的薄层鉴别方法。
鉴别方法包括以下项目的部分或全部
(1)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；加入乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；(2)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-85％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
更具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大输液200-400ml浓缩至40-60ml；或取注射液40-60ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的内径1～1.5cm、长15cm、填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝的DA-201树脂柱上，用水50-150ml洗涤，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本制剂中人参皂苷Re的含量测定方法是以人参皂苷Re对照品为对照的分光光度法。
本制剂中斑蝥素的含量测定方法是以斑蝥素对照品为对照，以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液的气相色谱法。
含量测定方法包括(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加入冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇匀，作为对照品溶液；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，摇匀，再精密加入氯仿，密塞，振摇，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
更具体的含量测定方法包括(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re1-2mg，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热10-30分钟，取出，用水冷却0.5-5分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在300-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大输液50-200ml浓缩至10-30ml；或取注射液10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-10g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，摇匀，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振摇1-10分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2-15μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
所述质量控制方法包括性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别(1)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；加入乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；(2)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-85％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH值应为3.0-6.0；重金属取冻干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；热原分别取冻干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至80-150ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定；含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加入冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇匀，作为对照品溶液；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，摇匀，再精密加入氯仿，密塞，振摇，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
经研究发现，采用以下质量控制方法将更容易控制本发明制剂的质量，更利于保证本制剂的临床疗效。故所述质量控制方法还可包括性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别(1)取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大输液200-400ml浓缩至40-60ml；或取注射液40-60ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的内径1～1.5cm、长15cm、填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝的DA-201树脂柱上，用水50-150ml洗涤，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH值应为3.0-6.0；重金属取冻干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；热原分别取冻干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至80-150ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定；含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re1-2mg，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热10-30分钟，取出，用水冷却0.5-5分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在300-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大输液50-200ml浓缩至10-30ml；或取注射液10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-10g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，摇匀，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振摇1-10分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2-15μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
本制剂中，人参具有增强免疫力的作用，斑蝥具有抗肿瘤的作用。人参和斑蝥均为该产品中起主要作用的药物，而人参皂苷Re和斑蝥素又分别是人参和斑蝥中的主要有效成分，故本发明应对人参皂苷Re及斑蝥素进行含量测定，方能有效控制该产品的质量，但是如何有效测定该制剂中人参皂苷Re和斑蝥素的含量，是本发明的难点所在。经过研究，我们发现，采用分光光度法，并采用氯仿提取药物，然后再用水饱和的正丁醇提取，加入无水硫酸钠后过大孔吸附树脂的方法制备供试品溶液，可有效测定该制剂中人参皂苷Re的含量；采用气相色谱法，色谱条件与系统适用性试验为以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；用该方法可有效测定制剂中斑蝥素的含量。另外在制备斑蝥素供试品溶液的方法中，我们没有使用K-D浓缩器，减少了检验成本。
本发明还对人参和黄芪进行了薄层鉴别研究，并以人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品为对照，采用水饱和的正丁醇提取，然后过树脂柱的方法提取药物，制备供试品溶液；以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，用该方法鉴别制剂中的人参和黄芪药材，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。所以用本发明方法可有效控制治疗肿瘤的注射制剂的质量，保证该制剂的临床疗效。
本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。
一、人参皂苷Re含量测定方法研究1、供试品溶液制备方法研究方法1取药物，置分液漏斗中，用氯仿提取，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，摇匀，即得。
方法2取药物，置蒸发皿中，于水浴上浓缩，加氯仿振摇提取，弃去氯仿，再加水饱和的正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇，加氨试液洗1次，弃去碱液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，即得。
根据试验结果可知，采用方法1制备供试品溶液，人参皂苷Re提取更为完全。
二、斑蝥素含量测定方法研究1、供试品溶液制备方法研究方法1取药物，置具塞试管中，加入1.8mol/L硫酸溶液，摇匀，再加入氯仿，密塞，振摇3分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得。
方法2取药物，加入1.8mol/L硫酸溶液，用氯仿提取3次，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩并定容，即得。
根据实验结果可知，两种方法所提取的斑蝥素含量无明显差别。但是由于方法2中使用了K-D浓缩器，增加了检验成本。另据本申请人了解，由于K-D浓缩器多用于食品的检测，在药品检测中使用的不多，且国内大多数药物检验所均无K-D浓缩器，故本发明中采用方法1检测本产品中斑蝥素的含量，不仅可以相对减少检验成本，还方便各省药检所对该产品进行检测。
三、人参、黄芪薄层鉴别研究供试品溶液制备方法一取药物，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用40％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加入甲醇溶解，作为供试品溶液；同法制备缺人参、黄芪阴性对照液。
供试品溶液制备方法二取药物，装入滤纸筒内，置索氏提取器中，加乙醚提取至无色，弃去乙醚液，加甲醇浸泡过夜后再加甲醇提取至无色，用少量甲醇洗涤容器，合并提取液及洗涤液，水浴蒸干，残渣用水微热熔解，用0.1mol/L氢氧化钠饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解；同法制备缺人参、黄芪阴性对照液。
展开剂选择分别以氯仿、醋酸乙酯、乙腈、水不同比例的混合溶液；氯仿、醋酸乙酯、甲醇、水不同比例的混合溶液；氯仿、甲醇、水不同比例的混合溶液为展开剂。
结果采用方法一制备供试品溶液，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4、10℃以下放置的下层溶液。
与现有技术相比，本发明对制剂中主要有效成分人参皂苷Re和斑蝥素的含量测定以及人参和黄芪的薄层鉴别进行了研究和筛选，所采用的质量控制方法科学合理，准确度高，重现性好，不仅能全面有效地控制治疗肿瘤的注射制剂的质量，确保该制剂的临床疗效，而且所采用的方法相对减少了检验成本。
具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
本发明的实施例1性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别(1)取冻干粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大输液60ml浓缩至10ml；或取注射液10ml；分别取上述药品，加乙醇50ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤2次，将沉淀物用蒸馏水5ml溶解，取1ml置试管中，微热后加入5％α-萘酚乙醇溶液50滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5ml，在二液面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉300g加注射用水50ml使溶解、或取大输液300ml浓缩至30ml；或取注射液50ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水3ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱(内径1～1.5cm，长15cm，填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝)上，用水100ml洗涤，再用40％甲醇液50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH值应为3.8-5.0；重金属取冻干粉20g加注射用水2ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；热原分别取冻干粉150g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定；含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re1.6mg，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，用水冷却2分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在544nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大输液120ml浓缩至20ml；或取注射液20ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤2次，每次5ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠3g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.4ml/min，弃去洗液，用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算。该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为10％和5％，1∶1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大输液60ml浓缩至10ml；或取注射液10ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，摇匀，再精密加入1ml氯仿，密塞，振摇3分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各4μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
本发明的实施例2性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别取冻干粉30g加注射用水5ml使溶解、或取大输液30ml浓缩至5ml；或取注射液5ml；分别取上述药品，加乙醇20ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1次，将沉淀物用蒸馏水2ml溶解，取0.5ml置试管中，微热后加入2％α-萘酚乙醇溶液2滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2ml，在二液面接界处显紫红色环；检查PH值应为3.0-5.0；热原分别取冻干粉100g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至80ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；
含量测定斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5％和2％，1∶9混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉30g加注射用水5ml使溶解、或取大输液30ml浓缩至5ml；或取注射液5ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入1mol/L硫酸溶液0.5ml，摇匀，再精密加入0.5ml氯仿，密塞，振摇1分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
本发明的实施例3性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别取冻干粉200g加注射用水40ml使溶解、或取大输液200ml浓缩至40ml；或取注射液40ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱(内径1～1.5cm，长15cm，填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝)上，用水50ml洗涤，再用20％甲醇液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝10∶5∶0.5∶10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯200nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；含量测定人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re1mg，摇匀，即得；
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液0.1ml、高氯酸0.5ml，摇匀，置40℃水浴中加热10分钟，取出，用水冷却0.5分钟，加冰醋酸2ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在300nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大输液50ml浓缩至10ml；或取注射液10ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.4ml/min，弃去洗液，用40％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml。
本发明的实施例4性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；检查重金属取冻干粉40g加注射用水10ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定；含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re2mg，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，摇匀，置80℃水浴中加热30分钟，取出，用水冷却5分钟，加冰醋酸10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉150g加注射用水30ml使溶解、或取大输液200ml浓缩至30ml；或取注射液30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤5次，每次5ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取6次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠10g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.4ml/min，弃去洗液，用90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为20％和10％，9∶1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大输液100ml浓缩至20ml；或取注射液20ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入3mol/L硫酸溶液3ml，摇匀，再精密加入3ml氯仿，密塞，振摇10分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各15μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
本发明的实施例5
性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别(1)取冻干粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大输液100ml浓缩至20ml；或取注射液20ml；分别取上述药品，加乙醇100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤5次，将沉淀物用蒸馏水10ml溶解，取3ml置试管中，微热后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸2ml，在二液面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉400g加注射用水60ml使溶解、或取大输液400ml浓缩至60ml；或取注射液60ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次15ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱(内径1～1.5cm，长15cm，填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝)上，用水150ml洗涤，再用85％甲醇液100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1∶15∶6∶1，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH值应为3.8-6.0；重金属取冻干粉80g加注射用水10ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；热原分别取冻干粉200g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至150ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定。
权利要求
1.一种治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，该注射制剂包括注射液、冻干粉和大输液，其特征在于所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括与α-萘酚的显色反应、以人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品为对照的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中人参皂苷Re和斑蝥素的含量测定。
2.按照权利要求1所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中人参和黄芪的鉴别方法是以人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品为对照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10、10℃以下放置的下层溶液为展开剂的薄层鉴别方法。
3.按照权利要求1或2所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；加入乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；(2)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-85％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.按照权利要求3所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大输液200-400ml浓缩至40-60ml；或取注射液40-60ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的内径1～1.5cm、长15cm、填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝的DA-201树脂柱上，用水50-150ml洗涤，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.按照权利要求1所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中人参皂苷Re的含量测定方法是以人参皂苷Re对照品为对照的分光光度法。
6.按照权利要求1所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中斑蝥素的含量测定方法是以斑蝥素对照品为对照，以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液的气相色谱法。
7.按照权利要求1、5或6所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于含量测定方法包括(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加入冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇匀，作为对照品溶液；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，摇匀，再精密加入氯仿，密塞，振摇，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
8.按照权利要求7所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于具体的含量测定方法包括(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re1-2mg，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热10-30分钟，取出，用水冷却0.5-5分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在300-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大输液50-200ml浓缩至10-30ml；或取注射液10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-10g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，摇匀，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振摇1-10分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2-15μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
9.按照权利要求1所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别(1)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；加入乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；(2)分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-85％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH值应为3.0-6.0；重金属取冻干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；热原分别取冻干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至80-150ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定；含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加入冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇匀，作为对照品溶液；供试品溶液的制备分别取冻干粉加注射用水溶解、或取大输液浓缩、或直接取注射液；置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，摇匀，再精密加入氯仿，密塞，振摇，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
10.按照权利要求9所述治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于注射液产品为浅棕色的澄明液体；对于大输液产品为黄色至浅棕色的澄明液体；对于冻干粉产品为黄色至浅棕色疏松块状物；鉴别(1)取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大输液200-400ml浓缩至40-60ml；或取注射液40-60ml；分别取上述药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的内径1～1.5cm、长15cm、填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝的DA-201树脂柱上，用水50-150ml洗涤，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH值应为3.0-6.0；重金属取冻干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大输液2ml、或取注射液2ml，置坩埚中，水浴上蒸干，依照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；热原分别取冻干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大输液30ml、或取注射液30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至80-150ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；其他本发明的注射液、冻干粉或大输液应符合中国药典关于注射剂项下的有关规定；含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re1-2mg，摇匀，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热10-30分钟，取出，用水冷却0.5-5分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在300-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大输液50-200ml浓缩至10-30ml；或取注射液10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-5次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-10g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，注射液中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.15mg/ml；冻干粉中含人参以人参皂苷Re计，不得少于2％；大输液制剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合装柱；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大输液30-100ml浓缩至5-20ml；或取注射液5-20ml；分别取上述药品，置具塞试管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，摇匀，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振摇1-10分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2-15祃，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，注射液中含斑蝥素为0.0005～0.004mg/ml；冻干粉中含斑蝥素为0.01～0.1％；大输液制剂中含斑蝥素为0.00008～0.0008mg/ml。
全文摘要
本发明提供了一种治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括与α－萘酚的显色反应、以人参皂苷Re、Rg
文档编号A61K9/19GK1823887SQ20051020088
公开日2006年8月30日 申请日期2005年12月29日 优先权日2005年12月29日
发明者叶湘武, 张梅 申请人:贵州益佰制药股份有限公司